2.2.2 动物细胞工程(第二课时)
2.2 动物细胞工程(第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体)
2.2 动物细胞工程第2课时动物细胞融合技术与单克隆抗体一、单选题1.下图为某生物技术的操作过程,有关叙述错误的是()A. 甲细胞可来自经免疫处理小鼠的脾脏中B. ①中可加入乙二醇以促进细胞融合过程C. ④可置于CO2培养箱中进行培养D. 该技术可用于研发相应的诊断试剂盒2.下图为某生物技术的操作过程,有关叙述错误..的是()A. 甲细胞为经免疫处理小鼠的脾细胞B. ①中可加入甘露醇以促进细胞融合过程C. ④应置于CO2培养箱中以提高细胞克隆形成率D. 该技术可研究相应抗原蛋白的结构、细胞学分布及其功能3.下列有关生物工程的说法正确的是()A. 单克隆抗体制备中使用的细胞是小鼠骨髓瘤细胞和卵细胞。
融合后得到的杂种细胞的特点是既能够无限分裂,又能产生专一性抗体。
B. 基因工程所用的工具有限制性内切酶、DNA连接酶、运载体。
C. 动物细胞培养时,如果缺少氨基酸供应,细胞一般会停留在细胞周期的分裂期。
D. 胚胎干细胞在功能上的最大特点是具有专能性,能分化为成年动物体内任何一种组织细胞4.下列有关制备单克隆抗体的叙述中,错误的是()A. 采用的细胞工程技术包括细胞培养和细胞融合B. 两次筛选的目的分别是筛选出杂交瘤细胞和筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞C. 要先用胃蛋白酶处理得到单个细胞,然后用诱导剂处理得到杂交瘤细胞D. 运用的生物学原理包括细胞分裂和细胞膜具有一定的流动性5.下列关于细胞工程的叙述,正确的是()A. 培养人的浆细胞能产生单克隆抗体B. 将动物组织分散成单个细胞需用胃蛋白酶处理C. 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理不同D. 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞6.制备单克隆抗体所采用的细胞工程技术包括()①细胞培养②细胞融合③胚胎移植④细胞核移植A. ①②B. ①③C. ②③D. ③④7.某同学在学习“细胞工程”时,列表比较了动植物细胞工程的有关内容,你认为有几处是不正确的()植物细胞工程动物细胞工程技术手段植物组织培养,植物体细胞杂交动物细胞培养融合,单克隆抗体的制备特殊处理机械法去除细胞壁胰蛋白酶处理,制成细胞悬液融合方法物理方法、化学方法物理方法、化学方法、生物方法典型应用人工种子、杂种植株单克隆抗体的制备培养液区别生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化动物血清不可缺少A. 1B. 2C. 3D. 48.下列关于动物细胞工程的叙述,正确的是()A. 生物导弹是用癌细胞的单克隆抗体杀死癌细胞B. 乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养C. 细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行D. 灭活病毒可使细胞相互凝聚并让细胞膜上的分子重新排布9.请据如图判断,下列说法不正确的是()A. 若a、b分别对应骨髓瘤细胞和B淋巴细胞,则d能产生单克隆抗体是b的遗传物质选择性表达的结果B. 若d形成有性杂交后代,则a和b融合形成d的过程叫受精作用C. 若d形成无性杂种植株,则采用了细胞工程中的核移植技术D. 若d形成无性杂种植株,由于杂种细胞具有双亲叶绿体,则可能培育出比有性杂交品种光合作用性能更好的植株10.如图为杂交瘤细胞制备示意图。
人教版生物选修3:2.2 动物细胞工程 教案2
动物细胞工程【教学目标】1.知识方面(1)动物细胞培养。
(2)动物细胞融合。
(3)单克隆抗体的制备及应用。
2.态度观念方面(1)初步培养学生勇于探索,不断创新的精神和合作精神。
(2)通过向学生介绍几大动物细胞工程技术的发展动态及一些新的研究成果,使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入,知识不断更新并向前发展。
