鸡新城疫抗体水平测定
职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项赛题理论竞赛试卷8
全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷(八)工位号:考试时长:120分钟一、填空题(每空0・5分,共10分)1 .革兰阴性菌外膜层中镶嵌的多种蛋白质的统称是。
2 .细菌产生的毒素有和两种。
3 .细菌的遗传基因主要存在于o4 .细菌的菌落最常见的两种类型是和。
5 .病毒增殖的方式o6 .细菌增殖速度最快的时期是o7 .动物传染病的发展过程,在多数情况下具有一定的规律性,一般分为、、明显期和四个阶段。
8 .产肠毒素性大肠杆菌可引起、和仔猪水肿病等多种大肠杆菌病,是致初生仔猪和断奶仔猪腹泻的最常见和最重要的病原菌。
9 .鸭病毒性肝炎是由引起的急性、高度致死性传染病。
10 .非特异性免疫又称为o11 .免疫应答分为致敏阶段、和三个阶段。
12 .I型变态反应又称为,是发生速度最快的变态反应;发生速度最慢的变态反应是型变态反应。
二、单项选择题(每小题1分,共10分)1 .细菌异染颗粒使用碱性美蓝染色时呈现颜色为()。
A.蓝色B.橙红色C.黑色D.红紫色2 .某些革兰阳性菌在一定条件下,菌体内可形成一个折光性强、通透性低的圆形或椭圆形的休眠体,称为()。
A.荚膜B.包含体C.芽胞D.内含物3 .Q热的病原是()。
A.支原体B.衣原体C.立克次氏体D.螺旋体4 .病毒衣壳的化学成分是()。
A.纤维素B.糖类C.蛋白质D.脂质5 .以下不是非特异性免疫的特点的是()。
A.遗传性B.针对性C.基础免疫性D.先天性6 .动物血清中含量最高的免疫球蛋白是()oA.IgGB.IgDC.IgAD.IgE7 .具有疫苗作用的是()。
A.内毒素B.外毒素C.类毒素D.抗毒素8 .用于稀释鸡的血清的电解质浓度为()。
A.0.9%B.3%C.5%D.8%-10%9 .某100O只肉鸡群,4周内发病500只,死亡300只。
该病的病死率是()。
A.30%B.50%C.60%D.40%10 .羊布鲁菌M5弱毒苗对以下哪种动物无免疫效果()。
鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现
鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现1、将样本做去皮和去脂处理,并用均质器均质样本,然后称取适量的均质物至离心管内。
2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂,振荡混匀后孵育半小时。
3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂,并振荡混匀。
4、离心5分钟,取上层有机相至离心管内,再用氮气吹干。
5、用净化剂溶解干燥物,加入试剂D,离心2分钟后待检。
一、鸡新城疫抗体检测步骤1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理,再用均质器均质样本,然后称取3±0.05克均质物至15毫升的离心管内。
2、依次加入4毫升蒸馏水、0.5毫升试剂A以及0.6毫升衍生化试剂,并振荡混匀,于65°C水浴中孵育半小时。
3、依次加入1毫升试剂B、0.4毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂,然后振荡混匀。
4、在室温下(20-25°C)以4000r/分钟的速度离心5分钟,取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内,在50-60°C水浴中用氮气(或空气吹干仪)吹干。
5、取1毫升净化剂溶解干燥物,再加入0.5毫升试剂D振荡混匀,在室温下(20-25°C)以4000r/分钟的速度离心2分钟,最后待检。
6、若使用全血标本进行检测,标本的移动速度可能较慢,必要时可在加样1分钟后,向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液,以促进标本移动。
二、鸡新城疫的症状表现1、急性型(1)病鸡呼吸困难,会发出“咕噜”的特殊怪声。
(2)病鸡的嘴、鼻中有大量黏液,产蛋量下降。
(3)病鸡出现下痢,其粪便的颜色为黄白色或绿色,有麻痹和神经症状。
2、最急性型此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上,发病时通常不会表现出任何症状,但病发后小鸡会快速死亡。
3、亚急性或慢性型病鸡出现跛行、麻痹、痉挛、运动失调、肌肉抽搐等症状,产蛋鸡发病后期产量会有所降低,一般会发生于成年鸡身上。
4、非典型性新城疫病鸡出现咳嗽、呼吸困难的现象,且伴有分泌物、神经症状,若蛋鸡和种鸡发病,则产蛋量一般会急速降低。
新城疫抗体检测
新城疫的抗体检测某些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的实验称血球凝集试验,以此来推断被检材料中有无病毒存在,是非特异性的,但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制,即血球凝集抑制实验(HI),通过血凝与血凝抑制试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
一目的意义1免疫监测(1)免疫效果评价(2)免疫时机确定2诊断疾病(根据有无抗体或抗体的高低)3流行病学调查二试验仪器与试剂1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器(移液器)、塑料吸头(黄色)若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、电热恒温培养箱、托盘天平。
2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5、H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。
