卵黄抗体的研究进展
卵黄抗体在疾病防治中应用的研究进展
卵黄抗体在疾病防治中应用的研究进展安芳兰;李菁;张荣;武发菊;武永淑;董文教;马全英;王凡;刘学荣【摘要】卵黄抗体是一种多克隆抗体,由禽类经特异性抗原刺激后通过B淋巴细胞产生并运行至卵黄中所形成,具有强大的免疫功能.对卵黄抗体的结构特点、理化性质、作用机理及其在各类动物疾病治疗预防方面的应用进行了综述,并指出了目前存在的问题.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2016(000)005【总页数】4页(P68-71)【关键词】卵黄抗体;免疫;疾病治疗;应用【作者】安芳兰;李菁;张荣;武发菊;武永淑;董文教;马全英;王凡;刘学荣【作者单位】中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州 730046【正文语种】中文【中图分类】S855.3Abstract Egg yolk antibody is a kind of polyclonalantibody by specific antigen stimulation of poultry, which is produced by B lymphocyte and migrated to the yolk of polyclonal antibody, with a strong immune function. In this research, we reviewed the application of structural characteristics, physicochemical property and action mechanism of egg yolk antibody in prevention treatment of animal disease. The existing problems were pointed at present.Key words Egg yolk antibody; Immunity; Disease treatment; Application卵黄抗体(IgY)又称为卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin),是禽类经特异性抗原刺激,由B淋巴细胞产生并移行至卵黄中的多克隆抗体,大多数为IgG,具有强大的免疫功能。
鸡卵黄抗体及其在养猪业中的应用研究进展
性、 柔韧性 下 降而 稳定 性 较高 , 等 电点 接近 5 . 2 。
I g Y中 C u 3和 C u 4区 与 哺 乳 动 物 I g G 的 C 7 2 和 C ' / 3具 有 同 源 性 ;C u 2是 I g G 的枢纽 区, 但 它 在
I g Y 中没有 得 到充分 进化 。I g Y 中这 种不 发 达 的 枢 纽 区造成 了 F a b的低 活性 , 这 可能是 I g G与 I g Y某 些差 异 的原 因 。尽 管 I g Y与 I g E和 I g M 有 相 似 的
用、 制 备 方便 、 经 济 优 势 明显 等 特 点 , 近 年 来 在 人 类 和 畜禽疾 病 的诊 断 与 防 治_ 1 ] 、 医药 和 生 物 技 术 等 领 域发 展 较快 。我 国是 一 个 养 猪 大 国 , 每 年 在 猪 病 的 诊断、 治疗、 预 防方 面 花费 巨大 。药 物 防治 不 仅 代价 较高, 而且长 期 使 用 或者 使 用 不 当还 容 易 产 生 耐 药
l I g Y 结 构 和 理 化 特 性
1 . 1 I g Y 的 结 构
鸡 的免 疫 系统 包 括 中枢 免 疫 器 官 ( 法 氏囊 和胸
腺) 和 外周 免疫 器 官 ( 脾、 淋 巴结 、 骨髓等 ) 。 当机 体
受 到外 来抗 原刺 激 后 , B细胞 接 受 抗 原 刺 激 分 化 成
1 . 3 I g Y 优 势
子质量 约 6 7 k u , I g Y轻链包括 1 个 可 变 区和 1个
恒定 区 , 重 链 有 1个 可 变 区 , 4个 恒定 区 ( C v l ~
免疫鸡卵黄抗体的形成
免疫鸡卵黄抗体的形成卵黄抗体(IgY)指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体。
自1893年Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来,卵黄抗体的研究不断深入,目前在卵黄抗体的形成、生物学特性等方面已研究得比较清楚,并且卵黄抗体作为诊断试剂和防治药物的研究愈来愈受到关注。
本文就免疫鸡卵黄抗体的研究进展作一综述。
1、卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫,分别受胸腺和法氏囊的控制。
当机体受到外来抗原刺激后,法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞,分泌特异性抗体进入血液循环,当血液流经卵巢时,特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积,形成卵黄抗体;当卵细胞分泌进入输卵管时,流经输卵管的血液中含有的特异性抗体(主要是IgA和IgM)进入卵清中,形成卵清抗体。
IgG移行进入卵细胞是受体作用的结果,因而IgG可在卵细胞中大量蓄积,浓度高于血液中的IgG。
与卵黄抗体相比,卵细胞在输卵管中移行的时间较短,因而卵清抗体含量极微。
卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液,为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护,在雏鸡疾病预防中具有重要作用,但同时也会干扰鸡疫苗的免疫效果。
2、IgY的性质IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180KDa,由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成,分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。
其等电点约为5.2。
IgY与一般哺乳动物IgG相比,IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。
