基因工程复习重点

1.核酸提取过程中，在酸性pH条件下DNA分配于有机组，RNA 分配在水相；碱性条件下， DNA 配于水相， RNA 分配在有机相，所以提取DNA时，需

要将苯酚平衡到pH 7.8 以上；提取RNA时，需要将苯酚平衡到pH 4.5 以下。

2.琼脂糖电泳中上样缓冲液有增大样品密度以确保DNA均匀沉淀到胶孔；使样

品带颜色使加样容易；可以预知电泳速率。

3.荧光扩增曲线可以分为荧光背景信号阶段；荧光信号指数扩增阶段；平台

期三个阶段。

4.大肠杆菌表达载体5个基本元素是：复制子，筛选标记，启动子，终止子，RBS组成。

5.一般来说基因文库是由：外源DNA片段，载体，宿主组成。补；琼脂糖凝胶电泳的染料是 EB-溴化乙锭荧光绿如蓝GelRed

1.下列哪一项论述是错的（D）

A.几种互不相溶的液体所组成的乳浊液可以用离心方法分开

B.液体中含有悬浮固

体的悬浮液可以···C.液-液-固系统等非均一系混合物···D.酒精和水的混合物···

2.下面的论述哪一项是正确的（D）

A.从理论上来说无限提高风速可以有效增加洁净度

B.对无菌的要求较低的时候可

以利用通风柜代替超净工作台C.对安全性要求低用超净工作台代替生物安全柜

D.闭环空气循环模式的超净工作台容易获得更好的洁净度

3.下面关于核酸提取的论述哪一项是错误的（A）

A.镁离子的沉淀效果最好，所以常用来沉淀核酸

B.影响动物细胞DNA提取主要是蛋白质含量，DNA酶和水分含量

C.影响植物DNA提取主要是多糖和酚类物质

D.D NA提取过程中最重要的是严格防止RNA酶的污染

4.关于大肠杆菌转化下面哪一项论述是错误的（A）

A.内切酶和重组酶缺陷是转化的必要条件

B.质粒的质量和浓度会影响转化率

C.制备感受态试剂的质量会影响感受态细胞的转化效率

D.电激转化可以转化较大的质粒，适用于所有的菌株

5.关于基因工程载体叙述哪一项是错的（C）

A.都能在大肠杆菌中自主复制，而且能连同所带的外源DNA一起复制

B.都很容易同细菌DNA分开并加以纯化

C.都是环状的双链DNA结构

D.都有一段DNA对于它们自身在细菌中的增殖不是必需的

6-15CDBCB CADDB

1.质粒不相容性：在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞内稳定共同存在的现象。

2.密码子偏好性:由于密码子的简并性，一个氨基酸可有多个密码子，对于tRNA丰富的密码子称为偏爱密码子，而对应于tRNA稀少的密码子是稀有密码子。

3.亚克隆基因文库：初步克隆的外源片段往往较长，含有许多目的基因片段以外的DNA片段，因此必须将目的基因所对应的已小段DNA找出来，这个过程叫亚克隆，获得多个克隆片段就成亚克隆文库。

4.内切酶的星号活力：在非标准条件下，也能切割一些与其特异性识别序列类似的

序列得到不同的酶解反应片段的酶活性，则称星号活性，并识别序列类似的序列得

到不同的酶解片段的酶活性则称星号活性。

5.同尾酶：切割不同的DNA片段，但产生相同的粘性末端的一类限制性内切酶，这类酶来源各异，识别的序列也不同，但产生相同的粘性末端。

6.内切酶位点优势效应：某些限制性内切酶对同一底物的不同位点切割效率不同。

7.PCR：聚合酶链反应式是一种对特定DNA片段在体外进行快速扩增的方法，具有特异性强，灵敏度高，简洁快速，纯度要求低的反应特点。

8.感受态细胞（competent cell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳

外来DNA的生理状态。

9.热启动：在聚合酶链反应中先将模版同引物在高于两者变性温度的条件下处理一

段时间，然后再加入酶和其他成分进行扩增反应，用以消除非特异性扩增产物的方

式

1.什么是荧光扩增曲线，一般来说分几个阶段

在实时荧光定量PCR反应中，引入一种荧光化学物质，随着PCR化学反应的进行P CR产物不断积累，荧光信号强度也等比例增强，每经过一个循环，收集一个荧光

信号强度。这样我们就可以通过荧光强度变化来监测产物量的变化，从而得到一条

荧光扩增曲线。一般而言，荧光扩增曲线分为三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光

信号指数扩增阶段，平台期

2.简述微量移液器使用过程中设定容量值时的操作步骤

当减少容量时缓慢调节到所需设定值，小心不要超过刻度，当增加容量时先调超过

三分之一圈，再缓慢减少容量达到所需值，小心不要超过刻度

3.简述α-互补筛选的原理和用途

α-互补是基于在两个不同的缺陷β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠

杆菌的乳糖Iac操纵子中的IacZ基因编码β-半乳糖苷酶，如果IacZ基因发生突变，则不能合成有活性的β-半乳糖苷酶。对于只能编码N-端140个氨基酸的IacZ基因，其产物也没有酶学活性。但这两个无酶学活性的产物混合在一起时，可恢复β-半乳

糖苷酶的活性，实现基因内互补，在生色底物5-溴-4-氨-3-吲哚-β-D-半乳糖苷培养

基中形成蓝色菌落，而当有外源基因插入到多克隆原点，从而造成插入失活，而使IacZ基因不表达而形成白色菌斑，这样就可以由颜色不同而区分重组子和非重组子

4.简述氧化钙感受态发我大肠杆菌转化的5个基本步骤及他们的作用

a.把链接产物加到感受态细胞b。冰上放置20min.。c. 42℃，90s。d.冰上2 min。

e.加SOC，37℃培养45min

5.简述乙醇加盐离子进行沉淀核酸的基本原理

乙醇是低极性，与水可以任意比例互溶，DNA溶液是双水合状态稳定存在的DNA，当加入乙醇夺取DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合沉淀，低温条件下分子运动大量减少，DNA易于聚合沉淀。在加入乙醇沉淀DNA 时，加入一定浓度的NaAc或NaCl。使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少分子间的同性排斥力，易于互相聚合而形成DNA的银沉淀。

6．如何提高外源基因在酵母中的表达水平

第一提高和控制外源基因的转录水平，第二是提高外源基因表达盒在宿主中的拷贝数，第三提高外源基因表达的因素。

7.如何理解限制性内切酶的位点优势效应

酶对同一个DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同，在双酶切时要考虑底物点优势效应，例如EcoRI并不是随机切割λDNA分子上5个识别位点，其中λDNA在侧位点的切割速率比中间位点快10倍。