盐酸二甲双胍质检方法
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍血药浓度及临床应用王长连1,刘亦伟1,黄品芳1关键词: 盐酸二甲双胍;血药浓度;高效液相色谱法中图分类号: R927.11 文献标识码: B 文章编号: 1672 4194(2007)06 0592 02收稿日期:2007 05 16 修回日期:2007 08 29作者单位:福建医科大学附属第一医院药学部,福州 350005作者简介:王长连(1954~),男,主任药师A:标准溶液[盐酸二甲双胍(M et)+尿苷(Uri)];B:空白血浆;C:标准品+空白血浆(含M et 500ng/m L);D:生物样品.图1 二甲双胍和内标尿苷H PL C 色谱图Fig 1 Chromato gr am of metfo rmin and inter nal standard(ur idine)盐酸二甲双胍(metfo rmin hydro chlor ide,M et)是临床常用的口服双胍类降糖药,近年有一些缓、控释制剂上市。
为了探讨其体内过程与临床疗效,笔者参考有关文献并加以改进[1 4],在实验室建立高效液相色谱法测定M et 血药浓度,报道如下。
1 材料和方法1.1 材料 高效液相色谱系统(包括510泵,996二极管阵列检测器,7725i 进样器,Empo wer 数据处理系统,美国Waters 公司);电子天平(A E 240,上海梅特勒 托利多有限公司);旋涡混合器(XW 80,上海医科大学仪器厂);石英亚沸高纯水蒸馏器(SY Z 550,金坛市丹阳门石英玻璃厂);台式高速离心机(T G L 16G ,上海医用分析仪器厂)。
M et 标准品(美国Sigma 公司,批号113K 0931);尿苷(U r i)对照品(上海化学试剂站分装厂,批号950906);IPR B 8离子对色谱试剂(天津化学试剂二厂,批号20070510);甲醇(国药集团上海化学试剂有限公司,批号T 20060930,色谱纯),实验用水为三蒸水。
HPLC法测定盐酸二甲双胍中二甲双胍的含量
HPLC法测定盐酸二甲双胍中二甲双胍的含量目的：通过HPLC方法测定二甲双胍在盐酸二甲双胍片剂中的含量。
方法：在色谱条件：选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱，流动相：乙腈：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm，进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）条件下进行检测。
结果：二甲双胍在2.56ug·mL-1-64.00ug·mL-1范围内线性关系良好，线性方程为：Y =65347X-324521（r=0.9996），平均回收率为100.46%，RSD为1.43%。
结论：采用高效液相色谱方法，可有效评估盐酸二甲双胍片剂中二甲双胍的含量，本法结果准确、方法简单、灵敏度高。
标签：HPLC法；二甲双胍；盐酸二甲双胍；含量二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的首选药物，目前对于盐酸二甲双胍的含量测定方法较多，紫外及高效液相等检测方法，都有相继报道[1]。
考虑到紫外检测不能有效分离制剂中有关物质，所测结果准确性不高，故考虑分析高效液相法对盐酸二甲双胍片剂检测的有效性，结果报道如下：1 材料1.1 仪器与试药岛津LC-20A 型高效液相色谱仪；超声波清洗器；乙腈由国药集团化学试剂有限公司提供，为色谱醇；磷酸、磷酸二氢钾均为分析纯；盐酸二甲双胍对照品（中国药品生物制品检定所，批号：150913-151102）；盐酸二甲双胍胶囊（常州兰陵制药有限公司，国药准字H11021518，批号为：140923、150316、150728）。
2 方法与结果2.1 方法学验证2.1.1 色谱条件色谱柱选择Hypersil CN（200 mm×4.6 mm，5 μm），，流动相：乙腈：0.01 mol/L 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调至pH=3.5）（32∶78），检测波长：234 nm，进样量10μl，1.0 mL/min流速，柱温为室温（30℃）。
盐酸二甲双胍缓释片质量标准
盐酸二甲双胍缓释片质量标准
一. 产品名称：
盐酸二甲双胍缓释片
二. 性状描述：
本品为斑点状或类似片状的白色、黄色或类似片状的物质。
三. 质量标准：
1. 外观：本品为斑点状或类似片状的物质，色白、黄色或类似片状，无杂质。
2. 硬度：≥60N。
3. 盐酸二甲双胍含量：90.0%-110.0%。
4. 溶解度：本品在0.1mol/L盐酸和水中均易溶。
5. 铅：≤5mg/kg。
6. 砷：≤3mg/kg。
7. 汞：≤1mg/kg。
8. 镉：≤1mg/kg。
9. 热失重：≤2.0%。
四. 适用范围：
本品适用于治疗2型糖尿病患者的糖代谢异常。
五. 用法用量：
口服。
成人初始每日剂量为500毫克或1克，每日1次，随餐服用。
剂量应在个体化治疗的基础上逐渐递增，不得超过每日2克。
六. 保存方法：
密闭、防潮、光线避免且存放于干燥处。
七. 批准文号：
国药准字H20080875
八. 生产企业：