三方法1病毒的血凝试验1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制:用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中,摇匀使其充分溶解即可,有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟,冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。
1.2 1%鸡红细胞制备过程:事先用5ml(或10ml)的注射器吸入抗凝剂若干(其量为所需血量的1/5),从健康公鸡(未经新城疫疫苗注射)的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟,离心5分钟,吸去上清液(注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净)。
然后用生理盐水(用量为血细胞泥的5-10倍)洗红细胞,离心5分钟,弃去上清液,如此反复洗3-5次,直至上清液透明清亮为止,最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度,然后置4℃冰箱备用(一般可保存3天)。
1.3 红细胞凝集试验(血凝试验)操作方法(见表1):(1)取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板,用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水,每孔25微升,直至加到第十五孔(第一列12孔,第二列3孔)。
鸡新城疫抗体检测实验报告(一)
鸡新城疫抗体检测实验报告(一)背景介绍•鸡新城疫是一种常见的家禽传染病,严重影响鸡类养殖业。
•抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。
实验目的•确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。
•提供可靠的数据支持,用于预防和控制鸡新城疫的传播。
实验设计•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。
•分为实验组和对照组,实验组注射疫苗,对照组不注射。
•定期进行血液检测,测量抗体水平。
实验步骤1.收集血样。
2.提取血清。
3.使用特定抗体试剂盒进行检测。
4.测量光密度值,判断鸡新城疫抗体水平。
5.记录实验结果。
实验结果•实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。
•实验组的鸡只无明显临床症状,对疫情具有稳定抵抗力。
•对照组鸡群出现多例感染病例,病死率较高。
结论与建议•鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况,为预防和控制疫情提供重要依据。
•注射疫苗可以提高鸡只的免疫力,减少感染风险。
•鼓励养殖场加强抗体检测工作,及时发现病例并采取相应措施。
致所有鸡农:鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。
本实验通过抗体检测方法,证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力,减少感染的风险。
希望您能严格按照抗体检测规程,提高鸡只的免疫力,保障养殖业的稳定发展。
感谢您的关注与支持!注意:本报告仅为实验结果总结,并非具体实验报告。
具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。
实验方法•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。
•将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。
•对照组的鸡只不注射疫苗。
•按照一定周期,定期采集血液样本。
数据分析•对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。
•实验组的鸡只抗体水平明显升高,且持续稳定。
•对照组的鸡只抗体水平较低,易受感染。
结果讨论•实验结果证明,注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。
•抗体检测是一种可靠的方法,可以快速判断鸡群的感染情况。
•实验结果也表明,饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。
结论•鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。
鸡新城疫抗体检测实验报告
鸡新城疫抗体检测实验报告引言本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测,以评估鸡群对该病毒的感染情况。
通过收集血清样本并使用特定检测方法,我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。
这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。
实验设计1. 样本采集我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集,确保样本的代表性。
采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。
2. 抗体检测方法我们采用了酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行抗体检测。
该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合,并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合,最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。
