孚尔根核染色25页PPT

大学课程遗传学实验实验四孚尔根(Feulgen)核染色课件

1N HCl 60℃
酸解使DNA醛基暴露
醛基与Schiff试剂发生显色反应
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek于1924 年提出的鉴定细胞中DNA的组织化学方法。其优点是制片清洁、染色体清晰、组织软化好，易于压片。但对小型染色体（如玉米、水稻）效果较差。在切片、涂片上研究核和染色体时，能减少细胞质着色对观察的影响。在细胞学研究中普遍采用
材料：大蒜根尖、洋葱根尖
1mol/L 盐酸(常温和60℃) Schiff试剂 45%醋酸或亮绿
实验步骤
预处理的目的及方法
目的：改变细胞质粘度，破坏和抑制纺锤体的形成，使染色体适度缩短和分散。
方法： 0.04-0.2%秋水仙素溶液2-4小时。对二氯苯饱和溶液3-5小时。 0.002M (或0.03%)8-羟基喹啉1.5-2小时以
黑暗条件下染色。要保证细胞呈单层，使染色体在一个平面上，
根尖的切片尽量要薄，压片必须用力适度，压片的实验台面要平坦。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
思考题
为什么要严格掌握DNA的水解条件？为什么实验材料从60℃盐酸中倒出后，
实验原理
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，在植物根尖或茎尖的分生组织中可清晰观察。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有8对共 16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。

1孚尔根核染色共25页

实验目的
掌握孚尔根核染色的方法。了解孚尔根染色的原理。
Schiff试剂的组成及配制
Schiff试剂：即脱色亚硫酸品红。配制方法：溶解1g碱性品红于200ml煮沸的重蒸水中，
轻轻摇动，继续煮5min使其完全溶解，冷却至55-50℃ 时过滤到棕色带塞子的玻璃瓶中，加入1M HCl 20 ml，继续冷却至25 ℃左右，再加入1g硫代硫酸钠，摇动使之溶解，置黑暗低温处或冰箱内18-24小时后检查，试剂如透明无色或淡黄色即可使用。
方法： 0.04-0.2%秋水仙素溶液2-4小时。对二氯苯饱和溶液3-5小时。 0.002M (或0.03%)8-羟基喹啉1.5-2小时以上，
室温。低温：1-4℃处理24小时。
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根尖形态与结构
成熟区伸长区
分生区根冠
注意事项
Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取 Schiff试剂的吸管。
黑暗条件下染色。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
光学显微镜基本结构： 1. 照明灯(Lamp) 2. 聚光器(Condenser)
3. 载物台和切片夹
(Mechanical stage and
specimen retainer) 4. 推进器(Mechanical stage adjustment knob) 5. 物镜(Objectives) 6. 粗细螺旋(Course and fine focus knob) 7. 8.目镜(Oculars)
固定的目的
迅速防止细胞的死后变化，防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。
使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前状态。

植物染色体的孚尔根染色法

四、实验步骤
1. 希夫试剂的配制
• 将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中用玻璃棒搅拌蒸馏水中, 碱性品红徐徐加入煮沸的蒸馏水中用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58°C左右过滤于棕色瓶中。使之充分溶解待溶液冷却至 ° 左右, 过滤于棕色瓶中。左右 • 当滤液冷却至 °C时, 再加入当滤液冷却至26° 时再加入10ml的1M盐酸和盐酸和0.5g亚硫酸氢钠的盐酸和亚硫酸氢钠或偏重亚硫酸钠(钾摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 或偏重亚硫酸钠钾), 摇动溶解后密封于棕色瓶中置于黑暗低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。低温处。次日检查溶液颜色须呈无色透明或淡茶色才可使用。 • 若稍呈红色可加入若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动在4°C下静置过夜然活性炭连续摇动, 下静置过夜, 活性炭连续摇动 ° 下静置过夜后过滤脱色。后过滤脱色。
2. 染色过程
① 取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖材料2-3分钟。 ② 将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在60±0.5℃的条件下水解8-10分钟。 ③ 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。 ④ 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可过夜。 ⑤ 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 ⑥ 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45%醋酸, 然后盖上盖片。 ⑦ 压片、观察。
玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色
玉米染色体核型图(2n=20+2B)
玉米染色体核型图(2n=20+4B) /mnl/79/18rosado.htm

实验二孚尔根染色法

实验二孚尔根染色法一、实验原理染色体是遗传物质的载体，它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol·1-1HCl处理后，不仅使分生组织的细胞彼此分离，而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，脱氧核糖上的醛基暴露，形成含醛基的无嘌呤结构物，醛基与希夫试剂反应显紫红色。