广东珠江药业股份有限公司
九. 包装：
本品采用铝塑泡腔包装，每板14片，每箱8板。
盐酸二甲双胍质检方法
盐酸二甲双胍质检方法一：质量指标二：质量检验方法1、外观性状目测颜色、颗粒形状，本品应为白色结晶或结晶性粉末，用鼻测其气味，几乎无臭。
2、溶解性（澄清度）盐酸二甲双胍分别能溶于水合甲醇中，且水中的溶解度要远比甲醇中大。
精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加10mL水于比色管中，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在水中的澄清度合格；同样精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加30mL甲醇于比色管中，边晃动边使其慢慢溶解，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在甲醇中的澄清度合格。
3、干燥失重精确称重1.000克样品于一称量皿中，放于105℃干燥炉中4小时至恒重，取出后放于一干燥皿中至室温，称重计算，减重不超过0.5%为样品合格。
计算方法如下：干燥失重=（m样—m干）÷m样4、炽灼残渣600度坩埚，先在高温箱中600℃加热1小时，而后取出放入干燥皿中冷却，精确称重。
准确称重1.000g样品放于坩埚中，直接放电炉加热至没有青烟（约半小时左右）凉至室温加0.5mL 硫酸，继续放电炉加热至无烟(低温加热至硫酸蒸汽，全部除尽)，而后放于600度高温炉中2小时，取出放于干燥皿中完成冷却，精密称量后，再在600-800℃炽灼至恒重，称重计算，小于0.1%为合格。
计算：A最后残渣质量÷m样品质量5、有关杂质（双氰胺对照试验）取二甲样品0.5g，加无水甲醇5mL（沿壁加入）于试管1中，水浴加热至完全溶解（加热取出多次，防止沸出试管），而后自然降温至35度，再加5mL乙醚搅拌冷却至20度，静止30分钟，用滤纸过滤，再用2.5mL乙醚洗试管，同样过滤合并滤液。
滤液。
滤液置水浴上蒸发至干，（可先用电炉蒸干一部分水），残渣加水0.5mL溶解，作为备用样品。
双氰胺对照试样，取双氰胺对照品0.004g，溶于10mL水中，作为备用对照（即没1mL中含0.4mg）展开剂配比：正戊醇、吡啶、水（1:2:1.8），分别取样品5mL、10mL、9mL混合于瓶中备用。
鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸二甲双胍
鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸二甲双胍陈文娟;陈建福;陈健旋【期刊名称】《济宁学院学报》【年(卷),期】2012(000)003【摘要】在碱性条件下盐酸二甲双胍对鲁米诺一高碘酸钾化学发光体系有强烈的增敏作用，结合流动注射技术，建立了流动注射化学发光测定盐酸二甲双胍的新方法．在优化的实验条件下，测定盐酸二甲双胍的线性范围为1．0×10-9～7．0×10-5mol／L，检出限为3．4×10-9moL／L，对于浓度为1．0×10-7mol ／L的盐酸二甲双胍连续测定11次，测定值的相对标准偏差为0．8％，以片剂为基体，用标准加入法检验方法的回收率，测得结果在99．6％-101．0％之间．该方法用于盐酸二甲双胍片剂中盐酸二甲双胍的定量分析，结果满意．%A highly sensitive chemiluminesence（CL） method for the determination of metformin hydrochloride by flow injection analysis was developed, based on that the CL intensity of Luminol - KIO4 systems was en- hanced by metformin hydrochloride. The relationship between the CL intensity and the concentration of met- formin hydrochloride was in a linear range from 1.0 ×10-9 to 7.0×10-5 mol/L. The detection limit of met- formin hydrochloride was 3.4 ×10-9 mol/L, Precision of the method was tested at the content rati on level of 1. 0 ×10-7 mol/L of metformin hydrochloride for 11 determinations, and value of RSD was 0.8%. Test for re- covery was made by standard addition method using tablets samples as matrixes, results of recovery were in the range of 99.6% - 101.0%. The proposedmethod was applied satisfactorily to the determination of metformin hydrochloride in tablets.