茶叶中茶黄素测定的提取方法探讨_周卫龙
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果见表 ３。用 ＨＰＬＣ 法测定茶黄素及总量， 结果表 明， 茶黄素用 ＩＳＯ１４５０２－２ 有机溶剂提取法比水提 取法含量高， Ｒｏｂｅｒｔｓ 水提取法和 ＧＢ ／Ｔ８３０５－２００２
４４
中国茶叶加工 ２００７， （ ３）
表 ２ 茶黄素及总量精密度
组分
ＴＦ ＴＦＤＧ ＴＦ－３－Ｇ ＴＦ－３＇ －Ｇ 茶黄素总量
本试验所用水为重蒸馏水， 除特殊规定外， 所 用试剂为分析纯。 １．２．１ 乙腈： 色谱纯。 １．２．２ 甲醇。 １．２．３ 乙酸。 １．２．４ 甲醇水溶液（Ｖ ／Ｖ）： ７ ／３。 １．２．５ ＥＤＴＡ 浴液： １０ｍｇ ／ｍＬ （ 现配） 。 １．２．６ 抗坏血酸溶液： １０ｍｇ ／ｍＬ （ 现配） 。 １．２．７ 稳定液： 分别将 ２５ｍＬＥＤＴＡ 溶液， ２５ｍＬ 抗 坏血酸溶液， ５０ｍＬ 乙腈加入 ５００ｍＬ 容量瓶中， 用 水定容至刻度， 摇匀。 １．２．８ 茶黄素类化合物标样购自 Ｓｉｇｍａ 公司： 茶黄 素类化合物混合标样的纯度为 ８０．３％， 其中茶黄 素 ＴＦ 为 １３．３２％、茶黄素单没食子酸酯 ＴＦ－３－Ｇ 为 ３１．１１％ 、 茶 黄 素 单 没 食 子 酸 酯 ＴＦ－３＇ －Ｇ 为
收稿日期： ２００７－ ０７－ １０
１ 实验部分
１．１ 仪器 １．１．１ 分析天平： 精度 ０．０００１ｇ。 １．１．２ 水浴锅。 １．１．３ 离心机： 转速 ３５００ｒ ／ｍｉｎ。 １．１．４ 高压液相色谱仪（岛津 ＬＣ－ ６Ａ）： 包 含梯度洗 脱及紫外检测器（检测波长 ２７８ｎｍ）。 １．１．５ 数据处理系统（岛津 ＣＲ－ ３Ａ）。 １．１．６ 液 相 色 谱 柱 ： Ｃ１８ （ 粒 径 ５"ｍ， ２５０ｍｍ × ４．６ｍｍ）。 １．２ 主要试剂
Ｂ、ＧＢ ／Ｔ８３０５－２００２ 水提取法： 称取茶样 ２ｇ（精 确 到 ０．０００１ｇ）， 置 于 ５００ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 沸 水 ３００ｍＬ， 于 沸 水 浴 上 提 取 ４５ｍｉｎ（每 １０ｍｉｎ 摇 瓶 一 次 ）， 趁 热 减 压 过 滤 ， 冷 却 定 容 到 ５００ｍＬ， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。
茶叶中茶黄素含量的测定是否能正确反映 茶叶的真实水平， 供试液的制备尤为重要， 目前 茶叶中茶黄素供试液的制备主要有以下三种： Ａ、 Ｒｏｂｅｒｔｓ 水 提 取 法 ： Ｂ、ＧＢ ／Ｔ８３０５－２００２ 水 提 取 法 ； Ｃ、ＩＳＯ１４５０２－２ 有机溶剂提取法。
Ａ、Ｒｏｂｅｒｔｓ 水提取法： 称 取茶样 ９ｇ （精 确 到 ０．０００１ｇ）， 置 于 ５００ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 沸 水 ３７５ｍＬ， 于沸水浴上 提取 １０ｍｉｎ（每 ５ｍｉｎ 摇 瓶 一 次）， 用 脱 脂棉过滤， 冷却， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。
１．０１
１．０９
１．１０
１．０９
