葡萄胚挽救研究进展

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“新葡7号”葡萄胚挽救最佳接种时期研究

１次，采集的幼果样品带回实验室，随机抽取３０
培养能否成功的前提。郭修武等人研究了胚珠粒果粒测量幼果重及胚珠质量和纵横径，确定接种时间和培养基种类对无核葡萄胚挽救的影最佳取样时间。响，结果表明，影响无核葡萄胚挽救最重要的因
菌水漂洗４－６次，将消毒后的果粒切开，取出胚
胡学林，钱文婕，张静，新疆生产建设兵团第十三师
珠，接种于内装５０ｍＬ培养基的１５０ｍＬ的培养瓶中，每瓶接种２０枚胚珠，每处理５瓶，置培养室中培养。培养条件为：温度２５＿＋１℃ ，光照强
农业科学研究所，邮编８３９００１；朱婉婷，新疆哈密市农
业技术推广中心。
收稿日期：２０１７ —１０ — ０４
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率达７５．２３％。不同品种、不同组合取样时间都７０％酒精浸泡３０～６０秒，无菌水冲洗３￣４次，再不同，本文以无核白葡萄大粒芽变新品种 “ 新葡将果穗放入０．１％升汞中浸泡６－８分钟，再用无
２０１７．１１
矗，匕ｌ亳｝艺

无核葡萄胚挽救技术研究进展

ＤＯＩ：１０．１３４１４／ｊ．ｃｎｋｉ．ｚｗｐｐ．２０１４．０３．０１３
萄是世界上种植面积较大的水果之一，占全球无核品种作父本，但是获得无核后代的几率较低。而且育ｊ水果种植面积的１０％以上。它不仅能投产旱，种周期长；三倍体杂交育种虽可以获得无核葡萄，但是二营养丰富，而且适应性强，经济效益高 …。而无核葡萄品倍体与四倍体的亲和力差，获得杂交后代难度同样很大。种更是以其品质优良、食用方便广受消费者的喜爱ห้องสมุดไป่ตู้ 。。近因此将无核品种做母本，利用胚挽救技术，在合子胚败育年来无核葡萄育种技术取得较大进展。迄今为止，美国已之前将其取出并在适宜的条件下离体培养，使其继续发育培育出了４Ｏ多个无核葡萄品种Ｈ】，中国、日本、以色列也成苗，最终形成完整植株的话，这样便能极大地提高后代
萄也习惯称为 “ 无核葡萄 ” 。有个别葡萄品种存在种子败小的胚中获得植株，也可以获得单倍体植株从而缩短育种
育和不完全败育两种败育形态，如壬亮经过试验研究发周期】。鉴于胚挽救的种种优势，此项技术已在无核葡萄
子］，仅留有不同大小的种子痕迹。由于残存种痕很薄且针对这些胚进行早期离体培养最终获得完整植株的一种技脆，在食用葡萄时，不易感觉到它的存在，所以把这类葡术。胚挽救技术不仅影响植物问远缘杂交，而且可以从弱

无核抗病葡萄胚挽救技术体系优化及新品系培育

无核抗病葡萄胚挽救技术体系优化及新品系培育无核葡萄是当今世界葡萄消费和育种的重要方向之一。

无核葡萄的合子胚在发育过程中败育而不能发育成正常的种子,因而常规育种只能以无核品种作父本杂交选育无核葡萄品种,但后代中无核几率低(0～15.9%),育种效率低下。

胚挽救技术可用于无核葡萄作母本的品种间杂交,后代无核性状比率高(45%～82%),育种效率高,但选育的欧洲葡萄无核品种的突出缺点是缺乏抗病性。

国外已将该技术应用于无核葡萄与圆叶葡萄育种中,但又存在杂交障碍,成苗率极低的问题。

中国葡萄属野生种抗病性强,与欧亚种无核品种杂交亲合性强。

因此,利用胚挽救技术获得欧洲葡萄无核品种与中国葡萄属野生种杂交后代,以培育无核抗病葡萄新品种(系)是完全可行的。

本研究田间人工杂交38 个葡萄种间杂交组合和13 个种内杂交组合。

在前期胚挽救初步研究的基础上,本试验用19 个以无核葡萄为母本的杂交组合为试材,进行了无核抗病葡萄胚挽救的进一步研究,主要取得了如下研究结果: 1. 通过田间杂交和胚挽救获得了51 个杂交组合的葡萄新种质2998 份。

利用胚挽救技术获得19 个杂交组合幼苗814 株,其中13 个无核品种×中国葡萄属野生种(杂种)组合成苗257 株;常规田间杂交组合32 个,成苗2184 株,其中20 个中国葡萄属野生种(杂种)×无核品种组合成苗1606 株; 2. 获得了适宜无核抗病葡萄即将败育的幼胚继续发育的最佳培养基:MM3+10mmol/L 甘氨酸;建立了其最优培养方式:固液双层培养;筛选到了适宜作胚挽救母本的欧洲葡萄无核品种是爱莫无核(Olmo Seedless)、底来特(Delight)和火焰无核(Flame Seedless)。

适宜培养基、培养方式和胚挽救母本的最佳搭配使无核抗病葡萄胚发育率高达66.67%,成苗率达64.58%。

获得了一种适宜诱导合子胚胚状体再生的培养基配方:ER 固体+1.0umol/L BA。

南方地区无核葡萄胚挽救及其取样时间研究

南方地区无核葡萄胚挽救及其取样时间研究作者：梅军霞等来源：《安徽农业科学》2014年第13期摘要 [目的]探讨无核葡萄品种离体培养的培养条件，并确定最佳取样时期。

