乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书
小鼠抗利尿激素(ADH) ELISA 试剂盒说明书

小鼠抗利尿激素(ADH) ELISA试剂盒使用说明书产品编号:E1139m盒的检测范围。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100ul,余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。
每孔加检测溶液A工作液100ul(取1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。
4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100ul,37℃,60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光显色(30分钟以内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50ul,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
在加终止液后15分钟以内进行检测。
注:1.每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2NH2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
2.为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
3. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。
标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
4. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
乙醇脱氢酶法测定血浆中乙醇

乙醇脱氢酶法测定血浆中乙醇西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)345乙醇脱氢酶法测定血浆中乙醇伏建峰,史清海,路西春,高华,丁艳萍(兰州军区乌鲁木齐总医院,新疆乌鲁木齐830000)论着?摘要:目的:建立一种快速测定血浆中乙醇浓度的新方法.方法:选用三(羟甲基)氨基甲烷一盐酸(Tris—HCL)作为缓冲体系,在碱性条件下,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇转化成乙醛,同时生成还原型辅酶I(NADH).在340Bill波长处检测吸光度的变化,对照标准计算乙醇的浓度.结果:ADH最适用量为753KU/L,辅酶I(NAD)最适浓度为60.0mmol/L,检测过程仅需90s,线性范围可达0~68.60mmol/L,变异系数(CV)为2.31%~3.25%,回收率为98.4%~101%,与美国DADE试剂盒比较具有良好的相关,^y:0.985,Y=0.987x+0.024.结论:本法测定血浆中乙醇无需除蛋白,具有快速,简便等优点,可用于自动生化分析仪及手工操作,适于临床常规运用.关键词:实验室诊断;乙醇;乙醇脱氢酶;检测;临床应用中图分类号:R446.1文献标识码:A文章编号:1o07—8622(2005)05—0345—03 Determinationofalcoholinplasmabyalcoholdehydrogenasemethod FUJian—feng,SHIQing—hai,LUXi—chun,eta1.(UrumchiGeneralHospitalofLanzhouCommand,PLA,830000,China)Abstract:0bjective:Toestablishanewmethodforrapidmeasuringalcohol(ALC)inplasma. Methods:(hydroxymethy1)aminomethane—hydrochloride(Tris—HCL)burwasusedinthisstudy.Intheconditionofalkalescence,alcoholdehydrogenase(ADH)catalyzedtheoxidationofALCtoacetaldehyd e,withthesimultaneous productionofdeoxidizednicotinamideadeninedinucleotide(NADH).Thevarianceofabsor bancewasdeterminedbyafilterof340nm.TheconcentrationofALCwascalculatedaccordingtothestandard.Resul ts:ThemostadaptquantityofADHwas753KU/L.andthebestconcentrationoftheNADwas60.0mmoL/L.Itco stonly90Sinthewholereaction.Therangeoflinearitywasfromzeroto68.60mmo1/L.Thecoemcientofva riationfCVindifferentconcentrationswasfrom2.31%to3.25%.Therecoveryraterangedfrom98.4%to10 1%.ComparedwithDADE(America)reagentsmethod,theregressionequationwasobtained.Conclusion: ThisADHmethodfor measuringtheconcentrationofALCinplasmaisrapidandsimplewithoutremovingprotein.I tcouldbeusedboth automaticallyandmanuallyandsuitableforclinicalapplication.Keywords:Laboratorydiagnosis;Alcohol;Alcoholdehydrogenase;Testing;Clinicalappli cation饮酒过量可引起以神经精神症状为主的疾病,称为酒精中毒(alcoholpoisoning)或乙醇中毒(etha.nolpoisoning)….一次饮用大量酒类饮料会对中枢神经系统产生先兴奋后抑制作用,重度中毒可使呼吸,心跳抑制而死亡.鉴于酒精中毒的后果严重,所以迅速测定血浆中乙醇浓度,对早期诊断和处理急性酒精中毒具有非常重要的f临床价值.作者报道一种新的酶终点法测定血浆中乙醇浓度,无需除蛋白,收稿日期:2005—06—23作者简介:伏建峰(1967一),男,副主任技师,Tel:0991—4992736, Email:****************整个检测过程仅需90S,可用于自动生化分析仪及手工操作,适于临床常规运用.1原理选用三(羟甲基)氨基甲烷一盐酸(s—HCL)作为缓冲体系,在碱性条件下,乙醇脱氢酶(ADH)催化乙醇转化成乙醛,同时生成还原型辅酶I(NADH).在340nm波长处检测吸光度的变化,对照标准计算乙醇的浓度.2材料与方法2.1试剂:ADH,辅酶I(NAD)为Sigma产品,三(羟甲基)氨基甲烷(Tris)为国产分析纯.试剂I:346西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)ADH16.8mg溶于10ml重蒸水.试剂II:NAD238.8mg溶于6ml重蒸水.试剂III:Tris10.70g溶于1O0ml重蒸水,检{贝0前与0.1mol/LHCL按5:1(V/V)混合.2.2标准液:分别加入100,200,300和400Ixl无水乙醇到50ml蒸馏水中,制备出的标准液浓度分别为17.15,34.30,51.45和68.60mmol/L,储存于具塞容器中备用.2.3混合血浆制备:采集40位健康体检者肘部静脉血各2ml,NaF抗凝,离心后制备混合血浆.2.4标准血浆:分别加入20,40,60,80l无水乙醇到10ml混合血浆中,混匀.