１．０５
２．４０
２．３８
２．３６
２．３７
水提取法提取结果较接近。差异不大。 如前所述， 茶叶中茶黄素是红茶品质的主要
成分之一， 与红茶品质， 尤其是汤色密切相关， 也 是与红茶价格呈正相关的重要品质指标。如果将 茶黄素作为红茶标准的指标， 笔者认为用 ＨＰＬＣ 法检测茶黄素准确度及精密度均较理想的前提
告读者
１、因版面原因， 《名优绿茶加工技术与品质（ 第三讲） 》延顺到下一期刊登。 ２、更正： 《中国茶叶加工》２００７ 年第 ２ 期第 １０ 页， 作者包佐森为包佐淼。
↓ １００％Ａ 相。
２ 结果与讨论
２．１ 线性关系 分别吸取标准工作溶液 １０!ｌ 注射入液相 色
谱仪进行分析。４ 种茶黄素的线性回归方程、相关 系数和线性范围见表 １。结果表明， ＨＰＬＣ 法在所 测浓度范围内， 茶黄素含量与峰面积呈良好的线 性关系。
表 １ 四种茶黄素类化合物的线性回归方程， 相关系数及线性范围
流 动 相 Ｂ： 分 别 将 ８００ｍＬ 乙 腈（２．１）， ２０ｍＬ 乙 酸（２．３）， ２ｍＬＥＤＴＡ（２．５）加入 １０００ｍＬ 容量瓶 中， 用 水定容至刻度， 摇匀。溶液需过 ０．４５!ｍ 膜。 １．２．１０ 茶 黄 素 标 准 工 作 溶 液 ： ＴＦ １０!ｇ ／ｍＬ ￣ １５０!ｇ ／ｍＬ、ＴＦ－３－Ｇ ２５ ￣!ｇ ／ｍＬ￣３００!ｇ ／ｍＬ、ＴＦ－３＇－ Ｇ １０ｇ ／!ｇ ／ｍＬ ～１５０／ｍＬ、ＴＦＤＧ１０!ｇ／ｍＬ ～２００!ｇ ／ ｍＬ。 １．３ 提取方法
检测分析
中国茶叶加工 ２００７， （３）： ４２～４４
中国茶叶加工 ２００７， （ ３）
茶叶中茶黄素测定的提取方法探讨
周卫龙 徐建峰 许 凌
（中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心 杭州 ３１００２０）
摘 要 用 ＨＰＬＣ 方 法 测 定 茶 叶 中 茶 黄 素 含 量 ， 茶 黄 素 标 准 工 作 液（０"ｇ ／ｍＬ￣１００"ｇ ／ｍＬ）测 定 呈 较 好 的 线 性 关 系 ， 相 关 系 数 Ｒ２≥０．９９５０。 对 茶 叶 中 茶 黄 素 测 定 供 试 液 的 制 备 方 法 进 行 了 比 较 ， 结 果 表 明 茶 黄 素 用 ＩＳＯ１４５０２－ ２ 有 机 溶 剂 提 取 法 比 水 提 取 法 含 量 高， Ｒｏｂｅｒｔｓ 水 提 取 法 和 ＧＢ／Ｔ８３０５－ ２００２ 水 提 取 法 提 取 结 果 较 接 近， 差异不大。
Ｃ、ＩＳＯ１４５０２－２ 有机溶剂提取法： 称取 ０．２ｇ（精 确到 ０．０００１ｇ）均匀磨碎的试样于 １０ｍＬ 离心管中， 加入在 ７０℃中预热过的 ７０％甲醇溶液５ｍＬ， 用玻
璃棒充分搅拌均匀湿润， 立即移入 ７０℃水浴中， 浸提 １０ 分钟（隔 ５ 分钟搅拌一次）， 浸提后冷却至 室 温 ， 转 入 离 心 机 在 ３５００ｒ ／ｍｉｎ 转 速 下 离 心 １０ｍｉｎ， 将上清液转移至 １０ｍＬ 容量瓶。残渣再用 ５ｍＬ 的 ７０％甲醇溶液提取一次， 重复以上操作。 合并提取液定容至 １０ｍＬ， 摇匀（该提取液在 ４℃下 可至多保存 ２４ 小时）。用移液管移取上述提取液 ２ｍＬ 至 １０ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 用 稳 定 溶 液（２．７）定 容 至 刻度， 摇匀， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。 １．４ 测定方法
