实验八计数法绘制动物细胞的生长曲线
细胞生长曲线 统计方法
细胞生长曲线统计方法细胞生长曲线是研究细胞生长特征的重要工具，它可以描述细胞在不同环境条件下的生长模式和速率。
统计方法在分析细胞生长曲线时起着至关重要的作用，它们能够帮助我们从大量的实验数据中提取有用的信息和结论。
本文将从简单到复杂，由浅入深地介绍一些常用的统计方法，以便读者全面、深入地了解细胞生长曲线的分析过程。
1. 平均值与标准差分析细胞生长曲线实验中，我们通常会测量一系列时间点上的细胞数量，并计算平均值和标准差。
平均值能够反映细胞数量的整体趋势，而标准差则表示细胞数量的离散程度。
通过对不同条件下的平均值和标准差进行比较，可以初步了解细胞生长的差异性。
2. 生长速率与斜率分析细胞生长曲线通常呈现出不同的生长阶段，包括指数生长期、稳态生长期和平台期。
为了定量评估生长速率，我们可以计算细胞数量关于时间的斜率。
斜率越大，说明细胞生长速率越快；斜率越小，说明细胞生长速率越慢。
通过比较不同条件下的斜率，我们可以判断细胞对环境的适应能力和生长潜力。
3. 峰值分析细胞生长曲线的峰值表示细胞生长的最大值，它对于了解细胞生长的极限和饱和程度非常重要。
通过对不同条件下的峰值进行比较，我们可以评估细胞所处环境的适宜程度，并确定最佳的生长条件。
4. 方差分析与T检验当我们需要比较三个及以上条件下的细胞生长曲线时，可以使用方差分析（ANOVA）来评估差异的显著性。
方差分析能够判断不同条件下的细胞生长是否存在显著差异，并找出主要的影响因素。
而当我们只需要比较两个条件时，可以使用T检验来判断差异是否显著。
5. 线性回归分析在某些情况下，我们希望找到适合细胞生长曲线的数学模型，以便预测和优化细胞生长的过程。
线性回归分析可以帮助我们建立细胞生长曲线与其他因素之间的数学关系，从而实现对细胞生长的精准控制。
总结回顾：细胞生长曲线的分析是研究细胞生长特征的重要方法之一。
在本文中，我们从简单到复杂地介绍了一些常用的统计方法，并通过这些方法对细胞生长曲线进行全面评估。
蛋白酶活力测定方法-大肠杆菌生长曲线的测定
实验材料
• 1.实验器材 电热恒温水浴槽；分析天平；容量瓶；移液管； 721分光光度计
• 2.实验试剂 (1) 缓冲液：pH 7.5-8.0的 50 mM Tris-Cl缓冲液。 (2) 2%酪蛋白溶液 (3) 三氯醋酸溶液（ TCA ）：10％ TCA (4) 酪氨酸标准溶液：1000μg/mL；100μg/mL (5) 碱性蛋白酶溶液：发酵液上清夜
➢将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样 品的吸光值。
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养 基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电比浊 测定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未 接种的LB培养基进行稀释，使其吸光值不超 过1。
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润 洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只 能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
➢取出档光体，按100%T/OA键调100%透射 比。
2.样品测定
➢将参比溶液以及被测溶液倒入比色皿中。
➢打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位。
➢将参比溶液推入光路，按100%T/OA键调满 度。
➢按 MODE ， 将 测 试 方 式 调 至 吸 光 度 方 式 （A）。此时,显示器显示“0.000”。
• 福林酚反应：福林试剂在碱性条件下极其不稳定， 容易定量地被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的 混合物，而呈现出不同深浅的蓝色。
• 利用比色法即可测定酪氨酸的生成量，用碱性蛋白 酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表 示酶活力。
2. 紫外分光光度计法
• 蛋白质、酪氨酸等氨基酸在200～320nm范围内 有光吸收，最大吸收波长在280nm处，故选此波 长作为测定波长。
常见实验大鼠和小鼠的生长发育体征及生长曲线
常见实验大鼠和小鼠的生长发育体征及生长曲线
常见实验大鼠和小鼠的生长发育体征及生长曲线
1、按体型和特征判断动物日龄
0～1 （天）皮肤赤红，耳朵粘连，双眼不张，全身无毛，头大，四肢和尾极短2～3（天）皮肤粉红，耳壳略张开
4～5（天）脐带疤痕脱落，能翻身，被毛长出
6～7 （天）耳耸立，能爬行
8～9（天）全身除耳部外均有短被毛
10～11（天）全身被毛，耳壳变薄
12～14（天）开眼
14～18 （天）能跳跃，可自行采食
45～55（天）雌性大鼠阴门开启
50～60（天）雄性大鼠睾丸下降至阴囊
2、体重周龄生长曲线
2、体重周龄生长曲线
①ICR生长曲线
②KM 远交群小鼠生长曲线
③斯莱克SD 生长曲线
④BALB/cA nu/nu 生长曲线
⑤Balb/cAnN 近交系小鼠生长曲线
