大肠杆菌PPT课件
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大肠杆菌培养教学课件ppt
微藻培养法
微藻培养法是一种利用微藻进行培养的方法，通过将微藻接种到适宜的培养基中，并在适宜的光照、温度和pH条件下进行培养，以促进微藻的生长和繁殖。
微藻培养法的优点是能够生产出高营养价值的微藻粉，且微藻具有较高的光合作用效率，可以减少温室气体的排放。
微藻培养法适用于对营养价值要求较高的食品、饲料等领域，如小球藻、螺旋藻等。
摇瓶培养法适用于各种类型的细菌培养，包括大肠杆菌、金黄色大规模生产，且可以实现对细菌生长过程的实时监测和控制。
发酵罐培养法适用于对产量要求较高的细菌培养，如大肠杆菌、酵母菌等。
发酵罐培养法是一种大规模生产细菌的方法，通过在大型发酵罐中接种细菌，并在恒温条件下进行通气和搅拌，以促进细菌的生长和繁殖。
降解有机污染物
大肠杆菌能够转化重金属离子，例如汞、铅和镉等。通过将重金属离子摄入细胞内，大肠杆菌可以将其转化为无害的物质，从而降低其对环境和人类健康的危害。
转化重金属
在生物降解污染物中的应用
废水处理
大肠杆菌在废水处理中具有广泛的应用前景。通过生物反应器技术，将大肠杆菌与其他微生物一起培养，用于处理各种工业和生活废水。
大肠杆菌能够发酵多种糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等。
某些大肠杆菌菌株具有致病性，可引起肠道感染和腹泻。
分类
大肠杆菌属于肠杆菌科，埃希氏菌属。
命名
大肠杆菌的命名是根据其发现的地点和时间来命名的。
大肠杆菌的分类与命名
大肠杆菌在生物体内的地位与作用
大肠杆菌是肠道正常菌群之一，对维持肠道微生态平衡起到重要作用。
通过绘制细胞生长曲线，了解细菌的生长特性和规律，为后续实验提供依据。
大肠杆菌培养的实际应用
05
生产胰岛素
大肠杆菌是一种常用的生产胰岛素的微生物，通过基因工程的方法将人类胰岛素基因转移到大肠杆菌中，使大肠杆菌能够生产出胰岛素，用于治疗糖尿病。
大肠杆菌培养教学课件ppt
发酵
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。
1-大肠杆菌表达体系介绍PPT课件
转录水平 翻译水平
质粒拷贝数
.
17
启动子
启动子 P lac P trp P tac P traA P lL P recA
-35 区序列 TTTACA TTGACA TTGACA TAGACA TTGACA TTGATA
P tac = 3 P trp = 11 P lac
.
-10 区序列 TATAAT T TAA C T TATAAT TAAT G T GATACT TATAAT
酸性国内国外均 有，中性国内尚 未产业化
稳步增长
稳步增长，当前是纺织 酶中市场最大
宽温宽pH 碱性条件 近中性
国外有，国内目 前江南大学产业 化初步阶段
稳步增长 >3000吨
诺维信等少数国 际公司产业化， 国内产业化初步 阶段
市场空间较大 > 5000吨
目前尚无商业化， 未来皂洗、染料废水脱
成本高
色市场空间大
易操作性
• 转化，筛选、遗传稳定
可延展性
• 蛋白种类，放大
低成本性
• 发酵原料，发酵工艺和后处理
高效表达
• 副产物少，表达量高
.
11
常用工业酶表达系统的表达水平
种类 细菌 酵母
丝状真菌
菌名
大肠杆菌 枯草芽孢杆菌
毕赤酵母 黑曲霉 米曲霉
里氏木霉 金孢子菌C1
表达水平
目的蛋白
总蛋白
<7g/l
20g/l
Aspergillus niger/oryzae
.
9
表达系统
工业生产：菌株、发酵工艺和后提取方法等
The good production strain is not everything, but everything is nothing without a good production strain.