[方法]选取南方无核葡萄品种中5个自然授粉胚珠和4个杂交组合的胚珠为试材，通过形态学观察确定取样时间，探索适宜南方无核葡萄品种的胚挽救程序。

[结果]适宜火焰无核×寒香蜜、碧香无核、火焰无核、奥迪亚无核等的胚挽救程序为授粉后30～40 d剥取胚珠接种在ER培养基，暗培养90 d，取胚转入WPM培养基上成苗。

[结论]该研究可为提高幼胚离体发育和萌发成苗率提供科学依据。

关键词无核葡萄；胚挽救；取样时间中图分类号 S663.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）13-03842-02Abstract [Objective] The aim was to discuss the in vitro cultivation conditions of seedless grape and confirm on the best sampling time. [Method] Choosing five kinds of natural pollination and four hybrid combinations of southern seedless grape as materials， the sampling time was identified by morphological observation and the suitable embryo rescue progress for southern seedless grape was explored. [Result] The suitable embryo rescue progress for Flame Seedless×Hanxiangmi， Bixiang Wuhe， Flame Seedless， Otilia Seedless was that the embryos were first inoculated at 30-40 days after fertilization， and then developed on the ER medium for 90 d， the embryos were cultured on WPM medium for germination. [Conclusion] The study provides a scientific basis for improving embryos development in vitro and germination rate.Key words Seedless grape； Embryo rescue； Sampling dates由于无核葡萄没有种子，不能作为母本获得杂交后代植株，只能利用有核品种作为母本与其杂交，但其后代出现无核植株的比率很低，且育种周期较长。

金星无核葡萄胚挽救影响因素的研究

关键词：无核葡萄；胚挽救；金星无核；培养基；取样时期
中图分类号：Ｓ６６３．１文献标识码：Ａ
ＳｔｕｄｙｏｎＦａｃｔｏｒｓＡｆｆｅｃｔｉｎｇＥｍｂｒｙｏＲｅｓｃｕｅｏｆＶｅｎｕｓＳｅｅｄｌｅｓｓＧｒａｐｅ
西南农业学 Nhomakorabea报
２０１３年２６卷１期
Ｖ０Ｉ．２６Ｎｏ．１
ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ
文章编号：１００１－４８２９（２０１３）Ｏ１ —０２９４— ０５
ｔｉｎｇｔｉｍｅ，ａｎｄｔｈｅｉｘｄｌｕｅｎｅｉｎｇｌｅｖｅｌｏｆｏｔｈｅｒｆａｃｔｏｒｓｗｅｅｒｄｉｆｅｒｅｎｔａｍｏｎｇｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ：ｔｈｅｓｕｉｔｂｌａｅｅｒｐｉｏｄｏｆｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎＷｓａｃｏｌｏｉｎｒｇｉｎｆｒｕｉｔｐｅｅｌｏｆ１０％，ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｇｒｏｗｔｈａｔｒｅｒｅａｃｈｅｄ６３．３８％；ＥＲｍｅｄｉｕｍｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ１．５ｍｇ／ＬＩＢＡ，１．０ｍｓ／Ｌ６－ＢＡｎｄａ０．５ｍｇ／Ｌ

假单性结实无核葡萄胚败育时期的确定及胚挽救影响因素的研究

假单性结实无核葡萄胚败育时期的确定及胚挽救影响因素的研究无核葡萄是当今世界葡萄消费和育种的重要方向之一。

假单性结实无核葡萄的合子胚在发育过程中败育而不能发育成正常的种子,因而常规育种只能以无核品种作父本杂交选育无核葡萄品种,但后代中无核几率低（0～15.9%）,育种效率低。

而胚挽救技术可以挽救败育的幼胚,使无核葡萄品种作母本成为了可能,大大提高了无核葡萄的育种效率。

本试验以延边地区主栽的两个无核葡萄品种无核白和布朗无核为试材,研究了胚败育时期及胚挽救的影响因素。

研究结果表明:无核白在授粉后第38天大部分胚开始败育,胚乳在胚发生败育之前已经开始败育并解体消失,随之胚也开始出现败育,并在授粉后第44天完全败育;布朗无核的胚也是伴随着胚乳的败育消失而开始大量败育的,大部分胚在授粉后第42天开始败育,并在授粉后第46天完全败育消失。

所以,无核白的最佳胚挽救时期是授粉后第37天,布朗无核的最佳胚挽救时间是授粉后第40天。

无核白的最佳胚挽救培养基为Nitsch+IAA 1.0 mg·L-1+BA 0.5 mg·L-1+GA30.5 mg·L-1,附加6%的蔗糖;在此培养基上,授粉后第37天的无核白胚珠的萌发率为42.25%,成苗率为23.96%;布朗无核最佳胚挽救培养基为Nitsch+IAA 2.0mg·L-1+BA 0.5 mg·L-1+GA3 0.5 mg·L-1,附加6%的蔗糖,在此培养基上,授粉后第40天的布朗无核胚珠的萌发率和成苗率分别为44.97%和39.74%。

用胚挽救技术创制无核葡萄及三倍体新种质的开题报告

用胚挽救技术创制无核葡萄及三倍体新种质的开题报告
背景概述：
葡萄是全球最重要的经济作物之一，其广泛的适应能力和对多种气候和土壤类型的容忍性使其成为各国重要的果树品种之一。

