手工制作组织芯片及其应用

法使 用 。组 织芯 和蜡 融合好 后 轻轻 地从 烤箱 中取 出 ， 再 从有包 埋 盒 的一侧 注入 少量熔 蜡 ， 组织 芯 片蜡模 使 与 包埋 盒 紧密结 合 ， 半融 状态 的石 蜡在 室温 条 件下 冷 却 后， 组织 芯 片蜡块 从 模具 中取 出 ； 将 至此 ， 组织 芯 片 蜡块 便制做成 功 。 切片 ： ⑦ 冰蜡块好 后 以 ４ ｍ厚切 片 ， １ ｘ 裱贴 于净洁 的经多 聚赖氨 酸溶液处 理的载玻 片上 。微
液。 Ｂ超提示 子宫 直肠窝 可见积 液但 量不 多 。 血检 白细
胞增高、 血色 素下 降 不 明显 。本组 有 ２例 右 侧 出血 性 输 卵管炎 ， 因忽 略 了必 要妇科 相关 检查 而误诊 。 ３６ 急 ｝ ． 生阑尾 炎 大多数 阑尾 炎 的症状 、体 征 典 型 ，
不难 做 出正 确 诊断 ， 这些 病人 约 占 ７ ％～ ０ 另 外 的 ０ ８ ％； ２ ％～ ０ ０ ３ ％病人 由于症状 、 体征 不典 型 ， 断 比较 困难 ， 诊
一
填捣 ， 两截问不 留间隙 ， 以保证切 片时每一孔标本都
能 切到 。为 了使 本实 验结果 更 加可 靠 ， 每个 组织 芯 片 蜡 块 中均植 入 正常 肝组 织 、Ｋ ０Ｃ ７及 ｒ 一 Ｃ ２、Ｋ ｒＦ １阳性
般采 用进 口的组 织微 阵列 仪 或组 织 芯 片制作 仪 ， 但
这些 仪 器价 格 昂贵 ， 不适 于 基层 单 位使 用 。为 此本 文
手 工制作组 织芯片及 其应 用
李波 罗宏 涛 杨 荣
【 摘要】 目的： 探索一种组织芯片的手工制作方法。方法 ： 使用骨髓穿刺针实性针芯在软化的空白蜡块上成阵列打孔 ； 然后取 出
选择的标本蜡块 ， 阳性点上取样 ， 在其 制成组织芯片 ， 并进行免疫组织 化学染 色。 结果： 织芯 片空心蜡模制备成功率达 １ ％。 组 ０ 所制备 ０
阵 列蜡 块 的切 片用 德 国徕 卡一 次性 刀 片在 徕 卡 切 片
样 针 ： 实 芯 的 骨髓 穿刺 针 一 个 ， 带 即一 个 空 心 针 及配 套 的实 心针芯 。 空心 针其 内径为 ２ ｍ， 于穿取 组织 ， ｍ 用
实 心针 芯用 于打孔 。用锯 片将 穿刺 针末 端 锯 成平 端 ，
机 上切 片 ； 与常 规 组织 切 片 基 本相 同 ， 是 因为 蜡块 但
内的组织 块 多 ， 裱 片时操 作要 轻 ， 在 速度 掌握 适 宜 ， 否
供体 蜡块 ｄｎｒ， ｏｏ）标记相应 靶点 并 画圈 （ 标记 圈一定 要 小 ， 约 ３ ｍ）一些 组织 蜡 块 太 薄 的病 例 被 排 除 ， 大 ａ ｒ ， 最
［ ］ 周学忠 ， ６ 黄琨 ， 陆小敏． 超诊断宫外孕若干问题探讨［ ３ Ｂ Ｊ． 中华临床
研 究杂志 ，０ ５ １（ ）８３ ８４ ２ ０ ， １６ ：６ —６ ．
［］ 陈潜 ， ７ 杨玉 伦． 急腹症误诊为 阑尾炎 ３ 例分析 ［］ 部外科 ， 妇科 ２ Ｊ腹