浙科版高中生物选修一 第一部分 实验1 大肠杆菌的培养和分离(共15张PPT)精品课件
2.常用方法 巴氏消毒法：牛奶 化学药剂：双手、水源 灼烧灭菌：接种环等（金属） 干热灭菌：160-170℃ 1-2h （玻璃器皿、金属） 高压蒸汽灭菌：121℃ 100KPa 15-30min（培养基） 紫外线消毒法：30min（空气中的微生物） 酒精灯火焰附近操作；超净工作台上操作。
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你
大肠杆菌PPT课件
14
• (3)肠侵袭性大肠杆菌（Enteroinvasive E.coli,EIEC）:EIEC的多数菌株无动力，生 化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注 意。
• （4）肠出血性大肠杆菌 （Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起 散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺 氏毒素样细胞毒素。EHCO的主要菌型是 O157：H7，还可有O26、OⅢ等
• 耐低温，能在冰箱内长期生存；在自然 界的水中可存活数周至数月；
• 不耐热，75℃ 1分钟即被灭活；对氯敏 感，被1mg/L的余氯浓度杀灭。
• EHEC 的最适生长温度为33-42℃，37℃ 繁殖迅速，44-45℃生长不良，45.5℃停止生 长。
17
• EHEC O157:H7除不发酵或迟缓发酵山梨醇 外，其他常见的生化特征与大肠埃希氏菌 基本相似，但也有某些生化反应不完全一致， 具有鉴别意义。EHEC O157:H7虽然有uidA 基因，但其编码的β-葡萄糖醛酸酶无活性， 不能分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷 （MUG）产生荧光，即MUG阴性。
13
• （2）肠致病性大肠杆菌（Enteropathogenic E.coli,EPEC）:是婴儿腹泻的主要病原菌， 有高度传染性，严重者可致死；成人少见。 细菌侵入肠道后，主要在十二指肠、空肠和 回肠上段大量繁殖。切片标本中可见细菌粘 附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上 皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻。 EPEC不产生LT或ST。有人报道，EPEC可产 生一种由噬菌体编码的肠毒素，因对Vero细 胞（绿猴肾传代细胞）有毒性，故称VT毒 素。VT毒素的结构、作用与志贺氏毒素相 似，具有神经毒素、细胞毒素和肠毒素性。 鉴定EPEC可根据临床表现与血清型
• (3)肠侵袭性大肠杆菌（Enteroinvasive E.coli,EIEC）:EIEC的多数菌株无动力，生 化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注 意。
• （4）肠出血性大肠杆菌 （Enterohemorrhagic E.coli,EHEC）:引起 散发性或暴发性出血性结肠炎，可产生志贺 氏毒素样细胞毒素。EHCO的主要菌型是 O157：H7，还可有O26、OⅢ等
• 耐低温，能在冰箱内长期生存；在自然 界的水中可存活数周至数月；
• 不耐热，75℃ 1分钟即被灭活；对氯敏 感，被1mg/L的余氯浓度杀灭。
• EHEC 的最适生长温度为33-42℃，37℃ 繁殖迅速，44-45℃生长不良，45.5℃停止生 长。
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• EHEC O157:H7除不发酵或迟缓发酵山梨醇 外，其他常见的生化特征与大肠埃希氏菌 基本相似，但也有某些生化反应不完全一致， 具有鉴别意义。EHEC O157:H7虽然有uidA 基因，但其编码的β-葡萄糖醛酸酶无活性， 不能分解4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷 （MUG）产生荧光，即MUG阴性。
13
• （2）肠致病性大肠杆菌（Enteropathogenic E.coli,EPEC）:是婴儿腹泻的主要病原菌， 有高度传染性，严重者可致死；成人少见。 细菌侵入肠道后，主要在十二指肠、空肠和 回肠上段大量繁殖。切片标本中可见细菌粘 附于绒毛，导致刷状缘破坏、绒毛萎缩、上 皮细胞排列紊乱和功能受损，造成严重腹泻。 EPEC不产生LT或ST。有人报道，EPEC可产 生一种由噬菌体编码的肠毒素，因对Vero细 胞（绿猴肾传代细胞）有毒性，故称VT毒 素。VT毒素的结构、作用与志贺氏毒素相 似，具有神经毒素、细胞毒素和肠毒素性。 鉴定EPEC可根据临床表现与血清型
《资料大肠埃希菌》课件
易感人群
探讨哪些人容易受到大肠埃希菌感染。
繁殖环境
探究大肠埃希菌喜欢繁殖的环境特征。
