串联质谱一般扫描模式之精读
液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定
0引言测量不确定度是指表征合理地赋予被测量之值的分散性与测量结果相联系的参数［1］。
《检验检测机构资质认定能力评价检验检测机构通用要求》（RB/T214—2017）中要求检验检测机构应建立相应的数学模型，给出相应检测能力评定测量不确定度的案例［2］。
硝基呋喃类药物是一类广谱抗生素，广泛应用于水产养殖［3］。
硝基呋喃类药物具有遗传毒性，有可能导致基因变异，我国已于2002年颁布禁止使用硝基呋喃类抗生素的禁令。
硝基呋喃类药物原型药在动物体内虽代谢迅速，但代谢物会与蛋白质紧密结合，形成稳定的残留物。
一般判定动物源性食品中硝基呋喃类药物的残留状况都是以其硝基呋喃类代谢产物的含量作为检测依据，硝基呋喃类药物主要有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林，其对应的代谢物分别为3-氨基-2-噁唑烷基酮（AOZ）、5-甲基-吗啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（AMOZ）、1-氨基-2-内酰脲（AHD）和氨基脲（SEM）。
液相色谱-串联质谱法因其灵敏度高、定性定量准确，成为目前硝基呋喃类代谢物主要的检测方法。
陈茹等［4］、吕燕［5］、蒙丽琼等［6］、林功师［7］、郭丽娜等［8］、李绪鹏等［9］、邢丽红等［10］都对液相色谱-串联质谱法测定硝基呋喃类代谢物的不确定度进行评定，但在对内标物引入的不确定度的分量上，未充分考虑内标法的特点，即内标物引入不确定度来自内标添加量的重复性。
本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012）对《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度进行评定，分析不确定度的主要来源，保证检测结果准确可靠。
1材料与方法1.1仪器与设备液相色谱-串联质谱联用仪（Xevo TQ-XS型号，配有电喷雾ESI离子源，美国Waters公司生产）；电子液相色谱-串联质谱法测定小龙虾中硝基呋喃类代谢物残留量的不确定度评定*吴祥庆，杨姝丽，吴明媛，黄鸾玉，谢宗升，蒙源，庞燕飞（广西壮族自治区水产科学研究院，广西南宁530021）摘要：文章根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059.1—2012），探讨采用《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱－串联质谱法》（GB31656.13—2021）测定小龙虾中硝基呋喃代谢物残留量的不确定度，建立相应数学模型，评估不确定度的测定结果。
蛋白质组学蛋白质组学试卷(练习题库)(2023版)
蛋白质组学蛋白质组学试卷(练习题库)1、自由流电泳分离蛋白质的机理及其优缺点。
2、质谱仪的组成及其主要技术指标。
3、蛋白质组学定量分析方法的主要原理。
4、请列举预测蛋白质相互作用的方法。
5、系统生物学研究的主要流程是什么？6、试述如何应用2D-PAGE进行差异蛋白质组学的研究，并分析其优缺点。
7、 Proteome（蛋白质组）8、 Proteomics（蛋白质组学）9、 Mass Spectrometer（质谱仪）10、 Post translational modification(蛋白质翻译后修饰)11、 De novo sequencing(从头测序)12、 Tandem mass spectrometry(串联质谱)13、 Peptide mass fingerprint(肽指纹谱)14、 Peptide sequence tag 肽序列标签15、 Post-source decay(源后衰变)16、 Neutral loss scan 中性丢失扫描17、 Matrix-assisted laser desorption/ionization基质辅助激光解18、论述蛋白质组学与基因组学的区别和联系。
19、简述与传统的分离技术相比较，PF-2D的优点。
20、多反应监测的英文缩写？（）21、下列哪一个不是质谱的离子化模式？（）22、质谱分析是根据（）对样品进行分析。
23、质谱仪的构造包括（）。
24、以下不属于质量分析器的是（）。
25、分辨率指，当两个质谱峰的峰高相等，而其谷高相当于峰高的（），这两个峰可以分开。
26、以下哪个质量分析器的检测上限最高（）。
27、电子轰击电离主要用于检测（）。
28、电喷雾电离源主要用于检测（）。
29、 MALDI的中文意思是指（）。
30、质谱仪的进样系统包括（）。
31、 MALDI是用于（）的离子化方法。
