饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响

动物营养学报２０１９，３１（４）：１８８７⁃１８９６ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ
㊀
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０１９．０４．０４８
饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡
盲肠菌群和肠道通透性的影响
曲湘勇㊀陈继发∗㊀匡佑华㊀康克浪㊀唐圣果㊀贺长青∗
∗
（湖南农业大学动物科学技术学院，湖南畜禽安全生产协同创新中心，湖南家禽安全
生产工程技术研究中心，长沙４１０１２８）
摘㊀要：本试验旨在研究饲粮添加蒙脱石（ＭＭＴ）和枯草芽孢杆菌（ＢＳ）对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响㊂采用２ˑ２双因子随机设计，选择３６０只２９周龄健康的罗曼粉壳蛋鸡，随机分为４组（每组６个重复，每个重复１５只），分别饲喂基础饲粮（对照组）㊁基础饲粮＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ（ＭＭＴ组）㊁基础饲粮＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＢＳ组）㊁基础饲粮＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＭＭＴ＋ＢＳ组）㊂预试期７ｄ，正试期７０ｄ㊂结果表明：１）ＢＳ组测序获得的有效序列显著多于其他各组（Ｐ＜０．０５），试验组测序获得的优质序列较对照组均有一定增加（Ｐ＞０．０５）㊂２）在门水平上，与对照组相比，ＭＭＴ组梭杆菌门相对含量有降低的趋势（Ｐ＝０．０７２），ＭＭＴ＋ＢＳ组迷踪菌门相对含量有降低的趋势（Ｐ＝０．０５３）㊂在属水平上，与对照组相比，ＭＭＴ组梭杆菌属相对含量有降低的趋势（Ｐ＝０．０７２），ＢＳ组乳杆菌属相对含量显著提高（Ｐ＜０．０５），ＢＳ组和ＭＭＴ＋ＢＳ组巨单胞菌属相对含量显著提高（Ｐ＜０．０５），ＭＭＴ＋ＢＳ组梭菌属相对含量显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂３）与对照组相比，饲粮添加ＢＳ显著降低了产蛋鸡血浆二胺氧化酶活性和内毒素含量（Ｐ＜０．０５），有降低血浆Ｄ－乳酸含量的趋势（Ｐ＝０．０５１）㊂可见，ＭＭＴ㊁ＢＳ及其联用均在一定程度上影响了产蛋鸡盲肠菌群的物种丰度，添加ＢＳ降低了肠道通透性㊂关键词：蒙脱石；枯草芽孢杆菌；肠道菌群；肠道通透性；产蛋鸡
中图分类号：Ｓ８１６㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０１９）０４⁃１８８７⁃１０收稿日期：２０１８－０９－３０
基金项目：湖南畜禽安全生产协同创新中心专项资金（ＣＩＣＡＰＳ）；湖南农业大学产学研合作项目（１３０９８）
作者简介：曲湘勇（１９６２ ），男，湖南长沙人，教授，博士，主要研究方向为家禽生产科学㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｑｕｘｙ９９＠１２６．ｃｏｍ∗同等贡献作者
∗∗通信作者：贺长青，副教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｃｑ５１２５＠１６３．ｃｏｍ
㊀㊀家禽肠道是一个开放的生态系统，栖居着大量的微生物并形成功能复杂的微生态环境㊂肠道微生物对宿主具有重要的作用，比如发酵不溶纤维提供能量［１］㊁维持机体免疫功能［２］㊁调节机体新陈代谢［３］等㊂而肠道菌群失衡或微生物多样性降低会导致机体免疫力下降㊁养分利用率降低，且可能与乳糜泄和炎症性肠病等的发生有关［４－５］㊂可见，健康的肠道菌群有利于维持宿主正常的生理功能和发挥生长或生产潜能㊂蒙脱石（ｍｏｎｔｍｏｒｉｌ⁃ｌｏｎｉｔｅ，ＭＭＴ）是一种铝硅酸盐类黏土，比表面积大，表面分布着无数微孔，具有很好的吸附性，已
被证实能在动物肠道中吸附细菌及其毒素，改善肠道菌群［６－７］㊂枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ，
ＢＳ）是生产中应用广泛的饲用益生菌之一，它可通过消耗肠道游离氧㊁竞争肠腔内养分和分泌类抗生素物质等抑制有害菌增殖，促进有益菌生长，进而调节肠道微生态平衡［８－９］㊂在断奶仔猪上的研究表明，ＭＭＴ和嗜酸乳杆菌联用对调节肠道菌群和降低肠道通透性的作用优于二者单独使用［１０］，
提示ＭＭＴ和益生菌在改善肠道菌群和肠道屏障功能方面可能具有协同作用，因此，我们推测ＭＭＴ和ＢＳ联用可能更有利于优化产蛋鸡肠道菌
㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷
群㊁降低肠道通透性㊂但目前尚未有关于ＢＳ及其
与ＭＭＴ互作对产蛋鸡肠道通透性影响的报道，且
二者对调节肠道菌群是否具有协同作用尚不明
确㊂此外，本课题组最近的研究表明，饲粮添加０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ㊁５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ及其联用均提
高了产蛋鸡的生产性能［１１］，鉴于肠道微生物与宿主免疫㊁养分吸收㊁生长发育或维持生产的相关
性，我们推测它们对产蛋鸡生产性能的影响与肠
道菌群存在一定关联㊂因此，本试验旨在探讨饲
粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡肠道菌群和肠道通
透性的影响，并观察ＭＭＴ和ＢＳ是否具有协同作
用，以期为其在产蛋鸡生产中的应用提供依据㊂１㊀材料与方法
１．１㊀试验材料
㊀㊀ＭＭＴ由美国安牧然国际公司提供，其主要成
分为：钙基ＭＭＴ含量＞７０％，其中钙含量为０．５％ １．５％；无定形水合二氧化硅含量＞１５％；其他矿物（如斜发沸石㊁伊利石㊁高岭石和黄铁矿等）含量＜１５％㊂ＢＳ（ＢＳ⁃Ｃ３１０２）由上海牧冠企业发展有限公司提供，活菌数ȡ１ˑ１０９ＣＦＵ／ｇ㊂
１．２㊀试验设计与饲养管理