传染发病途径
揭示大肠埃希菌的传播路径，及其与感染的关 系。
病原特性
介绍大肠埃希菌所具备的病原学特点。
病理学
1
细菌的致病机理
深入挖掘大肠埃希菌引起疾病的致病机理。
2
病理特征
解释大肠埃希菌感染时所表现出的病理学特征。
3
病理变化过程
展示大肠埃希菌感染过程中的病理变化。
临床表现
早期临床表现
典型症状
探索大肠埃希菌感染的早期症状， 以便早期发现和诊治。
辨明大肠埃希菌感染的典型临床 表现，以提高诊断准确率。
其他临床表现
介绍大肠埃希菌感染时较少见的 临床表现，以提供多样化的医学 知识。
检测诊断
细菌学检测
详解大肠埃希菌的细菌学检测 方法与流程，以确定感染情况。
生化检测
探讨大肠埃希菌相关生化指标 的检测方法，以提供全面的诊 断信息。
分子诊断
介绍大肠埃希菌分子诊断技术 的最新进展与应用。
预防与控制
1
感染预防
提供富有实操性的大肠埃希菌感染预防
疫苗研究
2
措施和建议。
介绍当前大肠埃希菌疫苗研究的进展与
应用情况。
3
医院感染控制
ห้องสมุดไป่ตู้
指导医疗机构如何有效控制大肠埃希菌
个人预防
4
感染的传播。
为个体提供防止大肠埃希菌感染的个人 预防方法。
结论
强调本研究对大肠埃希菌的重要性，并展望其未来研究的前景。最后进行总 结。
参考文献
列出本PPT课件中引用的相关文献列表。
探讨哪些人容易受到大肠埃希菌感染。
繁殖环境
探究大肠埃希菌喜欢繁殖的环境特征。
传染发病途径
揭示大肠埃希菌的传播路径，及其与感染的关 系。
病原特性
介绍大肠埃希菌所具备的病原学特点。
病理学
1
细菌的致病机理
深入挖掘大肠埃希菌引起疾病的致病机理。
2
病理特征
解释大肠埃希菌感染时所表现出的病理学特征。
3
病理变化过程
展示大肠埃希菌感染过程中的病理变化。
临床表现
早期临床表现
典型症状
探索大肠埃希菌感染的早期症状， 以便早期发现和诊治。
辨明大肠埃希菌感染的典型临床 表现，以提高诊断准确率。
其他临床表现
介绍大肠埃希菌感染时较少见的 临床表现，以提供多样化的医学 知识。
检测诊断
细菌学检测
详解大肠埃希菌的细菌学检测 方法与流程，以确定感染情况。
生化检测
探讨大肠埃希菌相关生化指标 的检测方法，以提供全面的诊 断信息。
分子诊断
介绍大肠埃希菌分子诊断技术 的最新进展与应用。
预防与控制
1
感染预防
提供富有实操性的大肠埃希菌感染预防
疫苗研究
2
措施和建议。
介绍当前大肠埃希菌疫苗研究的进展与
应用情况。
3
医院感染控制
ห้องสมุดไป่ตู้
指导医疗机构如何有效控制大肠埃希菌
个人预防
4
感染的传播。
为个体提供防止大肠埃希菌感染的个人 预防方法。
结论
强调本研究对大肠埃希菌的重要性，并展望其未来研究的前景。最后进行总 结。
参考文献
列出本PPT课件中引用的相关文献列表。
大肠杆菌ppt课件
（三）肠致病性大肠杆菌 （Enteropathogenic E.coli,EPEC）
婴幼儿腹泻 致病机制 黏附到小肠上皮细胞，破坏刷状缘，导致邻近微绒 毛破坏，A/E组织病理损伤，引起严重水样腹泻。
Brett Finlay, University of British Columbia
24
（四）肠出血性大肠杆菌
菌株 ETEC EIEC EPEC EHEC EAEC
作用部位 小肠 大肠 小肠
疾病与症状
致病机制
旅水低热行样者便，腹恶泻心；，婴呕幼吐儿，腹腹泻痛；，质泌液粒体介和导电LT解和质ST；肠黏毒附素素， 大 量 分
水样便，继以少量血便，腹 质粒介导侵袭和破坏结肠粘膜上皮
痛，发热
细胞
婴儿腹泻；水样便，恶心， 呕吐，发热
37
12
（五）抵抗力
•对热的抵抗力较其他肠道杆菌强 •胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用 •对磺胺类、链霉素、氯霉素、庆大霉素等
敏感，但易耐药。
13
二、致病性和免疫性
14
致病物质
1．黏附素
定植因子抗原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(CFA/Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ) 、集聚黏附菌毛Ⅰ、Ⅲ（AAF/Ⅰ/Ⅲ）、束形成 菌毛(Bfp)、紧密黏附素、P菌毛、Dr菌毛、Ⅰ 型菌毛、侵袭质粒抗原(Ipa)蛋白等。
传染源:牛肉、牛奶是EHEC感染的重要传染源。
25
（五）肠集聚型大肠杆菌 （Enteroaggregative E.coli,EAEC）
婴儿、旅行者持续性水样腹泻 致病机制
- 黏附肠细胞表面聚集，形成砖状排列。 - 导致微绒毛变短，单核细胞浸润和出血 - 产生肠毒素
26
三、微生物学检查法
6.易变异
五、大肠杆菌病 PPT课件
仔猪黄痢
症状 潜伏期：短12小时内，长仅1-3日内 临诊表现： 仔猪出生正常，后腹泻、消瘦死亡 粪便：黄色浆状、内含凝乳小片
严重肛门松弛、排粪失禁、肛门冒出稀
粪 发病率和死亡率很高，可达90-100%
仔猪大肠杆菌病
排 出 白 色 或 黄 色 稀 粪