【总页数】4页(P39-42)【作者】陈文娟;陈建福;陈健旋【作者单位】漳州城市职业学院生物与环境工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000;漳州职业技术学院食品与生物工程系,福建漳州363000【正文语种】中文【中图分类】O657.3【相关文献】1.量子点增敏碱性鲁米诺-高碘酸钾化学发光法测定五氯酚钠 [J], 周敏;吴小玲;李聪;马永钧;王爱连;母爱萍2.鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸苯乙双胍 [J], 陈文娟;陈建福;陈健旋3.鲁米诺-高碘酸钾化学发光法测定盐酸苯乙双胍 [J], 陈文娟;陈建福;陈健旋4.ZnSe量子点增敏碱性鲁米诺-高碘酸钾流动注射化学发光法测定苯甲酸 [J], 王爱连;罗晓伟;王乐政;国云;马永钧;周敏5.高碘酸钾-鲁米诺后化学发光反应的研究——流动注射-后化学发光法测定异烟肼[J], 马明阳;吕九如因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量
ＨＰＬＣ法测定盐酸二甲双胍片的含量目的：用HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量。
方法：采用Diamond C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液含0.015 mol/L高氯酸（pH3.0）；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：218 nm，以峰面积计算。
结果：在0.1~0.3 mg/ml范围内盐酸二甲双胍片的峰面积和浓度呈良好的线性关系，r=0.999 4。
结论：本法简便、快捷、灵敏，可作为盐酸二甲双胍片质量控制的有效方法。
[Abstract]Objective:To establish an HPLC method for the content determination of Metformin Hydrochloride Tables. Methods:Analytical column was Diamond C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid, the flow rate was 1.0 ml/min,UV detection was set at 218 nm and the peak area was calculated.Results:The linear range of metformin hydrochloride was 0.1~0.3 mg/ml,r=0.999 4.Conclusion:The method is simple，rapid and accurate.It can be used for the quality control of Metformin Hydrochloride Tablets.[Key words]HPLC;Metformin hydrochloride;Content determination盐酸二甲双胍是一种双胍类口服降糖药，用于非胰岛素依赖型糖尿病的治疗。
盐酸二甲双胍质量标准
北京中惠药业有限公司文件分类：体系程序性文件-质量标准文件名称：盐酸二甲双胍质量标准文件编码：SOP-QS001-00页码：第1页共5页制定人审核人批准人签名日期姓名康敬苏曼利窦豆职务质检员质检主管质量管理部经理执行日期：2013年06月01日分发范围：质量管理部、质监室、质检室、物流部文件变更记载文件编码文件名称变更历史及原因执行日期JS·ZL002-04盐酸二甲双胍质量标准根据《药品生产质量管理规范》2010版和《质量标准类文件的编制和标准》（GL·WJ009-02）进行变更。
2012年10月01日SOP-QS001-00盐酸二甲双胍质量标准增加“红外图谱的附图”：文件格式发生变化。
2013年06月01日1 目的：制定盐酸二甲双胍的质量标准，使盐酸二甲双胍的采购、验收、检验、贮存、使用有据可依，保证产品的质量。
2 范围：适用于盐酸二甲双胍的采购、验收、检验、贮存、使用各岗位。
3 职责3.1 物流部：按本标准进行采购、验收和贮存。
3.2 质监室：监督检查以下项目并对该物料行使放行审核权。
3.2.1 物流部是否按本标准进行采购、验收和贮存；3.2.2 取样员是否按抽样程序对待检物料进行取样；3.2.3 质检室是否按本标准进行检验。
3.3 质检室：按本标准进行检验，并及时出具检验报告。
4 内容4.1 物料基本信息4.1.1 物料名称: 盐酸二甲双胍；物料编码：Y010；4.1.2 质量标准的依据: 《中国药典》2010版二部；4.1.3 经批准的合格供应商：天津太平洋化学制药有限公司 ,淮南佳盟药业有限公司4.2 取样方法：取样执行《取样管理规程》（SMP-QA011-00）。
4.3检验项目、方法及可接受标准4.3.1 性状4.3.1.1本品应为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
4.3.1.2本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