ＴＦ－３－Ｇ
平行测定 平均值
０．２８
０．２８
０．２８
０．２８
０．２９
０．２９
Байду номын сангаас
０．２９
０．２８
０．７９
０．８０
０．７９
０．７９
ＴＦ－３＇ －Ｇ
平行测定 平均值
０．１７
０．１７
０．１７
０．１７
０．１８
０．１８
０．１８
０．１７
０．４３
０．４１
０．４２
０．４２
茶黄素总量
平行测定 平均值
１．０１
０．９９
１．００
平 行 测 定（峰 面 积）
２１３７４５、２２０６８４、２１６９２５、２１８８７９、２２０２２４、２１９２２８、２２３０５５ ３２８９９３、３３１９２６、３２４８９５、３２７２１４、３２５７３０、３２８９４３、３３３０７９ ５０１７５５、５１７１１４、４９４７２１、４９７９４３、４９６９９８、５０４４３１、５０７１８８ ２５６２７０， ２４９２９５、２５５８２８、２５９２０３、２５８２３６、２５９１２６、２５４３３４ １３００７６３、１３１９０１９、１２９２３６９、１３０３２３９、１３０１１８８、１３１１７２８、１３１７６５６
相关系数 Ｒ２
０．９９８４ ０．９９８４ ０．９９９３ ０．９９５０
２．２ 重现性、相对标准偏差 吸取标准工作溶液 １０!ｌ 注射 入液相色谱 仪
进行分析， 连续进行 ７ 次平行测定， 计算相对标 准偏差见表 ２。结果表明， ＨＰＬＣ 法测定茶黄素及 总量的相对标准偏差≤５％。
２．３ 茶叶样品提取比较 笔者对提取方法 Ａ、Ｂ 及 Ｃ 进行比较测定， 结
平均值
２１８９６３ ３２８６８３ ５０２８７９ ２５６０４２ １３０６５６６
说明： 进样浓度 ＴＦ 为 ５９．５!ｇ ／ｍＬ、ＴＦＤＧ 为 ９０．３!ｇ ／ｍＬ， ＴＦ－３－Ｇ １３８．９!ｇ ／ｍＬ， ＴＦ－３＇ －Ｇ 为 ７０．０!ｇ ／ｍＬ
相对标准偏差
１．３％ ０．９％ １．５％ １．４％ ０．８％
周卫龙 等：茶叶中茶黄素测定的提取方法探讨
４３
１５．６６％、茶黄素双没食子酸酯 ＴＦＤＧ 为 ２０．２１％。 １．２．９ 液相色谱流动相
流动相 Ａ： 分别将 ９０ｍＬ 乙腈（２．１）， ２０ｍＬ 乙酸 （２．３）， ２ｍＬＥＤＴＡ（２．５）加入 １０００ｍＬ 容量瓶 中， 用水 定容至刻度， 摇匀。溶液需过 ０．４５!ｍ 膜。
ＨＰＬＣ 法： 采用 ＩＳＯ１４５０２－ ２ 法 色谱条件 流动相流速 ： １ｍＬ ／ｍｉｎ 柱温： ３５℃ 紫外检 测器： "＝２７８ｎｍ 梯度条件： １００％Ａ 相保持 １０ｍｉｎ；
↓ １５ｍｉｎ 内由 １００％Ａ 相→６８％Ａ 相、３２％Ｂ 相；
↓ ６８％Ａ 相、３２％Ｂ 相保持 １０ｍｉｎ：
下， 提取方法的不同， 其结果相差较大。因此， 统 一并规范红茶中茶黄素含量测定的提取的方法， 从而准确反映红茶中茶黄素的真实含量， 并据此 而 制 定 统 一 的 指 标 、统 一 的 评 判 标 准 无 疑 是 很 有 必要的。
附 １ 茶黄素标准图谱
附 ２ 茶叶样品图谱
注： １、ＴＦ ２、ＴＦＤＧ ３、ＴＦ－３－Ｇ ４、ＴＦ－３＇ －Ｇ
关键词 茶黄素 提取