㊀㊀本试验于２０１７年７月２１日至２０１７年１０月７日在湖南生安赛特农牧科技有限公司进行㊂采用２ˑ２双因子随机设计，选择３６０只２９周龄健康的罗曼粉壳蛋鸡，随机分成４组，每组６个重复，每个重复１５只，分别饲喂基础饲粮（对照组）㊁基础饲粮＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ（ＭＭＴ组）㊁基础饲粮＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＢＳ组）㊁基础饲粮＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＭＭＴ＋ＢＳ组）㊂预试期７ｄ，正试期７０ｄ㊂预试期各组产蛋鸡统一饲喂基
础饲粮，每天对鸡群进行观察，并及时调整鸡群，
使各组间产蛋鸡的平均日采食量［（１１６．６１ʃ０．４５）ｇ，Ｐ＝０．６０３］㊁产蛋率［（９５．７２ʃ０．４８）％，Ｐ＝０．９５５］和平均蛋重［（５９．９０ʃ０．２１）ｇ，Ｐ＝０．６８９］差
异不显著㊂试验用基础饲粮参考‘鸡饲养标准“（ＮＹ／Ｔ３３ ２００４）并结合生产实际配制，基础饲粮组成及营养水平见表１㊂在基础饲粮配制好后，
准确称取所需的ＭＭＴ和ＢＳ添加到基础饲粮中，
逐级充分混匀（先将ＭＭＴ或ＢＳ混匀于小份饲粮
中，然后逐步拌于大份饲粮中），在配制ＭＭＴ＋ＢＳ
组试验饲粮时，先将所需的ＭＭＴ和ＢＳ充分混匀
后再逐级混匀于基础饲粮中㊂配制好的试验饲
粮，按照组别装于带盖的塑料大桶中，并储存于饲
料贮藏室㊂正试期间，每隔３ ４ｄ配制１次试验
饲粮㊂
㊀㊀产蛋鸡采用上㊁中㊁下３层阶梯式笼养，每笼３
只，每５笼１个重复，各组的试验鸡保证分布在
上㊁中㊁下层的数量相等㊂每日喂料２次，捡蛋２
次，上午㊁下午各匀料２次㊂各组产蛋鸡饲养管理
条件相同，试验第１ ５周鸡舍温度㊁相对湿度分别
为（２７．０６ʃ２．２７）ħ㊁（７７．３９ʃ６．１３）％；试验第６ １０周鸡舍温度㊁相对湿度分别为（２４．０３ʃ２．４０）ħ㊁（７７．０７ʃ６．２１）％㊂产蛋鸡自由采食㊁饮水，每日光照时间为１６ｈ，自然光照和人工光照相结合㊂每日清扫鸡舍１次，每周对鸡舍喷雾消毒２次，每隔３ｄ清粪１次㊂
表１㊀基础饲粮组成及营养水平（风干基础）
Ｔａｂｌｅ１㊀Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔ（ａｉｒ⁃ｄｒｙｂａｓｉｓ）％原料Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ含量Ｃｏｎｔｅｎｔ营养水平Ｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓ２）含量Ｃｏｎｔｅｎｔ
玉米Ｃｏｒｎ６４．００代谢能ＭＥ／（ＭＪ／ｋｇ）１１．２５
豆粕Ｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ２４．００粗蛋白质ＣＰ１６．９４
石粉Ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ８．００赖氨酸Ｌｙｓ０．９４
磷酸氢钙ＣａＨＰＯ４１．００蛋氨酸＋半胱氨酸Ｍｅｔ＋Ｃｙｓ０．５５
预混料Ｐｒｅｍｉｘ１）３．００钙Ｃａ３．５１
合计Ｔｏｔａｌ１００．００有效磷ＡＰ０．３４
㊀㊀１）预混料为每千克饲粮提供Ｔｈｅｐｒｅｍｉｘｐｒｏｖｉｄｅｄｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｐｅｒｋｇｏｆｔｈｅｄｉｅｔ：ＶＡ７５００ＩＵ，ＶＤ３３０００ＩＵ，ＶＥ２０ＩＵ，ＶＫ３２ｍｇ，ＶＢ１１．９８ｍｇ，ＶＢ２４．９８ｍｇ，ＶＢ６４．９８ｍｇ，ＶＢ１２０．０２ｍｇ，胆碱ｃｈｏｌｉｎｅ４００ｍｇ，烟酸ｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｉｄ３０ｍｇ，泛酸ｐａｎｔｏｔｈｅｎａｔｅ１５ｍｇ，叶酸ｆｏｌｉｃａｃｉｄ０．７８ｍｇ，生物素ｂｉｏｔｉｎ０．２ｍｇ，Ｆｅ（ａｓｆｅｒｒｏｕｓｓｕｌｆａｔｅ）７５ｍｇ，Ｃｕ（ａｓｃｏｐ⁃ｐｅｒｓｕｌｆａｔｅ）１０ｍｇ，Ｓｅ（ａｓｓｏｄｉｕｍｓｅｌｅｎｉｔｅ）０．３ｍｇ，Ｚｎ（ａｓｚｉｎｃｓｕｌｆａｔｅ）７０ｍｇ，Ｍｎ（ａｓｍａｎｇａｎｅｓｅｓｕｌｆａｔｅ）６０ｍｇ，Ｉ（ａｓｐｏ⁃ｔａｓｓｉｕｍｉｏｄｉｄｅ）１ｍｇ，Ｃａ３．３ｇ，Ｐ１．０５ｇ，ＮａＣｌ３．５ｇ㊂
㊀㊀２）营养水平均为计算值㊂Ｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅａｌｌｃａｌｃｕｌａｔｅｄｖａｌｕｅｓ．
８８８１
４期曲湘勇等：饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响
１．３㊀样品采集
㊀㊀试验第７０天清晨，以重复为单位随机选取２只产蛋鸡，采血前禁食１２ｈ，自由饮水㊂通过翅下静脉采集５ｍＬ左右血液于肝素抗凝管中，于３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ制备血浆，置于－２０ħ冰箱保存㊂采血结束后，立即饲喂试验鸡只，当天下午从每个重复随机选取１只鸡，颈部放血后剖开腹腔，取适量盲肠内容物置于１．５ｍＬ的高压灭菌离心管中，并迅速放置液氮中保存，然后放入
－８０ħ冰箱冻存㊂
１．４㊀检测指标与方法
１．４．１㊀盲肠微生物分析
㊀㊀细菌ＤＮＡ提取及检测：分别从每组的６份盲肠内容物样品中随机选取５份，称取每份盲肠内容物样品（２００ʃ１０）ｍｇ置于２ｍＬ离心管中，采用粪便基因组ＤＮＡ提取试剂盒（ＤＰ３２８，天根生化科技有限公司）提取细菌ＤＮＡ㊂用超微量分光光度计（ＮａｎｏＤｒｏｐＮＤ－２０００ＵＶ，赛默飞）检测ＤＮＡ浓度，０．８％琼脂糖凝胶电泳检测纯度，之后将合格的ＤＮＡ样品送上海美吉生物医药科技有限公司测序分析㊂
㊀㊀ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉＳｅｑ高通量测序：利用ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉＳｅｑ平台进行ＢａｒｃｏｄｅｄＩｌｌｕｍｉｎａＭｉｓｅｑ测序，对样品１６ＳｒＲＮＡ的Ｖ４区建立文库并上机测序㊂具体操作如下，选择１６ＳｒＤＮＡ的Ｖ４区作为目的扩增区域，用引物对５１５Ｆ／８０６Ｒ目的片段进行扩增㊂根据ＰＣＲ产物浓度进行等量混样，充分混匀后使用２％的琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物㊂目标条带用ＤＮＡ切胶回收试剂盒进行回收，得纯化样本，并用ＢｉｏＴｅｋ酶标仪测定各样本浓度并定量㊂每个样品ＤＮＡ等量混合，采用标准的ＩｌｌｕｍｉｎａＴｒｕＳｅｑＤＮＡ文库制备流程构建所需的宏基因组上机文库，最后在ＩｌｌｕｍｉｎａＭｉｓｅｑ分析平台上进行ＢａｒｃｏｄｅｄＩｌｌｕｍｉｎａＭｉｓｅｑ测序，采用ＰＥ２５０测序策略㊂