为了应对市场需求，保证葡萄产业的可
持续发展，需要不断研发新的葡萄品种。

无核葡萄和三倍体新种质因其具有较高的生
产性和经济效益，一直是葡萄育种的研究热点。

研究目的：
本研究旨在采用胚挽救技术，创制无核葡萄及三倍体新种质，为葡萄产业的可持续发展做出贡献。

研究方法：
1. 无核葡萄的创制：通过胚挽救技术，将已经成熟的花粉或叶片细胞脱除基因组，然后与无核葡萄雌性植株杂交，得到无核葡萄。

2. 三倍体新种质的创制：将双倍体无核葡萄与四倍体葡萄雌性花器杂交，得到三倍体新种质。

3. 分子生物学鉴定：采用PCR、酶切等分子生物学方法，对无核葡萄及三倍体新种质杂交后代进行鉴定，确保其品质与性状符合预期。

预期结果：
通过使用胚挽救技术创制无核葡萄及三倍体新种质，我们预期得到的新种质将具有较高的生产性和经济效益，并且对于葡萄产业的发展是具有重要意义的。

意义与价值：
研究结果可以创制出真正意义上的无核葡萄，可以便于人们直接食用，也能更好地满足人们在加工和储存方面的需求，有着较好的市场前景。

同时，三倍体新种质可
以通过不同的组合运用到不同地理环境中，提高葡萄品种整体的适应性，对于丰富葡
萄品种、提高葡萄产业经济效益都具有重要的推动作用。

‘弗雷无核’胚挽救适宜接种期研究

目前无核葡萄在国外葡萄市场上占据绝对的主导地位。

在我国随着经济发展,以及消费市场的日趋成熟,无核葡萄也越来越受到消费者的青睐,种植面积不断增加,市场对不同类型品种的需求日渐丰富多元化。

因此培育优质无核葡萄品种,已成为葡萄育种的主流方向。

传统的育种方法,为避免无核葡萄合子胚败育,只能用有核葡萄品种作为母本、无核品种作为父本进行杂交。

这种方法,仅能产生较少的无核后代,效率非常低,平均仅为13.5%[1]。

而使用胚培养技术,则可以使用无核葡萄作母本,有核、无核葡萄均可以作父本杂交,既可以极大拓宽亲本的选择范围,同时也可以简化育种程序,提高了后代的无核率,胚的离体培养使无核葡萄的育种周期缩短,对无核葡萄的育种有极大的促进作用。

1982年RAMMING 等[2]率先发明胚挽救技术,成功实现无核葡萄作为杂交母本,从而大幅提高无核后代的比例,使得这项葡萄育种技术得到更广泛的推广与普及应用。

国内外专家学者也正在利用这种手段进行无核葡萄的选育,到目前为止,法国、美国、日本等许多国家创造出了大量的无核葡萄新品种种质。

我国部分高校和科研院所自20世纪80年代中后期开始引进发展该技术,在无核葡萄的胚培养技术方面做了大量的工作。

目前,通过胚挽救技术已选育出了数十种新的无核葡萄品系,并培育出一些新种质[3]。

‘火焰无核’葡萄又称‘弗蕾无核’,欧亚种,原产美国,由美国Fresno 园艺试验站杂交选育而成。

1993年新疆葡萄瓜果开发研究中心将其作为资源引入新疆,1998-2001年3年品比试种,获得好评[4]。

2001年大量扩繁推广,目前已成为新疆推广面积较大的无核品种之一。

据中国农业大学梁树乐等人研究,以火焰无核为母本进行胚培养,胚萌发率以及成苗率明显高于其他10个无核品种。

因此本研究采用弗雷无核做母本,本地自育与外引品种做父本配置组合,做进一步试验研究。

1材料与方法1.1试验材料试验于2019年在石河子农业科学研究院葡萄所试验园进行,供试母本材料是8年‘弗雷无核’,3~5个中部果穗挂牌,去雄后分别与本所资源圃多年生‘无核白鸡心’‘紫香无核’‘夏至红’‘粉红亚都蜜’葡萄进行杂交,获得杂交组合。

18830254_胚挽救技术在我国无核葡萄育种中的应用及展望

葡萄（Vitis vinifera ）是世界四大水果之一，栽培遍及五大洲，鲜食葡萄因粒大味美而深受消费者的喜爱。

无核葡萄外形美观，品质优良，食用方便，在鲜食市场和制干领域均占据重要地位。

目前，无核葡萄品种是我国各葡萄产区的主推品种[1]，其中，大部分为国外育成品种，国内育成品种较少。

市售鲜食无核葡萄中大多是将有核品种经过无核化处理后得到的，如玫瑰香、巨峰、藤稔、红地球、醉金香、阳光玫瑰等，天然无核品种只占一小部分。

随着国际果品安全进程的不断推进，利用化学物质诱导葡萄无核化势必要被应用绿色安全的无核品种所取代。

因此，加大无核葡萄育种力度，选育大粒、优质且具香味的鲜食无核葡萄品种成为当今葡萄育种的主要目标[2，3]。

无核葡萄育种途径有芽变选种、杂交育种、多倍体育种、胚挽救育种、分子标记辅助育种等，其中杂交育种是无核葡萄育种的主要手段。

传统的杂交方式只能以有核葡萄为母本，依靠传递力强的无核父本来传递无核性状，利用这种方式选育无核葡萄品种效率很低，杂种后代中无核的几率一般不超过15%[4]，且选育过程时间长。

但这一状况在1982年因Ramming等创立无核葡萄胚挽救（embryo rescue ）技术而改变。

胚挽救技术是运用植物组织培养技术，对假单性结实或其他发育有障碍的受精胚或胚珠，在其合子胚败育之前进行离体培养，阻止幼胚败育，利用胚乳及培养基中的营养使其发育成充实的胚，最终形成完整的植株[5]。