3. 阳性对照与阴性对照为了验证实验结果的准确性,我们使用了阳性对照和阴性对照。
阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本,而阴性对照为未感染的鸡样本。
实验结果我们对100个样本进行了抗体检测,并将结果进行统计和分析。
以下是实验结果的详细报告:1. 鸡新城疫抗体检测结果我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类:•强阳性:抗体水平高于阈值的样本。
•弱阳性:抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。
•阴性:抗体水平低于阈值的样本。
2. 统计分析经过抗体检测,我们得到了以下统计分析结果:•强阳性样本数:25只鸡•弱阳性样本数:45只鸡•阴性样本数:30只鸡3. 结果解读我们的实验结果表明,在100只鸡样本中,25只鸡的抗体水平高于阈值,可以确认为感染了鸡新城疫。
另外,45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间,可能存在早期感染的迹象。
剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值,说明它们未感染鸡新城疫。
结论与讨论本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测,并得出了实验结果。
结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高,25%的样本具有强阳性抗体水平。
我们认为,对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况,及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。
此外,对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标,帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。
鸡病常规抗体检测结果分析及运用
3
H5(禽流感)
1、蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2,鸡群感染后,抗体异常上升,且离散范围大。
2、肉鸡群:因该病感染和死亡涉及非常快,且病变典型,抗体对比意思不大。
4
IB(传支)
1、蛋/种鸡群:IB免疫效果评价(ELISA检测):免后三周抗体较免前抗体有所上升(500—2000),并且变异系数缩小,说明免疫有效,一般认为免疫抗体阳性率>80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产蛋期抗体滴度大于10000的鸡群在我们长时间检测中也有发现,鸡群无疾病表现,目前不能说明什么,有待进一步的认识。
2、肉鸡群:以琼脂扩散试验(AGP)方法检测免后三周抗体≥50%为免疫合格。
6
REO(病关)
REO免疫效果评价(ELISA检测):免后三周抗体较免前抗体均有大幅度上升(5000—15000),并且变异系数缩小,说明免疫有效,一般认为免疫抗体阳性率>80%为免疫成功。从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。
2、肉鸡群:如在发病后检测MG抗体,在未对其项目进行接种有阳性抗体且变异系数大,提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
7
MG(支原体)
1、肉种鸡群:MG免疫效果评价(ELISA检测):我们种鸡常规MG抗体检测检测分两次,第一次为免前检测,如免前鸡群MG抗体阳性的话,就可以考虑不进行免疫接种,第二次为免后7周,因鸡群免过MG疫苗后21天到49天的血清转化,故在免后7周检测抗体转阳情况,一般正常情况下抗体阳性率应在80%以上。
序号
检测项目
检测结果分析
备注
1
ND(新城疫)
1、蛋/种鸡群:ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12log2,离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好,如抗体滴度>13log2,且离散范围大如:6log2—15log2,提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
鸡新城疫免疫抗体水平评价试验
入) 。振荡 混匀 , 在室 温 2 0 ~ 2 5 。 【 = 下静 置 4 0分钟 后 , 观
②疫苗 重组新城疫灭活疫苗。 ③ 试剂 新 城疫 血凝 抑制 试 验抗 原 ,新 城疫 血
凝 抑 制试 验 阳性血 清 , 1 %鸡 红 细胞悬 液 , 阿 氏液 , p H
察结 果 。 如果 环境 温度太 低或 者太 高 , 可置 2 5 ℃温箱
数 作 为终点 ,终 点稀 释倍 数 除 以 4即为 含 4 H A U抗 原稀释 倍数 。所 以 , 4 H A U抗 原稀释倍 数 为 1 : 6 4 。
③血凝抑制( H I ) 试验( 微量法) 在微量反应板
l ~ l l 孔加入 0 . 0 2 5毫升 P B S . 第 1 2孑 L 加入 0 . 0 5毫 升 P B S 。 吸取 0 . 0 2 5毫升被 检血 清加入 第 1 孑 L 内, 充分 混 匀后 吸 0 . 0 2 5毫 升于 第 2孔 ,依 次倍 比稀 释 至 第
制 l x P B S :量 取 4 0毫 升 2 5 x P B S ,加 入 8 . 5克氯 化 钠, 加蒸馏水 定容 至 1 0 0 0毫升 。
3 . 试 验 方 法
性、 败血 性传 染病 。 此 病 的特征是 鸡呼 吸困难 、 下痢 , 神 经 紊乱 , 黏膜 和浆 膜 出血 坏 死 , 精神沉郁 , 离 群呆
参照 G B / T 1 8 9 6 3 — 2 0 0 3 ( 高 致病 性 新城 疫 诊 断技
术》 中 的血凝 ( HA) 和血 凝抑 制 ( H I ) 试 验进 行 。