㊀㊀数据处理与分析：对经过双端（ｐａｉｒ⁃ｅｎｄ）测序的数据进行质量控制，截断或舍弃低质量序列（５０个连续碱基平均质量＞Ｑ３０，接头污染㊁含有Ｎ和低复杂度的ｒｅａｄｓ）㊂用软件Ｆｌａｓｈｖ１．２．１１连接通过质量控制的序列，舍弃无法连接的序列㊂利用软件ＵＳＥＡＲＣＨ７．０．１０９０去掉纯化后数据的嵌合体，应用Ｑｉｉｍｅ１．８．０分析软件合并去掉嵌合体的数据，并将数据按照Ｕｌｕｓｔ算法将序列相似性ȡ９７％的操作分类单元（ｏｐｅｒａｔｉｏｎａｌｔａｘｏｎｏｍｉｃｕｎｉｔｓ，ＯＴＵ）进行聚类㊂选取每个类最长的序列为代表序列，通过ＲＤＰ⁃ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒｖ２．２软件将ＯＴＵ代表序列与数据库有比对进行物种注释，得到每个ＯＴＵ的分类学信息㊂通过软件Ｍｏｔｈｕｒ１．３１．２对生成的ＯＴＵ信息进行细菌群落多样性和丰富度分析㊂１．４．２㊀血浆指标测定
㊀㊀使用北京华英生物技术研究所生产的试剂盒测定血浆二胺氧化酶（ＤＡＯ）活性和内毒素㊁Ｄ－乳酸含量，相应试剂盒的货号分别为ＨＹ⁃６０１０６㊁ＨＹ⁃７００５５㊁ＨＹ⁃６００２６㊂
１．５㊀数据统计与分析
㊀㊀盲肠微生物测序数据采用ＳＡＳ９．２统计软件中Ｋｒｕｓｋａｌ⁃Ｗａｌｌｉｓ检验，血浆ＤＡＯ活性和内毒素㊁Ｄ－乳酸含量采用一般线性模型（ＧＬＭ）程序进行２ˑ２因子分析，差异显著者用Ｄｕｎｃａｎ氏法进行多重比较㊂结果以平均值和集合标准误（ＳＥＭ）表示，用Ｐ＜０．０５表示差异显著，０．０５ɤＰ＜０．１０表示有提高或降低的趋势㊂
２㊀结㊀果
２．１㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡盲肠菌群测序数据和Ａｌｐｈａ多样性的影响
㊀㊀由表２可知，ＢＳ组测序获得的有效序列显著多于其他各组（Ｐ＜０．０５），试验组测序获得的优质序列较对照组均有一定增加（Ｐ＞０．０５）㊂各组测序覆盖率均在９９．３０％以上，说明测序深度已经基本覆盖到样品中的所有物种㊂各组间Ａｃｅ指数㊁Ｃｈａｏ１指数㊁香农指数和辛普森指数均无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂
２．２㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡盲肠菌群Ｂｅｔａ多样性的影响
㊀㊀Ｂｅｔａ多样性分析可以比较不同样品间在物种多样性方面存在的差异大小㊂如图１所示，经主坐标分析（ｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｓａｎａｌｙｓｉｓ，ＰＣｏＡ）方法分析，结果显示对照组㊁ＭＭＴ组和ＢＳ组菌群结构分布相对紧凑，相似度较高，而ＭＭＴ＋ＢＳ组菌群结构分布相对零散，相似度低，群落构成差异较大㊂
９８８１
㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷
表２㊀９７％相似性水平下物种丰富度和Ａｌｐｈａ多样性指数
Ｔａｂｌｅ２㊀ＲｉｃｈｎｅｓｓａｎｄＡｌｐｈａｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｄｅｘｏｆｓｐｅｃｉｅｓａｔ９７％ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｌｅｖｅｌ
项目Ｉｔｅｍｓ
组别Ｇｒｏｕｐｓ
对照ＣｏｎｔｒｏｌＭＭＴＢＳＭＭＴ＋ＢＳ
ＳＥＭ
Ｐ值
Ｐ⁃ｖａｌｕｅ
有效序列Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／条４５５５５ｂ４６９２０ｂ５７２４２ａ４２３３３ｂ１７１６．４６０．００４
优质序列Ｇｏｏｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓ／条１５０２６１６１０７１７３５０１５８５５４８１．９００．４２１
覆盖率Ｃｏｖｅｒａｇｅｒａｔｅ／％９９．４０９９．３４９９．４１９９．３２０．０２０．４３６
Ａｃｅ指数Ａｃｅｉｎｄｅｘ４３０．２０４３８．８０４５６．８０４４８．８０９．８１０．８０１
Ｃｈａｏ１指数Ｃｈａｏ１ｉｎｄｅｘ４３２．００４５４．００４６６．２０４５６．４０１０．２７０．８３３
香农指数Ｓｈａｎｎｏｎｉｎｄｅｘ４．２４４．０２４．４０４．０１０．０８０．２１０
辛普森指数Ｓｉｍｐｓｏｎｉｎｄｅｘ０．０３９０．０６４０．０３８０．０５６０．００６０．１９３
㊀㊀同行数据肩标不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相同或无字母表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）㊂表３㊁表４同㊂
㊀㊀Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗ，ｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｏｒ
ｎｏｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．ＴｈｅｓａｍｅａｓＴａｂｌｅ３ａｎｄＴａｂｌｅ
４．
㊀㊀Ｃｏｎｔｒｏｌ：对照组ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；Ｃａ＿ＭＭＴ：蒙脱石组ＭＴＴｇｒｏｕｐ；ＢＳ：枯草芽孢杆菌组ＢＳｇｒｏｕｐ；Ｃａ＿ＭＭＴ＿ＢＳ：蒙脱石＋枯草芽孢杆菌组ＭＴＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐ㊂
图１㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡
盲肠菌群Ｂｅｔａ多样性的影响