认识到学无止境,形成终生学习的意识。
3.能力方面(1)在学习动物细胞培养过程中,学生通过阅读、自学、质疑、讨论、训练、总结等环节,逐步提高独立获取知识的能力、逻辑思维能力、分析问题和解决问题的能力。
(2)由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程,培养学生的知识迁移能力、思维能力。
(3)让学生尝试设计革克隆抗体的制备过程,指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法,使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。
【教学重难点】单克隆抗体既是本小节的重点,也是难点内容。
【教学过程】一、单倍体抗体的制备:环节一:多数学生会提出如下思路:把产生相应抗体的B淋巴细胞提取出来,用我们所学的动物细胞培养技术经原代培养和传代培养(把单个B淋巴细胞克隆),将该细胞培养成细胞系,能无限传代,大量繁殖,便能从这些细胞中提取单抗了。
教师质疑:该方案可行性如何?(引导学生确认为什么单纯地进行B细胞培养行不通。
)一些学生提出异议:一个B淋巴细胞不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次危机而达到细胞系水平。
因为每经历一次危机,都有大部分细胞被淘汰,只有少部分生存下来,而单个B淋巴细胞在这个过程中的命运便可想而知了。
抓住学生这一认识过程中的矛盾冲突,引领学生进人下一挑战性环节。
需解决的难题何在?(B细胞在体外不可能无限增殖)如何使它无限增殖,方法有哪些?(B细胞与瘤细胞融合)环节二:学生思考:(l)单克隆抗体是用哪两种细胞来融合?为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合?(2)骨髓瘤细胞是癌细胞吗?(3)整个制备过程为何要经过两次筛选?(4)杂交瘤细胞在小鼠腹腔内培养与在体外培养有何区别?(5)杂交瘤细胞在小鼠腹腔增殖,可否造成小鼠死亡吗?(6)鼠单抗能用于人体疾病的治疗吗?(板画诱导学生探究两次筛选的对象)环节三:假如现在要制备抗SARS病毒的抗体,用我身上的B细胞来融合行吗?为什么?(必须用对应的抗原刺激才会产生特异性的B细胞)二、单倍体抗体的应用制备到的抗体除了可以用于在临床治疗以外,还可以用来干什么?三、细胞核移植阅读→归纳【板书设计】1.单倍体抗体的制备:获得杂交瘤细胞动物细胞培养提取2.单倍体抗体的应用:可用于疾病治疗、预防、单抗诊断疾病(“生物导弹”)等。
生物:2.2《动物细胞 工程》课件(新人教版选修3)
胚胎成幼龄动物的组织器官(细胞来源) 剪碎胰蛋白酶 分离细胞 单个细胞
洗涤、稀释、分离 原代培养 原代细胞 传代培养
细胞株(遗传物质没有发生改变)
细胞系(遗传物质发生改变)
动物细胞培养应用
1. 生产有价值的蛋白质制品,(如病毒疫 苗、干扰素、单克隆抗体、动物激素)
场景记忆法小妙招
超级记忆法--身 体法
1. 头--神经系统 2. 眼睛--循环系统 3. 鼻子--呼吸系统 4. 嘴巴--内分泌系统 5. 手--运动系统 6. 胸口--消化系统 7. 肚子--泌尿系统 8. 腿--生殖系统
超级记忆法-记忆 方法
TIP1:在使用身体记忆法时,可以与前面提到过的五感法结合起来,比如产生 一 些听觉、视觉、触觉、嗅觉、味觉,记忆印象会更加深刻; TIP2:采用一些怪诞夸张的方法,比如上面例子中腿上面生长出了很多植物, 正 常在我们常识中不可能发生的事情,会让我们印象更深。
硬背“在复合句中,修饰某一名词或代词的从句叫做定语从句”这个概念。
3.这个步骤可以使用思维导图或流程图,可以更好加深自己的理解哦~
费曼学习法-实操
第三步 没有任何参考的情况下,仅靠大脑,复述你所获得的主要内容
(三) 仅 靠 大 脑 复 述
1.与上一步不同的是,这一步不能有任何参考, 合上你的书本、笔记等,看看此时你的大脑里还剩下了什么; 2.仅凭记忆,如果可以复述很多,说明掌握状况还可以; 3.如果一合上书,就连关系词有哪些都想不起来了, 说明还 没有掌握,需要继续回顾。
TIP3:认知获取是学习的开始,而不是结束。
为啥总是听懂了, 但不会做,做不好?