制备出的标准血浆浓度分别为17.15,34.30,51.45和68.60mmol/L,以1m1分装,一20~C储存备用.2.5仪器:XL型生化分析仪(美国杜邦).2.6自动分析参数:反应类型:终点法;反应温度:37~C;波长:340nm(主)/380nm(次);样品3l,试剂I25l,试剂II130Ixl,试剂III340Ixl;反应时间:90s.3实验与结果3.1ADH用量的选择:取ADH(单位:KU/L)活性分别为:27,54,108,215,323,430,538,645,753,860,968的酶工作液分别测定高浓度(51.45retool/ L)的乙醇标准液,图1结果表明,ADH用量在753 KU/L以上最适.3.2NAD浓度选择:在pH10.5,ADH为753KU/L条件下,观察NAD浓度(mmol/L)为10,20,30,40,5O,6O,7O,8O,9O时对反应进程的影响,NAD最适浓度为60.0retool/L.3.3缓冲体系的选择:配制pH9~11的各种缓冲液:甘氨酸一NaOH,KH2PO4一K2HPO4,Na2CO3一NaHCO和Tris—Hcl等,在相同条件下,观察其对反应进程的影响,riffs—Hcl较为适宜.3.4缓冲液浓度及pH的选择:分别配制pH为:8.0,8.5,9.0,9.5,10.0,10.5,11.0的Tris—Hcl溶液,结果显示pHlO.5时较为适宜,同时确定Tris浓度为882.9mmoL/L.3.5反应动力学曲线:选择低,中,高(17.15,34.30,68.6mmol/L)三个不同浓度标准血浆,用本法在XL上观察反应进程,图2结果表明,不同浓度的样品60s内吸光度上升最快,70~80s曲线平缓, 90s后吸光度基本一致,因此选择90s为反应终点时间图2ADH法检测三个不同乙醇浓度标准血浆反应进程曲线3.6线性范围:取浓度为0,17.15,34.30,51.45,68.60mmol/L的标准血浆用本法测定,乙醇在0~68.60rnmol/L范围内线性良好.3.7精密度试验:选择低,中,高(17.15,34.30,51.45mmol/L)三个不同浓度标准血浆,用本法重复测定20次,批内变异系数分别为3.25%,2.31%和2.40%.3.8回收试验::在已知乙醇浓度为20,0rnmol/L的标本内分别加入低,中,高三种浓度(17,15,34.30,51.45rnmol/L)的乙醇标准液,回收率分别为1O0%,101%及98.4%.3.9干扰试验:将同体积蒸馏水和同体积不同浓度的干扰物,分别加入到等体积的混合血浆中,前者为对照样品,其余为含不同浓度干扰物质的检测样品,每个样品重复测定5次,取均值.检测样品与对照样品比较,偏差<±5%,说明该浓度物质对检测无显着干扰.测定结果显示,本法至少能去除30mmol/L的乙醛.此外,胆红素<500ixmol/L,血红蛋白<5g/L,甘油三脂<10.0mmol/L时,测定结果未见明显干扰.3.1O对比试验:选取40份不同乙醇含量的血浆分别用本法与美国DADE试剂盒对比测定,结果经回归分析::0.985,Y:0.987x+0.024.3.1l临床应用:健康体检且无饮酒习惯者40例,清晨空腹采血,用本法测定血浆乙醇含量,结果0西北国防医学杂志(MedJNDFNC)2005Oct.;26(5)347 mmoL/L36例,0.5~1.5mmoL/IA例;交通管理部门送检疑有酒后驾车者27例,血浆乙醇浓度在l0.8—39.0mmol/L,平均为21.4mmol/L,其中24人最终承认饮过酒;酒后反应迟钝并呕吐者8例,血浆乙醇浓度为20.5~39.7mmol/L;酒后昏迷者3例,血浆乙醇浓度分别为55.2,59.1和62.8mmol/L.4讨论ADH法检测乙醇最早由Hadjiioanno提出并沿用至今,传统方法需除蛋白,且反应时间较长(约300s),由于乙醇极易挥发,很难确保其检测的准确性.本法选择Tris—HCL作为缓冲体系,加之选用高活力的ADH,促使样品中有限的乙醇快速转化成乙醛,整个检测过程仅需90s且不用除蛋白,经方法学评价,各项指标均较为满意:线性范围可达0~68.60mmol/L,变异系数(CV)为2.31%~3.25%,回收率为98.4%~101%,与美国DADE试剂盒比较具有良好的相关.ADH工作环境为碱性,甘氨酸一NaOH,KH2PO4一K2HPO4,Na2CO3一NaHCO3和Tris—Hcl 等缓冲体系均可选用.在我们的实验中,甘氨酸一NaOH,KH2PO一K2HPO缓冲体系不甚理想;Na2CO3一NaHCO3和Tris—Hcl缓冲体系较为理想, 由于Na2CO,一NaHCO,缓冲液容易结晶,不利于存储,作者选择Tris—Hcl作为缓冲体系,该缓冲体系含有两性离子,有利于发挥酶的活力.不同文献报道的ADH的最适pH值也有很大差别,范围大致为8.8~10.9L2"J,可能由试验条件及ADH的来源不同所致,作者所选用ADH来自酵母,在本试验条件下,ADH的最适pH值为l0.5.乙醛是乙醇的氧化产物,其产量增多可抑制ADH的活性,试验中当乙醛浓度达30.0mmol/L时,仍未见其对ADH有明显的抑制作用,推测可能是s—Hcl和乙醛结合生成一种复合物,且此反应不可逆,使乙醛迅速被移走,反应得以快速进行.酶法自动分析已经普及,血中乙醇的酶学测定法分为两种:乙醇氧化酶法和ADH法.乙醇氧化酶法的试剂组成简单,缺点是特异性差,甲醇对测定干扰很大,可出现假阳性.ADH法相对特异,受甲醇或异丙醇的干扰极小,此外ADH较乙醇氧化酶更易得到且成本较低,因此ADH法更适宜常规操作,易于推广应用.参考文献:[1]BishopML,Duben—EngelkirkJL,FodyEP.Clinical chemistry[M].FourthEdition,PhiladelphiaUSA:Lippin. cottWilliamsWilkins,2000.508—610.[2]胡建强,刘凤兰.血清乙醇脱氢酶活性测定及其临床应用[J].天津医科大学学报,2001,7(1):110—111.[3]陈金来,刘毅,郭妹,等.酶法血清乙醇测定试剂盒的初步评价及临床意义[J].天津医科大学学报,2002,8 (4):506—508.[4]1wamotoR,KubotaH,HosokiT,eta/.Completeaminoacid sequenceandcharacterizationofthereactionmechanismofa glucosamine—inducednovelalcoholdehydrogenasefrom Agrobacteriumradiobacter(tumefaciens)[J].ArchBio. chemBiophys,2002,398(2):203—212.[5]张红霞,邓振华,谢娜,等.酒后驾车血液呼气中乙醇检测方法评价[J].刑事技术,2003,5:36—39.《西北国防医学杂志》征订启事<西北国防医学杂志=》为兰州军区联勤部卫生部主办的国,内外公开发行的综合性医药卫生学术性期刊,是"中国科技论文统计源"期刊,已被<中国科学引文数据库》等国内重要数据库收录,也被美国化学文摘(CA)和俄罗斯文摘杂志(JA)收录,刊出省部级以上各类基金资助论文及获奖论文占有较高比例,多次在军内外期刊质量评比中获奖.本刊刊登军内外医务工作者有关基础医学,临床医学,军事医学,文献综述,讲座,护理,卫生科技管理等方面的学术文章.主要栏目有:述评,论着,临床研究,高原医学,经验交流,护理,综述,讲座,卫生行政等.我们希望本刊能对广大医务工作者有所裨益,并热切欢迎对我刊给予扶持和指导.<西北国防医学杂志》(前身为<兰后卫生=》),1979年创刊,2002年改为双月刊,大16开本,80页,逢双月末出版,每期定价10.0o元.<西北国防医学杂志>国内邮发代号54—101,欢迎在当地邮局订阅,也可直接向编辑部订阅,全年70.0o元(含邮费).编辑部地址:兰州市小西湖西街98号;邮政编码:730050联系电话:(0931)8975420;E—mail:************。
细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中