4.3.1.3 熔点：照《熔点测定法标准操作规程》（SOP-TP012-00）操作，应为220～225℃。
HPLC-MS法测定盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）的含量
HPLC-MS法测定盐酸二甲双胍片中毒性杂质 N-亚硝基二甲胺（ NDMA）的含量重庆国舒制药有限公司重庆 401338重庆国泰康宁制药有限责任公司重庆 401520摘要：目的建立HPLC-MS法检测盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺的含测定方法。
方法以ACE EXCEL3 C18-AR 4.6mm×100mm，3.0μm为色谱柱，流动相为流动相A：0.1%甲酸溶液流动相B：0.1%甲酸甲醇溶液，柱温40℃，检测波长258nm，流速为0.55ml/min，采用APCI+:MRM扫描模式，定量离子对75.0→43.0 m/z。
结果：该方专属性强，NDMA在0.985ng/ml～98.5ng/ml范围内浓度与峰面积呈良好线性，线性方程为y =8×104 x–1.88×104，相关系数r为0.9999，该方法的回收率在98.58%～101.45%之间，9份溶液平均回收率为99.9%，RSD为0.9%，准确度良好。
结论：该HPLC-MS法能准确检出盐酸二甲双胍片中毒性杂质N-亚硝基二甲胺的含量。
关键词：HPLC-MS法；盐酸二甲双胍片；N-亚硝基二甲胺；含量盐酸二甲双胍片在临床上主要用于单纯饮食控制不满意的II型糖尿病病人，尤其是肥胖和伴高胰岛素血症者，用本药不但有降血糖作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果[1]。
国外报道盐酸二甲双胍片中检出NDMA杂质。
目前所知，NDMA杂质可能通过亚硝化机理生成。
即在一定条件下，胺类化合物尤其是仲胺，）或其他亚硝化试剂反应产生亚硝胺类杂质。
盐酸二甲双胍片与亚硝酸钠（NaNO2中NDMA来源分析：（1）原料引入：盐酸二甲双胍合成起始物料分别是二甲胺和双氰胺，原料药二甲胺本身均含有仲胺结果，但整个合成工艺中均未使用或添加）或其他亚硝化试剂（亚硝酰卤化物、亚硝酸酯、三氧化二氮和亚硝酸钠（NaNO2四氧化二氮），也未使用或添加酰胺类溶剂（如N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮等），所以引入亚硝胺类杂质的风险很低。
盐酸二甲双胍质量标准
北京中惠药业有限公司文件分类：体系程序性文件-质量标准文件名称：盐酸二甲双胍质量标准文件编码：SOP-QS001-00页码：第1页共5页制定人审核人批准人签名日期姓名康敬苏曼利窦豆职务质检员质检主管质量管理部经理执行日期：2013年06月01日分发范围：质量管理部、质监室、质检室、物流部文件变更记载文件编码文件名称变更历史及原因执行日期JS·ZL002-04盐酸二甲双胍质量标准根据《药品生产质量管理规范》2010版和《质量标准类文件的编制和标准》（GL·WJ009-02）进行变更。
2012年10月01日SOP-QS001-00盐酸二甲双胍质量标准增加“红外图谱的附图”：文件格式发生变化。
2013年06月01日1 目的：制定盐酸二甲双胍的质量标准，使盐酸二甲双胍的采购、验收、检验、贮存、使用有据可依，保证产品的质量。
2 范围：适用于盐酸二甲双胍的采购、验收、检验、贮存、使用各岗位。
3 职责3.1 物流部：按本标准进行采购、验收和贮存。
3.2 质监室：监督检查以下项目并对该物料行使放行审核权。
3.2.1 物流部是否按本标准进行采购、验收和贮存；3.2.2 取样员是否按抽样程序对待检物料进行取样；3.2.3 质检室是否按本标准进行检验。
3.3 质检室：按本标准进行检验，并及时出具检验报告。
4 内容4.1 物料基本信息4.1.1 物料名称: 盐酸二甲双胍；物料编码：Y010；4.1.2 质量标准的依据: 《中国药典》2010版二部；4.1.3 经批准的合格供应商：天津太平洋化学制药有限公司 ,淮南佳盟药业有限公司4.2 取样方法：取样执行《取样管理规程》（SMP-QA011-00）。
4.3检验项目、方法及可接受标准4.3.1 性状4.3.1.1本品应为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
4.3.1.2本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
4.3.1.3 熔点：照《熔点测定法标准操作规程》（SOP-TP012-00）操作，应为220～225℃。
反向高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量
反向高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片的含量重庆国舒制药有限公司重庆 401338重庆国泰康宁制药有限责任公司重庆 401520摘要目的：建立高效液相色谱法检测成品中盐酸二甲双胍的含量。
方法：采用高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片成品的含量，色谱柱为C18（4.6mm×250mm，5μm），以1.7%磷酸二氢铵缓冲液（取磷酸二氢铵17g，用水稀释至1000ml，用磷酸调节pH值至3.2）为流动相，流速为2.0ml/min，柱温：40℃，检测波长：230nm。