高效学习模型-内外脑 模型
2
动物细胞工程(第2课时)高二生物课件(人教版2019选择性必修3)
多种杂交细胞:骨-骨、B-B、 B-骨、
第一次筛选:用特定的选择培养基
在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种 核的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长
生其他抗体的细胞 克隆化培养
多孔细胞 培养板
杂交瘤细胞: (既能迅速大量增殖,又能产生抗体)
第二次筛选:克隆化培养、抗体检测 (可进行多次)
在体外条件下大规模培养(接种于培养液中) (9)如何获取大量所需杂交瘤细胞__________________________________________
或注射到小鼠腹腔内增殖 (10)如何获取单克隆抗体
①体外培养__从__细__胞__培__养__液__中__获__取_________ ②小鼠腹腔内培养__从__小__鼠__腹__水__中__获__取_________ (11)单克隆抗体的优点__能__准__确__地__识__别__抗__原__的_细__微__差__异__,__ __与__特__定__抗__原__发__生__特__异__性__结__合__,__并__且__可__以__大__量__制__备_______
育种,培育植物新品种
远缘杂交成为可能
二、单克隆抗体及其应用
1.研究背景 早期获得抗体的方法
产量低 缺点: 纯度低
特异性差
抗原
反复注射动物
从动物的血清 中分离抗体
二、单克隆抗体及其应用
思 1.抗体是由何种细胞产生的? B淋巴细胞——浆细胞
考
2.一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗?
每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。 3.如何获得大量的单一抗体呢?
(3)优点__靶__点__清__楚__、__毒__副__作__用__小_(__不__会__对__健__康__细__胞__造__成__伤__害__)___
2.2.2 动物细胞工程(第二课时)
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
科勒 米尔斯坦 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的 骨髓瘤细胞进行融合,所得到的融合细胞既能大 量增殖,又能产生足够数量的特定抗体。
3.制备单克隆抗体的过程
⑴如何得到B淋巴细胞?
⑵如何诱导融合?
加入聚乙二醇(PEG)
⑶细胞两两融合后,有哪 些类型? B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞? 单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选, 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生 特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方 法是不相同的。 ①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞
⑷继植物组织培养之后,克隆绵羊 培育成功,证明动物细胞也具 有 全能性 。
另一头母绵羊子宫 妊娠、出生 克隆绵羊多莉
⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的 保存濒危物种,繁殖优良品种,医学上克隆器官 实际意义: 。
3.科学家用小鼠骨髓癌细胞与某种细胞融合,得到 杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗体,与骨 髓癌细胞融合的是 A A.经过免疫的B淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 4.科学家将雌黑鼠乳腺细胞的细胞核移入白鼠去核 的卵细胞内,待发育成早期胚胎后移植入褐鼠的子
动物细胞工程小结
• 动物细胞培养:原理、营养、条件、过程、细胞 生长特点、结果、应用
• 动物细胞融合:原理、诱导方法、过程、应用
• 单克隆抗体的制备:原理、过程、特点、应用
• 核移植与克隆动物:供体、受体、核移植方法、 克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用
• 动、植物细胞工程的比较:植物组培技术与动物 细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞 融合技术
抗体与相应抗原特异性结合
动物细胞工程+第2课时+示范教案
第2节动物细胞工程第2课时◆教学目标1.阐明动物细胞融合技术的概念,举例说出诱导动物细胞融合的方法。
2.概述单克隆抗体的制备过程。
3.认同单克隆抗体在临床上具有重要的应用价值。
◆教学重难点【教学重点】概述单克隆抗体的制备过程。
【教学难点】概述单克隆抗体的制备过程。
◆教学过程【新课引入】【教师活动】龙是我国古代传说中的神奇动物,他有蛇身、鱼鳞、鹿角、牛耳、羊须、鹰爪等。
有没有一种动物细胞工程技术可以让不同种动物的体细胞进行杂交,从而培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞,乃至于新的动物个体呢?【新知讲解】一、动物细胞融合技术【教师活动】阅读课本48页相关内容,引导学生回答以下问题。
1.概念:动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
如必修1所学过的人鼠细胞融合。
2.原理:细胞膜的流动性。
3.方法:PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
拓展:灭活病毒是指使用物理或化学的方法使病毒失去感染能力,但并不破坏他们的抗原结构。
当使用灭活病毒诱导细胞融合时,原理为:病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
4.结果:通过动物细胞融合形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
思考:这种杂交细胞可以发育成动物体吗?动物细胞只有细胞核全能性,无细胞全能性,所以不能培养成新的动物个体。