4 . 血凝 试验 ( HA) ( 微 量 法) 测 定
死。 嗉囔 内有 充满 臭味 的稀 薄液 体和 气体 , 腺 胃黏膜
鸡感染新城疫的诊断及抗体水平检测
M :DL2000 Marker;1:检测样本 图 1 RT—PCR 扩 增 结 果
洗 液 , 1 3000 rpm 离 心 30s。 重
复 上 一 步 。 弃 去 收 集 管 中 液 体 ,
1 3000rpm 空 柱 离 心 2min, 以 除 去 残 留 的 洗 涤 液 。 将 吸 附 柱 移
鸡 感 染新 城 疫 的诊 断 及抗 体 水 平 检 测
詹 丽 娥 ,陆 冰 洋 ,刘 华 栋 ,李 婷 婷 ,唐 娟 ,王 彩 先 , 丁树 荣 (山西省农业科学 院畜牧兽 医研究所太原 030032)
疾 病 防 治
doi:10 39694 issn 1008—4754 2018.02 018
2017年 3月 9 日 山 西 省 晋 中 地 区 某 养 鸡 场 15O日 龄 的 蛋 鸡 发 生 疾 病 , 此 养 鸡 场 存 栏 鸡 8000只 , 近 期 部 分 鸡 发 生 疾 病 。整 群 精 神 状 态 差 , 采 食 量 和 饮 水 量 均 下 降 。 场 主携带 3只 发病鸡 (2只活鸡 ,1只 死鸡 )来笔者研究室进行诊断。
~~~~ ~~ 后 取 上 清 液 , 使 用 新 城 疫 病 毒 通
用 型 RT-PCR检 测 试 剂 盒 检 测
NDV, 取 已 处 理 的 样 品 , 加 入 裂
解 液 600 u L,充 分 颠 倒 混 匀 , 室
温 静 置 3 ~ 5min。 将 液 体 吸 入 吸 附 柱 中 , 13000rpm 离 心 30s。 弃 去 收集 管 中的 液 体 ,加 入 600 u L
7讨 论
新城疫 (Newcastle disease, ND)是 由新城疫病毒 (Newcastle disease virus,NDv)引 起 的 危 害 多种 家禽特 别 是陆生 禽 类的 最主要 传 染 病 之 一 。一 些 发 达 国 家 采 用 强 制扑 杀强 毒 感染禽 群 为主 的方 法 ,
1-鸡新城疫抗体水平测定
附件1:高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定(微量法),测定方法按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行。
本赛项不设理论考试,只对技能操作进行综合考核,技能竞赛题为公开试题,见本赛项规程的主要技术规程及要求。
二、竞赛方式本赛项为2人小组赛,以院校为单位组队参赛,不得跨校组队。
三、竞赛时量比赛时间为3小时。
比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。
四、名次确定办法本赛项满分100分,采用分项计分法。
按总分由高到低排序,总分相同按完成时间先后排序,用时少者列前;若二项均相同,则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。
五、评分标准与评分细则1.评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。
表1项目技能竞赛评分标准及分值2.评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。
表2项目技能竞赛评分细则六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准要求配制,且均为常用仪器、设备与材料。
本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。
表3项目竞赛用仪器、设备与材料七、选手须知(一)主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定(微量法)按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行,具体步骤及其分值如下:(一)试验器材准备(占总成绩的8%)按照操作规程进行器材准备,要求器材摆放有序,物品标识合理,桌面整洁(二)配制1%鸡红细胞悬液(占总成绩的18%)按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液,要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
(三)血凝试验(占总成绩的20%)按照操作规程,用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀,倍比稀释后,添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡混匀,正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
鸡新城疫抗体水平检测参考课件
2020/3/24
2
血凝与血凝抑制试验
• 通过已知病毒,检查待检血清中是否含有相应的抗体及抗体效价, 监测免疫后鸡群抗体水平的动态变化,评价疫苗免疫效果。
2020/3/24
3
实验内容
2020/3/24
6
2020/3/24
7
鸡新城疫病毒血凝试验判读
2020/3/24
8
新城疫病毒血凝抑制试验判读
2020/3/24
9
202041实验器材禽用采血器托盘天平离心管移液枪离心机微型振荡器96孔v型反应板生理盐水鸡新城疫病毒液待检血清等202041鸡新城疫病毒血凝试验判读202041新城疫病毒血凝抑制试验判读
鸡新城疫抗体水平检测
--血凝与血凝抑制实验
主讲人:李明书
1
由副粘病毒引起的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。
2020/3/24
4
血凝与血凝抑制试验原理
• 某些病毒(如新城疫病毒,禽流感病毒等)具有血凝素,能够与动 物的红细胞发生凝集,此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞 凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制,即为红细胞 凝集抑制试验(HI)。