该技术使无核葡萄×无核葡萄的杂交方式成为现实，是目前无核葡萄育种研究中发展最快的新兴实用技术，推动了无核葡萄的育种进程。

我国自20世纪90年代开始无核葡萄胚挽救技术研究，现已在无核葡萄种质创新[4，6~15]、三倍体无核品种选育[8，10，11，16~20]、抗性品种选育[21~26]等方面广泛应用，同时对影响胚挽救的不同因素[3，9，21，24，27~34]进行了研究。

1胚挽救技术在无核葡萄育种中的应用1.1杂交育种杂交育种是葡萄育种中使用最广泛的技术。

紫香无核葡萄胚挽救技术研究

紫香无核葡萄胚挽救技术研究作者：刘静陈虎陈红梅等来源：《安徽农业科学》2014年第23期摘要[目的]探讨紫香无核葡萄适宜接种时期及培养基。

[方法]以紫香无核葡萄为母本，红提、克瑞森、弗雷无核为父本杂交，另外选择紫香无核自交，对杂交和自交胚珠进行培养挽救。

[结果]在授粉55 d后接种，4个组合的胚珠均达到最大发育率和萌芽率，胚珠发育阶段采用ER+半胱氨酸盐酸盐1.0 g/L+水解酪蛋白0.4 g/L+活性炭3.0 g/L培养基发育率最高。

[结论]该研究可为进一步无核葡萄杂交育种奠定基础。

关键词无核葡萄；胚挽救中图分类号S663.1文献标识码A文章编号0517-6611（2014）23-07790-02作者简介刘静（1979-），女，河南滑县人，助理研究员，硕士，从事葡萄育种、栽培生理、组织培养等研究工作。

收稿日期20140704胚挽救技术就是通过选择假单性结实类型的无核品种，在其合子胚败育之前进行人工离体培养，减少幼胚的败育，利用胚乳及培养基中的营养使其发育成充实的胚，最终形成完整的植株。

葡萄胚培养是目前培育无核葡萄新品种的主要手段和最有效途径，利用胚挽救技术在无核葡萄育种方面已有了很多成功的报道[1-3]。

紫香无核葡萄是石河子农业科学院葡萄研究所选育的无核葡萄品种，笔者对紫香无核葡萄适宜接种时期及培养基进行研究。

1 材料与方法1.1 材料 2013年在石河子葡萄研究所葡萄试验园进行。

试材母本取自9年生紫香无核葡萄，分别与红提、克瑞森、弗雷无核葡萄进行杂交，获得杂交组合；另选紫香无核葡萄自然杂交种子（胚珠）。

1.2方法1.2.1 杂交。

在初花期采集杂交父本的花粉，阴干备用。

在母本即将开花时去雄，去雄后套袋，去雄后第2天授粉，授粉后立即套袋。

1.2.2 接种时间的选择。

分别于紫香无核葡萄盛花后50、55、60 d，对杂交和自然授粉的果穗取样培养。

1.2.3培养基的选择。

发育培养基以ER、MS培养基为基本培养基，加入蔗糖10 g/L，琼脂5 g/L，活性炭3 g/L，pH=5.8。

木纳格葡萄胚挽救影响因素的研究

新疆农业大学学报
２１，５４：９￣２７０２３（）２４９
ＪｕｎｌｆＸｉｊａｇＡｒｕｔｒｌｎｖｒｉｏｒａｎｉｎｇｉｌａｉｅｓｔｏｃｕＵｙ
文章编号：１０ — ６４２１）４０９ — ４０７８１（０２０ —２４０
方式以及活性炭浓度对胚挽救中木纳格葡萄胚萌发的影响。结果表明，纳格葡萄在开花后第４木Ｏ天是胚挽救的
最佳时期，萌发率可高达７．。对胚珠进行横切处理，６Ｂ．／ＧＡ０２ｍｇＩＩＡ１０ｍｇＩ，胚６８在－Ａ１０ｍｇｌ，。．／Ｂ．／活，性炭０５ｇＩ的Ｎｉｃ养基中，纳格葡萄胚萌发率最高。．／ｔｈ培ｓ木关键词：木纳格葡萄；育型胚珠；挽救；萌发败胚胚中图分类号：￥０．６３６文献标识码：Ａ
ＺＨＵＹｕ，ＰＡＮｉｎ，ＹＡＮＪａＬｕ，ＬＵＯｈ — ｉｇＳｕｐｎ
（．ｌｇｆＡｇｉｕｔｒ，ｎｉｎｒｃｌｒｌＵｎｖｒｉｙ，ｕｉ８０５Ｃｈｎ；２Ｘｉｊｎ１ＣｏｌｅｏｒｃｌｕｅＸｉｊｇＡｇｉｕｔａｉｅｓｔＵｒｍｑ３０２，ｉａ．ｎｉｇｅａｕａ
ｍａｅｉｌｏｓｕｄｈｆｅｔｆｉｃｌｔｏｒｏｂｓｃｃｔｅｍｅｉ，ｄｆｅｅｔｈｏｍｏｅ，ｖｅｔｅｔｔｒａｓｔｔｙｔｅｅｆｃｓｏｎｏｕａｉｎｐｅｉｄ。ａｉｕｌｕｒｄｕｍｉｆｒｎｒｎｏｕｌｒａ — ｍｅｔａｌａｓｄｆｅｅｏｅｒｔｏｆａｔｖａｂｍｂｒｏｇｒｎａｉｎｉｍｂｒｏｒｓｕｅｏｕｎｓｗｅｌｉｆｒｎｔｃｎｃｎｔａｉｎｏｃｉｅｃｒｏｎｏｎｅｙｅｍｉｔｏｎｅｙｅｃｆＭ — ｎｋｅｇｒｐｅａａ．Ｔｈｅｒｓｔｓｗｅｈｔ４０ｈｄａｆｅｎｔｓｓｏｆＭｕｋｅｇａｅｗａｈｅｂｓｅｉｄｏｍｂｒｏｅｕｌｈｏｄｔａｔｙａｔｒａｈｅｉｎａｒｄｓｔｅｔｐｒｏｆｅｙ

