水果采后病害生防菌的分离筛选及使用途径的研究进展

贮运保鲜
３ 生防菌的利用途径
利用生防菌防治采后病害， 有两条基本途径： （１）利用自然附生于果蔬表面的生防菌； （２）人为引入生 防菌。 ３．１ 自然发生于水果表面的生防菌
人们发现， 植物的叶围和根围自然存在大量的 生防菌， 这些生防菌对抑制病害的发生发展具有不 可忽视的作用。Ｃｈａｌｕｔｚ 和 Ｗｉｌｓｏｎ 发现， 清 洗 后 贮 藏 的柑橘果实比未清洗的果实容易腐烂； 将浓的柑橘 洗果液进行接种培养， 培养基中仅出现酵母菌和细 菌； 而将洗果液稀释后培养， 则出现了病原性霉菌。 这说明柑橘果实上的酵母菌和细菌自发地抑制了病 原菌的生长， 洗果过程中清洗了附生生防菌而使果 实 易 于 染 病 腐 烂［１６］。 迄 今 已 从 苹 果 、 柑 橘 等 果 实 表 面 分离出附生生防菌， 如从苹果的果实及叶上分离的 枝顶孢菌， 能完全抑制引起灰霉病的灰葡萄孢。若调 节采前采后附生生防菌的环境达到最适生长条件， 就会刺激它们增殖， 增强其对病原菌的竞争抑制作 用， 如收获前对芒果树喷施富含营养物的液剂， 能显 著控制芒果炭疽病。但如何以有利有效的方式操纵 附生混合微生物区系中的生防菌种类， 人们尚知之 甚少。 ３．２ 人为引入生防菌
为了成功地进行生物防治， 选择有潜力的生防 菌的生长条件必须与相关病原菌的生长条件相同或 是相似。不同条件下测定菌株在水果表面伤口上的 定殖能力、对水果上营养物质的利用率、低温和常温 下的生长率， 是检测一种微生物是否可作为果蔬采 后生防菌的重要指标。其他的标准还包括生物防治 剂对果树生存环境的抗性、生防菌对水果的致病性 等， 因为一些有生防潜力的生防菌株会造成一些水 果细微的腐烂和褐变。为了确保人类安全， 当生防菌 作为商品上市时， 必须经过严格的检测， 以保证对人 体 绝 对 安 全 ［１５］。
Ｋｅｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｐｏｓ ｔｈａｒｖｅｓ ｔ ｄｉｓ ｅａｓ ｅｓ ｏｆ ｆｒｕｉｔ； ａｎｔａｇｏｎｉｓ ｔ； ｉｓ ｏｌａｔｉｏｎ； ｓ ｃｒｅｅｎ； ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ
果蔬采后病害造成的损失是巨大的。据报道， 发达国家有 １０％￣３０％的新鲜果蔬损失于采后的腐烂， 而在发展中国家， 由于缺乏储运冷藏设备， 果蔬腐 烂损失率更高。水果腐烂主要归因于病原微生物的
ＭＡ Ｌｏｎｇ－ ｃｈｕａｎ， ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ ｙｉｎ＊， Ｊ ＩＡＮＧ Ｓｏｎｇ
（Ｃｏｌｌｅ ｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａ ｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ ｌ Ｅｎｇｉｎｅ ｅ ｒｉｎｇ， Ｊ ｉａ ｎｇｓ ｕ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉｔｙ， Ｚｈｅ ｎｊｉａ ｎｇ ２１２０１３）
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ： Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｐｒｅｓ ｅｎｔｓ ｔｈｅ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｏｆ ｉｓ ｏｌａｔｉｏｎ， ｓ ｃｒｅｅｎ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｗａｙ ｏｆ ｂｉｏ － ａｎｔａｇｏｎｉｓ ｔ ｔｏ
土壤也是一个丰富的生防菌来源。枯草芽孢杆 菌 Ｂ３ 就 是 一 种 从 桃 树 根 部 的 微 生 物 中 分 离 的 生 防 菌， 它是第一株大规模研究的用于采后病害的生物 防治的菌株， 并在桃子褐腐病的生物防治上取得了 成功， 激发了人们对水果采后病害生物防治研究的 兴 趣 ［１２］。 宋 聪 等 从 水 果 、 叶 片 表 面 及 果 园 土 壤 中 分 离 筛选到 １ 株细菌 ２ 株酵母菌， 对梨黑斑病菌 （Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｋｉｋｕｃｈｉａｎａ）、柑 橘 青 霉 病 菌 （Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｉｔａｌｉｃｕｍ）都表现出显著的拮抗效果［１３］。 １．５ 其他
