糖的薄层层析

薄层层析的种类:
1 吸附薄层层析：化学结构不同的物质，在同一吸附剂上具有 强弱不同的吸附性。薄层层析是利用吸附剂在各种溶剂中对不 同化合物的吸附能力的强弱不同而进行分离。如硅胶G、硅胶H 氧化铝等都属于此类。 2 分配薄层层析：其基本原理与纸层析相同，即由支持剂、固 定相、流动相组成整个层析系统。如纤维素、硅藻土等均属于 此类。 3 离子交换薄层层析：一般采用离子交换纤维素来制作层析薄 板。



5、 记录各斑点的位置、颜色，绘出层析图谱。计算 各标准糖及混合糖中各组分斑点的Rf值，以鉴定混合 糖中糖的组分。 移动速率(比移值)： 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离
五、注意事项

1、 制板时糊状物稀稠合适，铺板迅速，以 保证薄板薄而均匀，表面平整。 2、 样品不宜过浓或过稀。 3、 点样点直径≤3mm，样点间距离≥1cm。 4、 用0.02mol/L 醋酸钠（也可用0.02mol/L 硼酸）代替水来调制硅胶板，可使Rf值较接 近的糖得到更好的分离。


本实验是以硅胶G为支持物的薄层层析。在铺 有吸附剂的薄层上，样品经过连续反复的被吸附剂 吸附及展开剂解吸附的过程后，不同的糖因其分子 量不同，羟基数目及醛基、酮基性质的差异，故而 在薄层上以不同速度移动而得以分离。被吸附剂吸 附强及被展开剂解吸附弱的在薄层上移动速度慢， 展开距离短；反之则移动速度快，展开距离长，于 是混合糖液中的各种糖就被分离开来。糖在薄板上 的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。 在相同条件下，对照已知糖的Rf值可对未知糖 进行定性分析。


三、实验材料、仪器和试剂
1．实验材料和仪器：玻璃板、天平、电热烘箱、电吹风、 毛细管、层析缸、喷雾器。 2. 试剂 (1)、1%标准糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各 100mg ,分别用75%乙醇定容至10ml。 (2)、混合糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各1g 溶于50ml蒸馏水。 (3)、糖显色剂（苯胺－二苯胺－磷酸显色剂）：称取1g二 苯胺，加入1 ml苯胺。待溶解后加入50ml丙酮，最后加入5 ml H3PO4，边滴加边搅拌。此溶液应透明、无浑浊。 (4)、展开剂：用前配制。 1、正丁醇︰乙酸乙酯︰异丙醇︰冰乙酸︰水=2︰6︰6︰4︰1 2、氯仿︰甲醇=60︰40（V/V） (5)、0.02 mol/L 醋酸钠（含有0.5%的CMC-Na）。


六、思考题： 显色时，是否可以采用其他的糖显色剂？
Fra Baidu bibliotek

四、实验步骤 1、薄板制备：称取硅胶G 1.5g于烧杯中，加入0.02mol/L醋 酸钠6ml(含有CMC-Na0.5%），调成均匀糊状后，立即倾于玻 璃板上，使糊状物迅速铺平，布满整块玻板。将铺好的硅胶 G薄板于100℃烘箱中烘干（30min），取出后即可使用。 2、点样：用毛细管分别吸取4种标准糖溶液及其混合液，在 距玻板一段1.5cm处，间距1cm分别点样，用电吹风吹干样点。 3、展开：先在层析缸中放入展开剂，液面不要超过点样线， 将硅胶板点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶 剂到达标志线(距玻璃板上缘一厘米处）后取出电吹风吹干。 4、显色：用喷雾器向薄层均匀地喷上糖显色剂，置于80～ 100℃烘箱烘烤约3～5min，至色斑出现为止。
实验十
糖的薄层层析
学时: 3
一、实验目的
1 掌握吸附层析法。
2 掌握薄层层析的原理和操作技术。
二、实验原理
薄层层析是将吸附剂或支持物均匀地铺在玻璃上 成为薄层，然后把要分析的样品加到薄层的一端，用 合适的溶剂展开而达到分离目的。按照不同的样品和 不同的分离要求可选用不同的支持物，如硅胶G、硅藻 土、氧化铝G、纤维素、离子交换纤维素等。 薄层层析的优点是设备简单，操作方便，层析时 间短，样品用量范围大（1μg～0.5g），灵敏度高， 可以分离多种化合物，显色方法可采用腐蚀性显色剂， 其分辨率较高。