利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质

利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质胚挽救技术是一项重要的生物技术，可以在植物胚胎发展过程中对某些不理想的品质进行修复或改良。

现代农业中，这种技术被广泛用于蔬菜、水果等植物的改良研究中，尤其在葡萄种植业中有着广阔的应用前景。

本文将介绍利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质的相关研究进展，并讨论其意义和应用前景。

无核葡萄既是消费者所青睐的水果之一，也是葡萄种植业中的重要品种。

然而，目前市面上无核葡萄的种类相对较少，品质和产量方面尚有待提高。

胚挽救技术为培育无核葡萄新种质提供了新的思路。

胚挽救技术的基本原理是通过离体培养和植物激素的处理，使发育受阻的植物胚胎继续发育成植株。

首先，需要从无核葡萄果实中获取种子，然后将种子表面消毒处理，剖开种皮，提取种子胚，利用培养基提供养分和激素满足胚胎发育的需求。

在适宜的条件下，胚胎将发育成小植株，最终移植到土壤中进行生长。

利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质的关键在于胚胎的培育和育种人员对植株的筛选。

胚胎培养过程中，培养基的成分和植物激素的浓度对胚胎的成活和发育起着重要作用。

在培养基的优化中，育种人员需要进行大量试验和调整，以找到最适宜的条件。

同时，通过对大量无核葡萄种质的繁殖和筛选，可以发现一些发育快、碧绿丰满、耐病虫害等优良特性的植株，并将其用于后续的交配和选择育种中。

利用胚挽救技术培育无核葡萄新种质具有多方面的意义。

首先，无核葡萄品种的丰富，可以满足不同消费者对无核葡萄的不同需求，提高市场竞争力。

其次，利用胚挽救技术培育出的无核葡萄新种质，往往具备更好的抗病虫害能力和适应性，有助于减少农药的使用和提高种植效益。

此外，无核葡萄中所含的多种营养物质对人体健康有益，培育出更高品质的无核葡萄品种，有助于提供更多优质健康的水果选择。

未来，胚挽救技术在无核葡萄育种中的应用前景广阔。

随着生物技术的不断发展和研究进展，我们可以预见到更多优质无核葡萄品种的出现。

三倍体葡萄胚挽救技术研究

基，分别于４、０５、０５５、５６ｄ时接种，计各组合在不同接种时统间的萌发率。１２３不同激素种类以及激素组合对幼胚萌发的影响选．．
植株。目前，世界范围内，三倍体无核葡萄品种的选育取得了
此选育优质的无核大果粒品种成为葡萄育种的重要目标。以往常利用有核品种作母本、核品种作父本杂交选择无核葡无
荡灭菌１ｉ，０ｒｎ再用无菌水冲洗５～ａ６次，于灭菌铝板上用置
解剖刀取出葡萄种胚，种于预先准备好的培养基中，低接４℃ 温暗培养６。６种子切喙，续４℃ 低温暗培养３，０ｄ０ｄ后继０ｄ
０１Ｇ０１水解乳蛋白，中Ｌ一丝氨酸１ｍｏＬ．％Ａ、．％其０ｍｌ，／Ｌ一甲硫氨酸１ｍｌＬＬ一谷氨酰胺１ｏＬｐ０ｍｏ、／０ｍｍｌ，Ｈ值均调／
本试验通过四倍体和二倍体共４个杂交组合进行三倍体
很大的进展，已经育成三倍体无核葡萄品种７个，别是尾分
玲、黛拉王、蜜无核、ａＭｒ、Ｋｉｉｒ夏黑、ｅ马格拉契多倍体葡萄及我
国选育的无核早红。
用１２Ｓ培养基，入２／Ｍ加％蔗糖、．５０７％琼脂、．５００％活性炭、
核、用很方便而备受消费者欢迎，为市场热销品种。目前食成

耐寒无核葡萄胚挽救种质创新研究

耐寒无核葡萄胚挽救种质创新研究无核葡萄多属于欧亚种,品质优良,但耐寒性普遍较差,在冬季寒冷环境下易发生冻害。

我国拥有丰富的抗寒野生葡萄资源,通过杂交的方式将其抗寒性与欧亚种葡萄无核-优良特性结合,利用胚挽救技术可获得新种质。

本研究以30份野生葡萄资源和24个不同品种葡萄为试材,通过人工低温模拟试验,探究葡萄枝条在低温胁迫下的生理响应,建立不同葡萄品种抗寒性综合评价的方法,并以主栽欧亚种无核鲜食葡萄和抗寒性强的亲本进行田间杂交,结合胚挽救技术,获得杂种后代。

通过分析不同亲本杂交组合、继代培养基类型及离体幼胚发育成苗及大田炼苗移栽定植等影响因素,旨在进一步提高无核葡萄胚挽救育种效率。

对获得的杂种幼苗进行抗寒无核分子标记辅助选择,为耐寒无核葡萄育种提供具有参考价值的新材料。

主要研究结果如下:(1)课题组已收集30份野生抗寒葡萄资源,根据形态学特征分为两类,通过建立资源圃的方式完成野生葡萄种质资源的安全保存。

(2)运用隶属函数法建立了不同葡萄品种抗寒性综合评价的方法。

24个不同葡萄品种抗寒性存在差异,强弱顺序为:双丰、河岸10号、双优、山河1号、北醇、绛县山葡萄、贝达、无核翠宝、5BB、北冰红、丽红宝、晶红宝、京亚、红地球、户太8号、S04、早康宝、早黑宝、晚黑宝、秋红宝、紫提、夏黑、红宝石无核及维多利亚。