细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的存在，并广泛应用于核及染色体的研究中。

二、实验目的学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。

三、实验材料、用具及药品1．材料：洋葱或大蒜的根尖2．用具显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、烧杯、量筒、3．药品希夫氏试剂(无色碱性品红液)、漂洗液、1mol·1-1 HCl、45％醋酸等。

四、实验步骤1. 取材与固定：待大蒜根尖长1cm 时，于上午8时剪下根尖，经过预处理后投入卡诺固定液中固定2-24h。

固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。

2.水解试管1：取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，换1N HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1N HCl 浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟（视材料而定，水解时间可以从10分钟延长至30分钟）。

然后吸去热1N HCl，换入冷1N HCl洗一次，再用清水将根尖洗三次。

试管2（对照）取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，入预热60℃的蒸馏水浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟。

以下各步骤两试管相同。

（水解是本实验成败的关键之一。

重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。

如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。

实验02 孚尔根核反应染色法

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有丝分裂各时期
中期 ——极面
后期
末期
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子细胞
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有丝分裂各时期
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六、注意事项
1. 水解时间和温度是实验的关键因素；
2. Schiff试剂中SO2的含量影响孚尔根反应的颜色表现；
3. 压片技术是视野观察清晰与否的关键；
4. 材料的不同（DNA含量的不同），是影响显色反应强度的根本因素；
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五、实验步骤
材料
培养的植物根尖长到2cm左右时，切下；或取幼小花药或叶表皮或愈伤组织，或动物组织，或果蝇唾腺等材料。
固定
将取出的材料放入新配制的Carrnoy固定液（无水乙醇:冰醋酸=3:1）处理2~24hr→95%乙醇洗2次，每次10min→80%乙醇洗1次，10min→70%乙醇，冰箱保存。
染色30min~4h；漂洗液漂洗2~3次，每次2~5min，待用。
五、实验步骤
以下各人独立完成：将根尖置载玻片上，切取适当部位；加45%醋酸洋红1滴；压片；镜检；作图（实验报告）。
有丝分裂各时期
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有丝分裂各时期
间期
前期
中期 ——侧面
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实验二孚尔根核反应染色法
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1
一、实验目的
1. 学习和了解孚尔根（Feulgen）反应的原理； 2. 掌握对植物组织及细胞中鉴别DNA分布的孚尔根反应染色方法； 3. 掌握压片方法； 4. 了解制作玻片标本的方法； 5. 观察细胞中DNA的分布。
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Schiff试剂中的无色亚硫酸品红分子与活性醛基反应而呈现为紫红色化合物。该产物能特异地吸收峰值为550~570nm的光波。并在一定的浓度范围内，在550~570nm光波的吸收值与 DNA含量成正比，即符合化学计量学关系。

《孚尔根核染色》课件

染色过程
孚尔根核染色包括几个关键步骤：细胞固定、细胞通透性处理、DNA氧化、染色和观察。
染色过程需要在弱酸条件下进行，以促进DNA的氧化和后续的染色反应。
在染色过程中，需要使用特定的染料，如Giemsa染料或巴尔巴土染料，这些染料能够与DNA-蛋白质加合物结合，产生明显的染色效果。
染色效果
政策支持
政府可以出台相关政策，支持孚尔根核染色技术的研发和应用，促进其发展壮大。
感谢您的观看
THANKS
该技术可用于DNA多态性分析，有助于研究基因变异与疾病的关系。
技术局限性
1 样本量要求
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对于微量样本可能存在限制。
2 交叉污染风险
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对于微量样本可能存在限制。
3 假阳性结果
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对于微量样本可能存在限制。
减少人工操作误差。
降低成本
通过优化试剂和设备，降低检测成本，使更多实验室和医疗机构能够
应用该技术。
05
孚尔根核染色技术的未来发展
技术发展趋势
自动化与智能化
随着机器人技术和人工智能的发展，孚尔根核染色技术将逐渐实现自动化和智能化，提高染色效率和准确性。
环保与可持续发展
随着环保意识的提高，未来的孚尔根核染色技术将更加注重环保和可持续发展，减少对环境的污染和资源消耗。
《孚尔根核染色》PPT课件
目录
• 引言 • 孚尔根核染色技术原理 • 孚尔根核染色技术的应用 • 孚尔根核染色技术的优缺点 • 孚尔根核染色技术的未来发展
01
引言
核染色技术简介