仔猪黄痢
病理变化：
LT：有抗原性，分子量大，60℃经l0min破坏，引起肠 黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水；
ST：无抗原性，分子量小，须60℃以上和长时间才能破 坏，同样引起分泌性腹泻。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
侵袭性：某些ETEC，能直接侵入并破坏肠黏膜细胞。 与质粒有关。 大肠杆菌素：由质粒编码，主要是由引起全身性侵人 的大肠杆菌产生，据认为，与细菌引起败血症的能力 有关。 细胞毒素（志贺样毒素(SLT)）：有3型：SLT-I、SLTⅡ和SLT-Ⅳ，SLT-Ⅱ与引发人出血性肠炎的O157：H7 的致病作用有关，而SLT-Ⅳ则能使猪产生水肿病的临 诊和病理特征。
?12月龄雏鸡患病时输卵管明显增粗内积黄白色干酪样渗出物?成年产蛋鸡发病时输卵管局部高度扩张内积异形蛋样渗出物表面不光滑切面轮层状输卵管粘膜充血增厚大肠杆菌病的诊断?初步诊断?流行病学?临诊特点?病理变化大肠杆菌的诊断?确诊?细菌学检查?病料采取?败血型
第三章 人畜共患传染病
大肠杆菌病
大肠杆菌病
本病最早于1982年在美国首次爆发，之后加拿大、 英国和日本等发达国家，都发生过大肠杆菌O157 的暴发流行；尤其是1996年日本爆发近万人的特 大型的食物中毒，造成严重的危害，其感染已成 为世界性公共卫生问题。
毒力因子
定植因子：又称菌毛(fimbriae，pili)、黏附素(adhesin)或F 抗原，与肠黏膜特异性受体结合而定植于黏膜。如 F4(即K88)、F5(即K99)、F8(即987P)、F4l。 内毒素：细胞壁外膜中脂多糖，引起败血症。 外毒素：ETEC产生，质粒编码。有不耐热肠毒素(LT) 和耐热肠毒素(ST)二种。
大肠杆菌与合成生PPT课件
1. 载体构建、目的基因表达
采用常用分子克隆技术，如PCR 扩增、酶切、 连接和转化等构建质粒表达载体 。
将表达载体转化宿主菌E. coli DHGT7 ，接入含相应抗生素 (Kn、Cm 均为25 μg/mL) 的 液体LB培养基中，37 ℃培养 至OD600 =0.3~0.4 ，加入 0.2 ％ L-阿拉伯糖诱导，继续培 养4~5 h 。取菌体全蛋白作 SDS-PAGE 分析,以 pET28a 为对照。结果在约56 kDa 处 有可见的紫穗槐-4,11- 二烯合 酶 (ADS) 的条带 。
由于大肠杆菌仅存在DXP途径，为避免对内源途 径的影响，后面引入了异源的 MVA途径来提高前 体供给。
3. 构建异源MVA途径
以低拷贝质粒pACYCDuet-1 的骨架为基础，PCR 扩增质粒pET3b 的多克隆位点 (MCS)，并通过 PCR 引物引入NotⅠ和Apa Ⅰ限制性酶切位点，将 PCR 扩增的MCS序列连接到pACYCDuet-1 的Sph Ⅰ和Eco R Ⅰ之间，构建了具有特殊 MCS的质粒 载体pAOC3ANL，用于多基因合成途径的构建。
将粪肠球菌来源的mvaE、mvaS、MD 和ispA与
ADS 分别构建在质粒载体pAOC3ANL 和pET28a 上，得到表达载体pAOC3-ES-MD 和pET28-ispAADS，共转化E. coli DHGT7 ，摇瓶培养48 h ， 紫穗槐-4,11- 二烯产量达到151 mg/L，是利用内源 FPP的13.3 倍。
合成生物学如何创造生命
用A 、G 、C 、T 为代表的化学物质人工合成 DNA(脱氧核糖核酸) 片段, 由DNA片段合成基因, 再由基因组合成生物模块, 然后装配成“人造基因 组”, 最终在实验室里创造出全新生物体。
实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件
2、成分
水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方
调节pH
真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5
有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
四、无菌操作
1.无菌操作的概念
无菌操作杂泛菌指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下 一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的 增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
大肠杆菌在人体的_____中一肠般道对人体无害，但任何 大大肠肠杆杆菌菌如是_果_进__入_____工__程__中_被__广_泌都泛尿会采系对用统人的体工产具生。危害。
基因
质粒、 EcoRⅠ限制酶、
E.coli-DNA连接酶、
受体细胞