细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细菌乙醇脱氢酶总活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)还原后峰值的增高,即采用光度法来测定细菌裂解样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细菌菌株裂解悬液样品乙醇脱氢酶的总活性检测。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase;ADH;EC1.1.1.1),又称为乙醇NAD氧化还原酶(alcohol NAD- oxidoreductase),属于氧化还原酶家属成员之一,是一组含有6个亚酶的催化乙醇氧化的锌依赖性金属酶蛋白。
存在于许多生物体中。
通过氧化原发性和继发性醇类分子和半缩醛(hemiacetals),转化产生乙醛或酮。
乙醇脱氢酶分成三类:一类为辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD)或辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADP)依赖型;一类为吡咯喹啉醌-,血红素基团、F420(Pyrroloquinoline quinone,haem group,F420)依赖型;一类为黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin adenine dinucleotide)依赖型。
NAD或NADP依赖型乙醇脱氢酶又可以分成三种:一种为锌依赖性的中长链型(350氨基酸残基);一种为锌非依赖性的短链型(250氨基酸残基);一种为铁激活性(385氨基酸残基)。
在微生物中,乙醇脱氢酶起着发酵功能。
且用于酒精性饮料、工业溶剂、醋的生产,参与外源性芳香族化合物(xenobiotic aromatic compounds )的降解,帮助细菌或酵母在甲醇环境中生长。
基于底物乙醇,在乙醇脱氢酶的作用下,转化为乙醛(aldehyde)产物后,通过测定反应体系中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide;NAD)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)的变化(340nm 波长),来定量分析乙醇脱氢酶的总活性。
酒精脱氢酶表达