32、飞行时间质量分析器是利用具有相同能量的带电荷粒子，由于（）的差异而具有不同的速度，通过相同的漂移距离33、要想得到较多的碎片离子，应采用下面哪种离子源（）。
《现代仪器分析》思考题
《现代仪器分析》思考题1.有机质谱的用途（杨松成）a)确定分子量b)阐明化合物结构c)确定未知化合物d)对已知化合物进行定量2.有机质谱的离子源有哪些（杨松成）a)电子轰击（EI）b)化学电离（CI）c)场解析（FD）d)电喷雾电离（ESI）e)基质辅助激光解吸附电离（MALDI）f)快原子轰击（FAB)g)热喷雾电离（thermospray ionization）3.质量分析器的种类（杨松成）a)磁式分析器b)四级杆分析器c)离子阱分析器d)飞行时间分析器e)傅立叶变换-离子回旋共振分析器4.质量数的定义（杨松成）平均质量（average mass）：按元素的平均原子质量计算得到的分子量(所用同位素按权重计算出的平均效应质量)，适用于大分子。
平均质量= ∑（平均原子量*原子数）精确质量（exact mass）或单同位素质量（monoisotopic mass）：全部元素均按丰度最高的天然同位素的质量计算得到的分子量，适用于较小分子。
单同位素质量=∑（单同位素原子量*原子数）名义质量（nominal mass）: 全部元素均按丰度最高的天然同位素的质整数量计算得到的分子量5.质谱分辨率（杨松成讲义）分辨率是质谱仪对质量的鉴别能力，指的是分开两个峰的能力。
通常分辨率R定义为：R=M/ΔM对于磁质谱的定义，要求相邻两峰10％峰谷分开才算真正分开，其分辨率（即M/∆M）不随质量变化，所以磁质谱都用R＝M/∆M来表示分辨率。
磁质谱中，R不变，∆M是变化的，质量M越大，∆M越大。
所以，磁质谱表示分辨率都用R，常常可以见到R＝10,000的说法今天我们讨论的有机质谱，都是要求50％峰谷刚刚分开就算分开，这个定义没有磁质谱严格。
同时，这个分辨率R随质量变化，而∆M不变，即M越小，R越小。
因为实际工作中很难找到恰好在50％峰谷分开的峰，所以又简化为用单峰法表示，即测定一个峰半峰高处的全峰宽Full width half Maximum（简写为FWHM），则分辨率定义为R＝M/FWHM这种定义适用于四级杆、离子阱和飞行时间质谱。
串联质谱技术的应用综述
《有机结构分析II》串联质谱技术的应用液相色谱-质谱法(LC/MS)将应用范围极广的分离方法与灵敏、专属、能提供相对分子质量和结构信息的质谱法结合起来, 因此已成为一种重要的现代分离分析技术。
虽然与LC相连的单极质谱仪也能够提供相对分子质量的信息, 但不足之处在于基质对待测组分的干扰难以排除及待测组分的结构信息不能充分利用。
液相色谱与串联质谱联用可在一级质谱MS条件下获得很强的待测组分的准分子离子峰, 几乎不产生碎片离子, 并可对准分子离子进行多级裂解, 进而获得丰富的化合物碎片信息, 可用来推断化合物结构, 确认目标化合物, 辨认重叠色谱峰以及在高背景或干扰物存在的情况下对目标化合物定量, 因而成为药物代谢过程和产物研究, 复杂组分中某一组分的鉴定和定量测定, 以及药用植物成分研究中更为强有力的工具。
本文对液相色谱-串联质谱法(LC-MSn)的原理及其在药物代谢方面的应用作简要介绍。
1 串联质谱(MS/MS)基本原理1.1 离子源离子源的种类包括:电子轰击电离(EI)、化学电离(CI)、快原子轰击(FAB)、场电离(FI)和场解吸(FD)、大气压电离源(API)、基质辅助激光解吸离子化(MALDI)和电感耦合等离子体离子化(ICP)等。
现在主要采用大气压离子化技术(API), 包括电喷雾离子化(ESI)、大气压化学离子化(APCI)和大气压光电离化(APPI)。
API 是软电离技术, 通常只产生分子离子峰, 因此可直接测定混合物。
其中,ESI应用十分广泛, 适用于极性、热不稳定、难气化的成分分离分析, 小到无机离子, 大到蛋白质、核酸。
ESI-MS中可以容易地控制碎片的裂解程度。
用串联质谱可以选择特定的离子, 通过碰撞诱导解离(CID)使其碎裂成碎片离子;另一种方法是通过改变锥孔(取样口)电压(源内CID)的方式, 无选择地将源内所有的离子击碎。
1.2 质量分析器及其特点质量分析器是质谱计的核心, 不同类型的质量计其功能、应用范围、原理和实验方法均有所不同。
串联质谱气相色谱质谱结果解读ppt课件
• 3-甲基巴豆酰辅酶A羧化酶缺乏症 • 3-羟-3-甲基戊二酸尿症 • 3-甲基戊烯二酸尿症 • 丙酸血症（伴C3显著增高）
脂肪酸氧化代谢病相关酰基肉碱
（中链、长链酰基肉碱）
C0：游离肉碱 C8：辛酰肉碱 C10：葵酰肉碱 C12：月桂酰肉碱 C14：肉豆蔻酰基肉碱 C14:1：肉豆蔻烯酰基肉碱 C16：棕榈酰基肉碱 C16OH：3-羟基棕榈酰基肉碱 C18：十八碳酰基肉碱 C18OH：3-羟基十八碳酰基肉碱
