化学发光诊断试剂盒原理和进展PPT课件

子或分子由激发态回到基态时所产生的这一光辐射现象叫化学
发光。根据化学发光的强度测定物质含量的分析方法叫化学发 光分析。
▪ 1887年 Redziszewski首次报道了络吩碱（lophine,2,4,5三苯基咪痤）在碱性条件下与氧气反应发出黄金设色的光—— —人为的化学发光……
▪
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化学发光的特点
▪ 1。灵敏度高，如用荧光素酶和磷酸三腺苷（ATP） 的发光反应，可测定2*10-17mol/L的ATP，即可检 测一个细胞中的ATP含量。
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化学发光试剂
▪ 1．鲁米诺（luminol）,异鲁米(isoluminol)和 他们的衍生物
▪
鲁米诺（3—氨基—邻苯甲酰肼,1）,异鲁米诺（2）
及其衍生物（如氨基丁基乙基邻苯甲酰肼，ABENH,3）
在发光分析中被使用。
▪
在二甲基亚砜中，鲁米诺的量子产率不超过5%，
在水溶液中是1%~1.5%。鲁米诺在碱性条件下能被许
NH2 O
O
NH
-N2
NH
OOH
NH2 O
OH
*
O O
NH2 O
OH
O +光
O
NH2 O
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▪ 鲁米诺于H2O2的反应是一个自身化学发光反应。
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2．过氧草酸类
❖ 过氧草酸盐（peroxalate）（酯）包括一大类物质，他们自身并不发 光，其化学发光均为敏化华学范广，化学发光反应是芳香草酸值得过氧 化氢氧化作用，芳香草酸盐和H2O2芳香草酸盐和H2O2反应形成高能量 的中间物。
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3．化学发光强度与反应物浓度的关系
化学发光反应所以能用于分析测定，是因为化学发光强度（ICL）与化学反应速度（dp/dt）相关 联，而一切影响反应速度的因素有多可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为：
A+B → C*, C* → C+hv 该发光反应的化学发光强度取决于翻译的速度dp/dt和反应的化学发光量子效率（ ΦCL ）
▪ 2．分析方法简单快捷，不需要复杂的仪器，不需 要光源和色散装置，业没有光学分析方法中常见的 散射光和杂散光等引起的背景值。
▪ 化学发光分析法的测量仪器比较简单，主要包括样 品室、光检测器、放大器和信号输出装置。化学发 光反应在样品室中进行，反应发出的光直接照射在 检测器上，目前常用
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LUM-F流动注射化学发光仪器
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2.敏化化学发光反应
是指某些化学反应中的由于激发态产物本身不 发光或反光十分微弱，但通过加入某种能谅接 受体（荧光剂）可导致发光。反应式为：
A+B → C*+D, F+C* → F*+C, F* → F+hv
C为能量给于体，F为能量接受体。
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如 一氧化氮与臭氧的气相化学发光反应有较 高的化学发光效率，其反应机理为
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1.自身化学发光反应
化学发光反应，按反应机理可分成自身化学发光，
敏化化学发光，偶合反应化学发光，电致化学发 光反……
是指被测物质为反应物直接参与化学反应，
利用自身化学反应释放的能量激发产物分子的光 辐射。可用反应式表示为：
A+B → C*+D， C* → C+hv
这类化学发光反应最多和最普遍，多数有机物 分子在液相中的化学反应属于这一类型
ICL（T）= ΦCLdp/d 式中ΦCL可表示为：ΦCL=Φr+Φf,其中Φr为生成激发态产物的量子效率，Φf 为激发态产物分子 的发光量子效率，对于一定的化学发光反应， 为一定值;其反应速度可按质量作用定律表示出与反应 体系中物质浓度的关系。因此，通过测定化学发光强度就可以测定反应体系种某种物质的浓度，原则 上讲，对任何发光反应，只要反应是一级或假一及反应，都可以通过上式进行化学发光定量分析。化 学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化学发光反应中的的反应物；第二类物质是化 学发光反应中的催化剂，增敏剂或抑制剂;第三类是偶合反应中反应物，催化剂，增敏剂等。这三类 物质还可以通过标记方式来测定人们感兴区的其他物质。这就夸大了化学发光分析的应用范围。
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1．化学发光的基本条件
一个化学反应要产生化学发光现象，
必须满足以下条件：
第一是：该反应必须提供足够的激发能（对于蓝光发射需 300kj.mol-1,红光需150kj.mol-1），导致电子从基态跃迁至 激发态。
第二是：化学反应的能量至少能被一种物质所说接受并使之 生成激发态。
第三是：处于激发态的分子或原子必须具有一定的化学发光 量子效率时期能释放出光子，或能转移它的能量给另一个分 子使之处于激发态并使 发出光子
化学发光试剂及其应用
化学发光试剂及其应用
▪ 化学发光试剂概述 ▪ 化学发光分析的基本原理 ▪ 化学发光试剂的主要类型 ▪ 化学发光试剂的应用
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化学发光试剂概述
▪
发光被定义为处在激发态的分子或原子回到基态时所发射
的光。按照获得激发态能源的不同有各种类型的发光。在化学
发光（chemluminescence, CL）中，由化学反应产生能的原
多氧化剂（例如H2O2,O2,ClO-等）氧化而发出蓝色的
广，发光反应的量子产率介于0.01~0.05之间是一个研
究最早，最多，应用最广泛的发光试剂。
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▪ 鲁米诺（luminol）
O
NH NH
NH2
O
异鲁米诺(isoluminol)
O
NH NH H2N O
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▪ 鲁米诺的发光机理见下图，
O
NH NH
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▪
பைடு நூலகம்例如，在上述化学发光反应中，如果物质B保持恒定，而物质A变化 且为一级或假一及反应，则
I C L I C L ( t ) d t C L [ d A ( t ) /d t ] d t C L C A
此式表明化学发光强度与A的浓度成正比。
化学发光强度
时间
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▪ 。 化学发光分析测定的物质对象可分为三类：第一类物质是化 学发光反应中的的反应物；第二类物质是化学发光反应中的催 化剂，增敏剂或抑制剂;第三类是偶合反应中反应物，催化剂， 增敏剂等。这三类物质还可以通过标记方式来测定人们感兴区 的其他物质。这就夸大了化学发光分析的应用范围。
❖ 与鲁米诺相比，过氧草酸盐化学反应的发光效率更高，可达到27%，且 在较宽的酸度范围内(PH4~10)都能发光。
❖ 过草酸发光体西可用于测定的物质有：（1）待测物质本身是荧光剂， 可作为能量接受体和发光体;(2)待测物质曹禺某一反应可产生H2O2等氧 化剂而间接被测定；（3）待测物质可被淹声称荧光物质。可见，过氧草 酸盐类化学发光法英的分析应用还赖于新荧光衍生剂的开发。