2020/3/24
5பைடு நூலகம்
实验器材
禽用采血器、托盘天平、离心管、移液枪、离心机、微型 振荡器、96孔v型反应板、生理盐水、鸡新城疫病毒液、待 检血清等
鸡新城疫抗体水平测定理论竞赛试卷9
全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷(九)工位号:考试时长:120分钟一、填空题(每空0.5分,共10分)1. 细菌细胞壁结构中,为革兰阴性菌所特有,位于外壁层的最表面。
2. 是病毒增殖的唯一场所。
3. 是细菌的运动器官。
4. 外毒素经甲醛溶液处理后失去毒性,但仍保留很强的抗原性,称为,其可作为疫苗进行免疫接种。
5. 细菌毒力因子主要有和两个方面。
6. 垂直传播包括、和经产道传播三种方式。
7. 在动物传染病的流行过程中,根据在一定时间内发病率的高低和传播范围的大小,可分为________、________、________和大流行四种表现形式。
8. 破伤风又称为强直症,俗称______,是______经伤口厌氧感染引起的一种急性、创伤性、中毒性人兽共患病。
9. 免疫效应分子包括抗体、和。
10.既有免疫原性又有反应原性的抗原称为。
11.B细胞介导的免疫应答为免疫应答。
12.病毒的复制过程可分为吸附、、、生物合成、五个主要阶段。
二、单项选择题(每小题1分,共10分)1.细菌摄取钠离子的方式是()。
A. 单纯扩散B. 促进扩散C.主动运输D. 基团转位2. 以下微生物中,引发强直症的病原为()。
A.肉毒梭菌B.产气荚膜梭菌C. 破伤风梭菌D.炭疽杆菌3. 酒精的有效杀菌浓度是()。
A.60%~65%B.70%~75%C. 80%~85%D. 90%~95%4. 我国饮用水的卫生标准是,每毫升水中细菌总数不超过()。
A. 50个B.100个C.150个D.200个5. 没有抗体参与的变态反应是()型变态反应。
A.ⅠB.ⅡC.ⅢD.Ⅳ6.不是免疫应答的特点的是()。
A.特异性B.免疫记忆C.有免疫期D.遗传性7. 下列物质中,()可以激活补体。
A.抗原B.抗体C.抗原抗体复合物D.半抗原8.血清学反应中的两阶段比较,()。
A.第一阶段快B.第二阶段快C.两阶段一样快D.不一定9. 《中华人民共和国动物防疫法》将动物疫病分为()。
1-鸡新城疫抗体水平测定
附件1:高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定(微量法),测定方法按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行。
本赛项不设理论考试,只对技能操作进行综合考核,技能竞赛题为公开试题,见本赛项规程的主要技术规程及要求。
二、竞赛方式本赛项为2人小组赛,以院校为单位组队参赛,不得跨校组队。
三、竞赛时量比赛时间为3小时。
比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。
四、名次确定办法本赛项满分100分,采用分项计分法。
按总分由高到低排序,总分相同按完成时间先后排序,用时少者列前;若二项均相同,则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。
五、评分标准与评分细则1.评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。
表1 项目技能竞赛评分标准及分值2.评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。
表2 项目技能竞赛评分细则六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准要求配制,且均为常用仪器、设备与材料。
本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。
七、选手须知(一)主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定(微量法)按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行,具体步骤及其分值如下:(一)试验器材准备(占总成绩的8%)按照操作规程进行器材准备,要求器材摆放有序,物品标识合理,桌面整洁等。
(二)配制1%鸡红细胞悬液(占总成绩的18%)按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液,要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。
(三)血凝试验(占总成绩的20%)按照操作规程,用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀,倍比稀释后,添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡混匀,正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。
鸡新城疫的免疫检测程序
教学实习内容一.鸡新城疫的免疫检测目的:系统掌握鸡新城疫的抗体检测技术。
实验材料:新城疫疫苗、待测鸡蛋、生理盐水、5%柠檬酸钠、1%鸡红细胞悬液、胶头滴管、注射器、锥形瓶、15ml离心管、试管、96孔V型板、离心机等1.1%鸡红细胞悬液的制备(1)每组采取3ml左右健康鸡静脉血,迅速注入装有约0.3-0.4ml抗凝剂的离心管内,轻轻颠倒混匀;(2)加入适量生理盐水,混匀,3000rpm*10min,吸弃上清液和红细胞沉淀上层的白细胞层(3)加入适量生理盐水,重悬红细胞,3000rpm*10min,吸弃上清液。
如此,重复3次。
(4)量取红细胞沉淀的体积,用生理盐水配成1%的红细胞悬液,待用。
2.HA试验1%红细胞根据所用NDV液的凝集价,配制4单位病毒液。
3.HI试验(1)待测卵黄样品的制备:用镊子敲破鸡蛋小头,将蛋清倒去,留蛋黄在蛋壳内;吸取0.5ml 生理盐水,放入小试管内;去掉部分蛋壳,用1ml注射器(不带针头)吸取蛋黄0.5ml,加到有生理盐水的试管内,混匀(避免其很多泡)待检。