茶黄素最早是由 Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｅ．Ａ．Ｈ（１９５７）从红茶 中发现的， 茶黄素是多酚类物质氧化形成的一类 能溶于乙酸乙酯的具有苯骈卓酚酮结构的化合 物的总称， 目前已发现的茶黄素种类有 １８ 种， 但 研究较多的为以下四种： 茶黄素（ＴＦ）、茶黄素单没 食 子 酸 酯（ＴＦ－３－Ｇ 和 ＴＦ－３＇ －Ｇ）和 茶 黄 素 双 没 食 子 酸酯（ＴＦＤＧ）。茶黄素是构成红茶品质的主要成分 之一， 与红茶品质， 尤其是汤色密切相关， 也是与 红茶价格呈正相关的重要品质指标。国内外大量 研 究 表 明 茶 黄 素 类 具 有 抗 癌 、抗 氧 化 、抗 菌 消 炎 及防止心血管疾病等多种药理功能， 在某些方面 甚至优于儿茶素， 是一类极具开发潜力的天然产 物。目前有关茶黄素的测定一般采 用英国 Ｒｏｂ－ ｅｒｔｓ 茶黄素、茶红素的分光光度测定法、日本竹尾 忠一等 提出的 茶 黄 素 、茶 红 素 和 高 聚 物（茶 褐 素） 的 系 统 分 析 方 法 、中 国 程 启 坤 的 红 茶 色 素 的 系 统 分 析 法 以 及 氯 化 铝 （Ａ１Ｃ１３）比 色 法 、!－氨 基 乙 基 二 苯 硼 酸 酯 （Ｆｌａｖｏｇｎｏｓｔ）试 剂 法 、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－ ２０ 柱 层 析 法 、Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ 法 、高 效 液 相 色 谱 法 、毛 细 管 电 泳 法 、高 速 逆 流 色 谱 法 等 。 在 上 述 这 些 分 析 方 法中对茶叶样品中茶黄素的提取一般有水提取 和有机溶剂提取法两种， 为了能规范统一茶叶的 提取， 正确反映茶叶中茶黄素的真实含量， 笔者 用 ＨＰＬＣ 法测定茶叶中茶黄素含量， 对茶叶中茶 黄素的提取方法做了初步的研究。
表 ３ 茶叶样品中茶黄素含量提取方法比较
提取 方法
ＴＦ 平行测定 平均值
ＴＦＤＧ 平行测定 平均值
０．２２
０．３４
Ａ
０．２０
０．２１
０．３４
０．３４
０．２２
０．３４
０．２４
０．３８
Ｂ
０．２４
０．２４
０．３９
０．３８
０．２３
０．３７
０．３６
０．８２
Ｃ
０３４
０．３５
０．８１
０．８１
０．３５
０．８１
说明： 茶黄素含量单位为质量百分含量（％）
组分
ＴＦ ＴＦＤＧ ＴＦ－３－Ｇ ＴＦ－３＇ －Ｇ
线性范围（!ｇ ／ｍＬ）
１０－ １５０ １０－ ２００ ２５－ ３００ １０－ １５０
回归方程
ｙ＝３８６８．７ｘ－ ７９３５．３ ｙ＝３８６５．４ｘ－ １１４３２ ｙ＝３８２１．３ｘ－ １２９３９ ｙ＝３９０４．９ｘ－ １１１７６
说明： ｙ： 峰面积； ｘ： 质量浓度（!ｇ ／ｍＬ）
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中国茶叶加工 ２００７， （ ３）
表 ２ 茶黄素及总量精密度
组分
ＴＦ ＴＦＤＧ ＴＦ－３－Ｇ ＴＦ－３＇ －Ｇ 茶黄素总量