(3)杂交亲本对胚挽救效率影响较大。

红宝石无核作母本进行杂交时,胚形成率达到13.7%和13.8%,而晶红宝作母本时,胚形成率仅为1.3%和0.0%;北冰红为父本进行杂交时,胚形成率分别为14.2%、13.7%及0.0%,而山河1号为父本时,分别为1.3%、1.5%、6.6%及13.8%,达到显著性差异。

(4)通过叶片结构差异、气孔大小和形态、染色体数目的显微观察及分子标记技术对已获得的部分胚挽救杂种幼苗进行早期辅助选择。

从红宝石无核×北冰红、丽红宝×山河1号2个组合F1代杂种共13个株系中初步鉴定出4个无核株系,2个耐寒株系;从早黑宝×红宝石无核杂交后代中鉴定获得1个三倍体株系。

胚挽救技术应用于无核葡萄育种的研究进展

胚挽救技术应用于无核葡萄育种的研究进展摘要植物的胚挽救技术在无核葡萄的育种研究中发展迅速,通过对胚挽救技术及其在无核葡萄育种上的应用以及影响胚挽救的因素进行综述,指出了葡萄胚挽救技术存在的不足,并对其今后研究方向提出展望。

关键词胚挽救技术;无核葡萄育种;应用;研究进展无核鲜食葡萄（Vitis vinifera L．）一直深受广大消费者的喜爱。

无核性状作为葡萄重要的商品性状是当前葡萄育种的重要目标之一。

20世纪以有核品种为母本的有性杂交方式选育效益很低，随着胚挽救技术的应用，极大地缩短了无核葡萄选育的育种周期，使无核葡萄的育种有了长足地发展。

将胚挽救技术用于无核葡萄育种是十分有效的，并为解决无核葡萄育种中的问题开辟了新思路。

1 无核葡萄的胚挽救技术无核葡萄根据其授粉结实的特性可分为2类：一类称单性结实型（Parthenocarpy），就是卵细胞不经过受精作用而直接发育成果实；另一类称假单性结实型（Pseudo-Parthen-ocarpy），即种子败育型（Stenospermocarpy），就是虽受精，但受精后的胚很快停止发育导致无核果实产生，这种类型的品种占无核品种的85%以上。

胚挽救技术就是通过选择假单性结实类型的无核品种，在其合子胚败育之前进行人工离体培养，减少幼胚的败育，利用胚乳及培养基中的营养使其发育成充实的胚，最终形成完整的植株。

之前，以有核材料（母本）×无核材料（父本）的杂交方式培育的无核葡萄品种的无核比率很低，且选育1个品种的周期非常长（10年以上）。

现利用胚挽救方法可进行“无核×无核”方式杂交，通过胚挽救其后代来培育无核品种，并结合现代生物技术，从而使无核比率成倍提高，且大大缩短了品种的选育时间。

2 胚挽救技术在无核葡萄育种上的应用2.1 培育无核葡萄品种无核葡萄品种间杂交或以无核葡萄品种作母本进行杂交是培育无核葡萄品种的有效途径，而胚挽救技术使这种杂交方式成为现实。

葡萄胚挽救苗绿枝嫁接试验

规杂交育种仍然是当前葡萄育种工作的主要手段和室内移栽到温室，再定植到露地结果至少需要４年
方法［３】，无核葡萄育种是目前世界各国葡萄育种工作时间。潘学军旧等研究认为。葡萄胚挽救苗向田的重要目标、发展方向和发展趋势．用胚挽救技术培间移栽的过程中，环境条件发生了剧烈的变化，移育无核品种成为培育无核葡萄新品种的一种重要途栽成活率普遍较低，甚至不能成活。缩短葡萄胚挽
葡萄的杂交育种工作开始于Ｉ８世纪、１９世纪下术也得到各国育种工作者的普遍采用。但是，胚挽
半叶法国首先开始系统的葡萄抗性砧木育种［１－２］。常救苗在移栽和定植后成活的比例仍然较低，从实验
７１４秃尖偏长的缺点进行改良．结合配合力分析与聚
西南农业学报，２０００，１３（１）：１０７ — １１１．
类分析，ＭＹ４可以被划人以绵７１４为代表的父本群，因此两系的相互改良不会影响绵７１４或ＭＹ４与绵
［５】张祖新，郑用琏，李建生，等．三峡地区１Ｏ个玉米地方品种的遗传潜势［Ｊ］．华中农业大学学报，１９９４，１３（５）：４４９－４５４．