Ｆｉｇ．１㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙＭＭＴａｎｄＢＳｏｎＢｅｔａｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ
ｃｅｃｕｍｍｉｃｒｏｆｌｏｒａｉｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ
２．３㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡盲肠菌群结构和物种丰度的影响
㊀㊀由表３可知，在门水平上，各组中拟杆菌门㊁厚壁菌门㊁变形菌门和梭杆菌门均为优势菌门，其中拟杆菌门和厚壁菌门相对含量分别为４５．４２％ ５９．１２％和３４．８６％ ４３．４１％㊂统计结果表明：各组间相对含量大于０．１５％的菌门相对含量均无显著差异（Ｐ＞０．０５）㊂与对照组相比，ＭＭＴ组梭杆菌门相对含量有降低的趋势（Ｐ＝０．０７２），ＭＭＴ＋ＢＳ组迷踪菌门相对含量有降低的趋势（Ｐ＝０．０５３）㊂
㊀㊀由表４可知，在相对含量大于１％的菌属中，各组间优势菌属存在一定差异，且拟杆菌属的相对含量最高，其序列占测序总量的３２．２５％㊂统计结果表明：与对照组相比，试验组巨单胞菌属和乳杆菌属相对含量均有不同程度的提高，其中，ＢＳ组和ＭＭＴ＋ＢＳ组巨单胞菌属相对含量较对照组显著提高（Ｐ＜０．０５），ＢＳ组乳杆菌属相对含量显著高于对照组和ＭＭＴ组（Ｐ＜０．０５）；试验组梭杆菌属和梭菌属相对含量均有降低，其中，ＭＭＴ组梭杆菌属相对含量较对照组有降低的趋势（Ｐ＝０．０７２），ＭＭＴ＋ＢＳ组梭菌属相对含量显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）㊂此外，ＭＭＴ组普雷沃氏菌科Ｇａ６Ａ１群相对含量显著高于ＢＳ组（Ｐ＜０．０５）；ＭＭＴ＋ＢＳ组丁酸弧菌属相对含量较ＢＳ组显著提高（Ｐ＜０．０５），理研菌科ＲＣ９群相对含量较ＢＳ组有降低的趋势（Ｐ＝０．０７５）㊂
２．４㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡血浆ＤＡＯ活性、Ｄ－乳酸和内毒素含量的影响
㊀㊀由表５可知，主效应分析表明，饲粮中添加ＭＭＴ对产蛋鸡血浆ＤＡＯ活性㊁Ｄ－乳酸和内毒素含量均无显著影响（Ｐ＞０．０５）；添加ＢＳ显著降低了血浆ＤＡＯ活性和内毒素含量（Ｐ＜０．０５），有降低血浆Ｄ－乳酸含量的趋势（Ｐ＝０．０５１）；ＭＭＴ和ＢＳ互作对血浆ＤＡＯ活性㊁Ｄ－乳酸和内毒素含量均无显著影响（Ｐ＞０．０５）㊂ＢＳ组血浆内毒素含量显著低于对照组和ＭＭＴ组（Ｐ＜０．０５），血浆Ｄ－乳酸含量较对照组有降低的趋势（Ｐ＝０．０８５）㊂
０９８１
４期曲湘勇等：饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响
表３㊀相对含量大于０．１５％（序列占测序总量比例）的菌门
Ｔａｂｌｅ３㊀Ｂａｃｔｅｒｉａｌｐｈｙｌａｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅａｂｏｖｅ０．１５％（ｓｅｑｕｅｎｃｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｔｏｔａｌｓｅｑｕｅｎｃｅａｍｏｕｎｔ）％
项目Ｉｔｅｍｓ
组别Ｇｒｏｕｐｓ
对照ＣｏｎｔｒｏｌＭＭＴＢＳＭＭＴ＋ＢＳ
ＳＥＭ
Ｐ值
Ｐ⁃ｖａｌｕｅ
拟杆菌门Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｔｅｓ５０．４６５９．１２５０．８４４５．４２２．３６０．１３１厚壁菌门Ｆｉｒｍｉｃｕｔｅｓ３８．７５３４．８６３６．５２４３．４１１．７３０．３５７变形菌门Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ４．４６３．４１６．６０７．０１０．８１０．２５１梭杆菌门Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａ３．４２０．４６２．５２１．４９０．５２０．０７２软壁菌门Ｔｅｎｅｒｉｃｕｔｅｓ０．５３０．４４０．５５０．３４０．０８０．９３４蓝藻菌门Ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａ０．６１０．２７０．４９０．４１０．１１０．９２５螺旋体门Ｓｐｉｒｏｃｈａｅｔｅｓ０．４５０．１６０．８３０．２００．１２０．１５５脱铁杆菌门Ｄｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ０．１３０．３８０．３２０．４００．０７０．３７０Ｓａｃｃｈａｒｉｂａｃｔｅｒｉａ０．２２０．２１０．１２０．４３０．０７０．７８２迷踪菌门Ｅｌｕｓｉｍｉｃｒｏｂｉａ０．３３０．２００．０７０．０５０．０５０．０５３
表４㊀相对含量大于１％（序列占测序总量比例）或差异显著的菌属
Ｔａｂｌｅ４㊀Ｂａｃｔｅｒｉａｌｇｅｎｕｓｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅａｂｕｎｄａｎｃｅａｂｏｖｅ１％（ｓｅｑｕｅｎｃｅｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆ
ｔｏｔａｌｓｅｑｕｅｎｃｅａｍｏｕｎｔ）ｏｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ％
项目Ｉｔｅｍｓ
组别Ｇｒｏｕｐｓ
对照ＣｏｎｔｒｏｌＭＭＴＢＳＭＭＴ＋ＢＳ
ＳＥＭＰ值
Ｐ⁃ｖａｌｕｅ
拟杆菌属Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ２８．９７３９．６４３０．７５２９．６５２．１３０．５１７理研菌科ＲＣ９群
Ｒｉｋｅｎｅｌｌａｃｅａｅ＿ＲＣ９＿ｇｒｏｕｐ７．２４６．４１７．９３４．３９０．６４０．０７５考拉杆菌属
Ｐｈａｓｃｏｌａｒｃｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ４．２０４．４７４．３４６．０３０．７００．９６６
柔嫩梭菌属
Ｆａｅｃａｌｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ３．２３３．７０５．９１２．４３０．６４０．３２７不可培养瘤胃菌科
Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ＿ｕｎｃｕｌｔｕｒｅｄ６．８５１．２０１．８７４．５６１．５００．３６３拟杆菌科
Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ＿ｕｎｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ２．６２３．６５２．１７２．３５０．３７０．５４６瘤胃菌科ＵＣＧ⁃０１４
Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ＿ＵＣＧ⁃０１４１．８１３．３７２．０８２．１３０．３００．６２３未分类瘤胃菌科
Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅ＿ｕｎｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ２．５３２．０８２．６６２．０３０．１５０．２４５巨单胞菌属Ｍｅｇａｍｏｎａｓ０．１６ｃ０．６９ｂｃ２．４６ａｂ４．８０ａ０．７４０．００３梭杆菌属Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ３．４２０．４６２．５２１．４９０．５２０．０７２瘤胃球菌属ｔｏｒｑｕｅｓ群
Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ＿ｔｏｒｑｕｅｓ＿ｇｒｏｕｐ１．７９１．８８１．５１２．１１０．１７０．７５４Ｒｕｍｉｎｉｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ＿９１．９６１．６５１．６１１．６１０．１１０．６２４脱硫弧菌属Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ１．７４２．０８１．５５１．２６０．１５０．４２９普雷沃氏菌科ＵＣＧ⁃００１
Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ＿ＵＣＧ⁃００１２．０２１．６３１．０７１．８００．２２０．６６３未分类毛螺菌科
Ｌａｃｈｎｏｓｐｉｒａｃｅａｅ＿ｕｎｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ１．７７１．５２１．２４１．７６０．１４０．６１４
１９８１
㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷续表４
项目Ｉｔｅｍｓ
组别Ｇｒｏｕｐｓ
对照ＣｏｎｔｒｏｌＭＭＴＢＳＭＭＴ＋ＢＳ
ＳＥＭＰ值
Ｐ⁃ｖａｌｕｅ
另枝菌属Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ０．７３２．２０２．４６０．７４０．５３０．４７６紫单胞菌属Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ１．５６１．２９１．４４１．３６０．１３０．９６７乳杆菌属Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ０．５８ｂ０．６３ｂ２．６５ａ１．２９ａｂ０．２３０．００１萨特氏菌属Ｓｕｔｔｅｒｅｌｌａ０．９７１．０１１．２４１．２７０．１６０．９５８厌氧棍状菌属Ａｎａｅｒｏｔｒｕｎｃｕｓ１．２４１．３８１．０００．８５０．０９０．１７６普雷沃氏菌科Ｇａ６Ａ１群
Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａｃｅａｅ＿Ｇａ６Ａ１＿ｇｒｏｕｐ０．７４ａｂ１．７８ａ０．１３ｂ１．１０ａｂ０．２３０．０４９梭菌属Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ１．２７ａ０．９４ａｂ０．７７ａｂ０．４２ｂ０．１３０．０１７丁酸弧菌属Ｂｕｔｙｒｉｃｉｍｏｎａｓ１．１１ａ０．０３ａｂ０．０１ｂ０．６８ａ０．３１０．０１９表５㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡血浆ＤＡＯ活性、Ｄ－乳酸和内毒素含量的影响
Ｔａｂｌｅ５㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙＭＭＴａｎｄＢＳｏｎｄｉａｍｉｎｅｏｘｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆ
Ｄ⁃ｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄｅｎｄｏｔｏｘｉｎｉｎｐｌａｓｍａｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ
组别Ｇｒｏｕｐｓ
二胺氧化酶
ＤＡＯ／（Ｕ／Ｌ）
Ｄ－乳酸
Ｄ⁃ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ／（ｍｍｏｌ／Ｌ）
内毒素
Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ／（ＥＵ／ｍＬ）
对照Ｃｏｎｔｒｏｌ２．５４２．６２０．６０ａＭＭＴ２．３６２．２９０．６３ａＢＳ１．６４１．５３０．５１ｂＭＭＴ＋ＢＳ２．１０２．１９０．５８ａｂＳＥＭ０．１４０．１６０．０２Ｐ值Ｐ⁃ｖａｌｕｅ０．１１８０．０８５０．０２１主效应分析Ｍａｉｎｅｆｆｅｃｔｓａｎａｌｙｓｉｓ
蒙脱石
ＭＭＴ／（ｇ／ｋｇ）０２．０９２．０８０．５５０．５２．２３２．２４０．６０
枯草芽孢杆菌ＢＳ／（ＣＦＵ／ｋｇ）
０２．４５ａ２．４５０．６１ａ５ˑ１０８１．８７ｂ１．８６０．５４ｂ
Ｐ值Ｐ⁃ｖａｌｕｅ
蒙脱石ＭＭＴ０．６０９０．５９１０．０６５枯草芽孢杆菌ＢＳ０．０３９０．０５１０．０１３蒙脱石ˑ枯草芽孢杆菌
ＭＭＴˑＢＳ０．２３９０．１０４０．６１３
㊀㊀同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），相同或无字母表示差异不显著（Ｐ＞０．０５）㊂
㊀㊀Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎ，ｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５），ｗｈｉｌｅｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｏｒｎｏｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５）．