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长 繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构 的子细胞群体。
天然培养基：
天然培养基有血清、 血浆、和组织提取液 （如鸡胚和牛胚浸 液）。 优点：营养成分丰富， 培养效果好 缺点：来源受限;成分 复杂，影响对某些实 验产物的提取和实验 结果的分析;易发生支 原体污染;
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和 繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
主要包括：
_各__种__器__具__必须无菌、 __培__养__基___也必须要无菌、 ___________时不能带入其他杂菌
大肠杆菌感受态细胞的制备与转化ppt课件
14
实验步骤
➢ 菌株活化 ➢ 感受态细胞制备 ➢ 外源DNA的转化
15
实验步骤
菌株活化
1. 用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α，在LB培 养基平板表面划线，于37℃培养16小时
2. 挑取一个单菌落，转到3－5ml LB培养基中，于 37℃培养3－5小时
3. 将培养液全部转到100ml LB培养基中培养2－3 小时，到OD600＝0.3－0.4
16
实验步骤
感受态细胞制备
4. 将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min 5. 4000rpm离心5min,弃上清 6. 加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，冰上预冷10min 7. 4000rpm离心5 min,弃上清 8. 加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总
转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的 受体细胞( Transformant )。
5
实验原理
本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有 抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受 体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。 将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在 含氨苄青霉素的平板培养基上培养，只有转化体 才能存活，而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨 苄青霉素的能力而死亡。
统计每个培养皿中的菌落数。 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化
子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化 频率，公式如下：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总 体积／涂板菌液体积
转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子 总数／质粒DNA加入量(mg)
实验步骤
➢ 菌株活化 ➢ 感受态细胞制备 ➢ 外源DNA的转化
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实验步骤
菌株活化
1. 用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α，在LB培 养基平板表面划线，于37℃培养16小时
2. 挑取一个单菌落，转到3－5ml LB培养基中，于 37℃培养3－5小时
3. 将培养液全部转到100ml LB培养基中培养2－3 小时，到OD600＝0.3－0.4
16
实验步骤
感受态细胞制备
4. 将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min 5. 4000rpm离心5min,弃上清 6. 加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，冰上预冷10min 7. 4000rpm离心5 min,弃上清 8. 加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl2,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总
转化细胞(转化子)：带有异源 DNA 分子的 受体细胞( Transformant )。
5
实验原理