无核葡萄的胚挽救技术

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培养室三角瓶→温室营养钵→苗圃地
三、主要影响因素
1. 优良的树种和品种(基因型）
为保证获得杂交后的合子胚，一定要用假单性结实的无核葡萄作母本。在亲本选择时除保证无核性状外，选择并培育抗病、早熟大粒、抗逆性强等优良性状是目前的育种方向。无核葡萄胚的发育受基因型的严格控制。有研究者通过无核葡萄与有核葡萄胚挽救杂交后代的抗寒性研究，证实了葡萄抗寒性具有母性遗传现象。因此，在进行葡萄的抗寒性杂交选育中，一定要注意亲本特别是母本的选配。 2. 确定最佳胚挽救时期（胚龄）不同品种，甚至同一品种的不同植株，同一植株的不同部位，其胚发育期的长短是不同的。胚龄指从授粉开始到剥离胚培养的时间天数。胚龄越小越难培养成功，且与胚培养成苗率呈正相关。因此，胚龄是影响胚培养成功的关键因素之一。不同品种胚发生败育的时期不同。应在胚发育到最高程度，但又尚未开始败育的时期进行培养。因此，研究胚败育的过程，确定胚珠接种的最佳时期是胚挽救成功的前提。
三、主要影响因素
3. 选择适宜的培养基、激素、糖水化合物及胚珠处理方式无核葡萄胚挽救中选择适宜的培养基是获得成功的关键环节。在胚挽救过程的不同培养阶段所选用的基本培养基类型不同。在胚珠培养阶段，大多数研究者认为Nitsch 或NN 为胚发育的基本培养基效果良好，并经过多年研究总结出了适合无核葡萄胚珠培养的ER 培养基。在胚萌发和成苗培养阶段，多数研究者认为1/2MS 或Wood Plant（WP）培养基较好。经研究比较ER 和Nitsch 两种固液双层胚珠发育培养基对胚珠萌发的效果，结果发现后者更适宜于无核葡萄杂种胚的萌发和胚状体发生。因此，在胚挽救过程中，注意基本培养基应随着胚的不同发育阶段而进行及时更换。在胚挽救中，无核葡萄胚珠培养适合在较高的铵态氮的培养基上，在培养基中适当添加活性炭和0.2~0.5mg/L 的BA 对无核葡萄的胚珠发育有促进作用。为打破胚的休眠，可加入适宜浓度的GA 和IAA 取代低温处理。诱导分化阶段可加入6－BA 和NAA。在幼胚生长中，附加碳水化合物如葡萄糖和果糖等，既可提高培养基的渗透压，还可为胚的发育提供能量，对胚性生长有利，但后期胚的萌发需降低渗透压。切开胚珠可以改善胚与培养基之间的物质交流，横切的胚珠培养萌发率最高。

三倍体葡萄胚挽救育种研究现状与展望

三倍体葡萄胚挽救育种研究现状与展望路凤珍1,2，张娜1，田淑芬1*，温晓敏1,2，陈三春1,2（1. 天津市农业科学院葡萄研究中心/天津市葡萄遗传与育种企业重点实验室，天津 300192；2. 天津师范大学生命科学学院，天津 300387）摘要：综合分析国内外相关文献，阐述了三倍体葡萄胚挽救技术的研究进展，探讨了影响三倍体葡萄胚挽救育种成功的主要因素：亲本选择、接种时期、培养基种类等，概述了三倍体葡萄鉴定方法，驯化移栽过程中的影响因素，包括基质类型、生根粉浓度等，并对胚挽救技术在三倍体葡萄育种上的发展进行展望。

关键词：三倍体葡萄；胚挽救技术；育种；研究进展DOI：10.13414/ki.zwpp.2016.05.038多倍体育种是培育果树新品种重要途径之一，三倍体葡萄因具有无核或少核、果粒大、产量高、植株生长旺盛等优良特性，使其成为葡萄育种的目标之一，目前二倍体与四倍体进行有性杂交是获得三倍体葡萄的有效途径，其次还可以通过二倍体品种间杂交、自然选育、三倍体芽变、核融合、胚乳培养和花药培养等途径获得三倍体葡萄品种。

但在常规条件下，采用以上技术进行品种间杂交存在较严重的杂交障碍，往往出现坐果率低、杂种胚早期败育、亲和力差、胚乳解体或获得三倍体杂交种子生活力较低等问题，获得杂交后代比较困难[1-3]，使用胚挽救技术可提高其杂种后代的成活率[4]。

自1982年Ramming等[5]首次报道了利用胚挽救技术培养无核葡萄胚珠并获得2株实生苗以来，无核葡萄胚挽救开始引起世界各国葡萄育种者的关注[6-18]。

Yamashita等[4,19-20]首先利用有核四倍体葡萄和二倍体葡萄杂交，经胚珠培养，最高成苗率达42.4%，并成功获得了三倍体植株。

徐海英等[21]通过胚挽救获得部分杂种苗，其中约23%为三倍体单株。

潘春云等[22]利用胚挽救技术获得三倍体植株，成苗率为0～5.3%。

郭印山等[23]以葡萄二倍体与四倍体进行胚挽救得到三倍体植株（27.59%）。

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葡萄胚挽救研究进展马宗新（河南科技大学林学院）摘要：本文综述了葡萄胚挽救的研究进展，以期为葡萄育种工作者提供技术参考。

胚挽救技术已成为国内外无核葡萄育种的重要方法而被广泛应用[1,2,5,22]。

Charles分离并培养了菜豆(Phaseolus)与荞麦(Fagopyrum)的胚并获得了植株。

Hannig在1904年提出胚胎组织培养的研究路线，在一些十字花科植物如萝卜上应用，取这些植物接近成熟的胚分离培养，成功地在含有无机盐和糖液的培养基上将其培养为成熟胚：Laibaeh使用不能发育成有活力种子的亚麻杂种(宿根亚麻×澳洲亚麻)将其合子胚培养成熟，获得了在自然条件下由于胚败育而得不到的杂种：Van等在1941年在诱导曼陀罗植物胚胎发育和愈伤组织形成中使用椰子汁(液体胚乳)，增加了培养基中的营养促使胚胎生长和发育，成为胚胎培养的转折点。