２ ０ ． ３ ２） ２ ． ０ ０ Ａ１ （ ： ３ １
甘肃医药 ２ １ 年第 ３ ０ １ Ｏ卷第 ２期
Ｇ ｎｕＭｅｉａ Ｊｕ ａ，０ ， ｏ．０ Ｎ ． ａｓ ｄｃｌ ｏ ｍ ｔ２ １ Ｖ １ ， ｏ２ １ ３
・
８wenku.baidu.com・ ５
妇 科急症 认 识不 足 ， 次对 腹痛起 始 部位 、性 质缺 乏 其 认 真 分析 ， 组 病 例腹 腔 出血 较少 ， 常 规 检 验 血 象 该 血 升 高 、 见 明 显 贫 血 ， 仓 促诊 断为 急 性 阑尾 炎 以致 未 就
外孕 ， 内出血停止 ， 病情稳定 、 间久 ， 时 胚胎 已死亡 ， 但 长 期反 复 的 内出血 所形 成 的盆 腔血 肿不 消 散 ， 化 变 机 硬并 与周 围组织 粘 连 ， 并发炎 症 以致 误 诊 。因此 对 腹
Ｂ超联合检查作为常规检查［ ④综合上述情况仍不能 ６ １ 。
明确 时 ， 只要 具备 手 术指 征应 果断 手 术探 查 。但 应 避
痛 的未婚育龄妇女也要排除宫外孕 。Ｃ Ｔ及 ＭＲ 对 临床 Ｉ
和超 声无 法确诊 的宫外 孕病 例是重 要 的补 充 手段 『 ３ ］ 。
３ 右侧 出血 性 输 卵 管 炎 ． ５
临床 较 少 见 ，以下 腹 隐
痛， 阴道 出 血 ， 热 、 门 坠胀 为 主 要 表 现 ， 发 肛 双合 诊 右 侧输 卵 管 索 状 增 粗 有压 痛 ，后 穹 窿穿 刺 抽 出不 凝 血
的组织 芯片石蜡块内组织芯切片平 面整齐 ， 无组织芯倒浮 、 脱落现象 。组织芯片切片 中组织芯片微组织片阵列 整齐 ， 无微组织 片脱 片
现象 。结论 ： 手工制作组织芯片制备技术简单易学 ， 操作流程容易掌握控制 ， 且成本低廉 ， 有利 于组织芯片技术 的普及和推广应用 。 【 关键 词】 组织芯片 ； 手工制作方法 ； 免疫组化
作者单位 ：３ ００甘肃 兰州 ， ７０５ 甘肃省肿瘤医院病理科（ 李波、 杨荣 ）放 ，
疗科 （ 罗宏 涛 ）
・
８ ６・
壶 垫 ２１ 年第 ３卷第 ２ Ｇｎｕ ｅｉｌｏｍｌ２１。ｏ３。ｏ ０１ ０ 期 ａｓ ｄ ａＪｕａ。０ＩＶ１０Ｎ． Ｍ ｃ ． ２ 将 前半 截有 组织 蜡芯 装入 孔 内 ， 用穿 刺 针 针芯送 人底
４ ９ ２ ．
［ ］ 王虹 ， ５ 陈世红． 妇科急腹症诊断和鉴别诊 断［ ］ Ｊ． 吉林医学 ，０ ５ ２ ２ ０ ，６
（ ２ ：８ ０ １ ）１５ ．
有 时 甚 至误 诊 ，以致 采 用错 误 的治 疗 方 法 或延 误 治 疗， 产生 严 重并 发症 、 至死 亡［ 甚 ４ １ 科 接诊 医师 应详 。外 细追 问 病史 及疼 痛发 作规 律 ，必 要 时可 行腹 腔 穿 刺 ， 这是 一 种 简便 易 行 、 全 可靠 的诊 断 方法 ， 用 于急 安 适
部 后再 装入 另一 个有 组织 的半 截蜡 芯 ， 并用 针芯 适 当
学 染 色和 原位 杂 交等 ，一 次 实验 即可 获得 大 量信 息 ，