酒精脱氢酶表达
酒精脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)是一种酶类蛋白质,能够催化酒精在生物体内的代谢过程。
ADH的表达水平受到多种因素的影响,包括基因表达、环境因素、药物等。
在基因层面,ADH的表达受到ADH基因本身的调控,以及其他相关基因的影响。
例如,ADH基因的表达受到转录因子的调控,如NF-κB、AP-1等。
此外,环境因素如温度、pH值、氧气浓度等也会影响ADH的表达。
在药物层面,某些药物可以影响ADH的表达。
例如,酒精、乙醇等物质可以刺激ADH的表达,而一些药物如丙磺舒、丙磺舒利福平、丙磺舒利福定等则可以抑制ADH的表达。
总之,酒精脱氢酶的表达受到多种因素的影响,需要综合考虑多种因素来确定其表达水平。
乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)

乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)简介:乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)的系统名为乙醇:辅酶I氧化还原酶(alcohol:NAD+oxidoreductase),大量存在于人和动物肝脏、植物及微生物细胞之中,是一种含锌金属酶,具有广泛的底物特异性。
乙醇脱氢酶够以烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)为辅酶,催化伯醇和醛之间的可逆反应:CH3CH2OH+NAD+→CH3CHO+NADH+ H+。
在人和哺乳动物体内,乙醇脱氢酶与乙醛脱氢酶(ALDH)构成了乙醇脱氢酶系,参乙醇脱氢酶与体内乙醇代谢,是人和动物体内重要的代谢酶。
作为生物体内主要短链醇代谢的关键酶,它在很多生理过程中起着重要作用。
丙酮酸脱羧酶(PDC)、乙醇脱氢酶(ADH)是乙醇发酵途径的关键酶,无氧呼吸途径代谢产物的过程积累对细胞产生毒性,影响线粒体结构和三羧酸循环的相关酶活性。
Leagene乙醇脱氢酶(ADH)检测试剂盒(乙醛微板法)检测原理是在弱碱条件下,以乙醛为底物,乙醛在ADH催化下被NADH还原为乙醇,ADH每催化1分子乙醛消耗1分子NADH,通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度的变化,计算出NADH的消耗速率进一步推算出乙醇脱氢酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中乙醇脱氢酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:1、研钵或匀浆器2、离心管或试管3、低温离心机4、96孔板5、酶标仪编号名称TE0471100TStorage试剂(A):ADH Lysis buffer250ml4℃避光试剂(B):PMSF1ml-20℃试剂(C):ADH Assay buffer20ml RT试剂(D):NADH1支-20℃使用说明书1份操作步骤(仅供参考):1、配制ADH Lysis buffer工作液:取出ADH Lysis buffer和PMSF,恢复至室温,ADHLysis buffer:PMSF按一定比例混合,混匀,即配即用,不易久置,否则蛋白酶抑制剂PMSF的效率会有所下降。
小鼠乙醇脱氢酶(ADH)说明书