在低于75℃条件下,IgY具有良好的热稳定性。
IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降,65℃时可保持24h以上,70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃,30min条件下巴氏消毒不影响IgY;高于80℃,大部分IgY失去活性。
IgY在pH4.0-11.0时比较稳定,pH3.0-3.5时活性迅速下降,pH12时活性亦有所下降。
IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力,但对胰蛋白酶十分敏感。
卵黄抗体可行性研究报告
卵黄抗体可行性研究报告一、研究背景卵黄抗体是动物免疫学中的一种重要抗体,它可以被用来检测特定的抗原,也可以用来治疗一些疾病。
随着科学技术的进步,人们对卵黄抗体的研究也越来越深入,目前已经在一些医学领域得到了广泛应用。
在这种背景下,对卵黄抗体的可行性进行深入研究,将有助于促进其在临床应用中的进一步发展。
二、研究目的本次研究旨在探讨卵黄抗体在临床应用中的可行性,包括其在治疗和诊断领域的应用潜力,以及相关技术和生产工艺的研究现状。
通过该研究,将为卵黄抗体的进一步应用提供可靠的科学依据。
三、研究内容1. 卵黄抗体的生物学特性和应用潜力通过文献调研,归纳总结卵黄抗体的生物学特性,包括其来源、结构、功能等方面的信息。
同时,分析卵黄抗体在治疗和诊断领域的应用潜力,探讨其在不同疾病治疗和疫苗生产中的优势和局限性。
2. 卵黄抗体生产技术的研究现状对卵黄抗体的生产技术进行详细的调研和整理,包括克隆技术、重组技术、基因工程技术等方面的研究进展。
重点关注新技术在提高卵黄抗体生产效率、降低生产成本等方面的应用情况。
3. 卵黄抗体在临床应用中的案例分析通过查阅相关文献和临床报道,总结和分析卵黄抗体在临床应用中的成功案例,包括其在治疗癌症、传染病和疫苗生产中的应用情况。
通过案例分析,评估卵黄抗体在临床应用中的可行性和前景。
四、研究方法1. 文献调研法通过检索相关数据库和文献,收集和整理卵黄抗体的生物学特性、生产技术和临床应用方面的资料,并进行系统综合分析。
2. 实验研究法在对卵黄抗体的生物学特性和生产技术进行综合分析的基础上,开展相关实验研究,验证其在临床应用中的可行性。
3. 案例分析法通过查阅临床案例和相关文献,对卵黄抗体在临床应用中的效果进行案例分析,以验证其在临床应用中的可行性。
五、预期成果通过本次研究,预期取得以下成果:1. 归纳总结卵黄抗体的生物学特性和应用潜力,为其在临床应用中的进一步开发提供科学依据;2. 分析卵黄抗体生产技术的研究现状,为技术改进和提升生产效率提供参考;3. 总结并分析卵黄抗体在临床应用中的成功案例,评估其在不同领域的可行性和前景。
鸡卵黄抗体研究进展
鸡卵黄抗体研究进展张绍兰(成都医学院病原生物学教研室,四川成都610083) 【关键词】 鸡;卵黄抗体;研究进展 【中图分类号】 R-33 【文献标识码】 A 【文章编号】 167227193(2008)0320120202 抗体(免疫球蛋白,Ig)是指机体受到外来抗原物质刺激后,B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。
经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体,有研究证实[1],产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用,使其不断储存于卵黄中,这种抗体称为卵黄抗体(Immunoglobulin of y olk,IgY),卵黄抗体是当今生物科学研究领域的一项重大发现。
自1893年K lemperer首次报道鸡蛋中存在抗体以来,卵黄抗体的研究不断深入,本文就免疫鸡卵黄抗体的研究进展综述如下。
1 IgY的性质和特点111 IgY的性质 IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。
正常鸡IgY的分子量约为180K Da,由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成,分子量分别为60-70K Da和22-30K Da。
其等电点约为512。
随着研究的深入,更多的以为IgY可能是哺乳动物的IgG 和IgE的祖先[2]。
IgG和IgY在结构上有较多差异,IgY的重链有1个可变区,4个稳定区(Cv1-Cv4),无铰链区,而哺乳动物IgG只有3个稳定区(Cγ1-Cγ3)。
最近研究表明[3],IgY的疏水基团多于IgG,比较IgG和IgY的C-端序列发现,IgG的Cγ2和Cγ3区与IgY的Cv3和Cv4区十分相似。
112 IgY的特点 由于禽类与哺乳动物生物系统发育的差距,两者的亲缘关系较疏远,哺乳动物的蛋白质抗原在禽体内更易产生特异性较高的抗体,所以IgY的生化特性优于哺乳动物抗体[4]。
许多研究表明[3,5],IgY不能活化哺乳动物的补体系统,不与血清中存在的类风湿因子(RF)起反应,不与蛋白质A和G 起反应,不影响哺乳动物IgG发挥作用,且不与哺乳动物的Fc 受体起反应。
基于动物疾病防治中卵黄抗体的应用研究
X u m u s h o u y i通常情况下,对于卵黄抗体性能来说,呈现出良好的稳定性特征,可以在受到病毒、细菌影响导致的疾病防治过程中发挥出很大的作用,具有的优势十分明显。
得益于现阶段医学技术、治疗方案的快速进步影响,使卵黄抗体得到了很大的关注与重视,有利于增强动物疾病防治工作的实际效果。
实际上,生产卵黄抗体的经济成本较低,能够达到更多的产量。
通过合理运用卵黄抗体,能够获得更多的经济收益,提升了动物疾病防治工作的效率。
一、卵黄抗体获取的说明对于卵黄抗体而言,存在于很多两栖动物、爬行动物以及鸟类等动物的卵黄中,其中包含了免疫球蛋白。
由于被抗原所干扰,使动物体中的免疫细胞得以被激活,让免疫球蛋白开始分泌,产生相应的抗体。
鉴于抗体的特异性特征十分明显,在动物体中容易被抗原、抗体之间的融合所干扰,形成了一定的免疫功能。
如果动物机体受到异物伤害的时候,将使免疫功能日渐消失,让动物机体的情况处于被监控的状态。
比如,存在微生物、寄生虫,在异物中形成的毒素能够实现中和,保证动物机体的健康,并形成相应的卵黄抗体。