5.意义:突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。
6.教师引导学生回忆植物体细胞杂交技术,思考动物细胞融合与植物体细胞杂交技术相比会有哪些不同?【学生活动】思考、回答问题。
7.应用:该技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段,特别是利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术,为制造单克隆抗体开辟了新途径。
二、单克隆抗体及其应用【教师活动】教师引导学生回顾抗体相关知识,讲述早期获得抗体的方法及问题。
高中生物第2章细胞工程2.2动物细胞工程2.2.2动物细胞融合与单克鹿体名师课件新人教版选修
提示:能。可从经免疫的 B 淋巴细胞中获取决定所需抗体的基因(目的基因), 导入骨髓瘤细胞,然后培养骨髓瘤细胞并从培养液中提取分泌物,便可得到单 克隆抗体。
[思维升华] 1.技术手段:人工免疫、动物细胞培养、动物细胞融合。 2.制备流程:
【答案】 B
3.利用细胞工程方法,以埃博拉病毒核衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体。 下列有关单克隆抗体的叙述,正确的是( )
A.用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内,产生的血清抗体为单克隆抗 体
1.下列关于动物细胞融合的说法,错误的是( ) A.动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程 B.动物细胞融合需要用纤维素酶处理 C.动物细胞融合时需要人工诱导 D.常用的诱导动物细胞融合的因素有:聚乙二醇、灭活的病毒、电激等
【解析】 动物细胞融合是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过 程。动物细胞无细胞壁,所以诱导融合前不需要用纤维素酶处理。动物细胞融 合需要人工诱导融合,诱导因素包括聚乙二醇、灭活的病毒、电激等。
__克__隆__化___培养和_抗__体____检测
将杂交瘤细胞在__体__外___培养或注射到_小__鼠__腹__腔___内增殖
提取单克隆抗体:从__细__胞__培__养__液___或小鼠_腹__水___中提取 (4)单克隆抗体的特点:_特__异__性___强、__灵__敏__度__高,并可大量制备。
[合作探讨] 探讨1:仔细观察教材 P53 图 2-24,探讨下列问题: (1)制备单克隆抗体过程中的几种细胞有何特点? 提示:①免疫的 B 淋巴细胞:能产生单一抗体,但不能无限增殖。②骨髓 瘤细胞:能无限增殖,不能产生抗体。③杂交瘤细胞:既能产生特定的抗体, 又能在组织培养条件下进行无限增殖。
2.2 动物细胞工程(47张PPT)
原代培养——初次培养 传代培养——分瓶后的培养
动物细胞培养技术常将细胞培养至10代以内。
细胞株:原代培养的细胞一般传至10代左右,细胞的生长就会出现 停滞,大部分细胞衰老死亡。但极少数细胞能存活下来并继续传下去, 一般还可以顺利地传至40~50代,这种细胞被称作细胞株。 细胞系:一般情况下,当细胞株传至50代以后会再次出现停滞,不 能再传代。但有部分细胞的遗传物质发生了改变(细胞核型发生变 化),并带有癌变的特点,从而有可能在培养条件下无限制地传下去 (不死性),这种细胞叫做细胞系。
3.动物细胞培养经历原代培养和传代培养: (1)原代培养:从动物体获取组织或细胞后,进行的第一次 培养过程称为原代培养,也叫初代培养。
分散成单个细胞
在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上,称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿 要求:内表面光滑、无毒、易于贴附。
3.动物细胞培养经历原代培养和传代培养: (1)原代培养:从动物体获取组织或细胞后,进行的第一次 培养过程称为原代培养,也叫初代培养。
适宜的温度
【资料4】开放培养时一般把细胞置于95%空气和5%二氧化 碳组成的气体环境中。氧气参与细胞的呼吸作用,二氧化碳 可以调节、维持培养基的pH。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4 。
适宜的气体环境
4.动物细胞培养的条件 (1)充足的营养
① 生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子等, 生长因子能促进细胞生长并维持细胞形态)
充足的营养物质
【资料2】细菌、真菌和病毒等均可造成细胞培养环境的污染 ,而离体培养的细胞已经失去了对微生物和有毒物质的防御 能力,一旦受到污染或有毒自身代谢产物积累等,培养的细 胞就会死亡。
无菌环境
4.动物细胞培养的条件 【资料3】人体细胞培养的标准温度为36.5±0.5℃,偏离这 一温度范围,细胞的正常代谢就会受到影响。培养的细胞对 低温的耐受能力高于对高温的耐受力。
动物细胞培养和核移植技术(第二课时)
5.下列关于细胞工程的叙述中,错误的是-------------------------------------------( C ) A.植物细胞融合必须先制备原生质体 B.试管婴儿技术包括人工授精和胚胎移植两方面 C.经细胞核移植培育出的新个体只具有一个亲本的遗 传物质 D.用于培养的植物器官或组织属于外植体
A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养
)
3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎 或出生不久的幼龄动物的器官或组织,其主要原因 是这样的组织细胞 ( D ) A. 容易产生各种变异 B.具有更强的全能性
C. 取材十分方便
D.分裂增殖的能力强
4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------( A ) A.培养基不同; B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行; C.动物细胞可以传代培养,而植物细胞不能; D.动物细胞能够大量培养,而植物细胞只能培 养成植株。
–细胞培养、核移植、胚胎移植
• 新生牛的性别、基因?