３㊀讨㊀论
３．１㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡盲肠菌群多样性的影响
㊀㊀本研究采用高通量测序技术对产蛋鸡２０个盲肠内容物样品进行了测序，ＢＳ组样品测序获得的有效序列显著多于其他各组，试验组的优质序列较对照组均有一定增加㊂对菌群进行多样性分析发现，试验组和对照组样品间Ａｌｐｈａ多样性指数均无显著差异；另外，经ＰＣｏＡ方法分析Ｂｅｔａ多样性发现，ＭＭＴ＋ＢＳ组菌群结构分布相对零散，相似度较低，提示样品中群落构成差异较大㊂本课题组前期的研究表明，添加０．６ｇ／ｋｇＭＭＴ在一定程度上提高了产蛋鸡盲肠菌群的丰富度和Ａｌｐｈａ多样性［１２］，提示ＭＭＴ对产蛋鸡肠道菌群多样性的影响与其添加水平有关㊂Ｇｕｏ等［８］报道，添加ＢＳ
提高了产蛋鸡盲肠的香农指数和Ｃｈａｏ１指数；本试验中，ＢＳ组香农指数和Ｃｈａｏ１指数较对照组有
２９８１
４期曲湘勇等：饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响
一定提高，提示添加ＢＳ对产蛋鸡盲肠微生物多样性的影响是正面的㊂
３．２㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡盲肠菌群结构和物种丰度的影响
㊀㊀ＭＭＴ㊁ＢＳ及其联用对产蛋鸡盲肠优势菌门的相对含量没有产生显著影响，与前人的报道［８，１２］一致；而Ｌｉ等［１３］研究指出，添加ＢＳ显著提高了肉仔鸡盲肠拟杆菌门和变形菌门相对含量，降低了厚壁菌门相对含量，与本试验的结果不一致，可能与开始饲喂ＢＳ时鸡的年龄有关，即健康成年鸡肠道中已形成较稳定的微生态环境，添加ＢＳ（肠道非定植菌）很难引起肠道内主要微生物发生大的变化㊂本试验发现，试验组梭杆菌门相对含量较对照组均有一定程度降低㊂研究表明，梭杆菌门相对含量提高与消化道疾病有关［１４］，且此菌门的一些成员不利于机体脂质代谢［１５］，提示梭杆菌门相对含量的降低可能对产蛋鸡有一定益处㊂此外，试验组迷踪菌门相对含量有不同程度降低，本课题组前期的研究也发现ＭＭＴ降低了产蛋鸡盲肠迷踪菌门相对含量［１２］㊂梁惠等［１６］报道，酒精性肝损伤大鼠粪便迷踪菌门相对含量明显提高，并指出此菌门相对含量升高可能与肠道损伤有关㊂本试验中，ＭＭＴ＋ＢＳ组迷踪菌门相对含量最低，且较对照组有降低的趋势，提示二者联用可能有利于改善产蛋鸡盲肠菌群㊂
㊀㊀在属水平上，ＭＭＴ㊁ＢＳ及其联用对盲肠优势菌属相对含量没有产生显著影响㊂与对照组相比，ＢＳ组乳杆菌属相对含量显著提高，ＢＳ组和ＭＭＴ＋ＢＳ组巨单胞菌属相对含量显著提高㊂Ｇｕｏ等［８］报道，ＢＳ增加了产蛋鸡盲肠乳杆菌属的相对丰度；Ｆｏｒｔｅ等［１７］也指出，ＢＳ和嗜酸乳杆菌促进了产蛋鸡肠道乳杆菌属的增殖，本试验的结果与以上学者的报道基本一致㊂乳杆菌属是肠道有益菌群，其利用葡萄糖发酵后能产生乳酸和乙酸等㊂巨单胞菌属化能有机营养型微生物，发酵各种碳水化合物生成乳酸㊁乙酸和丁酸等，它们能够降低肠道ｐＨ，间接抑制外来病原菌的入侵㊂同时，丁酸还可为宿主肠上皮细胞生长提供能量，有利于维持肠道屏障功能［１８］㊂本试验中，ＭＭＴ组梭杆菌属相对含量较对照组有降低的趋势，ＭＭＴ＋ＢＳ组梭菌属相对含量显著低于对照组，与前人的报道［８，１７］基本一致㊂梭杆菌属和梭菌属均是肠道有害菌群，梭杆菌属包含坏死梭杆菌和核梭杆菌等多种致病菌，对动物和人类均具有毒害作用；苗慧芳等［１９］报道，结直肠癌患者粪便梭杆菌属丰度明显高于健康人，提示此菌属数量增加可能与肠道疾病有关㊂有学者证明，梭菌属的一些菌能够产生α－毒素，与坏死性肠炎的发生有关［２０］㊂此外，本研究表明，ＭＭＴ显著提高了普雷沃氏菌科
Ｇａ６Ａ１群相对含量，普雷沃氏菌与短链脂肪酸的合成有关，而短链脂肪酸的缺乏减弱了其对肠道屏障的保护作用；Ｓｈｅｎ等［２１］报道，非酒精性脂肪肝患者粪便中普雷沃氏菌相对含量在科和属水平出现显著下降，因此，普雷沃氏菌通常被认为是有益菌㊂丁酸弧菌属化能有机营养型微生物，可发酵底物广且发酵产物丰富，其发酵葡萄糖的主要产物是丁酸和乳酸［２２］，本试验中，ＭＭＴ和ＢＳ降低了丁酸弧菌属的相对含量，但二者联用可使此菌的相对含量升高㊂此外，本试验发现，试验组另枝菌属相对含量较对照组均有一定提高㊂据报道，此菌是一种耐胆盐的微生物，能产生溶纤维蛋白酵素，发酵碳水化合物生成乙酸㊁丙酸，并可高效表达木糖异构酶［２３］㊂
㊀㊀本课题组最近的研究表明，饲粮添加０．５ｇ／ｋｇ
ＭＭＴ㊁５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ及其联用均提高了产蛋鸡的产蛋率㊁日产蛋重，且二者联用降低了料蛋比［１１］㊂综上，ＭＭＴ和ＢＳ在一定程度上提高了盲肠部分有益菌属相对含量，降低了部分有害菌属相对含量，说明二者可改善产蛋鸡盲肠菌群，可能对提高产蛋性能有一定作用㊂鉴于ＭＭＴ和ＢＳ联用提高了巨单胞菌属㊁丁酸弧菌属和乳杆菌属相对含量，降低了梭菌属和梭杆菌属相对含量，提示二者联用对优化肠道菌群可能具有协同作用，进而有益于提高产蛋鸡的生产性能㊂本研究的结果与Ｃａｏ等［１０］的报道基本一致，可能是在ＭＭＴ的保护作用下，ＢＳ的益生功效增强［１１］㊂综合分析，ＭＭＴ和ＢＳ联用对提高产蛋鸡生产性能和盲肠菌群的效果优于二者单独使用㊂
３．３㊀饲粮添加ＭＭＴ和ＢＳ对产蛋鸡肠道通透性的影响
㊀㊀当动物肠黏膜屏障受损时，肠道通透性增大，血液中内毒素和Ｄ－乳酸含量增加，ＤＡＯ活性提高㊂本试验中，添加ＭＭＴ不影响产蛋鸡血浆ＤＡＯ活性㊁内毒素和Ｄ－乳酸含量㊂孟艳莉［２４］研究指出，添加ＭＭＴ显著降低了断奶仔猪血浆Ｄ－乳酸含量和ＤＡＯ活性；此外，Ｌｅｉ等［２５］报道，肉牛
３９８１
㊀
动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷
饲粮中添加ＭＭＴ，其血浆㊁瘤胃液㊁肠道食糜和粪
便中内毒素水平均显著降低㊂本试验的结果与以
上学者的研究结果不一致，其可能原因有以下几
方面：１）动物的生理状况㊂仔猪断奶后，肠黏膜屏
障在一定程度上受损，使肠道通透性增加，故此时
在饲粮中添加ＭＭＴ，有利于发挥其功效；而本试
验蛋鸡处于产蛋高峰期阶段，其肠道发育成熟，且
产蛋鸡处于正常的生产条件下，肠黏膜屏障相对