例如,对于母鸡来说,抗原得到刺激作用影响之后,使母鸡的体中产生了抗体,将免疫球蛋白的特异性存储并转移至卵黄当中,产生相应的卵黄抗体。
由此可见,卵黄抗体的效果非常明显,不但耐热性与活性良好,而且拥有较强的抵抗力与温度适应能力,而酸碱值也非常稳定。
并且,卵黄抗体获得的经济成本是较低的,母鸡在饲养的时候十分简单,处于很短的生长周期中,通过得到卵黄抗体能够规避采集血液的情况,有助于控制卵黄抗体的成本,提高对相关资源的利用率,不再受到空间、时间方面因素的束缚,完成了抗体采集的任务。
二、动物疾病防治中卵黄抗体的具体应用1、注重卵黄抗体在细菌感染方面的防治运用将卵黄抗体运用到细菌感染防治过程中,以病原菌的细胞壁作为主要的位置,实现和卵黄抗体有效粘附结合,让病原细胞缺失一定的完整性,并且妨碍到病原菌的生长情况。
与此同时,细菌菌毛上同样包含了卵黄抗体,如此可以使细菌带给肠道黏膜上皮细胞的伤害减小。
卵黄抗体的应用研究进展
卵黄抗体的应用研究进展【摘要】卵黄抗体又称“卵黄免疫球蛋白(IgY)”,具有强大的免疫功能,目前研究最多、应用最广的是鸡源IgY。
卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点,近年来逐渐引起学者的注意,在生物技术、医药卫生、食品科学等方面应用越来越广泛。
随着特异性IgY研究的日益深入,在各个领域显示出令人振奋的应用前景。
【关键词】卵黄抗体;诊断;治疗卵黄免疫球蛋白(egg yolk immunoglobulin)简称IgY,是从免疫后的禽蛋卵黄中提取出的针对某种特定抗原的抗体,多数为IgG,具有强大的免疫功能,因此又称之为“卵黄抗体”。
目前研究最多、应用最广的是鸡源性的卵黄免疫球蛋白。
鸡源性特异性IgY的制备先根据需要选定抗原对产蛋母鸡进行免疫,之后在蛋黄内就会产生抵抗该特定抗原的特异性抗体。
IgY抗体的获取无需采血,只需收集免疫蛋鸡产下的鸡蛋即可大量制备质量均一的特异性抗体[1]。
自20世纪50年代,研究学者就发现鸡卵黄中存在大量抗体,含量与鸡血清中的相当甚至更高;之后随着诸如标准IgY商品试剂的生产、IgY特异性纯化试剂盒的面市,开创了卵黄抗体应用的新时代。
1996年,IgY抗体的生产和应用技术被统称为“IgY技术”[2],现在它已被列为一个国际化的标准应用技术。
另外由于亲缘关系较远以及结构差异,禽类的IgY与哺乳动物免疫球蛋白之间血清学鉴定不会发生交叉反应[3],这进一步扩展了IgY的应用范围。
近年来卵黄抗体以其化学性质稳定、制备简单、使用方便、成本低廉等优点,逐渐引起人们的注意,在医药卫生、食品科学、生物技术等方面的应用越来越广泛。
1 IgY在医学疾病诊断方面的应用1.1 细菌性疾病的诊断Kim等人用单核李斯特菌的鞭毛蛋白作为抗原免疫蛋鸡,制备抗鞭毛蛋白抗原的特异性IgY,并通过ELISA法以抗鞭毛蛋白的单抗为包被抗体、特异性IgY 为检测抗体进行该菌的检测,结果显示此特异性IgY的敏感度高,特异性强,并且不与其它菌种发生交叉反应[4]。
卵黄抗体提取实验报告(3篇)
4. 本实验结果可为后续卵黄抗体提取工艺优化提供参考。
七、实验结论
通过本实验,成功提取了卵黄抗体,为后续的免疫学研究和应用奠定了基础。实验结果表明,酸沉淀法提取卵黄抗体是一种简单、高效的方法,具有较高的实用价值。
八、实验注意事项
1. 实验过程中,注意无菌操作,避免污染。
第1篇
一、实验目的
本实验旨在学习并掌握卵黄抗体的提取方法,通过实验操作,了解卵黄抗体的特性和提取过程中的关键步骤,为后续的免疫学研究和应用提供基础。
二、实验原理
卵黄抗体是禽类蛋黄中的一种免疫球蛋白,主要成分为IgY,具有广谱的免疫保护作用。本实验采用酸沉淀法提取卵黄抗体,通过酸化卵黄液使蛋白质变性,进而沉淀出抗体。
三、实验材料
1. 材料:
- 新鲜鸡蛋
- 生理盐水
- 0.2mol/L的醋酸溶液
- 5%的碳酸钠溶液
- pH计
- 离心机
- 容量瓶
- 烧杯
- 移液器
- 玻璃棒
- 研钵
- 研钵杵
- 酸碱指示剂
2. 试剂:
- 生理盐水
- 0.2mol/L的醋酸溶液
- 5%的碳酸钠溶液
- pH计校正液
四、实验方法
1. 鸡蛋处理:
- 将新鲜鸡蛋洗净,去壳,取蛋黄。
- 将蛋黄放入研钵中,加入适量的生理盐水,用研钵杵充分研磨,制成蛋黄匀浆。
2. 酸沉淀法提取卵黄抗体:
- 将蛋黄匀浆转移至烧杯中,用移液器加入适量的0.2mol/L的醋酸溶液,使pH值降至4.5-5.0。
- 用玻璃棒轻轻搅拌,观察蛋白质的沉淀情况。
- 将烧杯放入离心机中,以3000r/min的速度离心10分钟。
卵黄囊抗体制备及其应用研究进展
【关键词】卵黄囊抗体卵黄囊抗体即卵黄免疫球蛋白(Egg Yolk Immunoglobulin,IgY)是抗原免疫禽类后由卵黄中分离得到的特异性抗体。
与哺乳动物来源的IgG比较,卵黄囊抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高,同时具有特异性高、稳定性较好等优点,在疾病诊断、防治等诸多方面得到了广泛的应用,一直是生命科学相关科研领域的研究热点。
本文就卵黄囊抗体的分离纯化方法及其应用研究进展作一综述。
1 卵黄囊抗体的基本结构及其性质与哺乳动物血清免疫球蛋白相似,卵黄囊抗体的基本结构包括2条轻链和2条重链,分子量约为180kD。
卵黄囊抗体的疏水性大于IgG。
Lee和Kim等〔1,2〕研究表明,卵黄囊抗体具有良好的稳定性,对pH及酶等作用引起的失活效应有较强的抵抗力。
2 卵黄囊抗体的制备21 实验动物的免疫 Schwarzkopf等〔3〕研究结果表明:经皮下注射的方法比肌肉注射能产生更高滴度的抗体,免疫间隔时间对抗体的产生影响较大。
通常,初次免疫与第一次加强免疫之间的时间间隔至少4周。
另有研究分别于第0d,10周及15周免疫产蛋鸡,获得了高达1∶160000的抗体滴度。
22 卵黄囊抗体的分离从卵黄液中分离卵黄囊抗体的关键是除去卵黄中高含量的脂肪及脂蛋白,以获得水溶性组分(Water Soluble Fraction,WSF)。
根据纯度要求、技术工艺以及对环境的影响等因素,可以选择不同的分离方法。
常见分离方法包括以下几种。
221 水稀释法先将卵黄液用蒸馏水稀释10倍,调整pH值至50~52,4℃静置6h以上,上清液即为水溶性组分。
水稀释法工艺简单,若采用适当的方法进行纯化,可获得较高的回收率和纯度。
222 有机物沉淀法聚乙二醇(PEG)法是较常用的方法。
Bizanov和Normantiene〔4〕用仙台病毒免疫产蛋母鸡,收获高免鸡蛋。