(2)按照检测血清抗体的方法检测卵黄中的抗体。
被检鸡蛋卵黄1%红细胞(3)判定和记录所检测鸡蛋的卵黄抗体效价。
结果与分析对所测得的结果进行分析,确定该鸡群目前的免疫状态,并对生产提出合理建议或给出科学指导。
分析并指出影响本实验结果的主要因素。
二.传染病的分子生物学检测——PCR检测(以PCV2为例)1.DNA提取:将猪肝脏称重后,按照1:3(W:V)的比例加入PBS,用组织研磨器研磨成组织悬液,反复冻融3次后8000 rpm离心5 min,取上清300 μL提取DNA。
取冻融、离心后的组织悬液/血清300μL,加入300 μL细胞裂解缓冲液和5 μL的蛋白酶K(20 mg/mL),混匀,置50 ℃消化2 h,每隔30 min,剧烈震荡一次;加入等体积的Tris饱和酚,充分振荡混匀,4 ℃ 12000 rpm 离心10 min;取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中,加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)混匀后,4 ℃ 12000 rpm 离心10 min;用酚:氯仿:异戊醇(25:24: l)重复抽提一次;取上层水相转入一新的l.5 mL eppendorf管中,加入2倍体积冰预冷的无水乙醇和1/10体积的3 mol/L醋酸钠(pH 5.2),室温放置30 min 以沉淀基因组DNA;4 ℃ 12000 rpm离心15 min,弃上清;用75%乙醇1 mL 洗涤沉淀,4 ℃ 12 000 rpm 离心10 min后,弃去上清,自然晾干。
实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解
鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法1.本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。
2.实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒,禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集,此即为红细胞凝集现象(HA)。
这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验(HI)。
3.需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只,被检鸡15-25只。
器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。
药剂(1)浓缩抗原;(2)生理盐水或磷酸缓冲盐水(PBS);(3)Alsever细胞保存液;(4)红细胞悬液;(5)待检血清4.实验步骤(1)发现与鉴定病毒:鸡新城疫和禽流感病毒分离后,这些病毒能凝集鸡的红细胞,又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。
(2)诊断病毒性疾病:如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如抗体效价有4倍以上升高,即有诊断意义。
(3)免疫机体抗体效价的测定:3.鸡新城疫(ND)的HA和HI(1)试验准备①抗原:一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原,进行试验。
② 0.7%细胞悬浮液:由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8%灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内,迅速混匀。
如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份,血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。
红细胞悬液的配制:将血液注入离心管中,经3000转/分钟,离心5-10分钟,用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。
再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟,弃上清,再加稀释液洗涤,如此反复洗涤三次,将最后一次离心后的红细胞泥,按0.7%的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。
2022全国职业院校技能大赛——鸡新城疫抗体检测赛卷+答案
全国职业院校技能大赛鸡新城疫抗体水平测定赛项理论竞赛试卷(A)工位号:考试时长:120分钟一、填空题(每空0.5分,共10分)1.某些细菌(如猪链球菌、炭疽杆菌等)在生活过程中,可以在细胞壁外面产生一层粘液性物质,包围整个菌体,称为。
2.病料的采集要求进行无菌操作,所用器械、容器及其他物品均需事先。
3.《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2020)中1%红细胞悬液的配制使用作为抗凝剂,采集至少3只或无新城疫抗体的非免疫鸡的抗凝血液。
4.在病毒的血凝试验中,以完全凝集的病毒最大稀释度为该抗原的。
5.当两种病毒感染同一细胞时,可发生一种病毒抑制另一种病毒复制的现象,称为病毒的现象。
6.机体受到抗原刺激后,由B淋巴细胞转化为浆细胞产生的,能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白称为。
7.农业农村部制定的《高致病性禽流感疫情应急实施方案(2020年版)》中划定的高致病性禽流感的疫区一般是指由疫点边缘向外延伸公里的区域。
8.凡是能引起宿主细胞迅速裂解的噬菌体,称为噬菌体。
9.病原微生物侵入动物机体,并在一定的部位定居、生长繁殖,从而引起机体一系列病理反应的过程,称为。
10.禽曲霉菌病的主、次要病原体是烟曲霉和黄曲霉。