完整，进而添加ＭＭＴ难以对上述指标产生显著影
响㊂２）饲粮因素㊂肉牛饲粮中添加一定比例的草
料会降低瘤胃ｐＨ和影响体内微生态环境，容易造
成瘤胃酸中毒和产生大量的内毒素［２６］，而ＭＭＴ具有吸附内毒素的作用，因而添加ＭＭＴ显著降低
了内毒素含量㊂３）ＭＭＴ的添加水平㊂上述肉牛
和断奶仔猪试验中ＭＭＴ的添加水平分别为２㊁３ｇ／ｋｇ，而本试验ＭＭＴ的添加水平为０．５ｇ／ｋｇ，可能该水平下的ＭＭＴ对产蛋鸡肠道通透性不产生显著影响㊂
㊀㊀目前，关于ＢＳ对家禽肠道通透性影响的研究
很少㊂本研究表明，ＢＳ显著降低了血浆ＤＡＯ活
性和内毒素含量，且有降低血浆Ｄ－乳酸含量的趋
势，提示ＢＳ能增强产蛋鸡肠道屏障功能，降低肠
道通透性，推测对提高产蛋鸡的生产性能起一定
作用［１１］㊂这可能与ＢＳ一定程度上降低了肠道有害菌数量㊁优化肠道菌群有关，已知一些细菌能够产生内毒素，肠道内毒素含量降低，一方面，能够进入血液循环的内毒素减少；另一方面，肠道有害菌和内毒素减少，肠黏膜受损的几率降低，机体维持正常的屏障功能和肠道通透性，进而内毒素㊁ＤＡＯ和Ｄ－乳酸释放减少或难以穿过肠道屏障进入血液㊂此外，本试验中，ＭＭＴ和ＢＳ对血浆ＤＡＯ活性和内毒素㊁Ｄ－乳酸含量不产生显著交互作用㊂Ｃａｏ等［１０］报道，ＭＭＴ和嗜酸乳杆菌联用对提高肠上皮细胞跨膜电阻值和降低荧光素异硫氰酸酯葡聚糖４ｋｕ渗透率的作用略优于二者单独添加，但没有表现出明显优势，与本试验的结果基本一致㊂
４㊀结㊀论
㊀㊀①饲粮添加ＭＭＴ有降低盲肠梭杆菌门和梭
杆菌属相对含量的趋势，对肠道通透性没有显著
影响；添加ＢＳ提高了盲肠巨单胞菌属和乳杆菌属
的相对含量，降低了肠道通透性㊂㊀㊀②ＭＭＴ和ＢＳ联用降低了盲肠迷踪菌门和梭菌属的相对含量，提高了巨单胞菌属相对含量，提示二者对调节产蛋鸡肠道菌群可能具有协同作用㊂
㊀㊀③肠道中这些菌群丰度的变化与肠道健康相关，可能对提高产蛋鸡的生产性能有作用㊂
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４９８１
４期曲湘勇等：饲粮添加蒙脱石和枯草芽孢杆菌对产蛋鸡盲肠菌群和肠道通透性的影响
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ａｎｄｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｉｎｂｅｅｆｃａｔｔｌｅ［Ｊ］．Ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１３，１５８（１／２／３）：５７－６３．
［２６］㊀ＤＯＮＧＧＺ，ＬＩＵ，ＳＭ，ＷＵＹＸ，ｅｔａｌ．Ｄｉｅｔ⁃ｉｎｄｕｃｅｄｂａｃｔｅｒｉａｌｉｍｍｕｎｏｇｅｎｓｉｎｔｈｅｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔｏｆ
ｄａｉｒｙｃｏｗｓ：ｉｍｐａｃｔｓｏｎｉｍｍｕｎｉｔｙａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．
ＡｃｔａＶｅｔｅｒｉｎａｒｉａＳｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ，２０１１，５３：４８．
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动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３１卷
∗Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄｅｑｕａｌｌｙ
∗∗Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ａｓｓｏｃｉａｔｅｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｈｃｑ５１２５＠１６３．ｃｏｍ
（责任编辑㊀陈㊀鑫）
ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＤｉｅｔａｒｙＭｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓｏｎＣｅｃａｌ
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Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙｍｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅ（ＭＭＴ）ａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ（ＢＳ）ｏｎｃｅｃａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａａｎｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ．Ｔｈｅｔｒｉａｌｕｓｅｄａ２ˑ２ｆａｃｔｏｒｉａｌｒａｎ⁃ｄｏｍｄｅｓｉｇｎ．Ａｔｏｔａｌｏｆ３６０ｈｅａｌｔｈｙ２９⁃ｗｅｅｋ⁃ｏｌｄＬｏｈｍａｎｎｐｉｎｋｈｅｎｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｒｒａｎｇｅｄｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓｗｉｔｈ６ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓｐｅｒｇｒｏｕｐａｎｄ１５ｈｅｎｓｉｎｅａｃｈｒｅｐｌｉｃａｔｅ．Ｔｈｅｈｅｎｓｉｎ４ｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｆｅｄａｂａｓａｌｄｉｅｔ（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），ｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔ＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ（ＭＭＴｇｒｏｕｐ），ｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔ＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＢＳｇｒｏｕｐ），ａｎｄｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔ＋０．