甲基丙二酸血症发病机制
甲基丙二酰CoA变位酶
甲基丙二酰辅酶A
X
腺苷钴胺素
琥珀酰辅酶A
cblB
钴胺素腺苷转移酶
CbI Ⅰ cblA，cblH 钴胺素还原酶
线粒体
溶酶体
cblC,cbID
CbI Ⅰ
CbI Ⅲ
蛋氨酸合成酶，cbIE
甲基钴胺素
同型半胱氨酸
X
蛋氨酸合成酶，cbIG
蛋氨酸
肉碱 读
血游离肉碱及酰基 检测结果解
发病机制
亮氨酸
异亮氨酸
有机酸血症
缬氨酸
2-氧代异乙酸
X
异戊酰CoA
X
3-甲基巴豆酰CoA
X
3-甲基戊烯二酰CoA
2-氧代-3-甲基戊酸
X
2-甲基丁酰CoA
甲基巴豆酰CoA
2-甲基-3-羟基丁酰CoA
2-氧代异戊酸
X
异丁酰CoA
枫糖尿病
甲丙烯酰CoA 3-羟异丁酰CoA
同型胱氨酸
钴胺素
X
3-羟-3-甲基戊 二酰CoA
丁酰肉碱增高 （C4、C4/C3）
液相色谱串联三重四级杆质谱基础知识
数据处理系统 液相色谱
质谱
一 液质联用
液质联用仪的组成
大气 真空系统
液相色 谱
样品入 口
离子化 （离子源 ）
质量分析 器
检测器
数据系 统
质谱部分
一 液质联用
离子源
最常用的离子源-电喷雾离子源（ESI)
干燥 气 四极预 杆
喷雾针装置
喷雾室
毛细 管
一 液质联用
质量分离器
兽药残留最常用的是三重串联四级杆（QqQ）
我们所做的已知化合物，并且有现成 的方法
整个质谱仪的模式图
电喷雾离子源 Q1 q2 Q1 检测器
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 0 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
选择离子流图（SIM)：选取其中几个 特征离子扫描，对保留时间作图，即 得到选择离子色谱图。
三 质谱基本概念
选择离子流图（SIM)：
SIM通过去除本底和其 他无关离子的干扰， 降低噪声，提高选择 性、分辨率和灵敏度， 可使复杂的TIC简化， 对特定化合物的分析 或化合物的分类十分 有用。
三 质谱基本概念
8
9
10 11 12 13 14 15 16
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 14 m/e
8
9
10 11 12 13 14 15 16
超高效液相色谱串联质谱法测定餐饮具中烷基苯磺酸钠类阴离子表面活性剂残留量的研究
超高效液相色谱串联质谱法测定餐饮具中烷基苯磺酸钠类阴离子表面活性剂残留量的研究王清燕（泉州市产品质量检验所，福建泉州 362000）摘 要：目的：采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术建立餐（饮）具中烷基苯磺酸钠类阴离子表面活性剂残留量的分析方法。
方法：对色谱质谱条件进行优化后，通过加标回收实验、实际样品的测定等方式验证方法的精密度和准确度。
结果：烷基苯磺酸钠阴离子表面活性剂在20～1 000 μg·L-1呈良好的线性关系（r＞0.999），检出限为2.1 μg·L-1。
结论：加标回收率与实验室内变异系数均满足检测要求。
关键词：烷基苯磺酸钠；阴离子表面活性剂；高效液相色谱串联质谱法；餐（饮）具Study on Determination of Sodium Alkyl Benzene Sulfonate Anionic Surfactant Residue in Tableware by Ultra-HighPerformance Liquid Chromatography-Tandem MassSpectrometryWANG Qingyan(Quanzhou Product Quality Inspection Institute, Quanzhou 362000, China) Abstract: Objective: To establish a method for the determination of sodium alkyl benzene sulfonate anionic surfactants in food and beverage by ultra high performance liquid chromatography with triple quadrupole mass spectrometry. Method: After the conditions of chromatographic mass spectrometry were optimized, the precision and accuracy of the method were verified by standard recovery experiment and actual sample determination. Result: The anionic surfactants of sodium alkyl benzene sulfonate showed a good linear relationship (r＞0.999) in the range of 20～1 000 μg·L-1, and the detection limit was 2.1 μg·L-1. Conclusion: The recovery rate of added standard and the coefficient of variation in laboratory can meet the detection requirements.Keywords: sodium alkyl benzene sulfonate; anionic surfactant; ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; tableware烷基苯磺酸钠是常见的一种阴离子表面活性剂，是洗涤剂、乳化剂和起泡剂的基本原料，广泛应用于各种各类日化用品，如餐（饮）具洗涤剂、洗衣粉的生产过程。
串联质谱一般扫描模式之精读
齐孟文 中国农业大学
前言
质谱扫描模式实际上就是质谱的分析模式，在 现代的质谱分析中，为了应对复杂的分析任务，一 般多采用多级串联的质谱系统，其按照系统构成和 工作模式可分为空间串联和时间串联两大类型，同 时也包括所述两种类型的杂合系统。 空间串联是两个以上的质量分析器联合使用， 两个分析器间有一个碰撞活化室，目的是将前级质 谱仪选定的离子打碎，由后一级质谱仪分析，而时 间串联质谱仪离子被存储在离子阱中，前一时刻选 定的离子，在离子阱内被打碎，后一时刻再进行分 析。空间串联型质谱分为磁扇型串联，四极杆串联， 混合串联等，尤以三重四极杆质谱应用最为广泛； 时间串联包括离子阱质谱仪，回旋共振质谱仪 。
图.上图是一样品的全扫描质谱，下图是锁定 质荷比为86子离子得到的母离子的质谱图。
【举例】
对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基 苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92个，可 进行母离子扫描将其与氨基酸分开。 • 对羟基苯甲酸甲酯：151/136,92 • 对羟基苯甲酸乙酯: 179/136,92 • 对羟基苯甲酸丁酯: 193/136,92
串联质谱的工作流程
质谱信号的三维图像
总离子色谱图（TIC） 经色谱分离流出的组分不断进入质 谱，质谱连续扫描进行数据采集，每一 次扫描得到一张质谱图，将每一张质谱 图中所有离子强度相加，得到一个总的 离子流强度。然后以离子强度为纵坐标， 时间为横坐标绘制的图为总离子色谱图。
提取离子色谱图（EIC）
图.全扫描示意图，可以用Q1或Q3进行扫描，但 用Q3的背景影响较小。
选离子监测（SIM）
通过Q1锁定已知目标离子，q2不打碎全通过，用Q3 实施提取离子色谱图的监测，并用于定量分析。
多反应监测（MRM）
串联质谱
三级四极杆串联质谱
Q1：作为分析器分离出母离子 Q2：作为碰撞室产生子离子 Q3：子离子分析
（a）子离子扫描 （b）母离子扫描 （c）中性丢失扫描 （d）多反应监测
MS1
碰撞室
MS2
Hale Waihona Puke （a）子离子扫描示意图MS1
碰撞室
MS2
（b）母离子扫描示意图
MS1
碰撞室
MS2
（c）中性丢失描示意图
MS1
筹办航空事宜
处
三、从驿传到邮政 1．邮政 (1)初办邮政： 1896年成立“大清邮政局”，此后又设 ， 邮传邮正传式部脱离海关。 (2)进一步发展：1913年，北洋政府宣布裁撤全部驿站； 1920年，中国首次参加 万国。邮联大会
2．电讯 (1)开端：1877年，福建巡抚在 架台设湾第一条电报线，成为中国自 办电报的开端。
出口价格同步变动的现象。与这一现象直接相关的近代事
业是
()
A．电报业
B．大众报业
C．铁路交通业 D．轮船航运业
[解析] 材料主要反映了信息交流的快捷，故选A。
[答案] A
[题组冲关]
3．假如某爱国实业家在20世纪初需要了解全国各地商业信
息，可采用的最快捷的方式是
()
A．乘坐飞机赴各地了解 B．通过无线电报输送讯息
关键词——交通和通讯不断进步、辛亥革命和国民大革命顺应
时代潮流
图说历史
主旨句归纳
(1)近代交通由传统的人力工具逐渐演变为
机械动力牵引的新式交通工具，火车、
汽车、电车、轮船、飞机先后出现。
(2)通讯工具由传统的邮政通信发展为先进
的电讯工具，有线电报、电话、无线电
报先后发明。
串联质谱法两种扫描方式检测干血滤纸片上氨基酸含量的精密度和准确度
ａ
ａｎｄ
ｃｌｉｎｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
ａｓｓａｙ
ｈｉｇｈｌｙ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ
ＰＣＲ—ｒｅｖｅｌ３［，ｅ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ
ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ａｎｏｇｅｎｉｔａｌ
ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｎｍｖｉｍｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９９，３７：２５０８－２５１７．
方法学评价方面的研究。本文旨在通过分析中性丢失法和 多反应监测法检测干血滤纸片上氨基酸含量的精密度和准 确度性能验证情况，选择最适扫描方式，为实验室开展该项 目检测提供方法学依据。 一、材料与方法 １．标本来源：美国疾病控制中心质控部门提供的 ２００９年度用于大规模室间质评的定值质控纸片，批号分别 为９２１、９２２、９２３、９２４。定值纸片上含有５种定值氨基酸，分 别为蛋氨酸（Ｍｅｔ）、异亮－亮氨酸（Ｌｅｕ—ｔｉｅ）、苯丙氨酸（Ｐｈｅ）、
ｏｔｈｅｒ ＨＰＶ ｔｙｐｅｓ．Ｊ
Ｄｉｓ，２００１．１８３：８－１５．
ｏｆ ２７
【５］Ｇｒａｖｉｔｔ ＰＥ，Ｐｅｙｔｏｎ ＣＬ，Ａｐｐｌｅ ＲＪ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ
ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｍｓ ｔｙｐｅｓ ｂｙ
ｕｓｉｎｇ
ｈｕｍａｎ
ａ
Ｌ１
ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ
ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ
ｓｉｎｇｌｅ・ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ，ｒｅｖｅｒｓｅ ｌｉｎｅ ｂｌｏｔ Ｍｉｃｍｂｉｏｌ，１９９８。３６：３０２０－３０２７．
本岛津公司），ＡＰｌ２０００型质谱分析仪（美国ＡＢＩ公司），
万方数据
主堡捡笙医堂盘查垫！Ｑ生垒月筮塑鲞筮鱼翅￡坠！』！坐丛鲤：』婴！垫！Ｑ，！些箜：盟璺§ ９６孔板氮吹仪（北京众益中和生物技术有限公司）。５种氨 基酸同位素内标（２Ｈ３．Ｍｅｔ
质谱联用
气相色谱-质谱联用（GC-MS）
1 GC-MS的组成
色谱部分、质谱部分、数据处理系统 试样 GC 接口
MS
计算机系统
分析结果
气相色谱-质谱联用仪组成方框图
1 进样系统
进样系统是将分析样品引入到离子源的装置。 进样方式： 直接进样：将样品放入小的玻璃坩埚靠直接进样杆将样品送 入离子源，加热汽化后去离子化。适用于分析高沸点的纯样 品。 仪器联用进样：注射器注入色谱进样器，分离后离子化。色 谱-质谱联用仪的接口和色谱仪组成了质谱的进样系统。
碰撞室
质量分析器2
…
碰撞活化分 解（CID）
时间串联: 在一个分析器内，先打碎选定的分子，接着进行分析，在 同一个分析进行。
三重四极杆质谱联用仪
三重四极杆质谱联用仪
TSQ上的质量分析仪包含三个四级杆组件（Q1、Q2 和Q3） 以及三个透镜组。
质量分析仪、离子探测系统和离子光学组件
进样要求
1. 样品必须是澄清溶液，不能有显著的杂质，需过滤 (0.45μm滤膜)； 2. 样品不能含有难挥发酸，强酸、强碱，盐，表面活性剂 及Contamination Peak表上的物质； 3. 所用溶剂一般为水、乙腈和甲醇，且溶剂需过滤(0.45μm 滤膜)。 4. 优化时标准品浓度一般为1-5 ppm；测样时样品浓度一般 为10-3 ppm，不要超过0.1 ppm。
GC-MS 的质谱扫描方式 全扫描(Full Scan) 选择离子监测(SIM)
选择反应检测扫描(SRM)
全扫描(Full Scan)
质量分析器在给定的时间范围内对给定质荷比（M/Z）范 围进行无间断地扫描，获得样品中的每一个组分（在某一 个特定的时刻）的全部质谱。 全程扫描主要用于测定试样中的未知化合物。
质谱介绍及质谱图的解析
质谱介绍及质谱图的解析质谱法是将被测物质离子化，按离子的质荷比分离，测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。
质量是物质的固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱——质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。