–性别与供体相同、基因与供体的基本相 同
• 繁殖方式?
–无性繁殖
思考题
对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程,找出操 作过程的不同点?
多莉克隆过程的受体细胞是去核卵细胞,而高 产奶牛的克隆过程的受体细胞是去核卵母细胞; 多莉克隆过程是将供体细胞核注入受体细胞, 而高产奶牛的克隆过程是将供体细胞注入受体 细胞。 动物细胞核移植概念:将动物的一个细胞 的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母 细胞中,使其重组并发育成为一个新的胚胎, 这个新的胚胎最终发育为动物个体(克隆动
(3)对克隆动物食品的安全性问题存有争议。
供体细胞 (供核)
22 动物细胞工程(第二课时)-2022高二生物同步优质课件(人教版2019选择性必修3)
植物体细胞杂交植物组织培养动物细胞融合动物细胞培养动物体细胞核移植动物细胞工程植物细胞工程胚胎工程胚胎工程的理论基础胚胎工程技术及其应用第二章细胞工程第1节 动物细胞工程(第二课时)动物细胞融合技术与单克隆抗体动物细胞融合技术与单克隆抗体本节聚焦1、什么是动物细胞融合技术?2、单克隆抗体是如何制备的?动物细胞融合技术指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
原理诱导方式结果意义细胞膜的流动性物理法:电融合法、化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒杂交细胞具有拓 展1)“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么?用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏它们的抗原结构2) 灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么?病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用,使细胞互相凝聚,细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。
(P48相关信息)植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导融合的方法意义和用途克服远源杂交的障碍,获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理(离心、电融合法)化学( PEG )物理、化学方法( PEG )灭活的病毒制备单克隆抗体单克隆抗体的制备研究背景(1)早期获得抗体的方法向动物体内反复注射某种抗原,使动物产生抗体,然后从动物血清中分离所需抗体(2)上述抗体的缺点产量低、纯度低、特异性差(3)大量制备单一抗体的思路和需解决的问题每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体注意:在体外培养条件下一个B淋巴细胞不可能无限增殖思考:有什么办法能得到既能迅速大量增殖又能产生大量特定抗体的细胞?一种B淋巴细胞(只产生一种特定抗体)能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养大量的特定抗体(4)单克隆抗体制备思路米尔斯坦科勒由于发明了单克隆抗体的制备技术,米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖骨髓瘤细胞培养杂交细胞单一抗体阳性细胞单克隆抗体细胞融合B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合·脾脏中获取单克隆抗体的制备过程克隆化培养和抗体检测★有限稀释法每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞侧面模拟图克隆化培养一段时间取上清液进行抗体检测拓 展单克隆抗体的应用诊断试剂应用运载药物治疗疾病2、除了细胞毒素,还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物?①可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶向放疗。
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骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制 备 过 程 :
诱导细胞融合
动物 细胞 融合 技术 动物 细胞 培养 技术 杂交细胞 筛选 杂交瘤细胞 筛选 特异性杂交瘤细胞 体外或体内 细胞培养 杂交瘤细胞系 提取 单克隆抗体
特点:既能产生专一 抗体又能大量繁殖
特点:特异性强灵敏 度高可大量制备
4、单抗隆抗体的应用
7.在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比 较中,正确的是 ( B ) A.结果是相同的 B.杂种细胞的形成过程基本相同 C.操作过程中酶的作用相同
D.诱导融合手段的手段相同
荣获1984年诺贝尔生理学或医学奖
科勒 米尔斯坦 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的 骨髓瘤细胞进行融合,所得到的融合细胞既能大 量增殖,又能产生足够数量的特定抗体。
3.制备单克隆抗体的过程
⑴如何得到B淋巴细胞?