５ｇ／ｋｇＭＭＴ＋５ˑ１０８ＣＦＵ／ｋｇＢＳ（ＭＭＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐ），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｄｊｕｓｔｍｅｎｔｐｅｒｉｏｄｌａｓｔｅｄｆｏｒ７ｄａｙｓ，ａｎｄｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｐｅｒｉｏｄｌａｓｔｅｄｆｏｒ７０ｄａｙｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄａｓｆｏｌｌｏｗｓ：１）ｔｈｅｑｕａｎｔｉ⁃ｔｉｅｓｏｆｅｆｆｅｃｔｉｖｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｔｈｅＢＳｇｒｏｕｐｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ＭＭＴｇｒｏｕｐａｎｄＭＭＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）；ｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｉｅｓｏｆｇｏｏｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｍｏｒｅｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．２）Ａｔｔｈｅｐｈｙｌｕｍｌｅｖｅｌ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＦｕｓｏｂａｃｔｅｒｉａｉｎｔｈｅＭＭＴｇｒｏｕｐｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０７２），ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＥｌｕｓｉｍｉ⁃ｃｒｏｂｉａｉｎｔｈｅＭＭＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０５３）．Ａｔｔｈｅｇｅｎｕｓｌｅｖ⁃ｅｌ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＦｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｔｈｅＭＭＴｇｒｏｕｐｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＝０．０７２）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｉｎｔｈｅＢＳｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇ⁃ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＭｅｇａｍｏｎａｓｉｎＢＳａｎｄＭＭＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉ⁃ｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｉｎｔｈｅＭＭＴ＋ＢＳｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０５）．３）Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｄｉｅｔａｒｙＢＳｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｄｉａｍ⁃ｉｎｅｏｘｉｄａｓｅａｎｄｅｎｄｏｔｏｘｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎｐｌａｓｍａ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｅｎｄｅｄｔｏｒｅｄｕｃｅｐｌａｓｍａｃｏｎｔｅｎｔｏｆＤ⁃ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ（Ｐ＝０．０５１）．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｔｈｅｓｐｅｃｉｅｓａｂｕｎｄａｎｃｅｏｆｃｅｃａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａｉｎｌａｙｉｎｇｈｅｎｓｃａｎｂｅｐａｒｔｉａｌｌｙｉｎｆｌｕ⁃ｅｎｃｅｄｂｙｓｉｎｇｌｅｏｒｃｏｍｂｉｎｅｄａｄｄｉｔｉｏｎｏｆＭＭＴａｎｄＢＳ，ａｎｄｄｉｅｔａｒｙｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｈＢＳｄｅｃｒｅａｓｅｓｉｎｔｅｓｔｉ⁃ｎａｌｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ．［ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，２０１９，３１（４）：１８８７⁃１８９６］Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｏｎｔｍｏｒｉｌｌｏｎｉｔｅ；Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ；ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ；ｇｕｔｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ；ｌａｙｉｎｇｈｅｎｓ
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