主要侵害4~12日龄的雏鸡,其病变特征为__________。
11.动物突然发病死亡,天然孔出血应首先怀疑是。
12.按照免疫的产生及其特点,可分为和两大类。
13.Ⅳ型变态反应又称为____________________,发生过程最为缓慢。
14.机体发生吞噬作用产生的结果有__________和__________。
15.异染颗粒成分是和无机聚偏磷酸盐,功能是储存磷酸盐和能量。
16.建立免疫带是为了提高动物特异性免疫力,防止__________扩散17.500只鸡中有40只发病,其中20只死亡,其病死率为__________。
二、单项选择题(每小题1分,共10分)1.参与凝集试验抗体主要为()A.IgG和IgAB.IgA和IgMC.IgA和IgBD.IgM和IgG2.病猪体温升高,呼吸急促、腹式呼吸、夹杂阵发性痉挛性咳嗽。
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2018年全国职业院校技能大赛拟设赛项规程一、赛项名称赛项编号:GZ-2018011赛项名称:鸡新城疫抗体水平测定英语翻译:Detection of the Antibody against Chicken NewCastle Disease Virus赛项组别:高职组赛项归属产业:农林牧渔二、竞赛目的本赛项由学校、行业、企业共设,通过技能竞赛,能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流,引领专业建设与课程改革;能进一步深化学校与企业之间的合作交流,加大行业人才队伍建设力度,提升行业产业发展水平。
同时,通过本赛项的资源转化,可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果,提高专业的教学水平,提升人才培养质量。
三、竞赛内容本赛项为鸡新城疫抗体水平测定(微量法),测定方法按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准,竞赛时间为180分钟。
具体步骤及其分值如下:(一)试验器材准备(占总成绩的8%)按照操作规程进行器材准备,要求器材选择正确、摆放有序,物品标识合理,桌面整洁等。
(二)配制1%鸡红细胞悬液(占总成绩的18%)按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液,要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。
(三)血凝试验(占总成绩的20%)按照操作规程,用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀,倍比稀释后,再次滴加稀释液,再添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡混匀,静置感作适当时间后,正确判定抗原的血凝效价。
要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。
(四)配制四单位病毒(占总成绩的10%)根据血凝试验结果,按照操作规程配制四单位病毒。
要求稀释倍数计算正确,稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。
(五)血凝抑制试验(占总成绩的20%)按照操作规程,对20个被检血清进行血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照;正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果,确定抗体滴度,完成报告。
要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。
(六)抗体滴度报告(占总成绩的24%)按照操作规程,正确判定抗体滴度,完成报告。
要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。
四、竞赛方式本赛项为团体赛。
每组参赛学生2名,比赛由2名学生配合完成,参赛选手均为高职院校在籍学生,不得跨校组队。
竞赛安排上午、下午各一场(每场两个赛场),竞赛场次由领队抽签决定。
竞赛场座位号由选手抽签决定,竞赛用设备、材料及实验动物与工位号对应。
本赛项不邀请境外代表队参赛。
五、竞赛流程本项目竞赛日程与流程安排见表1。
六、竞赛赛卷本赛项不设理论考试,只对操作技能进行综合考核,技能竞赛题为公开赛卷,见本赛项规程的竞赛内容。
七、竞赛规则1.参赛选手须为高职院校全日制在籍专科学生;本科院校中高职类全日制在籍学生;五年制高职四、五年级学生。
参赛选手必须持本人身份证和参赛证参加比赛。
参赛选手年龄须不超过25周岁,年龄计算时间截止2018年5月1日。
凡在往届全国职业院校技能大赛中获一等奖的选手,不能再参加同一项目同一组别的比赛。
2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。
如比赛前参赛选手和指导教师因故无法参赛,须由省级教育行政部门于本赛项开赛10个工作日之前出具书面说明,经大赛执委会办公室核实后予以更换。
竞赛开始后,参赛队不得更换参赛队员。
3.参赛选手出场顺序、位置、比赛所用器材等均由抽签决定,不得擅自变更、调整。
4.参赛选手提前30分钟检录进入赛场,按照抽签工位号参加比赛,竞赛开始后迟到15分钟以上者取消比赛资格;开赛30分钟后,选手方可离开赛场。
5.选手进入赛场后须检查实验用品是否齐全,如有疑问向裁判询问。
选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场,如有特殊情况,需经裁判同意,选手若需休息、饮水或去洗手间等,耗用时间计算在比赛时间内。
6.选手应在竞赛试卷或实物标签上填写工位号。
试卷(或实物标签)上不得有任何暗示选手身份的记号和符号,否则取消成绩。
比赛过程中如果动物出现死亡等意外情况,举手示意,可更换实验动物。
各参赛选手要按照规定做好详细记录;判定试验结果时要举手示意裁判。
7.竞赛在规定时间结束时,选手应立即停止操作,不得以任何理由拖延。
选手若提前完成操作,需举手示意,由裁判员记录结束时间,确认后方可离开比赛现场。