以TBS作为缓冲液,将卵黄液稀释4倍后,加入35%的聚乙二醇6000,沉淀脂类,卵黄囊抗体保留在上清液中。
卵黄抗体可行性报告
卵黄抗体可行性报告一、引言卵黄抗体是一种针对卵黄蛋白所产生的抗体,其在生物医学领域具有广泛的应用前景。
卵黄抗体可作为一种重要的生物治疗药物,用于预防和治疗相关疾病,同时也可在食品安全领域起到重要作用。
本报告将探讨卵黄抗体的可行性,包括其生产技术、应用领域和潜在市场。
二、卵黄抗体的生产技术卵黄抗体的生产主要依赖于动物体内或体外的免疫反应。
在体内免疫的情况下,动物被注射卵黄蛋白后,机体会产生抗体以应对外源抗原。
而在体外免疫的情况下,通过离心、沉淀、纯化等技术手段从动物血清中提取卵黄抗体。
目前,体外免疫技术更为常用,因其操作简便、效率高、产量稳定。
三、卵黄抗体的应用领域1. 生物治疗卵黄抗体在生物治疗领域具有广泛的应用前景。
其可以用于治疗自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等疾病。
通过调节免疫系统、清除有害物质、抑制炎症反应等机制,卵黄抗体为治疗多种疾病提供了新的思路和方法。
2. 食品安全卵黄抗体也可以用于食品安全领域。
在食品生产过程中,可能存在卵黄蛋白残留或被掺杂的情况,而卵黄抗体可以被用来检测和清除这些残留物,保障食品的安全和品质。
四、潜在市场分析1. 生物治疗市场随着人们对生物治疗的需求不断增加,卵黄抗体作为一种新型的生物治疗药物,具有较大的市场潜力。
尤其是在自身免疫性疾病、感染性疾病等领域,卵黄抗体有望成为重要的治疗手段。
2. 食品安全市场在食品安全领域,卵黄抗体的应用也具有广阔的市场前景。
随着人们对食品安全的重视程度不断提高,对于能够检测和清除有害物质的技术需求也在增加,卵黄抗体可以填补这一市场空白。
五、结论综上所述,卵黄抗体作为一种新型的生物治疗药物和食品安全技术,在生物医学领域具有广阔的应用前景和市场潜力。
通过不断优化生产技术、拓展应用领域,卵黄抗体有望成为未来生物科技领域的重要产物,为人类健康和食品安全做出积极贡献。
卵黄抗体应用研究进展
20 0 2年
第2 3卷
第 1 ( 第 1 7期 ) 期 总 1
卵 黄 抗 体 应 用 研 究进 展
王 刚 , 殿 红 吕
( 东省农业科 学院兽 医研 究所 , 东广 l 5 0 d ) 广 广 州 1 6 O
中 围 分 类 号 : 8 2 4 ¥ 5. 3 文 献标 识 码 A
1 卵黄抗体 在禽病 防治上 的应用
预 0 8 治愈 率 9 . 。 52 目前 国 内广 泛 应 用 的 有 抗 传 染 性 法 氏 囊 病 、 鸡 治疗 . 防 保护 率 9 . . 抗 新 城疫 、 鸭病 毒 性肝 炎 、 抗 抗小 鹅 瘟 、 番 鸭细 小 病 毒 、 抗 鸭 病 毒 性 肝 炎 ( VH) 一 种 高 致 死性 的 急 性 传 D 是 抗 鸡 减 蛋综 合 征 卵黄 抗体 。 此外 还 有抗 鸡 脑 脊髓 炎 病 、 染 病 , 卵黄 抗 体在 防治 该病 中 起到 了积 极 的 作用 。 究 研 抗 鸡 病 毒 性关 节 炎 、 鸡 传染 性 喉气 管炎 高 免 卵 黄 抗 表 明 一 应 用 卵黄 抗 体 治疗 D 抗 . VH 的疗 效 取 决 于 卵黄 抗 体 , 抗 鸭疫 里 氏杆 菌 病等 卵黄抗 体 。 黄抗 体 还被 应 体 的 中 和效 价 及 治疗 时 间 , 黄抗 体 的 中 和效 价 达 2 及 卵 卵 用 到一 些 疑似 病 、 病 的 防治 研究 中 。 新 以上 , 疗 的 最佳 时 问 应 在 D} 进 入 鸭 体 后 的 2 治 Ⅳ 8h
文 童 编 号 : O 7 5 3 ( 0 2 Olo 6 o l O 0 8 2 0 ) — o1 一 3
摘 要 : 黄 抗体是 当今 生物 科 学研 究 中的一 卵 个 重 大发现 , 具有 价 格便 宜、 作 简单等优 点 , 制 人们对 它的研 究越 来越 多, 用也越 来越 广 泛 。 应 本文介 绍 了近 年来 卵黄抗体 在 家禽 、 家畜 、 水产 等养 殖 业方 面的应 用研 究进展 , 出 了存 在 问 提
免疫鸡卵黄抗体的形成
通过遗传育种技术,培育出产卵量大、抗体产量高的免疫鸡品种, 提高抗体提取的产量。
免疫方案优化
研究最佳的免疫方案,包括抗原剂量、免疫途径、免疫次数等,以 提高卵黄抗体的产生效率。
卵黄抗体稳定性与保存的研究
01
卵黄抗体稳定性机 制研究
深入探讨卵黄抗体在鸡卵中的稳 定性机制,为提高抗体稳定性提 供理论依据。
亲和层析
利用抗原与抗体之间的特异性结合,通过亲和层析柱分离纯化抗体。
凝胶过滤层析
将卵黄抗体通过凝胶过滤层析柱,根据抗体的大小进行分离纯化。
卵黄抗体的质量检测
免疫电泳
将卵黄抗体进行电泳分离,观察其迁移率,判断抗体 的纯度和类型。
蛋白质浓度测定
通过测定卵黄抗体的蛋白质浓度,评估其浓度和纯度 。
生物活性检测
特性
卵黄抗体具有高度的特异性,能 够与相应的抗原结合,具有治疗 和预防疾病的作用。
卵黄抗体的应用领域
疾病治疗
卵黄抗体可用于治疗某些感染性 疾病和自身免疫性疾病,如霍乱 、沙门氏菌感染等。
疫苗佐剂
卵黄抗体可以作为疫苗佐剂,增 强疫苗的免疫效果,提高接种人 群的免疫保护水平。
食品安全
卵黄抗体可用于检测食品中的病 原微生物,保障食品安全和消费 者健康。
抗体运输
分泌的抗体通过血液循环系统运输到全身各处,发挥免疫效应。
03
免疫鸡卵黄抗体的提取与纯化
卵黄抗体的提取
离心法
将免疫鸡的卵黄进行离心处理,分离出 上清液和蛋黄膜,取上清液进行抗体提 取。
VS
酶解法
使用特定的酶处理卵黄,使抗体从蛋黄膜 中释放出来,再通过离心分离得到抗体。
卵黄抗体的分离与纯化
被激活的B淋巴细胞进行快速有丝分 裂,形成大量具有相同抗体基因型的 B淋巴细胞克隆。
卵黄抗体的制备实验报告
卵黄抗体的制备实验报告
实验目的:
本实验旨在制备出卵黄抗体,为后续的生物学研究提供基础。
实验原理:
卵黄抗体是指针对卵黄中特定抗原的抗体。
制备卵黄抗体的过程中,首先需要将卵黄分离出来,并进行纯化处理。
接着将纯化后的卵黄制成免疫原,并将其注射到动物体内,使其产生相应的抗体。
最后,用相应的方法将卵黄抗体分离出来。
实验步骤:
1.卵黄的分离与纯化
将新鲜鸡蛋打开,分离出卵黄,并将其放入离心管中。
然后,用生理盐水将卵黄稀释,离心,去除卵黄中的杂质。
最后,用离心法或沉淀法将卵黄纯化。
2.卵黄免疫原的制备