⑥Wistar 近交系大鼠生长曲线
⑦C57BL/6 mice growth curve。
实验八细胞融合实验
培养基
基础培养基
提供细胞生长的基本营养物质，如氨 基酸、维生素和微量元素。
选择培养基
针对特定细胞或实验需求，添加选择 性的生长因子或抑制物。
其他辅助材料
01
02
03
细胞刮刀
用于刮取细胞，促进细胞 融合。
离心管和吸管
用于细胞培养和融合过程 中的离心和吸取操作。
显微镜和照相设备
观察细胞融合过程和结果 ，记录实验数据。
掌握细胞融合实验的原理
细胞融合实验基于细胞膜的融合机制 ，通过特定的诱导条件使两个或多个 细胞融合成一个细胞。
诱导细胞融合的方法包括化学诱导法 和生物诱导法，其中化学诱导法常用 聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
了解细胞融合实验的应用前景
细胞融合实验在生物工程领域有广泛的应用前景，例如制备单克隆抗体、基因治疗 和组织工程等。
详细描述：通过绘制融合细胞生长曲线，能够直观地了解 融合细胞生长特性和规律，为优化实验条件提供依据。
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总结词：动态监测
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详细描述：生长曲线的绘制可以动态监测融合细胞的生长 过程，及时发现并解决潜在问题。
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总结词：比较分析
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03
CATALOGUE
实验步骤
细胞准备
细胞培养
选择适宜的细胞系，在适 宜的培养基中进行培养， 保持细胞生长状态良好。
细胞传代
当细胞密度达到一定程度 后，进行传代，使细胞继 续生长。
细胞计数
对传代后的细胞进行计数 ，确定细胞数量以满足实 验需求。
细胞融合
诱导剂处理
融合细胞筛选
使用特定的诱导剂处理细胞，以促进 细胞融合。
细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇
细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇An experimental report on the drawing of cell growth c urve编订：JinTai College细胞生长曲线的绘制实验报告范文2篇小泰温馨提示：实验报告是把实验的目的、方法、过程、结果等记录下来，经过整理，写成的书面汇报。
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本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】1、篇章1：细胞生长曲线的测定文档2、篇章2：MTT法绘制生长曲线文档篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的学习了解微生物生长量测定的方法学习了解细菌生长曲线的绘制方法学习掌握血细胞计数板的使用方法（一）微生物生长量的测定计数法重量法生理指标法1、显微镜直接计数法（1）利用血细胞计数板计数（二）细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growth curve）篇章1:细胞生长曲线的测定文档一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。
2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。
为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。
3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。
生长曲线和细胞生长周期的测定
生长曲线和细胞生长周期的测定MTT比色法绘制生长曲线生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。
原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。
活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。
步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。
终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。
每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。
4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
流式细胞仪测细胞生长周期：流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。
流式细胞仪细胞周期检测流程1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。