从食品工业中经常使用的酵母菌种中也可筛选 出有效的生防菌。Ｆｉｌｏｎｏｗ 等 从 已 存 在 的 菌 种 中 分 离 筛选到了能有效防治贮藏期间苹果灰霉病的酵母菌 Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｈｕｍｉｃｏｌａ ＮＲＲＬ Ｙ１２６６， Ｆｉｌｏｂａｓｉｄｉｕｍ
２４８ Ｎｏ． ８． ２００８
ｆｌｏｒｉｆｏｒｍｅ ＮＲＲＬ Ｙ７４５４， Ｒｈｏｄｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｔｏｒｕｌｏｉｄｅｓ ＮＲＲＬ Ｙ１０９１ 和 Ｓｐｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅｓ ｒｏｓｅｕｓ ＦＳ－ ４３－ ２３８［１０］。 范青等从保存的菌种中分离出洋葱伯克霍尔德氏菌 （ Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｃｉａ ） 、 季 也 蒙 假 丝 酵 母 （ Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｉｅｒｍｏｎｄｉｉ ） 、 柠 檬 形 克 勒 克 酵 母 （ Ｋｌｏｅｃｋｅｒａ ａｐｉ － ｃｕｌａｔａ）、 汉 逊 德 巴 利 酵 母 （Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｃｅｓ ｈａｎｓｅｎｉｉ） 和 枯 草 芽 孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｂ－ ９１２ 等 ５ 种 拮 抗 菌 对 甜 樱 桃 褐 腐 病 都 表 现 出显著的抑制效果， 其中枯草芽孢杆菌、季也蒙假 丝酵母可完全抑制病害的发生； 季也蒙假丝酵母 和柠檬形克勒克酵母能有效地防治核果类果实采 摘 后 软 腐 病 ［１１］。 １．４ 从土壤中分离
品科学，２００４，２５（８）：１７７－ １８１ ［８］ Ｃｌａｒｉｓｓａ Ｍ Ｇｕｅｄｅｓ， Ａｌｉｃｅ Ｂ Ｐｉｎｔｏ， Ｒｉｃａｒｄｏ Ｆ Ａ Ｍｏｒｅｉｒａ， ｅｔ
ａｌ． Ｅｕｒ Ｆｏｏｄ Ｒｅｓ Ｔｅｃｈｎｏｌ，２００４，２１９：４６０－ ４６４ ［９］ ＭＹ Ｌｉ， ＧＨ Ｚｈｏｕ， ＸＬ Ｘｕ， ｅｔ ａｌ． Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｐｏｓ ｔｈａｒｖｅｓ ｔ ｄｉｓ ｅａｓ ｅｓ ｏｆ ｆｒｕｉｔ ａｎｄ ｓ ｕｇｇｅｓ ｔｓ ｎｅｗ ｌｉｎｅｓ ｏｆ ｒｅｓ ｅａｒｃｈ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄ ｐａｖｅ ｔｈｅ ｗａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓ ｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ｂｉｏ－ ａｎｔａｇｏｎｉｓ ｔ ｆｏｒ ｐｏｓ ｔｈａｒｖｅｓ ｔ ｄｉｓ ｅａｓ ｅ ｃｏｎｔｒｏｌ．
社，２００３：６９９－ ７００
Ｎｏ． ８． ２００８ ２４７
贮运保鲜
健康， 化学药剂对人体的毒害已越来越受到社会的 关注， 迫使人们去寻求更安全有效的采后防病新技 术 ［１］。 利 用 微 生 物 生 防 菌 进 行 采 后 病 害 的 生 物 防 治 是 国内外近年来发展起来的一个新的研究领域。本文 介绍水果采后病害生物防治生防菌的分离筛选和使 用途径的研究进展， 为进一步促进生防菌的分离筛 选和使用途径提供新的思路。
致病作用， 目前控制采后病害的主要方法是使用化 学杀菌剂。然而， 长期的使用化学药剂导致病菌产生 的抗药性降低了化学药剂的防病效果， 同２００７－ １２－ ２８
＊ 通讯作者
基金项目： “８６３”计划项目（０６１６０８０７）； 江苏省高校自然科学基金项目（０６ＫＪＢ２１００１３）。
肉的研究［Ｊ］．农业工程学报，２００５，２１（２）：１５７－ １６０ ［６］ 郭 月 红，李 洪 军，廖 洪 波，等．肉 类 食 品 防 腐 保 鲜 技 术 的 研
究进展［Ｊ］．肉类工业，２００５，１１（３）：２３－ ２５ ［７］ 潘 思 轶，王 可 兴，杨 东 旭．魔 芋 涂 膜 保 鲜 冷 却 肉 研 究［Ｊ］．食