将纯化后的卵黄用PBS缓冲液稀释至适当浓度,加入适量的胶体铝溶液并搅拌混合,静置一段时间,使胶体铝与卵黄充分结合。
最后,用PBS缓冲液将其稀释至适当浓度,以备注射。
3.动物的免疫注射
将制备好的卵黄免疫原注射到小鼠或兔子等适宜的动物体内。
注射后,需要进行多次免疫,以增强动物产生抗体的能力。
4.卵黄抗体的分离
将免疫动物的血清收集,离心去除红细胞,得到血清。
接着,用卵黄抗原进行免疫沉淀或免疫吸附,分离出卵黄抗体。
实验结果:
经过以上步骤,我们成功制备出了卵黄抗体,并用酶联免疫吸附实验对其进行了检测。
检测结果显示,卵黄抗体的纯度和活性均较高,可以用于后续的生物学研究。
实验结论:
本实验成功制备出了高纯度、高活性的卵黄抗体,为后续的生物学研究提供了基础。
同时,本实验也展示了免疫学的基本原理和操作方法,对我们深入了解生物学研究具有重要意义。
卵黄抗体在水生动物疾病防治中的研究进展
卵黄抗体在水生动物疾病防治中的研究进展
郑杰民;游剑涛;吴亮;林嘉铭;何艺宾;徐斌;薛海波
【期刊名称】《渔业研究》
【年(卷),期】2024(46)2
【摘要】卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY)因在水生动物疾病中具有被动免疫疗效而受到广泛的关注。
本文综述了IgY基本结构和理化性质的研究进展,重点介绍了IgY在水生动物细菌和病毒感染防控、治疗中的潜在应用,为今后IgY的研究和水产养殖中的应用提供参考。
【总页数】8页(P190-197)
【作者】郑杰民;游剑涛;吴亮;林嘉铭;何艺宾;徐斌;薛海波
【作者单位】厦门海洋职业技术学院;厦门市智慧渔业重点实验室;广东海兴农集团有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S942.3
【相关文献】
1.卵黄抗体在疾病防治中应用的研究进展
2.卵黄抗体在动物疾病防治中的研究进展
3.卵黄抗体提取方法及其在畜禽细菌性肠道疾病防治中的应用
4.卵黄抗体在水产疾病防治中的研究应用进展
5.卵黄抗体在毛皮动物疾病防治中的应用
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鸡卵黄抗体研究进展
最好 选用 近交 系 的 蛋 鸡 。根 据 生 产 Y 的 不 同 目的 选 择 合适
的鸡 群 , 用 于 治 疗 目 的 的 I 的 生 产 应 选 用 S F鸡 , 用 于 如 g Y P 而
预 防 目的 的 I 的 生 产 可 以 选 用 商 用 蛋 鸡 。 使 用 S F鸡 的 优 g Y P 点 是 可 产 生 高 滴 度 抗 体 , 使 用 商 品 蛋 鸡 既 价 格 低 廉 , 可 在 而 又
特 定 抗 原 免 疫 后 的 母 鸡 可 产 生 相 应 的 特 异 性 抗 体 , 研 究 证 有 实L , l 产蛋 鸡 的 卵黄 对抗 体有 浓 集 作 用 , 其 不 断 储 存 于 卵 黄 J 使
2
Y 的 制 备
2. 母 鸡 的 免 疫 1
21 1 实 验 动 物 的选 择 一 般 来 说 , 于 生 产 卵 黄 抗 体 的 鸡 .. 用
WS ) 卵 黄 中 的 主要 成 分 是 蛋 白质 和 脂 肪 , 比 例 约 为 1 2 F。 其 :。 大部 分蛋 白 质 是脂 蛋 白 , 在 于 卵 黄 颗 粒 中 , 溶 于 水 , 有 卵 存 不 只
l 的 分 子 量 约 为 10 D , 8K a 由两 条 轻 链 (L 和 两 条 重 链 ( H) 2) 2 组 成 , 子量 分 别为 6 分 0—7K a和 2 0D 2—3 K a 其 等 电 点 约 为 0D。 52 .。随 着 研 究 的 深 入 , 多 的 以 为 I 可 能 是 哺 乳 动 物 的 I 更 g G 和I g E的 祖先 L 。I 和 Y在 结 构 上 有 较 多 差 异 , Y 的重 链 2 S J  ̄ I g 有 1 可 变 区 , 稳 定 区 ( v —C4 , 铰 链 区 , 哺 乳 动 物 个 4个 C l v )无 而 I g G只 有 3 稳 定 区 ( Z 一C 3 。 最 近 研 究 表 明 E , Y 的 疏 个 C1 Z) 3 I 1s
卵黄抗体的研究进展[1]
第20卷 第3期2003年9月实验动物科学与管理LABORATORY ANIMAL SCIE NCE AND MANAGE MENT Vol.20 No.3September 2003综述#进展卵黄抗体的研究进展黄 莉 赵德明(中国农业大学动物医学院,北京 100094)关键词:卵黄抗体;研究进展中图分类号:S85215 文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2003)03-0039-03收稿日期:2003-03-04作者简介:黄 莉(1978-),女,硕士研究生,研究方向:实验动物病理。
自从1983年,Klemperer 首次报道鸡蛋中存在抗体以来,人们对卵黄抗体(IgY)的研究越来越多,认识也越来越深入,应用也日益广泛起来。
卵黄抗体价格便宜、制备方便,具有其它抗体不可比拟的特点,是当今生物科学研究的一个热点。
1 IgY 与IgG 的区别历史上,曾经有人认为在禽类血清中发现的低分子量(MW)免疫球蛋白是IgG 。
但是研究分析发现禽类血清中的抗体不具有类似于IgG 的50kDa 重链(C )[1]。
所以说禽类血清中的抗体不是I gG 。
现在认为IgY 是禽类血清和卵黄中的主要抗体。
I gG 的重链(C )为50kD,由四个区域组成:一个可变区(V H )和三个恒定区(C C 1-C C 3)。
C C 1与C C 2之间为绞链区,此区域赋予Fab 片断相当大的灵活性。
而I gY 的重链(T )为65kD,包括四个恒定区(C T 1-C 4)和一个可变区,没有绞链区。
IgG 和IgY 的序列比较结果表明,在基因序列上,IgG 的C C 2、C C 3区别分别与IgY 的C T 3、C T 4区域相似,而IgG 缺失IgY 上C T 2的类似区域,取而代之的是绞链区[1]。
此外,序列分析的结果证实了进化系统树中I gY 引起IgG 和IgE 产生的说法。
T 、C 和E 区的序列比较表明三者的相似程度比三者中任一种与L (Ig M)或A (IgA)的相似程度都要高。
卵黄抗体在病毒性疾病中的应用研究进展