迄今为止，通过胚胎培养已经获得了许多由于胚败育而不能获得的杂种。

开创了胚胎培养在植物育种中应用的先河，自Rammig首次利用无核葡萄胚珠培养的方法获得了两株葡萄实生苗以来，给无核葡萄胚挽救培育新品种开辟了新的途径。

这充分证明借助胚培养技术获得无核新品种是完全可能的[1,3,6,8]。

1、胚挽救的意义胚拯救技术是基于组织培养技术发展起来的。

主要针对由于营养、生理或遗传原因，造成难以播种成苗或在发育早期阶段就败育或退化的胚进行早期离体培养主要是利用离体胚在培养基上的再次培养获得适宜的生长条件及营养成分．使发育不良的幼胚得以二次生长．分化成健康的植株体。

目前胚抢救技术在果树上应用最为广泛，其中在抢救小麦远缘杂种和葡萄三倍体育种及无核品种的培育上都取得不少成果。

胚挽救技术可以及时抢救不能继续发育的胚：通过胚拯救获得的苗瓶内生根及根尖染色体制片．及早鉴定杂交后代的倍性，大大缩短倍性育种的周期：通过胚拯救技术获得的杂交后代，可以直接快速获得更多的幼苗．极大的提高了杂交后代的繁殖速度，极大地促进育种效率。

2、培养技术2.1 培养基刘佳[21]，杨国放[10]，赵凯[26,28 ]等认为ER培养基最适宜离体幼胚的发育；郭修武[ 29]，孙莉[12]、刘海琳[27]等以MS为基本培养基；夏培蓓[19]，李桂荣[24]等以Nitsch为基本培养基，都获得了较好的胚珠萌发率，牛茹萱[18]采用MM4培养基培养胚珠，也获得了试管苗。

2.2 取材时期赵凯[26,28]等以金星无核葡萄开始着色期作为采样接种的形态学指标，郭修武[]取金星无核自然授粉后55 d的胚珠培养，夏培蓓[17]认为木纳格葡萄在开花后第4O天是胚挽救最佳时期，胚萌发率可高达76．8%。

任杰[ 30,31]认为最佳接种时期为花后45—55d。

刘海琳[27 ]选用无核白葡萄在开花后35～60d培养。

李桂荣[24 ]认为无核白葡萄在授粉后20-50d，杨国放[ 10]在火星无核×无核白鸡心幼胚培养中认为花后40d取材较好，金星无核×康能无核在花后55d较好，优无核×布朗无核在花后45d较好；牛茹萱[ 18]认为“红无籽露”、“波尔莱特”、“皇家秋天”的最佳取样时间分别为花后51-53、55和66d。

2.3 激素多数学者采用BA，NAA组合，任杰[30,31 ]等采用6-BA 0．4 mg／l+NAA 0．5 mg ／L，郭修武[ 29]等采用 BA 0．5 mg／L+IBA 1．5 mg／L+GA3 0．5 mg／L+25 g ／L，赵凯[ 26,28]等采用IAA 1．5 mg／L。

夏培蓓[19]采用6-BA 1．0 mg／l +GA0.2 mg／I +IBA 1.0 mg／I，刘海琳[ 27]等采用BA0.5mg/L+IAA1.5mg/L。

李桂荣[24]等采用BA0.5 mg／1+IAA1.5 mg／l 。

杨国放[10 ]等认为不同品种的胚珠对培养基中IBA浓度要求不同，幼胚发育程度较高，败育时期较晚的胚珠，适合较低IBA浓度，胚发育程度较低，败育较早的胚殊则需要较高的IBA浓度。

牛茹萱[18]采用0．5 m_g ／L GA+1．5 mg／IAA0.5mg/l进行培养。

2.4 有机添加物为了促进胚培养成苗，多数学者在培养基中添加复杂有机物。

赵凯[ 26,28]在培养基中添加水解络蛋白(CH)500 mg／L获得了最高的胚发育率和成苗率，添加不同种类氨基酸对‘波尔莱特’×‘北醇’组合胚的发育率及成苗率有不同影响，以1 mmol／l 丝氨酸的促进效果明显，烟酸的添加对胚发育率和成苗率有一定的抑制作用。

夏培蓓[17]采用添加活性炭0．5 g／I，牛茹萱[18 ]在培养基中添加水解酪蛋白6O0mg／L +1．5 g／L活性炭+1．0 mmol／L氨酸+1．0 mmol／L半胱氨酸+100．0 mmol／L甘露醇。

2.5 胚珠处理赵凯[26,28 ]对胚珠进行横切、纵切处理都能够提高胚珠的萌发出苗率,郭修武[ 29]胚珠进行一定处理可以提高胚珠的萌发出苗率,其中剥取裸胚的萌发率最高。

夏培蓓[17]对胚珠进行横切处理,木纳格葡萄胚萌发率最高。

4 存在问题4.1 确定最佳取材时期难度大无核葡萄胚的发育受基因型的严格控制，不同品种、年份和气侯条件下胚发育期长短也不同。

无核葡萄胚的发育和败育是一个极其复杂的过程，取材过早，合子胚发育程度低，培养难度大；取材过晚，大部分合子胚已经败育，虽然培养的难度小，但是成苗率也较低。

理论上讲，接种效果好的时期应该在胚发育程度最高而尚未败育的时期，要想获得最多数量的萌发苗，必须在未败育的合子胚的最大数量及发育的最高程度的合子胚之间寻找一个均衡点进行培养。

因此，确定最佳的接种时期是胚挽救成功的一个关键因素。

4.2 培养技术尚待完善虽然培养取得了不少成绩，也有成功地范例，但是葡萄胚培养，仍然需要继续研究。

问题仍然较多，例如，培养的胚珠处理程序，学者的研究结果不同。

还有成苗率不高，还不能够100%培养成苗。

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