2，遇冷PBS 清洗两次3，加入胰酶（Tripsin），静止2-3分钟（消化时间不要过长，以免损伤细胞），加入2-3mlDMEM慢慢吹打细胞成单细胞悬液。
4，1000rpm 离心3min5，去上清，加入遇冷PBS 1000rpm 离心3min6，去上清，加入0.5ml PBS（预冷）悬浮细胞7，加入1.5ml无水乙醇在漩涡器上涡旋（逐滴加入）8，-20℃固定过夜（overnight）9，拿出已固定细胞，1000rpm 离心3min 去上清10，加入预冷PBS 100rpm 离心3mim11，去上清加入500ul---1000ul 预冷PBS 悬浮细胞12，加入5-10ul RNA酶37℃水浴消化30min13，过400目细胞筛注入EP管,封口膜封口。
生长曲线
微生物污染的检测 1，真菌的污染 真菌的种类很多，污染培养细胞的多为烟曲菌、黑曲菌、毛霉菌、孢子菌 白念、酵母等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物，一般肉 眼可见，较易被发现，短期内培养液多不混浊，倒置显微镜下可见细胞之间有 纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝，并悬浮飘荡在培养液中。很多菌丝 在高倍镜下可见到有链状排列的菌株；念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞 周边和细胞之间生长。有时通过显微镜观察可能发现瓶底外面生长的菌丝，不 要错当培养瓶内的污染。瓶外的污染物，需及时用酒精棉球擦洗清除，以防其 通过瓶口传入瓶内。
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简单地说：MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT主要有两个用途 1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性 的 测定； 2．细胞增殖及细胞活性测定。 MTT检测原理为: 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝 紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基 亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸 收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得 的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如 果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
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12日，三瓶细胞均铺满瓶底，冻了两瓶，剩下一瓶一传三，预计周五换液。 14日换液，细胞生长约瓶底70%，预计周日冻存两支，再一传三。 16日早晨去见细胞片状浮起，弃掉旧培养液，pbs清洗后见瓶底仍有少量细 胞贴附，遂将三瓶消化转移至新瓶(A)继续培养。 分析原因：1，周五细胞密度已经较大，应传代 2，细胞生长特别迅速（很多分裂相），加上密度大，周日情况 应是细胞密度抑制及代谢酸中毒。 17日上午见(A)仍有较多单个细胞漂浮，背景很脏（小黑点）,反复冲洗，换液， 见少量细胞贴附瓶底。 17日下午复苏一支细胞(B)。 18日见 (B)细胞部分贴附，换液，细胞较少； (A)个别细胞漂浮，背景 较脏。 19日见（B）细胞仍较少; (A)细胞变圆，少量漂浮，换液 20日见(B)细胞略有增多，见分裂相细胞。背景稍脏，预计明日换液 （A)细 胞仍有悬浮细胞，背景脏，拟丢弃。 分析原因：（A）虽然瓶壁有少量贴壁细胞，但状态应该也不好，加上消化， 所以转移至新瓶生长不好。
生长发育的计算与生长曲线的绘制
实习二 生长发育的计算与生长曲线的绘制一、实习目的1．掌握几种生长发育的计算方法 2．熟悉几种生长曲线的绘制方法二、内容与方法生长发育计算的理论依据有二：一是从动态的观点来研究家畜整体（或局部）体重（或体积）的增长，二是研究比较各种组织（或器官）随着整体的增长而发生比例上的变化，和它们彼此增长的相对比例关系。
从方法上讲，前者可计算绝对生长、相对生长、生长系数等，后者则常用相对生长系数和异速生长的计算来说明。
（一）绝对生长指在一定时间内的增长量，用以说明某个时期家畜生长发育的绝对速度，通常用日增重来表示。
计算公式如下：101t t W W G --=（克/日）式中：W 0：代表始重，即前一次测定的重量或体尺；W 1：代表末重，即后一次测定的重量或体尺；t 0：为前一次测定的时间（月龄或日龄）；t 1：为后一次测定的时间（月龄或日龄）。
例如，太原花猪初生重平均为0.95千克，45日龄断奶重平均为9.15千克，则由初生到断奶的绝对生长（日增重）计算为：)/(2.18204595.015.9日克=--=G（二）相对生长是利用一定时期内的增长量与原来体重相比，用以表示家畜的生长强度。