质谱仪一般由四部分组成：进样系统——按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位；离子源——用来使样品分子电离生成离子，并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束；质量分析器——利用电磁场（包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等）的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分离；检测器——用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。
一般情况下，进样系统将待测物在不破坏系统真空的情况下导入离子源（10-6～10-8mmHg），离子化后由质量分析器分离再检测；计算机系统对仪器进行控制、采集和处理数据，并可将质谱图与数据库中的谱图进行比较。
1进样系统和接口技术将样品导入质谱仪可分为直接进样和通过接口两种方式实现。
1.直接进样在室温和常压下，气态或液态样品可通过一个可调喷口装置以中性流的形式导入离子源。
吸附在固体上或溶解在液体中的挥发性物质可通过顶空分析器进行富集，利用吸附柱捕集，再采用程序升温的方式使之解吸，经毛细管导入质谱仪。
对于固体样品，常用进样杆直接导入。
将样品置于进样杆顶部的小坩埚中，通过在离子源附近的真空环境中加热的方式导入样品，或者可通过在离子化室中将样品从一可迅速加热的金属丝上解吸或者使用激光辅助解吸的方式进行。
这种方法可与电子轰击电离、化学电离以及场电离结合，适用于热稳定性差或者难挥发物的分析。
目前质谱进样系统发展较快的是多种液相色谱/质谱联用的接口技术，用以将色谱流出物导入质谱，经离子化后供质谱分析。
主要技术包括各种喷雾技术（电喷雾，热喷雾和离子喷雾）；传送装置（粒子束）和粒子诱导解吸（快原子轰击）等。
串联质谱数据分析流程和注意的问题
常用工具： ProteinProphet
Proteinprophet计算基于相关 肽段出现的概率推断在样品 中每个蛋白出现的概率，且 使用Occam的筛选法则减少 蛋白质列表至可以解释所有 观察到的肽的最小集合.
2.Data analysis workflow
串联质谱数据分析流程和注意的问题 Tandem mass spectrometry data analysis workflow and announcements
1. Definition 2. Data analysis workflow 3. Announcements
1.Definition
白质进行注释，更加全面的了解蛋白的相关信息
3.Announcements
• 将质谱数据的格式进行转化、统一（标准化） • 根据实验目的选取合适的光谱鉴定方法 • 利用不同的策略计算准确的FDR • 增加分析的重复次数 • 质谱检测时，选择合适的定量策略，不同策略差异显著 • 选择正确适合的蛋白定量分析软件 • 充分利用LIMS进行数据库分析管理 • 根据不同的科研要求选择不同处理软件和数据库资源对蛋
2.谱图库搜索鉴定法 搜索工具： BiblioSpec ,Bonanza, SpectraST 和 X! Hunter
3.De novo sequencing（从头合成） 识别肽序列的一种互补方法 主要用于识别没有蛋白质序列的多肽 需要高质量的MS / MS谱
4.序列标签的数据库搜索鉴定法
2.Data analysis workflow
2.5 Quantification
2.5 Quantification
• SELDI-TOF-MS——其可以用于多样品比较，可得到某些峰 的强度变化，但无法确定这个峰是什么.
质谱扫描模式(优选.)
质谱扫描模式SIM :单离子检测扫描(single ion monitoring)SRM :选择反应检测扫描(selective reaction monitoring)MRM :多反应检测扫描(multi reaction monitoring)质谱都有几种工作模式：（1）Full Scan：全扫描，指质谱采集时，扫描一段范围，选择这个工作模式后，你自己来设定一个范围，比如：150～500 amu。
对于未知物，一定会做这种模式，因为只有Full Scan了，才能知道这个化合物的分子量。
对于二级质谱MS/MS或多级质谱MSn时，要想获得所有的碎片离子，也得做全扫描。
（2）SIM：Single Ion Monitor，指单离子监测，针对一级质谱而言，即只扫一个离子。
对于已知的化合物，为了提高某个离子的灵敏度，并排除其它离子的干扰，就可以只扫描一个离子。
这时候，还可以调整一下分辨率来略微调节采样窗口的宽度。