⑵如何诱导融合?
加入聚乙二醇(PEG)
⑶细胞两两融合后,有哪 些类型? B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤 ⑷如何筛选出杂交瘤细胞? 单克隆抗体制备过程中,总共有两次筛选, 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生 特异性抗体的杂交瘤细胞,两次筛选的原理和方 法是不相同的。 ①首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞
1.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的 生产破伤风杆菌的抗体实验方案 A ⑴该实验方案的
目是 制备单克隆抗体 ;
⑵A是从小鼠的脾脏中取 B细胞 得_______,该细胞能够 产生 专一抗体 ; 细胞融合 ⑶图中B为________过程,
骨髓瘤细胞 B 杂交瘤细胞
C 足够数量的细胞群
体外培养 注射到
②疗效高、毒副作用小
结合同位素的单抗 -----生物导弹
项目 原理
动物细胞融合 细胞膜的流动性
植物体细胞杂交 细胞膜的流动性和 植物细胞的全能性 去除细胞壁 聚乙二醇、离心、 振动、电激、 获得杂种植株 培育作物新品种 克服远缘杂交障碍
融合前提 分散成单个细胞 诱导方法 聚乙二醇、离心、振动 、电激、灭活病毒 结果 用途 意义 获得杂种细胞或细胞产 物 制备单克隆抗体 使远缘杂交成为可能
抗体与相应抗原特异性结合
如何生产抗体?
抗原 抗原不纯
刺激
动物体内
效应B
抗体 抗体不纯
血清抗体(也称多克隆抗体) 由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生
的多种抗体的混合物,可达百万种以上,称为多
克隆抗体。
特点:
产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。
问题:
怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢?
灭活病毒 常用_________作为诱导剂 小鼠腹腔 双亲细胞 ,该细胞继承___________的遗传特性,既能 无限增殖 分泌专一抗体 。 __________,又能___________
黑面绵羊去 白面绵羊卵 ⑴写出 a、b所指的细胞工程各称: 核卵细胞 腺细胞核 核移植b 胚胎移植 a 。 a
让B细胞大量繁殖(克隆)就可以产生大量抗体了.
但,有问题: B细胞是不能无限繁殖的.怎么办? 找,什么细胞能无限繁殖呢? 癌! 只有癌细胞. 但它不能产生抗体. 思路就出来了:
癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体.B细胞能产生抗体,但不能大 量繁殖.融合呀!只要将两个细胞融合即可互补.
免疫 经过免疫的 注射抗原 B淋巴细胞
抗原表面具有的某 些特定的化学基团, 能决定抗原特异性, 是免疫细胞识别抗 原的重要依据。 各种抗原的决定簇 数目不同,同一抗 原的决定簇可能有 多种。
⑵什么是抗体?由何种细胞产生?主要分布在 哪里?起何作用?
当机体受到抗原刺激剂后由效应B细胞 (浆细胞)产生的,并且能与该抗原发生特异 性结合的具有免疫功能的球蛋白——抗体。 抗体分布于血清中,也分布于组织液及外 分泌液中。
每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一, 特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖(克
隆),形成细胞群,这样的细胞群就有可能产生
出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗
体。
在体外培养的条件下,一个B淋巴细胞 能无限增殖形成细胞群吗? 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢? ——肿瘤细胞!
不是自己的而又能引起免疫应答反应的物质就是抗原.
应答
抗原 刺激 B细胞 浆细胞 抗体
抗体的不纯性
一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种B细胞,作用于 不同的B细胞后,会产生多种抗体, 这是多克隆的, 故不纯!
怎么ห้องสมุดไป่ตู้能得到纯的抗体?
要想获单一的纯抗体,就必须从一个B细胞出发.
光纯还不行,还要大量.怎么办?
可能;
⑵为制造单克隆抗体开辟了新途径
3.单克隆抗体的制备 医院一般怎样检测人体内是否存在乙肝病毒? 使用相应的抗体检测乙肝病毒——抗原 凡能够引起机体产生特异性 免疫应答的物质叫做抗原。 ⑴什么是抗原?
乙肝病毒模式图
例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组 织或细胞也会成为抗原,如癌细胞等。
抗原决定簇:
D.骨髓瘤细胞可以产生抗体,但不能增殖
4.单克隆抗体是指 C A、单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B、单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C、单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体 D、单个抗体通过克隆化,产生大量抗体 5.下列哪一项属于克隆?