大 大 节 约 了组 织 原 材 料 和 检 测试 剂 ，减 少 了实验 误
差 ， 强 了可 比性 ， 增 操作 简 便 。但 组 织芯 片 制作 技术
则 容 易离 断或 组织 阵列 偏移 ； 外 ， 另 还要 注意 水温 ， 过 低切 片展 不开 ， 过高 易拉 长 ， 拉断 ， 保持 在 ４℃左右较 ８ 合适 。共制作 蜡块 ４个 ， 各切 片 ３张共 ｌ ２张切片 。 １ 免 疫 组 织化 学染 色 对 已制 作好 的组 织 芯 片进 ． ４ 行 免 疫 组 织 化学 染 色 ，采用 即用 型 Ｅｉｓ ｎ Ｍ ｐｕ ｌｉｏＴ ｌｓ ｖｉ 法 ，．ｌ ｌ ０ＯｍｏＬ枸 橼 酸缓 冲液 （Ｈ＝ ．） ／ ｐ ６０ 高压煮 沸抗 原修 复 ，Ｂ Ｐ Ｓ缓 冲 液冲洗 。Ｄ Ｂ显 色 ， Ａ 苏木 素复染 ， 用 的 选 抗 体 有 Ｃ ２ 、Ｋ Ｋ ０ Ｃ ７及 １ｒ＿ 等 。以上 试剂均 由北京 中 Ｔ １ Ｆ 山生 物技术开 发公 司提供 。
我 院外 科送 检 的肿瘤 组织 石蜡 标 本 １ ３ ， 中腺癌 ２例 其
１３例 ， 癌 １ 。 １ 鳞 ０例
１ 组 织处理 ． ２ 所有 标本 经 ４ ％的甲醛 固定 ，正常组 织 处理 ， 石蜡 包埋 ， 常规 切片 ＨＥ染 色 。 并
１ 组织芯片的基本制作过程 ． ３
① 自制打孔针和取
尝试手工方法制作组织芯片，并取得了较好 的效果 ，
现介绍 如下 。
１ 材料 与方法
的组织蜡芯 ， 作为阳性对照 ， 选用食管鳞癌作为阴性 对照 。⑤ 组织芯 片的表 面平整 ： 在微 阵列 排好 以后 ， 可 以发现样本高低不平 ，此时可 以将受体石蜡块放在 ６ ℃的烤 箱 中 １ ～ ５ ｉ ，然 后 用一 个 载玻 片下 压 平 ０ ０ １ｍｎ 整， 注意要均匀下压［ ３ １ 。⑥受体蜡块与组织蜡芯的融 合 ：将 做好 的蜡 块 有组织 的一 面朝 下 放人模 具 内 ， 置
织片整齐地排列在载玻片而成的微缩组织切片，由美
国国立癌症 研究院的 Ｋ ｎｎｎ等Ｉ １９ 年首 次报 ｏｏｅ ９８ 于 道 。 是继 基 因芯 片 、 白质 芯片之 后 出现 的又一 种重 它 蛋 要的生物芯片技术 。 由于该技术制成的切片体积小， 信
息含 量 大 ， 以进 行 ＨＥ染色 、 殊 染色 、 疫组 织 化 可 特 免
［ ］ 陈文 清， ３ 李建军 ， 王澄泉 ， Ｃ 及 Ｍ Ｉ 宫外孕 的诊断价值［ ． 等．Ｔ Ｒ对 Ｊ． ］
中华 医 学 研 究 杂 志 ，０ ３ ３ ８ ：４ － ４ ． ２ ０ ，（ ）７ ０ ７ １
［ ］ 张启瑜 ， ４ 钱礼． 腹部外科学［ ． Ｍ］ 北京 ： 民卫生 出版社 ，０ ６４ １ 人 ２０ ：０ —
但 异 位妊 娠 患者 常有 明确停 经史 ， 痛性 质 是 先 有下 腹
腹 隐痛 后 出现下 腹 撕 裂 样 疼 痛 ， 蔓 延 至 全 腹 ， 渐 阴道
常有不规则流血 ，可伴有蜕膜管型或蜕膜碎片排 出。