比如，要对500 amu的离子做SIM，较高高分辨状态下，可以设定取样宽度为1.0，这时质谱只扫499.5～500.5 amu。
还有些高分辨率的仪器，可以设定取样宽度更小，比如0.2 amu，这时质谱只扫499.9～500.1 amu。
但对于较纯的、杂质干扰较少的体系，不妨设定较低的分辨率，比如取样宽度设为2 amu，这时质谱扫描499～501 amu，如果没有干扰的情况下，取样宽度宽一些，待测化合物的灵敏度就高一些，因为噪音很低；但是有很强干扰情况下，设定较高分辨，反而提高灵敏度信噪比，因为噪音降下去了。
（3）SRM：Selective Reaction Monitor，指选择反应监测，针对二级质谱或多级质谱的某两级之间，即母离子选一个离子，碰撞后，从形成的子离子中也只选一个离子。
因为两次都只选单离子，所以噪音和干扰被排除得更多，灵敏度信噪比会更高，尤其对于复杂的、基质背景高的样品。
我们不妨把它看成二级质谱的SIM，上述关于SIM的特点也适用，即分辨率高些，抗背景排干扰的能力就更强。
高效液相色谱-串联质谱法分析
第39卷2011年4月分析化学(FEN XI H U A XU E) 研究报告Chinese Journal o f Analytical Chemistr y第4期534~539DOI:10.3724/SP.J.1096.2011.00534高效液相色谱 串联质谱法分析大肠杆菌代谢组中样品提取方法的比较梅辉1,2戴军*1刘文卫3凌霞3朱鹏飞3赵志军11(江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122)2(江南大学食品学院,无锡214122)3(无锡市疾病预防控制中心,无锡214002)摘 要 比较了基于液相色谱和串联质谱联用技术(L C M S/M S)的E.co li 代谢组分析的5种不同样品提取方法。
在对样品进行淬灭和洗涤后,分别使用冷甲醇法、热乙醇法、甲醇/氯仿法、热甲醇法和高氯酸法对样品平行提取3次,每个样品重复进样3次。
结果显示,冷甲醇法所得到的相对提取率最高,且重复性好(RSD <5%)。
从相对提取率、重复性等方面综合考察5种提取方法,从优到劣依次为:冷甲醇法>甲醇/氯仿法>高氯酸法>热乙醇法>热甲醇法。
此外,以冷甲醇法的提取溶剂配制系列不同浓度的代谢物标样测定的结果表明,本方法的代谢物检测线性较好,线性范围较宽,提取溶剂的基体效应对代谢物的定量分析影响较小。
本方法的检出限为0.05~0.36m mol/L 。
关键词 代谢组分析;液 质联用;提取方法;大肠杆菌2010 07 20收稿;2010 10 29接受本文系江南大学食品科学与技术国家重点实验室自由探索课题基金(No.SKLF T S 200803)资助项目*E mail:d j998lc@1 引 言饲料工业的发展及在医药工业上应用的不断扩大使色氨酸的需求量越来越大,目前我国色氨酸主要依赖进口。
采用微生物直接发酵法生产色氨酸,其合成代谢途径较长,代谢流弱,调控机制复杂,很难实现工业化。
代谢组学技术已应用于微生物表型分类、突变体筛选、代谢途径及微生物代谢工程等方面,但有关色氨酸生产的代谢组学及其分析策略的研究尚未见报道。
串联质谱一般扫描模式之精读共31页
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
串联质谱一般扫描模式之精读
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
图. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合 物与氨基酸的混合物样品。上图为全扫描质谱图，下图为子离子为92的 母离子扫描的质谱图。
子离子（产物离子）扫描
Q1锁定某一质荷比为m/e的母离子，输 送到q2进行诱导解离，产生的碎片用Q3进行 全扫描，因此得到的是母离子产生的子离子 的质谱图，主要用于母离子的结构分析。
图，筛选具
子通过
有特征子离
子（结构）
的分子
子离子扫描 锁 定 一 个 母 打碎（CID），扫 描 给 定 质 子 离 子 质 谱
离子
并让所有离 量范围的所 图，研究母
子通过
有碎片子离 离子的结构
子
特征
中 性 丢 失 扫 扫 描 所 有 的 打碎（CID），对 与 Q1 保 持 中 性 丢 失 子
描
母离子
描
围 内 的 所 有 通过
母离子
常规质谱， 了解样品的 基本组分
选择性单离 锁定一个母 不打碎，全 实施指定离 提 取 离 子
子 监 测 扫 描 离 子 （ 目 标 通过
子信号强度 （质量）色
（SIM）
物）
随时间变化 谱图，定量
的监测扫描 分析
多 反 应 监 测 锁 定 一 个 母 打 碎 （ CID ） ，选 择 一 个 子 提 取 离 子