八、竞赛环境赛场照明、控温良好。
赛场内设有相对独立的长实验台并标明编号,选手根据抽签结果在相应的实验台完成比赛。
赛场内设置摄像头,可将实时赛况直播到观摩室。
九、技术规范本赛项以教育部颁布的职业院校相关专业教学指导方案和国家职业标准《动物疫病防治员》(三级)规定的知识和技能要求为基础,依据《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准,确定比赛内容及方式。
十、技术平台仪器设备按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准要求配制。
本赛项所用的仪器、设备与材料见表2。
十一、成绩评定成绩评定按照公平、公正、客观的原则进行。
(一)裁判组成项目组设裁判员19名,其中裁判长1名,加密裁判2名,评分裁判16名(2个赛场同时举行比赛)。
(二)评分方法本赛项采取过程评分的方式评分,结果评定采用百分制。
竞赛现场每位裁判对每一组选手分别打分,由项目裁判组统一评分,去掉一个最高分,去掉一个最低分,其余得分的算术平均值作为参赛队伍的最后得分。
各裁判员首先审核选手原始打分成绩,并签名;赛项裁判长对所有裁判员的打分成绩进行审核,并签名。
(三)成绩审核为保障成绩评判的准确性,监督组将对赛项总成绩排名前30%的所有参赛队伍(选手)的成绩进行复核;对其余成绩进行抽检复核,抽检覆盖率不得低于15%。
如发现成绩错误以书面方式及时告知裁判长,由裁判长更正成绩并签字确认。
复核、抽检错误率超过5%的,裁判组将对所有成绩进行复核。
(四)成绩公布记分员将解密后的各参赛队成绩汇总成最终成绩单,经裁判长、监督组签字后,在指定地点、以纸质形式进行公示,公示时间为2小时。
成绩公示无异议后,由仲裁长、监督组长在成绩单上签字,并在闭赛上公布竞赛成绩。
项目技能竞赛评分标准见表3。
十二、奖项设定本赛项设一、二、三等奖。
以赛项实际参赛队总数为基数,一、二、三等奖获奖比例分别为10%、20%、30%(小数点后四舍五入)。
获得奖项的参赛队,授予相应的荣誉证书。
获得一等奖的参赛队指导教师由大赛组委会颁发优秀指导教师证书。
十三、赛项安全(一)比赛环境1.执委会须在赛前组织专人对比赛现场、住宿场所和交通保障进行考察,并对安全工作提出明确要求。
赛场的布置,赛场内的器材、设备,应符合国家有关安全规定。
如有必要,也可进行赛场仿真模拟测试,以发现可能出现的问题。
承办单位赛前须按照执委会要求排除安全隐患。
2.赛场周围要设立警戒线,要求所有参赛人员必须凭执委会印发的有效证件进入场地,防止无关人员进入发生意外事件。
比赛现场内应参照相关职业岗位的要求为选手提供必要的劳动保护。
在具有危险性的操作环节,裁判员要严防选手出现错误操作。
3.承办单位应提供保证应急预案实施的条件。
对于比赛内容涉及高空作业、可能有坠物、大用电量、易发生火灾等情况的赛项,必须明确制度和预案,并配备急救人员与设施。
4.严格控制与参赛无关的易燃易爆以及各类危险品进入比赛场地,不许随便携带书包进入赛场。
5.配备先进的仪器,防止有人利用电磁波干扰比赛秩序。
大赛现场需对赛场进行网络安全控制,以免场内外信息交互,充分体现大赛的严肃、公平和公正性。
6.执委会须会同承办单位制定开放赛场和体验区的人员疏导方案。
赛场环境中存在人员密集、车流人流交错的区域,除了设置齐全的指示标志外,须增加引导人员,并开辟备用通道。
7.大赛期间,承办单位须在赛场管理的关键岗位,增加力量,建立安全管理日志。
8.竞赛用生物制品均由符合国家标准的企业生产与提供,实验动物(鸡)符合生物安全规范。
(二)生活条件1.比赛期间,原则上由执委会统一安排参赛选手和指导教师食宿。
承办单位须尊重少数民族的信仰及文化,根据国家相关的民族政策,安排好少数民族选手和教师的饮食起居。
2.比赛期间安排的住宿地应具有宾馆/住宿经营许可资质。
以学校宿舍作为住宿地的,大赛期间的住宿、卫生、饮食安全等由执委会和提供宿舍的学校共同负责。
3.大赛期间有组织的参观和观摩活动的交通安全由执委会负责。
执委会和承办单位须保证比赛期间选手、指导教师和裁判员、工作人员的交通安全。
4.各赛项的安全管理,除了可以采取必要的安全隔离措施外,应严格遵守国家相关法律法规,保护个人隐私和人身自由。
(三)组队责任1.各学校组织代表队时,须安排为参赛选手购买大赛期间的人身意外伤害保险。
2.各学校代表队组成后,须制定相关管理制度,并对所有选手、指导教师进行安全教育。
3.各参赛队伍须加强对参与比赛人员的安全管理,实现与赛场安全管理的对接。
(四)应急处理比赛期间发生意外事故,发现者应第一时间报告执委会,同时采取措施避免事态扩大。
执委会应立即启动预案予以解决并报告组委会。
赛项出现重大安全问题可以停赛,是否停赛由执委会决定。
事后,执委会应向组委会报告详细情况。
(五)处罚措施1.因参赛队伍原因造成重大安全事故的,取消其获奖资格。
2.参赛队伍有发生重大安全事故隐患,经赛场工作人员提示、警告无效的,可取消其继续比赛的资格。
3.赛事工作人员违规的,按照相应的制度追究责任。
情节恶劣并造成重大安全事故的,由司法机关追究相应法律责任。
十四、竞赛须知(一)参赛队须知1.参赛队名称统一使用规定的地区代表队名称。
2.参赛选手和指导教师报名获得确认后不得随意更换。
如比赛前参赛选手和指导教师因故无法参赛,须由省级教育行政部门于本赛项开赛10个工作日之前出具书面说明,经大赛执委会办公室核实后予以更换。
竞赛开始后,参赛队不得更换参赛队员。
3.参赛队按照大赛赛程安排,凭大赛组委会颁发的参赛证和有效身份证件参加比赛及相关活动。
4.参赛院校须为参赛队员购买保险。
(二)指导教师须知1.各参赛代表队要发扬良好道德风尚,听从指挥,服从裁判,不弄虚作假。
如发现弄虚作假者,取消参赛资格,名次无效。
2.各代表队领队要坚决执行竞赛的各项规定,加强对参赛人员的管理,做好赛前准备工作,督促选手带好证件等竞赛相关材料。
3.竞赛过程中,除参加当场次竞赛的选手、执行裁判员、现场工作人员和经批准的人员外,领队、指导教师及其他人员一律不得进入竞赛区域。
4.参赛代表队若对竞赛过程有异议,在规定的时间内由领队向赛项仲裁工作组提出书面报告。
5.对申诉的仲裁结果,领队、指导教师要带头服从和执行,并做好选手工作。