孚尔根(FEULGEN) 染色

Schiff 试剂的配置
称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮 5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1N HCl，冷却至 25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24小时（有时需2～3天），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可再用
反应原理
样品经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
操作方法及步骤
以Feulgen染色法观察洋葱根尖有丝分裂为例
•1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1N HCl中，加热到60℃水解8～10 min。 • 2．蒸馏水水洗。 •3．Schiff试剂遮光染色30min。 •4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次 1min。 • 5．水洗5min。 •6．将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片，压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 • 7．显微镜检查。结果：细胞中凡有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反应。
孚尔根染色法的反应原理主要与Schiff试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。

期末实验孚尔根染色法和植物染色体标本的制备

期末实验孚尔根染色法和植物染色体标本的制备207.12.1 6.结果与分析6.1结果（1）孚尔根染色结果图1.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×10倍）图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×40倍）①结果描述：在光学显微镜下，洋葱根尖细胞被均匀地压成了单层细胞，细胞分布较为均匀，变形细胞较少。

DNA成功被染上紫色，染色较深，视野背景为白色无红色颗粒较为清晰，视野中无气泡。

处于分裂时期的细胞约占10％，分裂期的细胞染色体染色较深，而分裂间期的染色较浅，中间有1-3个白斑为核仁。

②结果评价：较成功③结果分析：在物镜10倍观察下可以清晰反映出压片的结果与染色的情况。

在压片前要注意用亚硫酸水把染液冲洗干净，防止背景一片红，不利于观察，压片时先把根尖捣碎，防止细胞堆积；在压片时要固定好盖玻片防止盖玻片与载玻片之间发生摩擦，防止细胞变形，同时也要注意力度的把握和敲击的方向，垂直敲打，且从中间到边缘。

染色的时间要足够长，这是我实验时制作的第二张装片，染色时间为18min,第一张为10min，染色较浅，不利于观察。

视野中，由于分裂期的染色质高度螺旋为染色体，DNA浓度较高，所以分裂期的染色体染色较深，而分裂间期的细胞，DNA分裂较为均匀，所以染色较为均匀且相对浅，中间的白斑为核仁，因为核仁中主要为rRNA，所以不被染成紫色。

A B C DE F G HI J K LM N O P图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色有丝分裂过程（10×40倍）①结果描述：A间期:DNA均匀分部于细胞核中，核仁明显，为透明发亮圆形，可见1—3个。

B-E前期：细胞核膨大，染色质缩短变粗，晚前期（D、E）核仁、核膜消失。

F-G中期：染色体缩短变粗，形成姐妹染色单体，整齐排列与赤道板上。

H-L后期：着丝粒分裂，姐妹染色单体分离，分别移向细胞两极。

M-P末期：染色体解旋为染色质，核仁核膜重新出现，细胞中间形成细胞板。

实验三-Feulgen反应显示DNA PPT课件

三、实验器具与药品
l 每一个学生
复式显微镜（带油浸物镜）（microscope）
l 每一组学生
擦镜纸；记号笔；小片滤纸；载玻片；镊子；移液枪四膜虫培养液（200μl）；大染色缸： Carnoy 固定液； Schiff 试剂（铝箔包装）； 1mol/L HCl；自来水
蓝绿色部分为DNA，红色部分为胞质和核仁的RNA
介绍：四膜虫（Tetrahymena）
四膜虫与草履虫一样，都是单细胞原生动物，属纤毛虫纲。一般呈梨形。四膜虫有两个细胞核，大核位于细胞中部，直径约10微米，小核位于大核附近，直径为1.52微米。小核具5对染色体，其基因不转录，对细胞表型无影响。在有性生殖过程中，小核经配子核交换发育产生新大核，同时旧大核退化。大核中的基因活跃地转录，决定了细胞的表型。
对照组或采取不经盐酸处理，或预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明此反应的专一性。
此法既可定位用于细胞或组织化学染色反应，观察 DNA的分布，又可用显微分光光度计和图像分析仪对细胞或组织中DNA的含量进行定量分析。
1950年，Swift H.应用Feulgen显微分光光度法，测定了一些生物各种组织中单个细胞的DNA含量，定义为C值。
（2）按上述方法再做一片细胞标本作为对照。
（3）将标本放在干燥箱中10-15分钟，令样品干燥，细胞牢固贴于玻片。
每人做两片：①样品；②对照
载玻片
染色缸平面示意图
2．固定、染色、观察：
以下1~7步操作在染色缸中进行。（注意：载玻片插入染色缸中应插在凹槽中，尽量避免两片载玻片贴在一起，否则会摩擦掉上面的细胞。） (1)将干燥好的2片细胞涂片置于Carnoy固定液中固定20分钟，取出，平置在滤纸上，吸去玻片背面的液体。（滤纸不要擦载玻片正面。） (2)将其中一片标本（样品）放入1mol/L盐酸中，60℃水浴15分钟（注意不要打翻染色缸）；另一片标本（对照）放在空气中，令其自然干燥。 (3)将以上两标本同时放入Schiff氏液中作用45分钟（ 30℃培养箱）。（注意不要搞混样品和对照。） (4) 自来水浸泡1分钟，提出载玻片，平置在滤纸上。