又叫质量色谱图，是由全扫描质谱中提 取一种质量的离子得到的色谱图。利用质量 色谱，可以排除色谱峰共同流出物的影响， 比如通过选择不同质量的离子做质量色谱图， 使正常色谱不能分开的两个峰实现分离，因 此常用质量色谱图进行定量分析。
三重四极杆Q-q-Q质谱的扫描模式
方式
Q1
Q2
Q3
图谱，用途
Q1 全 扫 描 扫 扫 描 一 定 范 不 打 碎 ， 全 全通过
中性丢失扫描
Q1扫描一定质量范围内的所有母离子， 并输送到q2进行诱导解离，Q3以与Q1保持中 性丢失碎片的固定质量差联动扫描，得到中 性丢失所形成子离子的质谱。该模式可用于 鉴定和确认类型已知的化合物，也可以帮助 进行未知物架构的判定，如DNA加合物的确 定等。
并让所有离 恒定质量差 离子质谱图，
子通过
子离子联动 筛选具有中
扫描
性丢失集团
结构类的分
子
全扫描
是指对指定质量范围内的离子扫描 并记录其质谱图，用以确定待分析物的 分子量，并通过库搜索进行定性鉴别的 方法，总是用单个质量分析器完成。
图.全扫描示意图，可以用Q1或Q3进行扫描，但 用Q3的背景影响较小。
对于空间串联质谱，由于相关事件可以
分别在不同的质谱分析器顺序进行处理，因 此可以实现诸如全扫描，前体离子（母离 子）、产物离子（子离子）和中性丢失等 MS/MS分析扫描，而时间串联质谱，只能将 待分析的离子储存起来进行顺序处理，一经 扫描检测抛出离子阱后便不能再进行后续处 理，因此单独依靠系统硬件本身不能进行前 体离子扫描及中性丢失扫描，但却可以进行N 级逐个碎裂过程的扫描分析MSn。
图.(a) MRM扫描在三重四级杆质谱中的扫描模式。(b) MRM 在一次操作 中同时对14种不同分析物质的监测图。
/instrument/54-261873-1.html
前体离子（母离子）扫描
连续扫描第一个质量分析器Q1，让各种质荷 比的母离子依次通过Q1，进入q2 并诱导碰撞解离， 同时设定Q3锁定特定质荷比的子离子，一经检测 则利用软件回溯该子离子的母离子通过Q1 时的电 压，便可以得到母离子的质荷比，得以扫描记录具 有共同字离子特征母体离子的质谱图，通俗地将就 是一由已知子离子，检测具有这种子离子特征的所 有母离子。该模式是快速筛选化合物的有力手段， 适合筛选结构相似的化合物，主要应用在药物和代 谢研究中。
选择离子监测（SIM）
通过Q1锁定已知目标离子，q2不打碎全通过，用Q3 实施提取离子色谱图的监测，并用于定量分析。
多反应监测（MRM）
由Q1全扫描确定的质量为m1目标物，经 q2打碎全通过，在Q2做子离子扫描，从子离 子谱中选择特征的子离子m2，组成离子对实 施MRM监测，只有同时满足m1和m2特征质 量的离子才被监测。这样的质量色谱图经过 了三次选择：即LC的保留时间，Q1选择m1 和Q2选择m2，其色谱峰被认为不再存在任何 干扰。在MRM模式下，根据色谱峰面积，可 采用外标或内标法进行定量分析。
前言
质谱扫描模式实际上就是质谱的分析模式，在 现代的质谱分析中，为了应对复杂的分析任务，一 般多采用多级串联的质谱系统，其按照系统构成和 工作模式可分为空间串联和时间串联两大类型，同 时也包括所述两种类型的杂合系统。
空间串联是两个以上的质量分析器联合使用， 两个分析器间有一个碰撞活化室，目的是将前级质 谱仪选定的离子打碎，由后一级质谱仪分析，而时 间串联质谱仪离子被存储在离子阱中，前一时刻选 定的离子，在离子阱内被打碎，后一时刻再进行分 析。空间串联型质谱分为磁扇型串联，四极杆串联， 混合串联等，尤以三重四极杆质谱应用最为广泛； 时间串联包括离子阱质谱仪，回旋共振质谱仪 。
图.上图是一样品的全扫描质谱，下图是锁定 质荷比为86子离子得到的母离子的质谱图。
【举例】
对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基 苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92个，可 进行母离子扫描将其与氨基酸分开。 • 对羟基苯甲酸甲酯：151/136,92 • 对羟基苯甲酸乙酯: 179/136,92 • 对羟基苯甲酸丁酯: 193/136,9离子色谱图（TIC）
经色谱分离流出的组分不断进入质 谱，质谱连续扫描进行数据采集，每一 次扫描得到一张质谱图，将每一张质谱 图中所有离子强度相加，得到一个总的 离子流强度。然后以离子强度为纵坐标， 时间为横坐标绘制的图为总离子色谱图。
提取离子色谱图（EIC）
（MRM） 离 子 （ 目 标 并 让 所 有 离 离 子 ， 实 施 （ 质 量 ） 色
物）
子通过
该离子信号 谱图，定量，
强度随时间 有效消除假
变化的监测 阳性
续上
方式
Q1
Q2
Q3
图谱，用途
母离子扫描 扫 描 所 有 的 打碎（CID），锁 定 一 个 子 母 离 子 质 谱
母离子
并 让 所 有 离 离子