血清总胆固醇测定法

血清总胆固醇测定法

1.实验原理

胆固醇酯被胆固醇酯酶水解酶(CEH)水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。醌亚胺的最大吸光度在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。反应式如下：

CEH

胆固醇酯+ H2O 胆固醇＋脂肪酸

COD

胆固醇＋O2Δ4-胆甾烯酮＋H2O2

POD

2H2O2+ 4-AAP +酚苯醌亚胺(显色) + 4H2O 2. 标本：

2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA抗凝血浆。

3. 标本存放：血清稳定性：20～25℃保存可稳定1

周；4～8℃保存可稳定1周；-20℃保存可稳定3个月。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂欧泰克总胆固醇试剂盒（货号：112 1307170 1 试剂8×70ml）

6.1.1 试剂组成

Tris缓冲液pH7.3 50mmol/L

酚20mmol/L

4-氨基安替比林 1.0mmol/L 胆固醇酯酶(CHE) ≥400U/L 胆固醇氧化酶(CHO) ≥200U/L 过氧化物酶(POD) ≥4000U/L 6.1.2 试剂准备试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂

6.2 校准品：使用罗氏复合校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

7. 仪器：日立7060生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以罗氏复合校准品总胆固醇校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠检测结果。

12. 参考值范围（mmol/L）

合适范围： 5.2mmol/L 高度危险临界值： 5.2～6.2mmol/L

高度危险范围：>6.2mmol/L

13. 临床意义：胆固醇由体细胞合成和来自对食物的吸收[1]，是细胞膜的组分和类固醇激素、胆汁酸的前体。血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL参与将胆固醇运送至外周细胞，而HDL负责从细胞中吸收胆固醇。四种形式的脂蛋白与冠状动脉粥样硬化有着明确的关系。低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）作用于动脉内膜形成动脉粥样硬化斑块，与冠心病(CHD)以及相关的死亡率有着非常密切的关系。即使总胆固醇在正常范围内，LDL-C浓度的升高也预示了高度危险。HDL-C 具有抵御斑块形成的作用，它与冠心病的发生呈负相关。事实上，低HDL-C值是独立的危险因子。进行个体总胆固醇的检测只是起过筛作用，如果要对危险作较好的评估，必须另外进行HDL-C和LDL-C检测。

近年来，通过控制饮食、改变生活方式的治疗、和/或使用各种药物治疗(特别他汀类药物[HMG CoA还原酶抑制剂])临床试验，说明了降低总胆固醇和LDL-C水平可极大地减少CHD的危险。

14. 线性范围：0.08～19.4mmol/L。

15. 超出范围结果处理：本法对胆固醇的检测范围为0.08～19.4mmol/L。当样品测定值超过上限时，将样品用9g/L氯化钠溶液1:4稀释，重新测定，结果乘以5。

16. 病危报警值的处理：高度危险范围>6.2mmol/L。