其公式为：%)100(01⨯=W W C 例如，太原花猪在哺乳期间的相对生长，按公式计算应为：%2.863%10095.095.015.9=⨯-=R（三）生长系数生长系数是利用末重与始重（一般习惯以初生时的重量为基准）直接相比，单位可用百分数或直接用倍数表示。
它也是用以说明生长强度的，计算公式如下：%10001⨯-=W W W R 例如，太原花猪哺乳期间的生长系数，按公式计算应为：%)2.963(63.995.615.9或==C 由计算可见，用百分数表示时，由于末重与始重相差较大，因而数值也较大。
为此，也常用生长加倍次数（n ）来表示其生长强度，其公式为：n w w 201⨯=计算时，将两边求对数经整理得：2lg lg lg 01w w n -=例如，太原花猪哺乳期间的生长加倍次数可计算如下：27.32lg 95.0lg 15.9lg =-=n以上有关生长发育的计算方法都是从动态的观点来研究家畜的整体或局部的生长速度或生长强度的。
记录生长曲线方法
记录生长曲线方法
记录生长曲线的方法有很多，以下是一些常见的方法：
1. 定期测量：按照固定的时间间隔，如每周或每月，对生物体进行测量，例如身高、体重、体长等。
2. 选择标准测量工具：使用准确、可靠的测量工具，如尺子、体重秤等，以确保测量结果的准确性。
3. 记录数据：将每次测量的数据记录下来，可以使用电子表格或纸质图表，以便直观地观察生长趋势。
4. 绘制曲线：将测量数据绘制成曲线图，可以更清晰地看出生长的趋势和变化。
5. 标记关键事件：在生长曲线上标记一些关键事件，如生病、饮食改变等，以便分析这些事件对生长的影响。
6. 比较和分析：将不同个体或不同时间段的生长曲线进行比较和分析，观察差异和变化。
7. 长期坚持：为了得到更有意义的结果，最好进行长期的记录，这样可以更全面地了解生长过程。
8. 寻求专业帮助：如果对记录生长曲线的方法或结果有疑问，可以咨询医生、营养师或相关专业人士。
通过记录生长曲线，你可以及时发现问题，采取适当的措施来促进生物体的健康成长。
细胞生长曲线 统计方法
细胞生长曲线统计方法细胞生长曲线统计方法：细胞生长曲线是衡量细胞生长和繁殖的重要工具。
通过测量细胞数量随时间的变化，可以获得细胞生长曲线。
在生物学研究中，细胞生长曲线的分析对理解细胞生长的动力学过程至关重要。
统计方法在分析细胞生长曲线方面发挥着重要的作用，以下是一些常见的统计方法：1. 最小二乘法：最小二乘法是一种常用的回归分析方法，可以用来拟合细胞生长曲线。
通过将观测值和模型之间的误差最小化，最小二乘法可以找到最佳拟合曲线。
这个方法可以帮助我们确定细胞生长速率、延续时间和最大细胞密度等参数。
2. 斯皮尔曼相关系数：斯皮尔曼相关系数是一种非参数统计方法，用于衡量细胞生长曲线中变量之间的相关性。
通过计算排名变量之间的相关性，斯皮尔曼相关系数可以解决数据不满足正态分布的情况。
这个方法可以帮助我们了解细胞生长曲线中不同因素之间的相关性，例如细胞密度和培养时间之间的关系。
3. 方差分析：方差分析是一种用于比较多个组之间差异的统计方法。
在细胞生长曲线的研究中，我们可能对不同处理条件下的细胞生长进行比较，例如不同浓度的药物对细胞生长的影响。
通过方差分析，我们可以确定是否存在显著差异，并找到影响细胞生长的因素。
4. 生长动力学模型：生长动力学模型是一种定量描述细胞生长曲线的数学模型。
常见的生长动力学模型包括Gompertz模型、Logistic模型和Verhulst模型等。
这些模型可以根据实验数据进行参数估计，进而预测未来的细胞生长趋势。
细胞生长曲线的统计方法可以帮助我们分析和解释细胞生长的规律和特征。
通过应用适当的统计方法，我们可以获得准确的结果，并从中得出有关细胞生长的有价值的结论。
微生物生长曲线的绘制方法
微生物生长曲线的绘制方法
微生物生长曲线是描述微生物在适宜环境条件下生长过程的一条曲线，常用的绘制方法有以下几种：
1. 对数增殖曲线方法：将微生物的数量取对数后，与时间的关系进行绘制。
通常微生物的生长过程分为潜伏期、指数期和平稳期，对数增殖曲线能较好地反映这种生长过程。
2. 直接绘制方法：在适宜环境条件下，每隔一段时间取样，直接计数或估算微生物的数量，然后以时间为横坐标，微生物数量为纵坐标进行绘制。
此方法适用于较短周期的生长曲线研究。
3. 饼图法：将微生物的生长过程分为几个不同阶段，用饼图表示每个阶段中微生物数量的比例。
通过饼图，可以直观地展示微生物数量在不同阶段的变化情况。
4. 间断绘制方法：在适宜生长条件下，每隔一段时间（如1小时）将微生物数量及相应的时间点记录下来，然后连线表示微生物数量的变化。
通过有选择地取样，间断绘制方法能够更清楚地展示微生物数量的变化规律。
以上是常用的几种微生物生长曲线绘制方法，具体选择何种方法主要根据研究目的和实验条件来决定。
实验八细菌生长曲线的测定及
实验⼋细菌⽣长曲线的测定及实验⼋细菌⽣长曲线的测定及⾎球计数板测定微⽣物⽣长⼀、细菌⽣长曲线的测定及★细菌的⽣长曲线就是把⼀定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进⾏培养，在此过程中，其细胞数⽬将随培养时间的延续⽽发⽣规律性的变化，如以细胞数⽬的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作⼀条曲线，即为细菌的⽣长曲线，它反映了细菌的群体⽣长规律。
★⼤多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，⼀定时期的⼤肠杆菌细胞每20min分裂⼀次。