小鼠小鼠乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶(ADH)酶联免疫酶联免疫分析分析分析试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围检测范围:: 96T0.5 U/L -30U/L使用目的使用目的::本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中乙醇脱氢酶(ADH)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)水平。
用纯化的小鼠乙醇脱氢酶(ADH)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乙醇脱氢酶(ADH),再与HRP 标记的乙醇脱氢酶(ADH)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乙醇脱氢酶(ADH)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠乙醇脱氢酶(ADH)浓度。
试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品(48U/L ) 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6显色剂B 液6ml ×1/瓶12密封袋1个标本标本要求要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。
操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
24U/L 5号标准品 150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液 12U/L 4号标准品 150µl 的5号标准品加入150µl 标准品稀释液 6U/L 3号标准品 150µl 的4号标准品加入150µl 标准品稀释液 3U/L 2号标准品 150µl 的3号标准品加入150µl 标准品稀释液 1.5U/L1号标准品150µl 的2号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告

人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告人类乙醇脱氢酶基因型鉴定实验报告酒精是一种常见的神经系统抑制剂,它会让人产生感觉的放松和愉悦,并且也会增加人们对危险和冒险的倾向。
然而,在接触酒精时,每个人的反应可能会存在差异,这是因为乙醇代谢速率的遗传变异可能会影响个体对酒精的敏感性和酒精耐受能力。
因此,研究乙醇代谢的相关基因变异可以为精准的药物治疗和预防酒精滥用提供重要的指导和支持。
本实验旨在通过检测人类乙醇脱氢酶(ADH)的基因型,探索ADH基因多态性对酒精代谢能力的影响,并为相关药物治疗提供参考。
实验方法本实验选取了50名年龄在18-35岁之间的健康成年人作为研究对象,均为中国汉族人。
通过采集被试者的口腔黏膜细胞,提取DNA,然后进行基因型分析。
在此基础上,分析ADH1B*1、ADH1B*2、ADH1B*3、ADH1C*1、ADH1C*2、ADH4*1和ADH4*2这7个ADH基因突变位点的基因型分布情况,并进一步分析这些基因型与乙醇代谢速率的相关性。
结果和分析实验结果表明,ADH基因突变位点的基因型频率在被试者中存在差异。
其中,ADH1B*2位点的基因型频率最高,为36%,其次是ADH1C*1和ADH1C*2位点的基因型频率,分别为26%和22%。
而ADH1B*1、ADH1B*3、ADH4*1和ADH4*2位点的基因型频率较低,分别为6%、6%、2%和2%。
进一步分析发现,ADH1B*2位点的基因型与乙醇代谢速率之间存在很大的关联性。
具体来说,该基因型的个体乙醇代谢速率较快,一般较为耐酒,容易产生饮酒后仍然保持理智和冷静的感觉。
而ADH1C*1和ADH1C*2位点的基因型与乙醇代谢速率关联性较小,可能会导致人体对酒精的摄入量有较大的差异。
结论和建议通过本实验的研究,我们可以初步认识到酒精代谢的遗传变异对人们饮酒行为的影响。
ADH基因突变位点的分布和相应基因型的差异,可能导致不同个体对酒精的代谢能力不同,甚至在同等条件下出现酒精含量差异较大的现象。
乙醇脱氢酶(ADH)活性检测试剂盒说明书