疫产 蛋鸡 ,制 备特 异性 I g Y,该 产 品可 以 有效 抑 制 病毒 在 细胞 中的 复 制 ,对 由轮 状 病 毒 和诺 如 病 毒
引起 的腹 泻有 一定 的 防治能力 。
l 2
广 东 轻 工 职 业 技 术 学 院 学 报
第 1 4卷
史 继静 等 。 。 用纯化 的 H I V一1 N C p l 5蛋 白免 疫 产 蛋鸡 ,制备得 到 的 I g Y 具 有 较强 的免 疫 特 异 性 , 能够用 于 H I V一1 病毒 N C p l 5蛋 白 的检测 ,从 而为
不 损 害机 体 正 常 细 胞 ,而 大 多 数 抗 病 毒 化 学 剂 对 细胞 都具 有 较 大 毒 害 作 用 ,不 能 用 于病 毒 性 疾 病
的 防治 。 因此 ,到 目前 为 止 ,用 于 病 毒 性 疾 病 防
治 的药 物很 有 限 ,且 抗 病 毒 药 物 面 临抗 药 性 突 变
( n o r o v i r u s , N o v ) 引起 的 … ,疫苗 不 能有 效 预 防该
病 毒性 疾 病 都 是 由 于 病 毒 引 起 的 ,病 毒 是 严
格 的 寄 生 生 物 ,不 同 于 普 通 微 生 物 ,其 繁 殖 完 全
有 赖 于宿 主 细胞 的 生 物 合 成 ,某 些 病 毒 的 核 酸 直 接 整合 于 宿 主 细 胞 的基 因组 内。抗 病 毒 药 物 应 该
疫抗 原 产生 的特 异性 抗体 。其 制 作 简单 ,价格 相 对低廉 ,在 疾病诊 断 、治疗 、预 防等 方 面 有 着广 泛的应 用。本 文就 卵黄抗 体在 病毒 性 疾病预 防 、治 疗与检 测 中的应 用进 行相 关的探
卵黄抗体在疾病防制中的应用研究进展
卵黄抗体在疾病防制中的应用研究进展亓秀晔;宋翔;王业华;徐海燕;程福亮;谷巍【摘要】卵黄抗体(immunoglobulin of yolk,IgY)是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体,是存在于卵黄中的最主要免疫球蛋白,具有化学性质稳定、产量高、成本低、特异性强且无任何毒副作用等特点;且由于动物种系发生距离远,不会发生交叉血清学反应.IgY在动物及人的疾病防制中具有显著优势.作者对IgY的结构特点、理化性质、作用机理及其在各类动物疾病防制方面的应用及发展前景进行了综述,尤其是在动物疾病的治疗方面,如治疗畜禽腹泻及烈性、急性、危害性大的病毒疫病;治疗人类疾病特别是严重危害人类财产安全的人畜共患病;其他方面如水产、皮毛动物等重大疾病.IgY在有效治疗动物疫病的同时,也减少了人畜共患病的可能,从人身安全方面考虑,也必将具有重大发展前景.%Immunoglobulin of yolk (IgY) refers to the specific antibodies from the immune eggs,is the most important immunoglobulin in the yolk,which has the characteristics of stable chemical properties,high yield,low cost,high specificity and no toxic side effects,there was no cross serological reaction among animals breeds because of a long distance.IgY has a significant advantage in animal and human disease prevention and treatment.In this research,we reviewed the application of structural characteristics,physicochemical property and action mechanism of IgY in prevention treatment of animal disease and developing prospect,especially in the treatment of animal diseases,such as diarrhea and acute treatment of animal spirit,harm,large virus disease;zoonosis seriously endanger the safety of human property;Other aspects such as aquaculture,animal fur and other major diseases.IgY couldeffectively prevent and treat animal diseases,but also reduce the possibility of zoonosis,which will be of great significance for the protection of personal safety.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)009【总页数】6页(P2767-2772)【关键词】卵黄抗体;应用;畜禽疾病;人类疾病;人畜共患病;前景【作者】亓秀晔;宋翔;王业华;徐海燕;程福亮;谷巍【作者单位】山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000;山东宝来利来生物工程股份有限公司,泰安271000【正文语种】中文【中图分类】S852.4卵黄抗体(immunoglobulin of yolk,IgY)是指从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体,是存在于卵黄中的唯一的免疫球蛋白,获取方便,仅需收集免疫蛋鸡所产的鸡蛋,在卵黄中即含有高水平的特异性抗体[1],具有化学性质稳定、产量高、成本低、特异性强且无任何毒副作用的优势;且由于动物种系发生距离远,不会发生交叉血清学反应。
抗缩胆囊素卵黄抗体的制备及应用研究的开题报告
抗缩胆囊素卵黄抗体的制备及应用研究的开题报告题目:抗缩胆囊素卵黄抗体的制备及应用研究一、研究背景胆汁酸是胆汁中的主要成分之一,它能够帮助消化脂肪和吸收脂溶性维生素等营养物质。
而缩胆囊素则是胆汁酸的代谢产物。
缩胆囊素的水平在体内的变化与肝功能和胆道系统有关,因此缩胆囊素的测定对于检测肝胆疾病具有重要意义。