结果：HPLC法能准确检测盐酸二甲双胍片的含量。
盐酸二甲双胍对照溶液进样体积为10μl时，在0.126mg/ml～0.502mg/ml浓度范围内线性关系好，线性方程为y=115793.4993x+61202.9655（相关系数r=1.0）；加样回收率回收率在99.7%~99.9%范围内，平均值为99.8%（n=9），RSD为0.45%。
结论：本高效液相色谱条件的专属性强、准确度高，重复性好，可作为盐酸二甲双胍片的含量控制方法。
关键词盐酸二甲双胍片；高效液相色谱法；盐酸二甲双胍；含量盐酸二甲双胍片在临床上主要用于单纯饮食控制不满意的II型糖尿病病人，尤其是肥胖和伴高胰岛素血症者，用本药不但有降血糖作用，还可能有减轻体重和高胰岛素血症的效果。
对某些磺酰脲类疗效差的患者可奏效，如与磺酰脲类、小肠糖苷酶抑制剂或噻唑烷二酮类降糖药合用，较分别单用的效果更好。
亦可用于胰岛素治疗的患者，以减少胰岛素用量[1]。
本品属于要求一致性评价的基本药物，我公司在该品的一致性评价过程中，由于《中国药典》2015年版以及《美国药典》对盐酸二甲双胍片的含量测定方法均采用紫外-可见分光光度法，由于该方法专属性不强，测定误差大，因此笔者摸索出一套高效液相色谱法测定本品的含量，现报道如下：1仪器与试药1.1仪器岛津LC-2030 HPLC色谱仪，紫外检测器；BS124S电子天平（赛多利斯天平）。
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片含量的优化方法
高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍片含量的优化方法摘要：本文主要针对高校液相色谱法，对盐酸二甲双胍片当中的盐酸二甲双胍含量的测试方法进行探讨，并且建立相应的探讨机制。
在过程当中，使用的色谱柱是kronaxil C18，流动性是甲醇以及离子对试液在进行含量检测的过程当中，工作人员可以将测试的波长调整为235纳米，流动的速度是每分钟一毫升，这种方法可以对盐酸二甲双胍的含量进行准确的检测，并且提高整体的平均回收率，回收率达到99.96%。
为此，分析优化方法与标准的方法相比并没有非常显著的差别。
在对盐酸二甲双胍片进行含量检测的过程当中，选择高效液相色谱法具有较高的使用价值，这种方案不仅简单准确，而且还具有比较高的灵敏度。
关键词：盐酸二甲双胍片；高效液相色谱法；盐酸二甲双胍在为糖尿病患者进行临床治疗操作的过程当中，医疗工作者可以选择盐酸二甲双胍片开展治疗操作，它可以通过配合饮食控制健康锻炼的方法，提高整体的治疗效果，特别是对存在肥胖症状的糖尿病患者来说，这种药物的使用价值更高。
糖尿病是一种由遗传以及环境相互作用之下引发的常见疾病，主要以高血糖作为诊断的标准，很多患者在治疗期间会存在比较明显的身体多系统受到损害的情况此时再提供盐酸二甲双胍片进行治疗操作时能够获得比较明显的治疗效果，可以通过配合使用磺脲类口服降糖药的方法提高患者的治疗有效性。
盐酸二甲双胍片当中的盐酸二甲双胍含量对后期的治疗效果会产生比较大的影响，本次课题主要分析高效液相色谱法，在盐酸二甲双胍片的含量测定工作中产生的效果进行探讨，研究结果表明这种测试的方法简单方便，而且具有很强的专属性，结果准确。
1.仪器和试剂在开展课题研究的过程当中，研究人员使用了kromasilc18色谱柱进行一系列的检测工作。
流动性是甲醇以及离子对试液在进行含量检测的过程当中，工作人员可以将测试的波长调整为235纳米，流动的速度是每分钟一毫升，这种方法可以对盐酸二甲双胍的含量进行准确的检测，并且提高整体的平均回收率，回收率达到99.96%。
二甲双胍检测微生物限度操作规程
以下是一种可能的二甲双胍（Metformin）检测微生物限度的操作规程，这仅作为参考，具体操作规程可能根据实验室的要求和法规进行调整：
实验室准备：
清洁的试验台和操作区域。
符合微生物实验要求的培养基、培养基添加剂和培养基制备设备。
符合微生物实验要求的培养皿、培养管和其他培养容器。
非菌性试剂和耗材，如吸管、移液器等。
符合微生物实验要求的生物安全柜。
样品处理：
从适当的样品来源（例如原材料或成品）中取得二甲双胍样品。
使用无菌工具，将样品转移到无菌容器中。
如有必要，对样品进行适当的稀释，以确保微生物的可检测性。
微生物限度试验：
准备适当的培养基，并按照制造商的说明书或相关法规进行配制。
将培养基分装到无菌培养皿或培养管中。
将样品转移到含有适当培养基的培养皿或培养管中。
确保在样品处理期间保持无菌条件。
对于灭菌的样品，可以设置对照组（阳性和阴性对照）以验证培养基的有效性。
将培养皿或培养管密封，以防止外界污染，并在适当的温度下进行孵育。
按照相关法规或指南规定的孵育时间和温度进行培养。
孵育结束后，观察培养皿或培养管是否有菌落生长。
根据相关法规或指南，对菌落进行计数或鉴定，并记录结果。
分析并解释微生物限度试验的结果，并与适用的标准进行比较。
清洁和处理废弃物：
实验室操作结束后，将用过的培养皿、培养管和其他污染物进行正确的处置。
清洁和消毒实验室设备和操作区域，以防止交叉污染。
2024版中国药典方法对盐酸二甲双胍液相色谱解决方案