★依据其⽣长速率的不同，可把细菌的⽣长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。
★微⽣物OD值是反映菌体⽣长状态的⼀个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表⽰被检测物吸收掉的光密度。
通常400～700nm 都是微⽣物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。
★本实验测定细菌⽣长曲线的⽅法是，将待测菌种接⼊⼀只⼤试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通⽓状态下，定时取出此试管，在600纳⽶波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在⼀定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。
因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌⽣长繁殖的进程。
将所测得的⼀组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的⽣长曲线。
☆实验操作1、菌种培养：取⼤肠杆菌斜⾯菌种1⽀，以⽆菌操作挑取1环菌苔，接⼊⾁膏蛋⽩胨培养液（LB）中，静⽌培养12--14h，备⽤。
2、制备LB培养基100ml置于200ml三⾓瓶内，备⽤。
3、标记：取11⽀⽆菌⼤试管，⽤记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
4、接种：分别⽤5ml⽆菌吸管吸取5ml⼤肠杆菌培养液(培养12~14h)转⼊盛有100ml LB液的三⾓瓶内，混合均匀后分别取5ml 混合液放⼊上述标记的11⽀⽆菌⼤试管中。
5、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r/min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，⽴即放冰箱中贮存，最后⼀同⽐浊测定其光密度值。
实验项目二住骨髓间充质干细胞的倍增时间与生长曲线的测定
PMSCs生长曲线和倍增时间的测定【1】来自猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化：取生长状况良好的P1、P3、P5、P9代细胞，用0.25%胰酶消化液，在37℃消化1-3min，制成单细胞悬液，然后以5x104个/ml密度接种到30个直径为35mm培养皿中，随机分成10组，每组3皿，每天检测一组中每皿的细胞总数，取3个皿的均值，如此至第10组结束，细胞技术如下(2004,司徒镇强)即一天消化3个组，共消化10天。
P1，P3,P5，P9均如此，每代30个皿，共计120个皿。
细胞群体倍增时间（PDT）=(t-t0)lg2/(lgN t-lgN0) t0培养起始时间，t,培养终止时间；N0培养初始细胞数，N t培养终止细胞数。
【2】增强型绿色荧光蛋白转染猪骨髓间充质干细胞特性观察用0.25%胰酶将转染后的细胞克隆消化为单个细胞，用PBS洗2遍，1x105个细胞加入75μl破膜剂，振荡10s,加入PI染料700μl,室温避光30min,上机检测；选同期培养的为转染细胞为对照组，比较EGFP转染对细胞增殖的影响，分别计算出静止期G0/G1,增殖期S%,和G2/M【3】两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT （2mg/ml）20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492），以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线。
【4】人骨髓间充质干细胞体外培养及其生物学特性研究取不同代数细胞，调整细胞浓度为2x104/ml后，接种于96孔培养板，置37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱培养后，用胰酶-EDTA进行消化，用台盼蓝拒染法计数活细胞，每天取12复孔，共7天；根据计数结果绘制细胞生长曲线。
《动物细胞工程学》实验课教学大纲
《动物细胞工程学》实验课程教学大纲实验名称：动物细胞工程学实验课程编码：0141014学时：32学分：2适用专业：生物工程执笔人：唐业刚审订人：郭云贵一、课程的性质与任务动物细胞培养技术是动物胚胎工程技术的基础和核心技术，开设该门实验课的最大任务和任务就是让学生掌握动物细胞培养技术的原理和基本方法，锻炼学生的专业素养。
应此，在教学过程中应着重培养和锻炼学生自己寻找感兴趣的小课题并能运用理论和实验操作知识独立进行实验设计、实验可行性等这种提出问题、分析问题和解决问题的能力。
二、教学目标与基本要求：了解动物细胞培养实验室的设计和基本设备。
理解动物细胞培养的实验原理和常用基本仪器设备的作用。
掌握常见大型仪器的使用方法和原代细胞培养、传代培养的流程和方法。
三、实验项目与类型：四、实验教学内容及学时分配：实验一、动物细胞一般培养过程教学录像观摩………………………………………（4学时）1.目的要求：了解动物细胞培养实验室组成、仪器及细胞培养的一般过程。