《DNAFeulgen染色》课件

添加标题
应用：DNAFeulgen染色技术广泛应用于细胞生物学、遗传学、病理学等领域，用于观察DNA的分布和形态，研究DNA的结构和功能。
DNAFeulgen染色技术的优势
高灵敏度：能够检测出极低浓度的DNA，提高了检测的准确性。特异性高：只与DNA中的碱基结合，不受其他物质干扰。染色效果好：染色后细胞核颜色鲜艳，易于观察和分辨。稳定性好：染色后颜色稳定，不易褪色，有利于长期保存。
染色步骤：严格按照操作规程进行染色，避免遗漏或错误操作
染色后处理：染色完成后，及时进行后处理，如清洗、脱水、封片等
安全防护：操作过程中注意个人防护，避免接触有害物质
染色后的注意事项
染色后立即用清水冲洗，避免染色过度染色后应立即观察，避免染色时间过长导致染色效果不佳染色后应立即进行后续实验，避免染色效果随时间变化染色后应避免阳光直射，避免染色效果受到破坏
染色前的注意事项
确保实验环境清洁，避免污染准备足够的染色试剂，避免中途中断确保实验材料新鲜，避免变质严格按照实验步骤操作，避免错误
染色过程中的注意事项
染色时间：根据样本类型和染色目的，选择合适的染色时间
染色温度：保持稳定的染色温度，避免过高或过低
染色剂浓度：根据样本类型和染色目的，选择合适的染色剂浓度
域进一步拓展应用
DNAFeulgen染色技术在未来医学和生物学研究中的应用前景
细胞生物学研究：用于研究细胞结构、功能及基因表达等
药物研发：用于研究药物作用机制、药物筛选等
遗传学研究：用于研究遗传病、基因突变等
生物技术：用于基因工程、细胞工程等
肿瘤学研究：用于研究肿瘤的发生、发展及治疗等
环境科学：用于研究环境污染、生物多样性等

DNA的孚尔根反应PPT教学课件

实验五孚尔根（Feulgen）反应
一、实验目的
掌握孚尔根（Feulgen）反应的原理和方法，观察了解DNA在细胞内的分布。
二、实验器材及试剂
显微镜、染色缸、剪刀、镊子、培养皿等；
1M HCl、席夫试剂、亚硫酸水溶液等。
2020/12/09
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三、实验材料洋葱
四、实验原理
孚尔根反应是 Feulgen 和 Rosserbeck于1924 年发现的,是鉴定细胞内DNA特殊有效的方法。其原理一般认为：稀酸（1M HCl,60℃)水解DNA，打开DNA分子上嘌呤碱和脱氧核糖连接的键，从而使脱氧核糖中的醛基释放出来，然后再与席夫试剂（Schiff试剂，无色品红）反应，由于醛基的氧化作用，使之与无色品红结合成紫红色的化合物。细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应。
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五、实验方法
1、将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l的HCl中，加热到60℃水解8-10分钟。
2、蒸馏水水洗。 3、入席夫试剂 6、将鳞茎内表皮放在载玻片上，盖好盖玻片
，用吸水纸吸去玻片上多余的溶液，置显微镜下检查，细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应（玫瑰红色）。