本试验所用水为重蒸馏水， 除特殊规定外， 所 用试剂为分析纯。 １．２．１ 乙腈： 色谱纯。 １．２．２ 甲醇。 １．２．３ 乙酸。 １．２．４ 甲醇水溶液（Ｖ ／Ｖ）： ７ ／３。 １．２．５ ＥＤＴＡ 浴液： １０ｍｇ ／ｍＬ （ 现配） 。 １．２．６ 抗坏血酸溶液： １０ｍｇ ／ｍＬ （ 现配） 。 １．２．７ 稳定液： 分别将 ２５ｍＬＥＤＴＡ 溶液， ２５ｍＬ 抗 坏血酸溶液， ５０ｍＬ 乙腈加入 ５００ｍＬ 容量瓶中， 用 水定容至刻度， 摇匀。 １．２．８ 茶黄素类化合物标样购自 Ｓｉｇｍａ 公司： 茶黄 素类化合物混合标样的纯度为 ８０．３％， 其中茶黄 素 ＴＦ 为 １３．３２％、茶黄素单没食子酸酯 ＴＦ－３－Ｇ 为 ３１．１１％ 、 茶 黄 素 单 没 食 子 酸 酯 ＴＦ－３＇ －Ｇ 为
收稿日期： ２００７－ ０７－ １０
１ 实验部分
１．１ 仪器 １．１．１ 分析天平： 精度 ０．０００１ｇ。 １．１．２ 水浴锅。 １．１．３ 离心机： 转速 ３５００ｒ ／ｍｉｎ。 １．１．４ 高压液相色谱仪（岛津 ＬＣ－ ６Ａ）： 包 含梯度洗 脱及紫外检测器（检测波长 ２７８ｎｍ）。 １．１．５ 数据处理系统（岛津 ＣＲ－ ３Ａ）。 １．１．６ 液 相 色 谱 柱 ： Ｃ１８ （ 粒 径 ５"ｍ， ２５０ｍｍ × ４．６ｍｍ）。 １．２ 主要试剂
Ｂ、ＧＢ ／Ｔ８３０５－２００２ 水提取法： 称取茶样 ２ｇ（精 确 到 ０．０００１ｇ）， 置 于 ５００ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 沸 水 ３００ｍＬ， 于 沸 水 浴 上 提 取 ４５ｍｉｎ（每 １０ｍｉｎ 摇 瓶 一 次 ）， 趁 热 减 压 过 滤 ， 冷 却 定 容 到 ５００ｍＬ， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。
茶叶中茶黄素含量的测定是否能正确反映 茶叶的真实水平， 供试液的制备尤为重要， 目前 茶叶中茶黄素供试液的制备主要有以下三种： Ａ、 Ｒｏｂｅｒｔｓ 水 提 取 法 ： Ｂ、ＧＢ ／Ｔ８３０５－２００２ 水 提 取 法 ； Ｃ、ＩＳＯ１４５０２－２ 有机溶剂提取法。
Ａ、Ｒｏｂｅｒｔｓ 水提取法： 称 取茶样 ９ｇ （精 确 到 ０．０００１ｇ）， 置 于 ５００ｍＬ 锥 形 瓶 中 ， 加 沸 水 ３７５ｍＬ， 于沸水浴上 提取 １０ｍｉｎ（每 ５ｍｉｎ 摇 瓶 一 次）， 用 脱 脂棉过滤， 冷却， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。
１．０１
１．０９
１．１０
１．０９
１．０５
２．４０
２．３８
２．３６
２．３７
水提取法提取结果较接近。差异不大。 如前所述， 茶叶中茶黄素是红茶品质的主要
成分之一， 与红茶品质， 尤其是汤色密切相关， 也 是与红茶价格呈正相关的重要品质指标。如果将 茶黄素作为红茶标准的指标， 笔者认为用 ＨＰＬＣ 法检测茶黄素准确度及精密度均较理想的前提
告读者
１、因版面原因， 《名优绿茶加工技术与品质（ 第三讲） 》延顺到下一期刊登。 ２、更正： 《中国茶叶加工》２００７ 年第 ２ 期第 １０ 页， 作者包佐森为包佐淼。
↓ １００％Ａ 相。
２ 结果与讨论
２．１ 线性关系 分别吸取标准工作溶液 １０!ｌ 注射入液相 色
谱仪进行分析。４ 种茶黄素的线性回归方程、相关 系数和线性范围见表 １。结果表明， ＨＰＬＣ 法在所 测浓度范围内， 茶黄素含量与峰面积呈良好的线 性关系。