本 组 ５例 否 认 停 经 史 ， 患 者 使 用 宫 内 节 育 器 ５例 （Ｕ ； 例 患者未 婚伴 阴道不 规则流 血史 为 陈 旧性 宫 ＩＤ）１
误诊 。
腹 症 的检查 。文献报 道认 为 ， 只要 严格掌 握适 应症 、 禁
忌症及操作规范， 阳性率和正确率可达 ９％以上ｌ 其 ０ ５ Ｊ 。 综 上所 述 ，为 避免 将妇 科 急症误 诊 为 阑尾炎 ， 应 注意以下几点 ： ①对 右下腹痛的妇女 ， 除考虑 阑尾炎 外， 应想到有妇科急症的可能。②仔细询问妇科病史 ， 作妇 科 检查 ，是 避 免误 诊为 急性 阑尾 炎 的重要 措 施 。 ③盆腔 Ｂ超对该病 的鉴别诊断有一定的帮助 ， 对女病
参 考 文献
［ ］ 魏 启蒙 ， １ 童德敏 ． 女性右下腹痛误诊 为急性 阑尾 炎 ｌ 例分 析［ ＿ １ Ｊｌ ］ 中国现代医生 ，０ ７４ ， １ ） １８ ． ２０ ，５ （３ ：０ ９ ［ ］ 丰有吉 ， ２ 沈铿． 妇产科学 ［ ． Ｍ］ 北京 ： 民卫生 出版社 ，０ ５ ２ ９ 人 ２ ０ ：７ ．
文献标识码： Ａ 文 章编 号 ：０４ ２ ２ ２ １） ２ ０ ８ — ４ １０ － ７５（０ 】 ０ － ０ ５ ０
组 织芯 片（ｉ ｕ ｈｐ ／． 组织微 阵￣ （ｉ ｕ — ｔｓｅｃｉ）． ｓ ￣称 ｌｔｓｅｍｉ Ｊ ｓ ｃｏｒ ｙ ＭＡ）是 将数 十个 、 百个乃 至数 千个 小 的组 ｒａｒ ａＴ 。 数
人 应仔 细询 问月 经史 及结 婚 生育史 ， 对有 恶 心 、 吐 、 呕 下腹 痛伴 停 经或 月 经不 正 常 的育龄 女 性 应将 Ｈ Ｇ和 Ｃ
３ 疼 痛特 征 ． ４
右侧 输 卵管妊 娠 引起 的下 腹 疼痛 、 恶
心 、 吐及 肛 门坠胀 甚 至休 克 ， 时易与 阑 尾炎 混 淆 。 呕 有
并 将其 末 端 磨 圆 ， 实性 针 芯 末 端磨 平 ， 于 打 孔及 钻 便
取蜡块后将穿刺针内的蜡芯完整推出。②收集和选择
病例 ： 首先 根 据研究 课 题 收集 和选 择病 例 。 复查 组织 切片 ， 审查 病理 诊 断 ， 记 组织 中的靶 点 （ 标 肿瘤 组 织密
集处 ） 并在 切 片上画 圈标记 。选 择相 应组织 蜡块 （ 称为
人 ６％烤 箱 内 １ ， 两 者重 新溶 为 一体 ， 这 个过 程 ０ ｈ使 在 中 ， １ｍｉ 每 ｎ观察 一次 ， ０ 既要保证 组织芯 和蜡融合 在一
起 ， 要 防止 Ｔ Ａ蜡块 完全 溶 解 、 又 Ｍ 组织 排列 混 乱而 无
１１ 标 本 来 源 收集 ２０ ． ０ ８年 １月 一 ０９年 １ 间 ２０ ２月
免麦 氏切 口， 以免增加手术及处理的难度１ ７ １ 。⑤急性右 下腹 痛 系 多种 疾病 的共 同症状 ， 根据 腹 痛 的性 质 和 应 特点 ， 认真收集资料 ， 进行全面综合分析 、 动态观察 、
完善 三 级查 房制 度 及请 相关 科 室会 诊 ，使 诊 断 准确 、
从而 在术前 明确 诊断 。