2.方法原理：通过观看教学录像，以及参观实验室，加深对动物细胞培养条件的理解；通过学习教学录像内容，认识到无菌操作技术在整个细胞培养实验中的重要作用。
3.掌握要点：熟悉动物细胞培养的总体流程；掌握实验所需的关键仪器设备的使用方法；认识到动物细胞培养比其他实验要求更高、更严。
4.实验内容：讲述动物细胞培养的发展历史。
观看录像，利用PPT多媒体教学手段观看细胞培养教学录像。
参观实验室的仪器设备及实验室设计，讲解仪器使用方法及实验室设计思路。
简要介绍该课程整体实验项目，课程考核方式及成绩评定办法等事宜说明。
实验二、实验室组成设计及实验容器具的洗涤、包扎和灭菌………………………（4学时）1.目的要求：掌握清洁液的配置方法；掌握动物细胞培养所用器皿的种类、作用及清洗灭菌方法；掌握滤器的使用方法2.方法原理：体外培养的动物细胞对微量有害物质十分敏感，了获得较好培养效果，对培养容器具的无害化处理是十分重要的。
细胞生长曲线的测定安全操作及保养规程
细胞生长曲线的测定安全操作及保养规程1. 简介细胞生长曲线的测定是一种常用的实验方法，用于评估和研究细胞的生长状态和增长速度。
本文档旨在提供细胞生长曲线测定的安全操作指南和保养规程，以确保实验的准确性和实验人员的安全。
2. 实验材料•细胞培养物•无菌培养基•无菌培养器皿（培养盘、培养瓶等）•细胞培养培养箱•移液器和吸头•离心机•显微镜•细胞计数仪3. 实验操作3.1. 确保实验环境的清洁在进行细胞生长曲线测定之前，应确保实验环境的清洁和消毒，以防止细胞污染。
实验操作台、培养箱、显微镜等设备应定期清洁，使用无菌工具进行操作。
3.2. 细胞培养和传代在开始测定细胞生长曲线之前，需根据细胞类型的要求进行细胞培养和传代。
培养基的配制应按照相关实验室的标准操作程序进行，确保培养基的无菌和适宜。
3.3. 细胞接种和处理•使用无菌技术将细胞接种到培养器皿中，如培养盘或培养瓶。
根据细胞类型的不同，接种密度也会有所差异，应根据相关文献或实验室标准操作程序指导进行操作。
•保持培养器皿的密闭性，避免细菌和真菌的污染。
•维持适宜的温度和湿度，在培养箱中保持恒定的培养条件。
•定期进行细胞观察和培养液的更换。
3.4. 细胞计数和细胞生长曲线测定•在指定时间点，使用无菌技术从培养器皿中取出一定数量的细胞。
•使用细胞计数仪准确计数细胞的数量。
遵循仪器操作规程，避免仪器污染和误差。
•根据已知的细胞密度和培养时间计算细胞生长速率，并绘制细胞生长曲线。
3.5. 数据记录和分析实验过程中需要记录相关的实验参数和数据，如培养时间、细胞密度、培养条件等。
使用适当的试验记录表格或电子文档进行记录，并妥善保存。
4. 实验安全注意事项•操作前应熟悉实验材料和设备的使用方法，避免误操作和事故发生。
•实验过程中应佩戴实验室标准的防护用品，包括实验手套、眼镜和实验服等。
•使用无菌技术和实验室标准的消毒操作规程，以防止细胞污染和交叉感染。
•注意实验室卫生，定期清洁和消毒实验设备和工作台面，保持实验环境的清洁和无菌。
实验八 细菌生长曲线的测定及【内容充实】
实验八细菌生长曲线的测定及血球计数板测定微生物生长一、细菌生长曲线的测定及★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。
★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。
★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。
通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。
★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。
因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。
将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。
☆实验操作1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。
2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。
3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
5、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r/min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。
微生物生长曲线测定
实验七 测定细菌生长曲线一、实验目的1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；3. 反复练习无菌操作技术；4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法二、 实验原理将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。
图一 微生物生长曲线示意图单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。