2024版中国药典方法对盐酸二甲双胍液相色谱解决方案盐酸二甲双胍（Metformin hydrochloride）是一种常用的口服降糖药物，主要用于治疗糖尿病。
其化学结构如下所示：盐酸二甲双胍盐酸二甲双胍常常作为原料药使用，因此对其质量的控制十分重要。
中国药典是我国制定的药品质量标准，其中包含了对盐酸二甲双胍的质量要求和检测方法。
盐酸二甲双胍的液相色谱检测方法主要包括以下几个方面。
首先是色谱柱的选择，常用的是C18柱，如Agilent Zorbax SB-C18柱，Phenomenex Luna C18柱等。
其次是流动相的选择，常用的有甲醇-水、乙腈-水等。
流动相的pH值可以用磷酸调节，一般为2.5、再次是检测波长的选择，常用的是220nm或230nm。
在进行液相色谱分析时，首先需将盐酸二甲双胍溶解于适当的溶剂中，然后通过过0.22μm的微孔滤膜滤除杂质。
将过滤后的样品注入到色谱柱中，通过梯度洗脱的方法进行分离。
流经柱的组分会根据其亲水性和极性不同，在色谱柱中保留不同的时间，最终通过检测器进行测定。
在测定过程中，需要进行系统适应性试验，了解色谱条件是否稳定，分辨率是否满足要求。
仪器校准和标准曲线的绘制也是必不可少的。
将含有不同浓度盐酸二甲双胍的标准溶液，经过色谱柱进行分离，测定其峰面积。
将峰面积和浓度之间进行线性拟合，得到标准曲线方程，从而可以通过峰面积对样品中盐酸二甲双胍的含量进行定量测定。
在进行样品测定前，还需进行样品制备步骤，包括提取和清洗。
提取步骤一般使用溶剂提取法，将样品与溶剂充分混合后，通过离心或振荡摇动进行萃取。
清洗步骤主要是去除样品中的杂质，包括胶体、大分子物质、脂质等。
常见的清洗方法有凝胶过滤、固相萃取等。
在进行方法验证时，需要考察盐酸二甲双胍的线性范围、灵敏度、稳定性、精密度和准确度等指标。
线性范围一般为0.5-10 mg/mL，灵敏度可通过LOD（限制检测限）和LOQ（定量检测限）进行评估。
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量
HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量目的建立测定盐酸二甲双胍片含量的方法。
方法采用HPLC法，C18柱（250 mm×6.0 mm，5μm）；流动相为0.01 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（内含0.015 mol/L高氯酸，pH为3.0）；检测波长为218 nm。
结果盐酸二甲双胍在8.07 ~80.74μg/mL浓度范围内线性关系良好（r=0.999 1），平均回收率为98.02%，RSD=0.76%。
结论本方法简便、快速、准确，专属性强，可作为盐酸二甲双胍片的含量测定方法。
[Abstract] Objective To establish a method to determine the content of metforminhy drochloride tablets. Methods HPLC instrument with C18 chromatographic column(250 mm×6.0 mm，5μm）was used .The mobile phase consisted of 0.01 mol/L postassium dihydrogen phosphate and 0.015 mol/L perchloric acid;The wavelength for detection was 218 nm. Results The linear range of hydrochlorothiazide was 8.07 ~80.74μg/mL(r=0.999 1). The average recovery was 98.02%.RSD was 0.76%. Conclusion The method is simple,rapid，accurate and specific.It can be used as the quantitative determination of metformin hydrochloride tablets.[Key words] HPLC;Metformin hydrochloride tablets;Content盐酸二甲双胍片是一种双胍类口服降糖药，具有提高2型糖尿病患者的血糖耐受性，降低基础和餐后血糖的作用，是饮食和运动不能控制的2型糖尿病患者的首选处方药，也是国家基本药物目录中收载的品种。
盐酸二甲双胍
盐酸二甲双胍中国药典：拼音名：Yansuan Erjiashuanggua英文名：Metformin Hydrochloride【性状】本品为白色结晶或结晶性粉末；无臭。
本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷或乙醚中不溶。
熔点本品的熔点（附录Ⅵ C）为220-225℃。
吸收系数取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5μg的溶液。
照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A），在233nm的波长处测定吸光度，吸收系数（E1%/1cm）为778-818。