乙醇脱氢酶(ADH )活性检测试剂盒说明书微量法货号:BC1085规格:100T/96S 产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶-20℃保存试剂三液体2 mL×1瓶4℃保存溶液的配制:1、提取液:内含不溶物,使用前摇匀;2、试剂一:临用前把试剂二转移到试剂一中,分装保存于-20℃。
产品说明:ADH 是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。
哺乳动物ADH 主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH 释放到血清中。
血清ADH 活性高低反映了肝功能是否异常。
ADH 催化NADH 还原乙醛生成乙醇和NAD +,NADH 在340nm 处有吸收峰,而NAD +没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH 活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、可调式移液器、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)1、 组织:按照组织质量(g ):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液)进行冰浴匀浆。
16000g ,4℃离心20min ,取上清置冰上待测。
2、 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL )为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w ,超声3秒,间隔7秒,总时间3min );16000g ,4℃离心20min ,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
乙醇测定试剂盒(乙醇脱氢酶法)产品技术要求jiuqiang

乙醇测定试剂盒(乙醇脱氢酶法)适用范围:用于体外定量分析人血清或血浆中的乙醇含量。
1. 产品型号/规格及其划分说明1.1 包装规格包装规格见表1。
1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。
注:不同批号的校准品、质控品赋值有差异。
2. 性能指标2.1 外观试剂1为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;试剂2为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;校准品为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;质控品为无色澄清液体,目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物;试剂盒标签标识清晰,外包装完整无损。
2.2 净含量试剂的净含量应不少于标称量。
2.3 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.0000。
2.4 准确度用国际标准物质SRM 2896,对试剂盒进行测试,相对偏差应不超过±10.00%。
2.5 分析灵敏度样本浓度为1.00 g/L时,吸光度差值应≥0.2800。
2.6 线性区间在[0.05, 3.00]g/L区间内,线性相关系数r≥0.990,在[0.05, 1.00] g/L区间内测定的绝对偏差应不超过±0.10 g/L,在(1.00, 3.00] g/L区间内测定的相对偏差应不超过±10.00%。
2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的样本重复测定10次,其测定值的变异系数(CV%)应不大于10.00%。
2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差(R)应不大于15.00%。
2.8 质控品赋值有效性使用质控品进行测定,所得结果应在质控范围内。
2.9 稳定性试剂盒在2℃~8℃密封避光保存,有效期为12个月。
在试剂盒有效期满后一个月以内,应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7.1、2.8的要求。
2.10 溯源性按照GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供所用产品校准的来源、赋值过程以及测量不确定度,试剂盒校准品溯源至国际参考物质SRM 2896。
大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)酶联免疫分析 试剂盒 说明书

大鼠乙醛脱氢酶(ALDH)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用预期应用ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关液体中乙醛脱氢酶(ALDH)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中乙醛脱氢酶水平。
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入乙醛脱氢酶抗原、生物素化的抗大鼠乙醛脱氢酶抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的乙醛脱氢酶呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板:一块(96孔)标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释100ng/ml,50ng/ml,25ng/ml,12.5ng/ml,6.25ng/ml,3.12ng/ml,1.56ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0ng/ml,临用前15分钟内配制。
如配制50ng/ml标准品:取0.5ml100ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
2.样品稀释液:1×20ml/瓶。
3.检测稀释液A:1×10ml/瓶。
4.检测稀释液B:1×10ml/瓶。
5.检测溶液A:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100ul),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如1ul检测溶液A加99ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
6.检测溶液B:1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B1:100稀释。
一种测定乙醇脱氢酶活性的循环催化流动分析法

一种测定乙醇脱氢酶活性的循环催化流动分析法王恒;李永生;高秀峰;田甜;林玉莲【摘要】基于乙醇(EtOH)/乙醇脱氢酶(ADH)/氧化型辅酶I(NAD+)催化反应体系,建立了一种用于ADH活性测定的循环催化流动分析法(RCFA),并优选该测定体系的实验条件,得到如下参:Tris-HCl缓冲液浓度(pH 8.9)为0.1 mol/L.EtOH的浓度为15.6 mol/L,NAD+浓度为9.0 mmol/L,ADH用量20 μL/次,反应液流速为0.98 mL/min,反应液体积为2 mL;ADH的测定范围为0.6~50 U/L,检出限为0.14 U/L,相对标准偏差≤1.3%(n=11).RCFA法具有测定过程简便、快速、自动化特点,能对ADH催化反应过程进行连续循环检测,可对ADH活性变化实现动态研究.RCFA法使反应液循环不但节省了大量的试剂和酶量、降低了测定成本,而且循环测定时不存在人为误差,提高了测定结果的准确度.【期刊名称】《酿酒科技》【年(卷),期】2010(000)010【总页数】4页(P100-102,114)【关键词】循环催化流动分析;乙醇脱氢酶;乙醇;氧化型辅酶I;酿酒酵母菌【作者】王恒;李永生;高秀峰;田甜;林玉莲【作者单位】四川大学化学工程学院,四川,成都,610065;四川大学化学工程学院,四川,成都,610065;四川大学华西基础医学与法医学院,四川,成都,610041;四川大学化学工程学院,四川,成都,610065;四川大学化学工程学院,四川,成都,610065【正文语种】中文【中图分类】TQ920.1%Q55%O65乙醇脱氢酶(Alcohol dehydrogenase,ADH)是生物体内一种重要的代谢酶,具有广泛的底物特异性[1]。
目前ADH被广泛应用,例如,ADH用于制作测定乙醇浓度的生物电极和乙醇生物传感器[2-3],酿酒发酵中ADH与乙醛脱氢酶结合为酵母菌提供能量并使细胞免受过量乙醇的毒害 [4],ADH与乙醛脱氢酶的结合用于生产食醋[5],ADH也是人体重要的生理指标之一[6-7]。
ALDH2基因分型测试说明书