表 １ 四种茶黄素类化合物的线性回归方程， 相关系数及线性范围
流 动 相 Ｂ： 分 别 将 ８００ｍＬ 乙 腈（２．１）， ２０ｍＬ 乙 酸（２．３）， ２ｍＬＥＤＴＡ（２．５）加入 １０００ｍＬ 容量瓶 中， 用 水定容至刻度， 摇匀。溶液需过 ０．４５!ｍ 膜。 １．２．１０ 茶 黄 素 标 准 工 作 溶 液 ： ＴＦ １０!ｇ ／ｍＬ ￣ １５０!ｇ ／ｍＬ、ＴＦ－３－Ｇ ２５ ￣!ｇ ／ｍＬ￣３００!ｇ ／ｍＬ、ＴＦ－３＇－ Ｇ １０ｇ ／!ｇ ／ｍＬ ～１５０／ｍＬ、ＴＦＤＧ１０!ｇ／ｍＬ ～２００!ｇ ／ ｍＬ。 １．３ 提取方法
检测分析
中国茶叶加工 ２００７， （３）： ４２～４４
中国茶叶加工 ２００７， （ ３）
茶叶中茶黄素测定的提取方法探讨
周卫龙 徐建峰 许 凌
（中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院、国家茶叶质量监督检验中心 杭州 ３１００２０）
摘 要 用 ＨＰＬＣ 方 法 测 定 茶 叶 中 茶 黄 素 含 量 ， 茶 黄 素 标 准 工 作 液（０"ｇ ／ｍＬ￣１００"ｇ ／ｍＬ）测 定 呈 较 好 的 线 性 关 系 ， 相 关 系 数 Ｒ２≥０．９９５０。 对 茶 叶 中 茶 黄 素 测 定 供 试 液 的 制 备 方 法 进 行 了 比 较 ， 结 果 表 明 茶 黄 素 用 ＩＳＯ１４５０２－ ２ 有 机 溶 剂 提 取 法 比 水 提 取 法 含 量 高， Ｒｏｂｅｒｔｓ 水 提 取 法 和 ＧＢ／Ｔ８３０５－ ２００２ 水 提 取 法 提 取 结 果 较 接 近， 差异不大。
Ｃ、ＩＳＯ１４５０２－２ 有机溶剂提取法： 称取 ０．２ｇ（精 确到 ０．０００１ｇ）均匀磨碎的试样于 １０ｍＬ 离心管中， 加入在 ７０℃中预热过的 ７０％甲醇溶液５ｍＬ， 用玻
璃棒充分搅拌均匀湿润， 立即移入 ７０℃水浴中， 浸提 １０ 分钟（隔 ５ 分钟搅拌一次）， 浸提后冷却至 室 温 ， 转 入 离 心 机 在 ３５００ｒ ／ｍｉｎ 转 速 下 离 心 １０ｍｉｎ， 将上清液转移至 １０ｍＬ 容量瓶。残渣再用 ５ｍＬ 的 ７０％甲醇溶液提取一次， 重复以上操作。 合并提取液定容至 １０ｍＬ， 摇匀（该提取液在 ４℃下 可至多保存 ２４ 小时）。用移液管移取上述提取液 ２ｍＬ 至 １０ｍＬ 容 量 瓶 中 ， 用 稳 定 溶 液（２．７）定 容 至 刻度， 摇匀， 过 ０．４５!ｍ 膜， 待测。 １．４ 测定方法
ＴＦ－３－Ｇ
平行测定 平均值
０．２８
０．２８
０．２８
０．２８
０．２９
０．２９
Байду номын сангаас
０．２９
０．２８
０．７９
０．８０
０．７９
０．７９
ＴＦ－３＇ －Ｇ
平行测定 平均值
０．１７
０．１７
０．１７
０．１７
０．１８
０．１８
０．１８
０．１７
０．４３
０．４１
０．４２
０．４２
茶黄素总量
平行测定 平均值
１．０１
０．９９
１．００
平 行 测 定（峰 面 积）
２１３７４５、２２０６８４、２１６９２５、２１８８７９、２２０２２４、２１９２２８、２２３０５５ ３２８９９３、３３１９２６、３２４８９５、３２７２１４、３２５７３０、３２８９４３、３３３０７９ ５０１７５５、５１７１１４、４９４７２１、４９７９４３、４９６９９８、５０４４３１、５０７１８８ ２５６２７０， ２４９２９５、２５５８２８、２５９２０３、２５８２３６、２５９１２６、２５４３３４ １３００７６３、１３１９０１９、１２９２３６９、１３０３２３９、１３０１１８８、１３１１７２８、１３１７６５６