目前,常用的缩胆囊素测定方法包括高效液相色谱法和放射性同位素法等。
这些方法存在一些局限,比如需要复杂的仪器设备、操作复杂等。
因此,研究一种简便快捷、灵敏度高、特异性强的测定缩胆囊素的方法具有重要的研究意义和应用前景。
抗缩胆囊素卵黄抗体就是一种新型的缩胆囊素测定方法。
二、研究目的(1)制备抗缩胆囊素卵黄抗体;(2)对制备的抗缩胆囊素卵黄抗体进行鉴定,并测试其灵敏度、特异性、重现性等性质;(3)建立抗缩胆囊素卵黄抗体的免疫测定方法,研究该方法在人体血清和胆汁样品中的应用价值。
三、研究内容(1)制备抗缩胆囊素卵黄抗体采用多肽合成技术合成缩胆囊素多肽,并将其连接到卵黄蛋白上,制备成抗原。
将该抗原用于兔子免疫,获得抗缩胆囊素卵黄抗体。
(2)抗体鉴定采用酶联免疫吸附试验,对制备的抗缩胆囊素卵黄抗体进行鉴定,并测试其灵敏度、特异性、重现性等性质。
(3)建立免疫测定方法采用建立的免疫测定方法,测定一组人体血清和胆汁样品中的缩胆囊素水平,并与传统的测定方法进行对比分析,评估该方法的应用价值。
四、研究意义(1)开发一种快速、灵敏、特异的缩胆囊素测定方法;(2)为临床诊断和药物研发提供重要的实验工具;(3)推动我国抗体制备技术向高水平前进。
五、研究方法与技术路线1、多肽合成技术2、抗原提取与纯化技术3、兔子免疫技术4、酶联免疫吸附试验5、免疫测定方法的建立技术路线如下:(1)缩胆囊素多肽合成(2)缩胆囊素多肽与卵黄蛋白连接(3)抗原纯化与提取(4)兔子免疫(5)抗体鉴定(6)测定缩胆囊素水平(7)数据分析与比较六、预期结果(1)成功制备抗缩胆囊素卵黄抗体;(2)建立一种快速、灵敏、特异的缩胆囊素测定方法;(3)应用该方法测定人体血清和胆汁样品中的缩胆囊素水平,获得一组实验数据,并进行分析和比较。
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文献综述卵黄抗体的研究进展郑译西南大学荣昌校区动物医学系,重庆,荣昌402460摘要:抗体(免疫球蛋白,Ig)是指机体受到外来抗原物质刺激后,B细胞识别抗原后活化、增殖分化为浆细胞,由浆细胞合成和分泌的能与相应抗原特异性识别和结合的一类球蛋白。
关键词:卵黄抗体;免疫程序;研究进展卵黄抗体(Immunoglobulin of yolk,IgY)经特定抗原免疫后的母鸡可产生相应的特异性抗体,有研究证实[1],产蛋鸡的卵黄对抗体有浓集作用,使其不断储存于卵黄中,这种抗体称为卵黄抗体。
1 卵黄抗体的概念卵黄抗体,英文名(vitelline antibody)定义:从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体,是一种具有较强免疫功能的蛋白质,多为IgG。
禽类免疫后在其卵黄中产生的大量高纯度IgG,其对某些禽类疫病具有明显治疗和紧急预防作用。
卵黄抗体是用特定抗原多次免疫产蛋母鸡,使机体产生相应的特异性抗体,并转移、贮存在卵黄中,经提取纯化的免疫球蛋白卵黄抗体(Egg yolk antibodies eyAb),也称卵黄免疫球蛋白(Egg yolkimmunogbhin,IgY)。
科学家在鸟类的血液循环壁发现三种免疫球蛋白(IgG、IgA 与IgM),母鸡在细胞分裂产蛋的过程中,会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋,母鸡血浆中之IgA与IgM,会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。
IgG:免疫球蛋白G (Immunoglobulin G,IgG)的缩写。
IgG是血清主要的抗体成分,约占血清Ig的75%。
其中40~50%分布于血清中,其余分布在组织中。
IGA:一种免疫球蛋白。
异常情况下,在肾脏受到各种炎症反应刺激等因素下,导致IGA过度沉积在肾脏肾小球系膜区等部位,与抗原一起形成免疫复合物,造成肾脏结构病理损害,引起的一系列临床症状,称为IGA肾病。
IGM:免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,IgM)的缩写。
根据结构的不同将免疫球蛋白分为五种,IgM是三种免疫球蛋白之一,其他还有lgA、lgG、IgD和lgE.。
2卵黄抗体的性质和特点2.1 产量高产蛋母鸡是高效率、高质量IgY的“生产工厂”。
产蛋母鸡经特定抗原免疫后,可产生持久性应答,效价可维持数月至1年以上。
卵黄中IgY的含量超过哺乳动物血清抗体含量。
每个卵黄的IgY含量可达100~250 mg(Leslie等,1969)。
2.2 性能稳定鸡IgY耐酸、耐碱、耐热,理化性质较稳定性。
Larsson等(1993)将IgY制剂在4℃条件下贮存5年或在室温下放置6个月,IgY抗体活性仍无明显下降。
Hatta等(1993)检测了3种主要消化道酶对抗HRV IgY的影响.将胃蛋白酶和IgY在pH=2条件下温育1 h 后,几乎所有IgY均丧失;而在pH=4条件下温育1 h后保持91%的活性,温育1O h后仍有63%的活性。
IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶温育8 h,活性分别保持39%和41%,这说明IgY对这3种酶有一定的抵抗作用。
2.3 安全性高王忠泽等(2002)用治疗剂量(80~300 mg/kg)的1O~4O倍进行试验,没有发现毒性反应。
美国食品和药品管理局(FDA)认为,卵黄免疫球蛋白作为食品比作为药物更有利,并将其列入“一般公认安全物质”范畴。
说明规范生产使用卵黄抗体是安全的。
2-4 免疫测定中干扰小IgY不能识别哺乳动物体内的补体和人Fc受体.不会和类风湿因子及HAMA (人抗鼠抗体)反应。
此外,IgY也不会和IgA和IgG结合,可避免这些因素所造成假阳性或假阴性结果。
2-5易获得,适用性广除上述理化特性外,IgY还有其他重要的生物学特性。
卵黄IgG浓度高于血清IgG,单个卵黄(约15 mL)含100 mg以上的IgY,自卵黄中获得IgY较实验动物血清方便,且免去实验动物采血的痛苦。
Y不与哺乳动物补体、Fc受体结合,也不与葡萄球菌蛋白A(SPA)或链球菌蛋白G(SPG) 结合;IgY还不与血清中的类风湿因子(RF)结合,可提高免疫学检测的准确性。
因而可用IgY检测粪便中的病毒,因为粪便中含有SPA,用IgY检测可避免假阳性结果。