本实验以 E.coli DH5α 菌株为受体细胞，用 CaCl2 处理受体菌使其处于为感受态，然后与 pUC18质粒共保温，实现转化。 pUC18质粒携带有 抗氨苄青霉素的基因，因而使接受了该质粒的受 体菌具有抗氨苄青霉的特性，用 Apr符号表示。 将经过转化后的全部受体细胞经过适应稀释，在 含氨苄青霉素的平板培养基上培养，只有转化体 才能存活，而未受转化的受体细胞则因无抵抗氨 苄青霉素的能力而死亡。
统计每个培养皿中的菌落数。 转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化
子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化 频率，公式如下：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总 体积／涂板菌液体积
转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子 总数／质粒DNA加入量(mg)
《大肠杆菌》课件
THANKS
感谢观看
。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
05
大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。
大肠杆菌ppt课件
18
EHEC除其代表菌株O157:H7外，还包括 O157:NM、O26:H11、O111:H8、 O125:NM、O121:H19、O45:H2、 O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、 O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。 血清学鉴定包括O抗原和H抗原的鉴定。前 者可使用玻片凝集试验或胶乳凝集试验；后 者则应先进行动力试验，动力活泼者再进行 玻片和试管凝集试验
13
（2）肠致病性大肠杆菌 （Enteropathogenic E.coli,EPEC）: 是婴儿腹泻的主要病原菌，有高度传染性， 严重者可致死；成人少见。细菌侵入肠道后， 主要在十二指肠、空肠和回肠上段大量繁殖。 切片标本中可见细菌粘附于绒毛，导致刷状 缘破坏、绒毛萎缩、上皮细胞排列紊乱和功 能受损，造成严重腹泻。EPEC不产生LT或 ST。有人报道，EPEC可产生一种由噬菌体 编码的肠毒素，因对Vero细胞（绿猴肾传代 细胞）有毒性，故称VT毒素。VT毒素的结 构、作用与志贺氏毒素相似，具有神经毒素、 细胞毒素和肠毒素性。鉴定EPEC可根据临 床表现与血清型
15
肠出血性大肠杆菌（EHEC）是能引起人的 出血性腹泻和肠炎的一群大肠埃希氏菌。以 O157:H7血清型为代表菌株 生物学特征 EHEC O157:H7属于肠杆菌科埃希氏 菌属。革兰氏染色阴性，无芽胞，有鞭毛， 动力试验呈阳性。其鞭毛抗原可丢失，动力 试验阴性
16
EHEC O157:H7具有较强的耐酸性， pH2.5-3.0，37℃可耐受5小时； 耐低温，能在冰箱内长期生存；在自然 界的水中可存活数周至数月； 不耐热，75℃ 1分钟即被灭活；对氯敏 感，被1mg/L的余氯浓度杀灭。 EHEC 的最适生长温度为33-42℃， 37℃繁殖迅速，44-45℃生长不良， 45.5℃停止生长。
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大肠杆菌O157: H7传染源和传播途经
• 大肠杆菌O157: H7基本上是一种食源性病原菌， 可通过食用大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、 牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等 感染,也可通过人与人、人与动物密切接触传播。
• 在实验室，大肠杆菌O157: H7可以感染小鼠、鸡、 兔、猪、牛等动物。
•
•/L 新生霉素或10mg/L盐酸-吖啶黄的胰蛋白
胨大豆肉汤 • 新生霉素MEC肉汤 • 月桂基胰蛋白胨肉汤 • 加入下例任何一种抑制剂均可增加培养基的选择性 • 头孢克肟 0.05mg/L 亚碲酸钾2.5mg/L • 新生霉素10mg/L 万古霉素40mg/L
• Chapman等先用EC肉汤增菌,然后用免疫磁珠分离法富集牛粪便大肠杆 菌O157: H7菌株,再用选择性培养基分离，并与CR-SMAC和CT-MAC直 接培养作比较。用前者检测接种12株不同大肠杆菌O157: H7菌株的牛粪 便悬液,其敏感性比在两种培养基上直接培养高100倍。
• Cubbon等用免疫磁分离法（IMS）检测牛粪便和食品标本的大肠杆菌 O157: H7。在一起经牛奶传播的大肠杆菌O157: H7爆发中,用IMS、粪便培 养和多聚酶链反应(PCR)检测Vero毒素基因的携带,用三种方法对粪便 大肠杆菌O157: H7的分离率作比较结果,在受检的142份粪便标本中,直接 培养和IMS均阳性20 份,另13份仅IMS阳性。因此,IMS提高了大肠杆菌 O157: H7感染病例的检出率,与PCR符合率高。