不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G 表示。
其计算公式为：2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。
三、 实验仪器、材料和用具1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；4.实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块2.分为三个小组：第（1）小组取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃200rpm取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃200rpm第（2）小组取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃110rpm取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm第（3）小组取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，30 ℃200rpm取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基，37 ℃110rpm每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.3.测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。
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典型的细胞生长曲线
生长曲线常用于 测定药物等外来因素 对细胞生长的影响。 一般在对数生长期的 1/3-1/2处加药。细胞 计数的时间和次数则 依实验目的而定。
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血细胞计数板的使用
使用区域为白1~白4时： 细胞个数（个/ml）=白1~白4四格细胞总数÷4×104×稀释倍数
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4. 实验步骤
• 取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后 计数。如是非贴壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养 基然后制成细胞悬液计数。
• 根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104/ml。作传代培养接种细胞，共接 种21瓶细胞。
• 24h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进 行计数，计算平均值，连续计数7d。
• 根据细胞计数结果，以单位细胞数（细胞数/ml）为纵坐标，以时间为横 坐标绘制生长曲线。
• 分别作两组实验，即10%血清和１%血清培养的细胞的生长曲线，并比较 结果．
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大连理工大学 5.注意事项
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• 为减少消化时造成的误差，可以直接定量 加入胰蛋白酶，充分消化后直接计数。
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大连理工大学 6.思考题
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• 细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结 果之间有什么关系?
• 为了尽量减少误差，应在哪些环节上多加 注意。
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3.实验材料、用品
• 实验材料：Hela细胞 • 用品：
①仪器及用具 C02培养箱，倒置显微镜，血球计数板，培养瓶，试管，吸管， 移液管，废液缸，培养细胞，专用盖玻片。 ②试剂 培养基（RPMI 1640），小牛血清，Hanks液，0.25%胰蛋白酶 溶液，0.5%台酚蓝染液。
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实验八 计数法绘制动物 细胞的生长曲线
指导教师：唐颖
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大连理工大学 1.实验目的
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• 掌握血细胞计数板的使用
• 掌握计数法测定细胞的生长曲线的一般方 法。
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大连理工大学 2. 实验原理