IgY是独特的IgG同种型抗体,同时哺乳动物组织结构较禽类组织具有高度免疫性,IgY用于哺乳动物检测具有明显的优势。
许多高度保守的抗原,在哺乳动物中仅产生极小的免疫原性,却可用IgY进行区分。
因而在许多方面卵黄抗体可替代哺乳动物抗体。
2-6 绿色无害,没有残留IgY是禽蛋中天然存在的一种物质,化学本质是蛋白质,发挥作用后即可被机体作为营养物质分解利用,纯品不会残留任何有害物质。
用IgY抑杀病原体,作用对象直接准确,不会产生广谱抗生素使用后有益微生物也被一起杀死、致使机体内微生物区系失调、引起继发反应的现象;使用IgY治病,病原微生物不会产生抗药性,不存在给动物用药而影响人类药物治疗效果的问题。
多数禽类病原菌对哺乳动物无致病性IgY成为疾病传播媒介的可能性比哺乳动物血清抗体小;与基因工程抗体相比,IgY的生产过程是一个纯天然过程,不需使用肿瘤细胞系等可能造成潜在危险的物质,因此使用禽IgY基因工程抗体更安全。
3.1 制造用鸡的选择选40—50日龄SPF鸡,用通过SPF鸡传代的野毒滴鼻、点眼,每只鸡接种0.2—0.3mL,在48~72h左右死亡的鸡,无菌采集其法氏囊,并作病变观察,将病变典型的法氏囊低温保存备用。
3.2 疫苗免疫通常使用组织灭活苗,其制备过程如下:3.2.1 制苗取lOg病料加10OraL0.5%甲醛生理盐水,匀浆、冻融、过滤,滤液加8%甘油,置37~C18—24h灭活,即为水剂灭活苗,也可加白油等佐剂,制成油乳剂灭活苗。
3.2.2 无菌检验取灭活苗0.5mL接种于普通琼脂斜面及厌氧肉汤培养基各一支,于37~C培养48h,应无菌生长。
3.2.3 安全试验及保护试验经无菌检验合格的灭活苗,肌肉注射、滴鼻、点眼,接种0.3—0.5mL,观察半月,可用1:10强毒0.5mL/只攻毒,观察10~l4天,无发病者为安全有效。
免疫程序:第一次免疫,每只鸡肌肉注射lmL,经7一l0天后进行第二次免疫,每只鸡2mL,7天后用琼脂扩散方法测定IgY效价,如已达到1:64以上,即可收集高免蛋,如效价不高,可隔7—1O天进行第三次加强免疫。
3.3 高免卵黄抗体的制备3.3.1 高免蛋的处理高免蛋用0.I%新洁尔灭溶液浸泡5分钟,洗涤干净,放人无菌室晾干备用。
3.3.2 分离卵黄无菌操作,打破蛋壳,分离蛋黄。
4.3.3 卵黄匀浆收集的蛋黄置无菌的组织匀浆器中,加等量灭菌生理盐水,并按每毫升加入青霉素、链霉素各1000单位,硫柳汞1.O/万,匀浆、过滤,分装消毒瓶内,4℃冷藏备用。
3.3.4 高免卵黄抗体的检验无菌检验:取0.5mL高免IgY,分别接种于普通琼脂斜面和厌氧肉肝汤培养基,37cI=培养24—48小时,应无细菌生长。
安全检验:取30日龄健康鸡1O只,每只鸡肌注IgY2mL,观察5—7天,应无任何不良反应。
卵黄抗体效价测定:用琼脂扩散反应测定,抗体效价应在1:64以上。
1.诊断如上所述,卵黄抗体较哺乳动物抗体具有明显的优势,诸如不与补体、Fc受体、SPA、SPG RF等结合,同时避免动物采血的痛苦,受到实验动物保护者的欢迎。
因而越来越多的人倡议用卵黄抗体取代高免血清,将来会有更多的IgY被用于制备免疫学诊断试剂。
目前国外关于此方面的报道较多,而国内相对较少。
据报道卵黄抗体已在琼脂扩散试验、乳胶凝集试验、荧光免疫试验、ELISA等免疫学试验中应用于检测细菌、病毒、寄生虫、酶、激素、免疫球蛋白、受体、红细胞抗原等。
如Davalos P L等报道利用IgY乳胶凝集方法和IgG蛋白吸附和解吸附、等电点、电动迁移率和胶体稳定性进行比较,证明IgY更有效,IgY比IgG更疏水,而且IgY包被的胶体分散颗粒比IgG更稳定。
Cipolla A等分别利用IgY和IgG检测胎儿弯曲菌,IgY显色背景较浅,两者检测阳性率相近,但IgY比较简单易行。
Staak C所述IgY用于以下常规诊断:(1)通过血蝇昆虫的腹腔血液检测宿主种:(2)利用ELISA检测马媾疣(3)FITC标记Ig 检测狂犬病;(4)FITC标记IgY检测禽病毒病,如NDV/IBV~BDV等。
DuP.DH等利用间接夹 t~'ELISA能检测8 ng非洲马瘟病毒,马瘟单抗包被后加入病毒抗原,然后加入抗马瘟IgY个斗l作为二抗,再加入抗IgY酶标绵技l羊抗体进行检测。
Hommel U 等动I利用鼠IgG或IgM免疫蛋鸡制备I IgY,作为鼠单抗检测中的二抗,Calzado G E 等报道应用抗人IgG的IgY制备特异性的Coombs试剂,利用人红细胞抗原免疫鸡制备IgY用于鉴定人血型系统2.疾病防治卵黄抗体应用于疾病防治的报道较多,范围也非常广泛,在动物、植物和人类疾病防治中均见报道。
(1)禽的病原鉴于卵黄抗体来源于产蛋母鸡,因而卵黄抗体应用于禽病防治是研究最早、应用最广泛的。
国内目前制备的卵黄抗体多数针对禽病防治,主要有抗新城疫病毒、传染性法氏囊病毒、减蛋综合症病毒、鸡脑脊髓炎病毒、鸡病毒性关节炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、小鹅瘟病毒、番鸭细小病毒等。
通常应用卯黄抗体防治的病毒血清型比较单一,卵黄抗体经肌注后吸收进入血液,中和血液中的病毒,达到治疗的目的。
这种被动免疫疗法作用较快,但作用时间短,只能应用于紧急治疗。
在应用过程中应防止卯黄抗体本身携带污染病原,避免使卵黄抗体成为新的传染源。
(2)猪的病原在猪的病原中,目前报道制备卵黄抗体的主要是引起胃肠道疾病的病原,特别是引起仔猪腹泻的病原,如产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、轮状病毒等。
如Yokoyama H等制备的抗ETEC(K88、K99、987P)卵黄抗体;肖池等和李学伍等制备的抗ETEC卵黄抗体;Kweon C等制备的抗PEDV卵黄抗体;本实验室制备的抗ETEC (K88、K99、987P)、TGEV、PEDV混合卵黄抗体。
这些卵黄抗体在实验室和临床试验均证实具有明显的治疗效果。
(3)牛的病原与猪的病原类似,针对牛病原的卵黄抗体主要用于治疗犊牛腹泻。
如Kuroki M 等制备的抗牛轮状病毒卵黄抗体Yokoyama H等制备的抗犊牛沙门氏菌卵黄抗体等。
卵黄抗体I:1服应用于犊牛,能增强犊牛肠道局部免疫力,防治犊牛肠道传染病。
(4)人的病原Sarker SA等制备的针对轮状病毒的卵黄抗体应用于颓生婴儿腹泻的治疗具有明显的效果;Amaral JA等应用卵黄抗体治疗因EPEC病原引起的腹泻;Ji—Hyun Shin 等应用卵黄抗体治疗因幽门螺旋菌引起的胃炎。