【鉴别】（1）取本品约10mg，加水10ml溶解后，加10%亚硝基铁氰化钠溶液-铁氰化钾试液-10%氢氧化钠溶液（等体积混合，放置20分钟使用）10ml，3分钟内溶液呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集631图）一致。
（3）本品的水溶液显氯化物的鉴别反应（附录Ⅲ）。
【检查】有关物质取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1lml中约含0.5mg 的溶液，作为供试品溶液；另取双氰胺对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成每1ml 中约含0.1mg的溶液，作为双氰胺对照品溶液。
分别精密量取上述两种溶液各0.5ml，置同一100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）测定，用磺酸基阳离子交换键合硅胶为填充剂，以1.7%磷酸二氢铝溶液（用磷酸调节pH值至3.0）为流动相，检测波长为218nm，理论板数按双氰胺峰计算不低于5000，盐酸二甲双胍峰与双氰胺峰的分离度均应符合要求。
取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使双氰胺色谱峰的峰高约为满量程的10%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至盐酸二甲双胍保留时间的2倍。
供试品溶液的色谱图中如有与双氰胺峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得过0.02%，其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积的1/5，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液中盐酸二甲双胍峰面积。
鲁米诺—高碘酸钾化学发光法测定盐酸二甲双胍
器（ 西安 瑞迈 电子 科技 有 限公 司 ） 整 个 分 析 过程 ．
续测定 ｌ １次， 测定值的相对标准偏 差为 ０ ８ ， ．％ 以片剂为基体 ， 用标 准加入 法检 验 方法的 回收率 ， 测得 结果在 ９ ．％ 一１ １０ ９６ ０ ．％之 间． 该方法用于盐酸二 甲双胍片剂 中盐酸二 甲双胍的定量分析 ， 结果满意． 关键词 ： 学发 光 ； 化 盐酸二 甲双胍 ； 流动 注射 ； 高碘酸钾 ； 鲁米诺
甲双胍 的方 法 ， 这些 方 法 分 别 是 基 于 利 用 盐 酸 二 甲双胍 对 Ｃ （Ｉ ｕ Ｉ）一Ｈ ０ 一罗 丹 明 Ｂ体 系 、 ｕ Ｃ （Ｉ Ｉ）一Ｌｍｉ ｌ ２ ， 系 ＪＣ （Ｉ ｕ ｎ —Ｈ ０ 体 ｏ 、ｕ Ｉ）一Ｌ ｍｎｌ ｕ ｉｏ 体 系 ］Ｎ一溴代 丁亚 酰 二胺 一荧 光 素体 系 叩等 、 增 敏作用 或 抑制作 用 ． 实验 中 ， 们发 现 在碱 性 在 我 介 质 中 ， 酸 二 甲 双 胍对 Ｌｍｉ ｌ Ｉ 发 光体 盐 ｕ ｎ —ＫＯ ｏ 系 也存在 增 敏作 用 ， 此 结 合 流 动 技 术 建 立 了流 据
中图分类号 ：６７３ ０ ５ ． 文 献 标 识码 ： Ａ
盐 酸 二 甲双 胍 （ ｔ ｒ ｉ ｙ ｒｃ ｌ ｉｅ Ｍｅ ｏｍ ｎ ｈ ｄｏｈｏ ｄ ）化 ｆ ｒ 学 名称 为 １ １一二 甲基 双 胍 盐 酸 盐 ， 一 种 双 胍 ， 是
１ 实验部分
１ １ 主要原 料 和试剂 ． 盐 酸二 甲双 胍 （ 海 瑞 齐 生 物 科 技 有 限 公 上
法＿ ， ６ 已有 文 献 ｒ 道化 学 发 光 法测 定 盐 酸 二 ］ 卜∞ 报
司 ） 准储 备 液 ： 标 准确 称取 １６ ６ ｇ的盐酸 二 甲双 ．５ ２ 胍 ， 蒸 馏水 溶解 后定 容 于 １０ｍｌ 棕色 容 量 瓶 用 ０ 的 中 ， ０ １ｍ ｌＬ标准 溶 液 ， 用 时 用蒸 馏 水 逐 级 得 ． ｏ ／ 使
中国药典版二部：盐酸二甲双胍片
中国药典版二部：盐酸二甲双胍片
药品名称盐酸二甲双胍片拼音名YansuanErjiashuangguaPian英文名MetflrminHydrochlorideTablets来源(分子式)与标准本品含盐酸二甲双胍
（C4H11N5.HCl）应为标示量的95.0％～105.0％。
性状
本品为糖衣或薄膜衣片，除去包衣后显白色。
检查
溶出度取本品，照溶出度测定法（附录ⅩC第一法），以水1000ml为溶剂，转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟，取溶液10ml滤过，精密量取滤液2ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，照分光光度法（附录ⅣA），在233nm的波长处测定吸收度，按C4H11N5.HCl的吸收度系数（Ｅ1cm1%）为798计算出每片的溶出量。
限度为标示量的70％应符合规定。
其它应符合片剂项下的各项规定（附录ⅠA）。
鉴别
(1)取本品细粉适量（约相当于盐酸二甲双胍50mg），加水10ml使盐酸二甲双胍溶解，滤过，照盐酸二甲双胍项下鉴别(1)(2)项试验，显相同的反应。
(2)取含量测定项下的溶液，照分光光度法（附录ⅣA）测定，在233nm的波长处有最吸收。