ALDH2 Morgan™ SSP分型检测试剂盒由美国TBG有限公司(TBG, Inc)生产。
ALDH2基因位于人类第12号染色体,由于ALDH2 基因存在G1510A 多态性,导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换( Glu487 Lys),其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(ALDH2*1) ,催化能力失活的变异型称为A 等位基因(ALDH2*2) 。
在亚洲的黄种人群中, ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型.本产品每块板48个ALDH2分型测试,此试剂盒具有可靠、简便、快速、重复性高等显着特点。
实验背景ALDH2与酒精性疾病乙醛脱氢酶( aldehyde dehydrogenase, ALDH)和乙醇脱氢酶( alcohol dehydrogenase, ADH) 在人体内共同组成了人乙醇脱氢酶系, 负责催化人体的乙醇分解代谢。
ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量, 是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。
研究发现, 突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失, 并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病、消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。
过度的饮酒行为, 不仅使ALDH2*2 携带者对酒精产生依赖, 还可能引起肝癌等的酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)。
ALD是长期、大量饮酒所引起的肝脏病变, 已成为现代社会的主要健康隐忧之一。
研究显示,携带ALDH2 变异基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性,同时研究发现, ALDH2*2突变与饮酒人群患消化道癌的风险之间具有明显的联系。
此外,ALDH2*2显性突变与胃癌的易感性也存在一定的联系。
由此可见, ALDH2*2突变是增加区域性癌化几率的重要因素之一。
ALDH2与硝酸甘油治疗硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物,研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮(NO)所介导。
乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书 微量法

乳酸脱氢酶(LDH)活性检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号:BC0685规格:100T/48S产品内容:提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存;试剂一:液体7mL×1瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1支,-20℃保存,用时加入1.3mL双蒸水充分溶解备用,配好后可分装成小管-20℃保存,可保存两周,禁止反复冻融;试剂三:液体7mL×1瓶,4℃保存;试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;丙酮酸钠标准液:液体1mL×1支,4℃保存,2μmol/ml。
产品简介:LDH(EC 1.1.1.27)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是糖酵解途径的末端酶,催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应,伴随着NAD+/NADH之间互变。
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中显棕红色,颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂:可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:1.细菌、细胞或组织样品的制备:细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.血清(浆)样品:直接检测。
3.丙酮酸钠标准液:取100μL标准液,倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL,用2、1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。
乙醇含量测定试剂盒说明书

乙醇含量测定试剂盒说明书 微量法100管/96样注 意:正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义:酒是含酒精(乙醇)饮料的统称,乙醇是酒的主要成分,是衡量酒质量的重要指标之一。
我国是世界上最早发明酿酒的国家,也是酒类产品消费大国,其消费量居世界之首。
因此,快速、准确测定酒中乙醇含量,对于确保酒的质量和保护消费者的健康具有重大意义。
测定原理:乙醇在乙醇脱氢酶的催化下氧化脱氢生成乙醛,同时,NAD 被还原生成NADH,NADH 在1-mPMS 的作用下使WST-8 显橙黄色,通过450 nm 下测定吸光值变化可测得乙醇含量。
需自备的仪器和用品:酶标仪、台式离心机、可调式移液器、96 孔板、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制:试剂一:液体12 mL×1 瓶,4℃保存;试剂二:粉剂×1 瓶, -20℃保存;临用前加入 6 mL 试剂三充分溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存;试剂三:液体10 mL×1 瓶,4℃保存;试剂四:液体 1.5mL×1 管,4℃避光保存。
乙醇提取:1. 组织:按照组织质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:5~10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1mL 蒸馏水),进行匀浆,8000g,25℃离心10min,取上清待测。
2. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):蒸馏水体积(mL)为500~1000:1 的比例(建议500 万细菌或细胞加入1mL 蒸馏水),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30 次),8000g,25℃离心10min,取上清待测。
3. 血清(浆)等液体样品:直接测定。
测定步骤:1. 酶标仪预热30min 以上,调节波长至450nm。
2. 工作液的配制:临用前按照样本数量,按以下比例配制工作液3. 样本测定按下表在96 孔板中加入如下试剂混匀后记录450nm 下测定初始吸光值A1,和37℃避光孵育10min 后的吸光值A2,计算△A=A2-A1。
动物组织中甲醛脱氢酶(FDH)活性检测试剂盒说明书

