法医病理学组织切片制作

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法医病理学组织切片制作
二、固定
（一）意义：是做好切片的重要步骤之一，如果 首次组织固定不良，再重新固定效果不佳。
检材固定的关键：取材后尽可能地及时地将 所取的材料进行固定，以防止其“死后”变化的 进展，尽力使组织接近于生前状态。为了防止组 织结构及成份的破坏和溶解消失，需要使其转变 为不溶性物质，有利于组织结构保存--固定的基 本意义。
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2．甲醛：（福尔马林）（formalin） 最常用的固定液，一种还原剂，无色透明极易挥发有强
烈刺激性气味的液体，不能与氧化剂混使用。可应用于组织 学、组织化学、免疫组织化学等染色，最好用时现配。 商品甲醛：37％～40％甲醛水溶液。 固定液的浓度：4％～8％（习惯上称为10％或20％的福尔马 林）。 固 定 时 间 ： 常 温 下 固 定 24h ～ 48h 。 快 速 固 定 ， 可 加 温 到 70℃～80℃或者加温煮沸10min即可。快速固定，组织块不宜 过厚或过大，缺点是组织收缩较严重。 固定液配制：甲醛1份与9份自来水混合即为10％（4%）浓度 的甲醛固定液。
垂体：前、中、后叶和垂体柄，从前向后 横切。
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2．管腔脏器：
取材时注意方向，取管腔脏器的全层构造。 大肠、小肠：应考虑环行皱襞，沿肠管的长轴取 （纵切）。 食管、气管：横切面为宜。 胃：常规取胃底。
取材后应将被膜面铺在滤纸上，然后入固定液 内，防止或减少组织受压变形与收缩。 有病变的部位，应附带周围正常组织取材。
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2．单纯固定液
乙醇（酒精）、甲醛（福尔马林）、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、 冰醋酸
（1）乙醇（酒精）（alcohol）
优点：
①价格低，易购买，易溶于水，使用方便，95％浓度，无水乙醇100％；
②市售有两种：100%；95%；
③能硬化组织起固定作用；
④也是一种最常用的脱水剂。
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（二）方法： 1. 实质器官
心脏：心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常 组织。可单独取心室肌，乳头肌，3～5块。
肺脏：左右两肺（五个肺叶）；可根据病变需要决定 取材块数，特殊情况下为区别在不同肺叶上取材， 可用形状做标志在记录时记清楚，5～7块。
肾脏：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，应区别左 右肾，2～4块。
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（二）固定液： 根据检验目的不同选择不同种类固定液，如糖原检查：不含水的固
定液；电镜检查：锇酸固定液等；HE染色：甲醛。 固定液：用以固定组织的药剂。 固定液分类：单纯固定液，由一种药剂组成；混合固定液（或复合）， 由二种以上的药剂组成。 1．选择固定液的标准： ①具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透到组织内部使组织细胞结构 保持生活状态。 ②不使组织过度收缩与膨胀而变形。 ③能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。 ④使组织达到一定的硬度便于切片制作。 ⑤价格便宜，易购买，配制方便。
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固定的目的：
1. 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。
2．保存组织的结构及成份。
3．媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同
亲和力，使细胞各部易于受色。
4．能使组织硬化，为制作薄切片奠定基础。
注意：材料块不能过大，固定器皿不易过小，固 定液量不易过少，应是固定材料体积的20 一30倍。
固定用浓度在70％～80％，酒精浓度愈大组织收缩愈严重，浓度过低起 不到固定作用。
缺点：
①穿透力小，由于被固定的组织表面硬化，固定液不容易渗透到组织中去， 所以用乙醇固定的组织材料要小。
②使组织严重收缩。
③由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白的沉淀物易溶于水， 使细胞核核色不佳。。
④溶解脂肪、血红蛋白和多种色素，脂肪染色必须制作冰冻切片。
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去掉福尔马林色素颗粒方法：
① Schridde法
25％氨水 l ml
75％酒精 200 ml
切片脱蜡经70％酒精时，用上液浸泡半小时或稍长一 些时间，然后水洗再行染色。
②Verocay法
l％氢氧化钾水溶液 l ml
70％酒精
100 ml
切片脱蜡经酒精80％时入上液处理10分钟，经70％酒 精入水后即可染色。
法医病理学-组织切片制 作
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2020/11/26
法医病理学组织切片制作
HE染色切片
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法医病理学组织切片制作
一、目的要求
掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸 蜡与包埋，切片制作。 （一）取材 1.取材快，新鲜，防止组织腐败。 2.取材刀锋利，垂直地切取，严禁挤压或用钳镊 钳夹，以免使组织或细胞变形造成人为的破坏。 3.取材大小，lcm～3cm×1cm～2cm×0.3cm～ 0.5cm。材料过大在短时间内不易固定透，影响 效果。
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（三）水洗
1.用水道流水洗涤，彻底清除组织块中的固定液。
胰腺：取胰体部，必要时加取胰头、胰尾，2块。 肝脏：取长方形或三角形，2～3块。 脾脏：取材带被膜，2～3块。
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脑：全脑（桥脑、延脑、小脑）、脊髓颈 段及脉络丛，十一块，或根据具体情况决定：
①额极；②前后中央回；③海马；④内囊； ⑤丘脑；⑥枕叶；⑦脉络丛；⑧桥脑；⑨延 髓；⑩中脑； ⑪小脑。取材时要带上软脑 膜、脑室膜或软脊膜因此刀要锋利。需要时 取脊髓。
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优点：①渗透力较强；②组织收缩小；③细胞核染色较好。 缺点： ①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉 淀物称“三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈 酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳 酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或 者白色粉笔作为中和剂。 ②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒 状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶 于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。