• 目H培7前养的，法卫,污生结染威果的胁不肉。理、检想家测。畜食IM，品S甚和和至其水饮它源用检中水测肠均的道面研病临究原大表体肠明使杆,用对菌传快O统速1的5检7: 测食品和环境标本似乎前景良好,Yu检等以IMS结合电化学
发光检测法(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果 显示,在原缓冲液检出大肠肠菌的范固为100－1000 cfu/lm, 在食品检出的范围为1000－2000cfu/lm ，检测时间十分快, 一在般两不种到培1养小基时上。直菌接O培157养: H高7菌10株0倍的。牛在粪监便测悬牛液群,其的敏4个感月性间比, 从（牛8.2采%集）18042份4份中直有肠23标份本（,2其7.中4%检）出由大直肠接杆培菌养O和157I:MHS7分84离份。 23份中15份由两种培养基、5份仅由CT-SMAC、3份仅由
2．免疫磁珠分离法
• 免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附于一种能 被吸附的磁性珠子上,然后利用抗原抗体反应特 性将样品中的大肠杆菌O157: H7富集起来。
• 方法:1.增菌;2.取样品1ml加大肠杆菌O157: H7免 疫磁珠20ul;3.轻轻混合10分钟;4.将试管插入磁 架上;5.吸取上清;6.加PBS,重复3-5过程;7.取管 壁沉淀物,划线接种于CT-山梨醇麦康凯琼脂(C头孢克肟,T-亚碲酸钾)等选择性培养基。37℃ 培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。
大肠杆菌O157: H7实验 诊断研究进展
大肠杆菌O157: H7感染临床表现
• 出血性肠炎：鲜血样便，腹部痉挛性疼痛，低热或不 发热。
• 溶血性尿毒综合征（HUS）：主要发生在儿童，常出 现在腹泻后数天或1-2周。病死率一般在10%，各别可 高达50%。
• 血栓性血小板减少性紫癜（TTP）：主要发生在成年 人，尤其老年人。病人主要表现为发热、血小板减少、 溶血性贫血、肾功能异常等症状，病情发展迅速，病 死率高，有时可出现70%的病人死亡。
• Chapman等 共检测大便标本690份, 免疫磁珠分离法检出25 。用免疫磁珠分离 法分离的l2株大肠杆菌O157: H7中,直接培养阳性仅5株。
• Wright等将接种大肠杆菌O157: H7的碎牛肉标本置加有万古霉素和头孢 克肟的缓冲蛋白胨水培养,然后直接或用大肠杆菌O157抗体包被的磁珠 分离细菌后,接种于CT-SMAC,结果直接次培养检出量为200cfu/g,而免 疫磁珠分离法仅需 2cfu/g 。
• 典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下： • 动力试验（+） 葡萄糖（+） 麦芽糖（+）甘露醇（+） 蔗糖（－/+）
硫化氢（－） 尿素（－） 靛基质（+） 甲基红（+） V-P试验（－） 枸橼酸盐（－）苯丙氨酸脱羧酶（－）赖氨酸脱羧酶（+/－）鸟氨酸脱 羧酶（ +/ －）氧化酶（－）氰化钾（－） • 与O157有鉴别意义的生化反应见表1。 • MUG即4-甲基伞形化内酯-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌具有葡萄糖 醛酸酶,可水解MUG产生荧光, 但O157: H7中大多数菌株则不水解MUG。 Thompson等建立了一种快速MUG试验,取 MUG试剂0.5ml置试管中,以无 菌棉签挑取待检菌纯培养物混匀于其中,44.5℃置20min,暗室内高强度光 源下观察结果,产生蓝色荧光者为阳性。
CR－SMAC分离,其余61份(72.6%)仅IMS分离。用含吐温－ 20 的PBS洗涤磁珠可减少其它微生物与磁珠的非特异性结 合具。有用快无速关、的操抗作体简包单被、磁特,异则性大高肠,杆在菌流O行1病57:学H7调不查结中合有。价IM值S。
3．生化反应
• 目前许多国家使用的O157和 H7特异性抗体与极少数细菌具有不同程度交 叉反应。因此用生化试验确定为大肠杆菌是必须的。
• 大肠杆菌O157: H7的感染已成为世界性的问题 • 我国情况也不容乐观
一、细菌培养与鉴定
• 1．分离培养
• 早期培养对确定病原有重要意义。 • 培养的对象首先是急性血性腹泻患者，其次是HUS、TTP等住院
病人，再其次是高危接触者。 • 培养基： • 山梨醇麦康凯琼脂、胰胨大豆琼脂 • 改良的伊红美兰 、改良的SD-39（MSD）琼脂 • 添加了头孢克肟 和 亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC） • 添加了头孢克肟和鼠李糖（0.5%)的山梨醇麦康凯琼脂（CR-SMAC） • “科玛嘉”大肠杆菌O157: H7显色培养基 • 四溴荧光亚甲基兰琼脂 • H7抗血清—山梨醇发酵培养基 •