细胞生物学实验课件实验课件2

有1mol/L HCL的染色缸中清洗，然后将载玻片放入已温浴至60℃的1mol/L HCL溶液中水解8分钟，水解后很快将标本取出，放入室温1mol/L HCL溶液中。
注意：水解是本实验成败的关键之一。重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。如果温度过高或时间过长，造成水解过度，糖与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，不能呈现颜色反应。
1.用carnoy固定液固定的鱼肝脏切片； carnoy液：（纯酒精：冰醋酸：氯仿＝6:1:3) 2.显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、香柏油，擦镜纸，盖玻片； 3. Schiff试剂、1mol/L盐酸、1%亮绿、酒精、二甲苯、亚硫酸水（洗涤剂）: 在200ml蒸馏水中，加入 10ml 1N HCl 和10ml 10%偏亚硫酸氢钠水溶液（或1.0g固体）。此液在临用前配制。
注意：时间切忌过长，以免染色过深，影响对DNA的观察。
11、水洗、脱水与封片用蒸馏水洗两次，每次5 min，再经过30%， 50%，70%，85%，95%，100%（Ⅰ），100% （Ⅱ）的酒精各3~5分钟；二甲苯透明Ⅰ和Ⅱ，各8~10 min。中性加拿大树胶封片。 12 镜检
五、实验结果
细胞核中的DNA呈鲜亮的紫红色反应，细胞质被亮绿复染成绿色，核仁通常为负反应。 -反映出DNA存在的部位 -从颜色反应的深浅，可以判断DNA的相对含量。
四、实验步骤
1、取材和固定：取材要小，一般以2-3mm的厚度为宜，固定剂通常用Carnoy溶液，固定后放4℃ 冰箱中4-6小时。 2、脱水：依次经过95%酒精两次(每次20-30 min); 100%酒精两次(分别用30min、 40min)。
3、制片二甲苯透明，石蜡包埋，切片6-7 µ m，明胶贴片，烘干。在贴片时应加入1-2滴10% 甲醛予以固定，否则很易脱片。 4、脱蜡（本次实验开始）将制片经二甲苯Ⅰ（20 min）和二甲苯Ⅱ （10 min）将石蜡脱净，再经过100%， 95%，85%，70%，50%，30%的酒精各 8~10 min, 最后放入蒸馏水中5~10 min。

实验10 DNA孚尔根染色

实验10孚尔根（Feulgen）反应
一、实验目的
掌握孚尔根（Feulgen）反应的原理和方法，观察了解DNA在细胞内的分布。

二、实验用具
洋葱内表皮，显微镜、染色缸、剪刀、镊子、培养皿等；1M HCl、希夫试剂、亚硫酸水溶液等。

三、原理
孚尔根反应是Feulgen和Rosserbeck于1924年发现的,是鉴定细胞内DNA特殊有效的方法。

其原理一般认为：稀酸（1M HCl,60℃)水解DNA，打开DNA分子上嘌呤碱和脱氧核糖连接的键，从而使脱氧核糖中的醛基释放出来，然后再与希夫试剂（Schiff试剂，无色品红）反应，由于醛基的氧化作用，使之与无色品红结合成紫红色的化合物。

细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应。

四、操作过程
1、将洋葱鳞茎内表皮放在1mol/l的HCl中，加热到60℃水解8-10分钟。

2、蒸馏水水洗3次。

3、入希夫试剂染色30分钟。

4、亚硫酸水溶液洗3次，每次1分钟。

5、水洗5分钟。

6、将鳞茎内表皮放在载玻片上，盖好盖玻片，用吸水纸吸去玻片上多余的溶液，置显微镜下检查，细胞内凡有DNA的地方都呈阳性反应（玫瑰红色）。

五、实验结果
绘图示Feulgen反应的结果即细胞内DNA的分布。

孚尔根

染色体变异与孚尔根核反应染色法实验日期：11月24日——12月8日成员：周赛赛、傅林美、颜燕何、何洪菲、丁小娟实验研究方向：分别用秋水仙素和紫外线处理植物根尖，对照组为未处理的植物根尖。

观察和鉴定DNA的存在情况和染色情况一、实验目的1.学习和掌握孚尔根反应染色法。

2.鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。

二、实验原理DNA是主要的遗传物质，集中于染色体上。

1924年孚尔根首先用席夫试剂(Schiff)作试验，鉴定了染色体上DNA的存在，故称为孚尔根染色法。

孚尔根染色法的反应原理主要与席夫试剂的化学性质有关，此试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。

碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时还原，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构，呈现紫红色。

利用1N HCl 、60℃下水解时，可将DNA分子中嘌呤碱基与去氧核糖之间的糖苷键打断，使嘌呤脱下，并使去氧核糖C-1位置释放醛基与席夫试剂反应显紫红色。

细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此利用孚尔根反应，可以鉴定DNA的存在。

并广泛应用于核及染色体的研究中。

水解的时间很重要，因为核酸的水解有两个过程，第一，嘌呤碱很快被除掉，脱氧核糖中潜在的醛基显露出来，第二，组蛋白和核酸愈来愈多的被除掉。

在短时间的水解作用以后，第一个过程占优势，这个时候用希夫试剂进行染色，染色体的染色作用最强。

随着水解作用的继续进行，第二个过程逐渐变成优势，因此水解液中希夫反应最强，而染色体中的希夫应减弱。

最后，第二个过程超过第一个过程时，染色体也随之停止反应。

三、实验材料蚕豆根尖四、实验器具和药品试剂显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、青霉素瓶、吸管、烧杯、量筒、切片架、切片盒、小口瓶。

95%乙醇、冰醋酸、碱性品红、偏亚硫酸氢钠、盐酸、活性炭、亮绿。