究［Ｊ］．食品科学，１９９８，（８）：５－ ３７ ［３］ 阎 高 峰，马 丽 珍．肉 类 食 品 的 保 鲜 技 术［Ｊ］．山 西 食 品 工 业，
２００２，（３）：１２－ １５ ［４］ 王 树 林．鲜 肉 保 鲜 技 术 的 应 用 及 研 究 现 状［Ｊ］．肉 类 工 业，
２００２，１２（２）：１５－ １８ ［５］ 汪 学 荣，阚 建 全，彭 顺 清，等．用 玉 米 醇 溶 蛋 白 涂 膜 保 鲜 牛
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｍａｉｎ ｆｌｏｒａ ｉｎ ｃｈｉｌｌｅｄ ｐｏｒｋ ｄｕｒｉｎ ｓｔｏｒａｇｅ ｕｓｉｎｇ ＰＣＲ－ ＤＧＧＥ． Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，２３：６０７－ ６１１ ［１０］ 薛 慧 文．肉 品 卫 生 监 督 与 检 验 手 册 ［Ｍ］．北 京 ：金 盾 出 版
除此以外， 从弱毒系中及昆虫生物防治菌中， 也是生防菌的筛选的主要方法。
２ 生防菌的筛选
生防菌筛选方法有离体筛选和活体筛选两种方 法。一般是先将在离体情况下能产生较大抑菌圈的 潜在生防菌筛选出来， 进一步转移到果蔬表面进行 活体拮抗试验， 这样筛选到的生防菌主要是些产生 抗生素的细菌， 但往往遗失了较普遍存在的靠营养竞 争 发 挥 作 用 的 拮 抗 酵 母 类 。Ｗｉｌｓｏｎ 等 认 为 直 接 的 活 体筛选更可取， 这不仅可以避免遗失非抗生机制的 生防菌， 而且也可避免人们产生对含抗菌素物品的 恐 惧 心 理 ［１４］。
作者简介： 马龙传（１９８３—）， 男， 山东金乡人， 硕士研究生， 研究方向为水果采后病害的生物防治。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
２５（６）：５１－ ５２ ［２］ 李络，彭璎，张素苹，等．植酸－ 食用油脂抗氧化剂的应用研
关键词： 水果采后病害； 生防菌； 分离； 筛选； 使用途径
中图分类号： ＴＳ ２５５．３
文献标志码： Ｂ
文章编号： １００５－ ９９８９（２００８）０８－ ０２４７－ ０４
Ｒｅ ｖｉｅ ｗ ａ ｄｖａ ｎｃｅ ｓ ｏｎ ｉｓ ｏｌａ ｔｉｏｎ， ｓ ｃｒｅ ｅ ｎ ａ ｎｄ ｕｔｉｌｉｚａ ｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏ－ ａ ｎｔａ ｇｏｎｉｓ ｔ ｔｏ ｐｏｓ ｔｈａ ｒｖｅ ｓ ｔ ｄｉｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｓ ｏｆ ｆｒｕｉｔｓ
１ 生防菌的分离
生物防治工作的基础， 首先是分离、筛选到有 良好拮抗效果的生防菌。一般认为， 从自然的病害系 统中最易发现有效生防菌。 １．１ 从水果表面分离
水果采后病害生防菌的筛选大多是从水果表面 分离得到。水果表面是抵制采后水果腐烂的生防菌 的良好生长源。在病害有可能发生但是还没有发生 的水果部位， 已分离出了许多具有拮抗作用的细菌 和 酵 母 菌［２－ ３］。 因 此 ， 在 果 园 或 贮 藏 的 无 腐 烂 的 水 果 表面寻找生防菌， 成为水果采后生物防治生防菌的 筛 选 首 选 方 法 。 选 用 没 有 管 理 的 果 园 里 （没 施 用 化 肥 农药）的水果可以提高生防菌分离效 果 ， 因 为 在 这 些 水果上自然的微生物群落没有被化学物质破坏， 所 以它潜在的生防菌群落比施用化肥农药的水果上的 多［４－５］。澳大利亚的 Ｈｕａｎｇ 和 Ｗｉｌｄ 等 从柑桔果实表面 分 离 获 得 的 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｕｍｉｌｕｓ 用 于 防 治 伏 令 夏 橙 的 绿 霉病， 表现出和杀菌剂抑霉哇一样的防效。用于华脐 和里斯本柠檬的绿霉病防效也较好。生防菌也可以 从水果表面的伤口、自然裂缝、含有水果洗液的琼脂 平板以及用水果洗液处理并培养了若干天的水果伤 口处分离［６］。Ｆａｎ 和 Ｔｉａｎ 从桃果实的伤口处成 功地分 离到了能有效防治核果类果实软腐病的酵母菌 （Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｍｂｒａｎｅｆａｃｉｅｎｓ）， 该 生 防 菌 可 以 防 治 桃 果 实 的 软 腐 病［７］。 １．２ 从叶面分离