含量测定
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸二甲双胍10mg），置100ml量瓶中，加水75ml，充分振摇15分钟，使盐酸二甲双胍溶解，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
照光光度法（附录ⅣA），在233nm的波长处测定吸收度，按C4H11N5.HCl的吸收系数（Ｅ1cm1%）为798计算，即得。
类别同盐酸二甲双胍剂量同盐酸二甲双胍注意同盐酸二甲双胍规格0.25g贮藏密封保存。
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盐酸二甲双胍质检方法
一：质量指标
二：质量检验方法
1、外观性状
目测颜色、颗粒形状，本品应为白色结晶或结晶性粉末，用鼻测其气味，几乎无臭。
2、溶解性（澄清度）
盐酸二甲双胍分别能溶于水合甲醇中，且水中的溶解度要远比甲醇中大。
精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加10mL水于比色管中，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在水中的澄清度合格；
同样精确称量1.000g盐酸二甲双胍，加30mL甲醇于比色管中，
边晃动边使其慢慢溶解，待完全溶解后，比色管从上往下看，如果纯清则表示其在甲醇中的澄清度合格。
3、干燥失重
精确称重1.000克样品于一称量皿中，放于105℃干燥炉中4小时至恒重，取出后放于一干燥皿中至室温，称重计算，减重不超过
0.5%为样品合格。
计算方法如下：
干燥失重=（m样—m干）÷m样
4、炽灼残渣
600度坩埚，先在高温箱中600℃加热1小时，而后取出放入干燥皿中冷却，精确称重。
准确称重1.000g样品放于坩埚中，直接放电炉加热至没有青烟（约半小时左右）凉至室温加0.5mL 硫酸，继续放电炉加热至无烟(低温加热至硫酸蒸汽，全部除尽)，而后放于600度高温炉中2小时，取出放于干燥皿中完成冷却，精密称量后，再在600-800℃炽灼至恒重，称重计算，小于0.1%为合格。
计算：A最后残渣质量÷m样品质量
5、有关杂质（双氰胺对照试验）
取二甲样品0.5g，加无水甲醇5mL（沿壁加入）于试管1中，水浴加热至完全溶解（加热取出多次，防止沸出试管），而后自然降温至35度，再加5mL乙醚搅拌冷却至20度，静止30分钟，用滤纸过滤，再用2.5mL乙醚洗试管，同样过滤合并滤液。
滤
液。
滤液置水浴上蒸发至干，（可先用电炉蒸干一部分水），残渣加水0.5mL溶解，作为备用样品。
双氰胺对照试样，取双氰胺对照品0.004g，溶于10mL水中，作为备用对照（即没1mL中含0.4mg）
展开剂配比：正戊醇、吡啶、水（1:2:1.8），分别取样品5mL、10mL、9mL混合于瓶中备用。
准备一微晶纤维素点版，用针管取10uL双氰胺对照品溶液一点一点慢慢点于板上同一点，每点一点都要用吹风机吹干，点的直径约在3—4mm左右，直至点完。
同样用样品10uL溶液点于板上。
把准备好的展开剂倒入层析缸一边，放入点好的纤维素点板（点向下置于展开剂中），等到展开剂向上升至离点板上边1cm左右取出晾干，用猴头喷雾器装显色液喷于纤维素点板上，样品斑点比对照品斑点颜色要浅（不得更深）。
显色剂配制：10%亚硝基铁氰化钠溶液、10%铁氰化钾溶液、10%氢氧化钠溶液，三试剂等体积混合放置20分钟即得；
6、重金属
（1）准备比色管三支，并标1、2、3做标记；取2mL标准铅溶液，放于试管1中；取二甲双胍样品1个溶于10mL水中于
试管2中；取1mL硫代乙酰胺和5mL混合物（氢氧化钠、
水、甘油混合物15:5:20）于试管3中，在沸腾的水浴中加
热20秒取出备用；分别在试管1和试管2中加入醋酸盐缓
冲液各2mL，然后再分别加入试管3溶液各2mL，分别再
用水稀释至50mL，摇匀，放置一会从上往下看样品2试管
应比标准1试管颜色浅为合格。
（2）取纳氏25mL比色管两支，甲管中加入标准铅溶液2mL与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2mL，加水稀释至25mL；乙试管中
加入供试品1.0g，加水溶解并稀释成25mL，再在甲乙两管
中分别加入硫代乙酰胺试液各2mL，摇匀，放置2分钟，
同置于白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比
较，不得更深。
7、含量
取三个锥形瓶干燥，做标记1、2、空白；分别精确称取二甲双
胍样品0.07g于1、2瓶中，1、2、空白三瓶中各加入10mL冰
醋酸，再各加5mL醋酸汞5%溶液，再于电加热板上加热溶解
（不能使其在加热时沸腾），直至完全溶解；1、2、空白，各加
两滴萘酚苯甲醇指示剂，后用高氯酸标准溶液滴定，都至黄绿
色，分别记录高氯酸用量。
含量=高氯酸mol/L×0.08282×滴定数mL÷样品重量mg×100% 含量%=（V样-V空白）×C×T÷m
V样----样品消耗滴定液量mL
V空白—空白消耗滴定液量mL
C-------滴定液浓度mol/L
T-------滴定度8.282mg，计算时换为g，即8.282/1000
m-------样品重量g
干燥品含量%=含量%÷（1-水分%）注：水分%=干燥失重。