第 1 页,共 2 页动物组织中甲醛脱氢酶(FDH )活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法货号:AC10772规格:50T/48S产品内容:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系本公司工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体35 mL×1瓶4℃保存试剂二粉剂×2支-20℃保存试剂三粉剂×2支4℃保存试剂四液体3 mL×1瓶4℃保存溶液的配制:1、试剂二:临用前加入0.25 mL 蒸馏水,充分混匀;用不完的试剂-20℃分装保存两周,避免反复冻融。
2、试剂二工作液:根据试验所需用量,按照试剂二(μL )∶蒸馏水(μL )=1∶29比例配成工作液,现配现用。
试剂二工作液当天配制当天用完。
3、试剂三:临用前加入1.5 mL 蒸馏水,充分溶解;用不完的试剂4℃分装保存两周。
产品说明:甲醛脱氢酶存在于绝大多数原核生物以及所有的真核生物中,是一种将甲醛进行转换的氧化还原酶。
甲醛脱氢酶可催化甲醛和NAD +产生NADH ,在340nm 处的吸光值会增加,测定340nm 处的吸光值变化,可计算得到甲醛脱氢酶的活性。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:紫外分光光度计、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)组织:按照动物组织质量(g ):提取液体积(mL )=1∶5~10的比例(建议称取0.1 g 动物组织,加入1 mL 提取液),冰浴匀浆,8000 g ,4℃条件下离心10 min ;取上清(若上清不够澄清,建议重复上述离心步骤)置于冰上待测。
二、测定步骤1、紫外分光光度计预热30 min 以上,调节波长至340 nm ,蒸馏水调零。
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货号:MS1007 规格:100管/96样乙醇脱氢酶(ADH)活性测定试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。
哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。
血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理:
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
自备实验用品及仪器:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1瓶,室温保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
临用前把试剂三转移到试剂二中,4℃保存。
试剂三:粉剂×1支,-20℃保存。
试剂四:液体×1支,4℃保存。
粗酶液提取:
1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,
加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。
16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500
万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g,4℃离心20min,取上清液置冰上待测。
3、血清等液体:直接测定。
ADH测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在25℃水浴中保温30 min。
3. 空白管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸馏水、160μL试剂二和20μL试
剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。
△A空白管=A1-A2。
4. 测定管:在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL试剂二和20μL试
剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A3和A4。
△A测定管=A3-A4。
注意:空白管只需测定一次。
计算公式:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
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(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V 样)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/g 鲜重) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V 样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量
×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管)
ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mg prot) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(Cpr×V 样)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷Cpr
(2)按照样本质量计算
活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/g 鲜重) =[(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(W×V样÷V 样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷W
(3)按细胞数量计算
活性单位定义:25℃中每104个细胞每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/104cell) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷(细胞数量
×V样÷V样总)÷T
=1.61×(△A测定管–△A空白管) ÷细胞数量
(4)按液体体积计算
活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1μmol NADH 为1个酶活单位。
ADH (μmol/min/mL) = [(△A测定管–△A空白管)÷ε÷d×V反总×106] ÷V样÷T
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=1.61×(△A测定管–△A空白管)
ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5 cm;V反总:反应体系总体积,200μL=2×10-4 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W :样品质量;V样:加入反应体系中上清液体积,20μL=0.02 mL;V样总:提取液体积,1 mL;T:反应时间,1min。
注意事项:
1.上清液蛋白质浓度需要另外测定,建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。
2.配制好的试剂二3天使用完。
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