D
A.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B.将抗药菌的某基因引人草履虫的细胞内 C.将鼠骨髓瘤细胞与经过免疫的脾细胞融合成杂交瘤
②再筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 通常采用有限稀释克隆细胞的方法,将杂交 瘤细胞多倍稀释,接种在多孔细胞培养板上培养, 使每孔细胞不超过一个,再由这些单细胞克隆生 长,然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体,那 些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。 最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩 大培养。
细胞
D.将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系
6.一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后, 这个卵细胞经过多次分裂,再植入第三只羊的子宫内 发育,结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用
途,但是不能 (
D
)
A.有选择地繁殖某一性别的家畜
B.繁殖家畜中的优秀个体
C.用于保存物种
D.改变动物的基因型
宫,该褐鼠产下小鼠的体色和性别分别是
A.黑、雌 B.褐、雌 C.白、雄
D.黑、雄
A
5. (多选)将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合,可
使融合的细胞经培养产生单克隆抗体,其依据是
AC
A.B淋巴细胞可以产生抗体,但不能无限增殖
B.B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体
C.骨髓瘤细胞可以无限增殖,但不能产生抗体
单克隆抗体的优点: 特异性强,灵敏度高,并可以大量制备。 ①作为诊断试剂
用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定,纯度高、 特异性强,具有准确、高效、简易、快速的优点。
②定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病
利用同位素标记单抗,在特定组织成像
⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高
生物导弹——单克隆抗体+抗癌药物
动物细胞工程小结
• 动物细胞培养:原理、营养、条件、过程、细胞 生长特点、结果、应用
• 动物细胞融合:原理、诱导方法、过程、应用
• 单克隆抗体的制备:原理、过程、特点、应用
• 核移植与克隆动物:供体、受体、核移植方法、 克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用
• 动、植物细胞工程的比较:植物组培技术与动物 细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞 融合技术
1970年,有两位科学家 做了一个著名的实验: 人—鼠细胞融合的实验, 以证明细胞膜上的蛋白 质分子是运动的。 人—鼠细胞是怎样实 现融合的?动物细胞融合 有什么实践意义呢?
三、动物细胞融合与单克隆抗体 1.细胞融合: 是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞 的过程。 ⑴自然发生: 受精卵 ⑵人工诱导: 利用诱导剂诱导动物细胞融合 诱导因素:聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。
⑷继植物组织培养之后,克隆绵羊 培育成功,证明动物细胞也具 有 全能性 。
另一头母绵羊子宫 妊娠、出生 克隆绵羊多莉
⑸请举例说明克隆绵羊培育成功的 保存濒危物种,繁殖优良品种,医学上克隆器官 实际意义: 。
3.科学家用小鼠骨髓癌细胞与某种细胞融合,得到 杂交细胞,经培养可产生大量的单克隆抗体,与骨 髓癌细胞融合的是 A A.经过免疫的B淋巴细胞 B.不经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.不经过免疫的B淋巴细胞 4.科学家将雌黑鼠乳腺细胞的细胞核移入白鼠去核 的卵细胞内,待发育成早期胚胎后移植入褐鼠的子
2.世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。 请仔细看图后回答问题:
⑵实施细胞工程a时,所需的受体 细胞大多采用动物卵细胞的原因是
重组细胞 电脉冲处理 早期胚胎 b
卵细胞体积大,易于操作,卵细胞中有 : 。 启动核基因表达的物质
⑶多莉面部的毛色是 白色 , 多利的核基因全部来自白面绵阳 判断依据是: 。
方法——
抗原-抗体杂交法
阳性孔
在单克隆抗体制备过程中,两次筛选的原理 和方法是不相同的。
⑻如何得到大量的单克隆抗体? 体内培养:小鼠腹腔(少) 体外培养:微生物发酵(多) 单克隆抗体 ——化学性质单一、特异性强
1.制备单克隆抗体的思路 抗体
动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生的球蛋白.
抗原
⑶动物细胞融合的原理:细胞膜的流动性
正在融合的 鸡血细胞
正在融合的
淋巴细胞与骨髓瘤细胞
把两个不同的动物 细胞放在一起,用灭活 的病毒处理细胞,它们 先发生质融合,再出现 核融合,进而形成杂交 细胞。 融合后的杂交细胞 经过有丝分裂后仍能形
成两个完整的杂交细胞
2.动物细胞融合技术的应用:
⑴突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为