相关系数 Ｒ２
０．９９８４ ０．９９８４ ０．９９９３ ０．９９５０
２．２ 重现性、相对标准偏差 吸取标准工作溶液 １０!ｌ 注射 入液相色谱 仪
进行分析， 连续进行 ７ 次平行测定， 计算相对标 准偏差见表 ２。结果表明， ＨＰＬＣ 法测定茶黄素及 总量的相对标准偏差≤５％。
２．３ 茶叶样品提取比较 笔者对提取方法 Ａ、Ｂ 及 Ｃ 进行比较测定， 结
平均值
２１８９６３ ３２８６８３ ５０２８７９ ２５６０４２ １３０６５６６
说明： 进样浓度 ＴＦ 为 ５９．５!ｇ ／ｍＬ、ＴＦＤＧ 为 ９０．３!ｇ ／ｍＬ， ＴＦ－３－Ｇ １３８．９!ｇ ／ｍＬ， ＴＦ－３＇ －Ｇ 为 ７０．０!ｇ ／ｍＬ
相对标准偏差
１．３％ ０．９％ １．５％ １．４％ ０．８％
周卫龙 等：茶叶中茶黄素测定的提取方法探讨
４３
１５．６６％、茶黄素双没食子酸酯 ＴＦＤＧ 为 ２０．２１％。 １．２．９ 液相色谱流动相
流动相 Ａ： 分别将 ９０ｍＬ 乙腈（２．１）， ２０ｍＬ 乙酸 （２．３）， ２ｍＬＥＤＴＡ（２．５）加入 １０００ｍＬ 容量瓶 中， 用水 定容至刻度， 摇匀。溶液需过 ０．４５!ｍ 膜。
ＨＰＬＣ 法： 采用 ＩＳＯ１４５０２－ ２ 法 色谱条件 流动相流速 ： １ｍＬ ／ｍｉｎ 柱温： ３５℃ 紫外检 测器： "＝２７８ｎｍ 梯度条件： １００％Ａ 相保持 １０ｍｉｎ；
↓ １５ｍｉｎ 内由 １００％Ａ 相→６８％Ａ 相、３２％Ｂ 相；
↓ ６８％Ａ 相、３２％Ｂ 相保持 １０ｍｉｎ：
下， 提取方法的不同， 其结果相差较大。因此， 统 一并规范红茶中茶黄素含量测定的提取的方法， 从而准确反映红茶中茶黄素的真实含量， 并据此 而 制 定 统 一 的 指 标 、统 一 的 评 判 标 准 无 疑 是 很 有 必要的。
附 １ 茶黄素标准图谱
附 ２ 茶叶样品图谱
注： １、ＴＦ ２、ＴＦＤＧ ３、ＴＦ－３－Ｇ ４、ＴＦ－３＇ －Ｇ
关键词 茶黄素 提取
茶黄素最早是由 Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｅ．Ａ．Ｈ（１９５７）从红茶 中发现的， 茶黄素是多酚类物质氧化形成的一类 能溶于乙酸乙酯的具有苯骈卓酚酮结构的化合 物的总称， 目前已发现的茶黄素种类有 １８ 种， 但 研究较多的为以下四种： 茶黄素（ＴＦ）、茶黄素单没 食 子 酸 酯（ＴＦ－３－Ｇ 和 ＴＦ－３＇ －Ｇ）和 茶 黄 素 双 没 食 子 酸酯（ＴＦＤＧ）。茶黄素是构成红茶品质的主要成分 之一， 与红茶品质， 尤其是汤色密切相关， 也是与 红茶价格呈正相关的重要品质指标。国内外大量 研 究 表 明 茶 黄 素 类 具 有 抗 癌 、抗 氧 化 、抗 菌 消 炎 及防止心血管疾病等多种药理功能， 在某些方面 甚至优于儿茶素， 是一类极具开发潜力的天然产 物。目前有关茶黄素的测定一般采 用英国 Ｒｏｂ－ ｅｒｔｓ 茶黄素、茶红素的分光光度测定法、日本竹尾 忠一等 提出的 茶 黄 素 、茶 红 素 和 高 聚 物（茶 褐 素） 的 系 统 分 析 方 法 、中 国 程 启 坤 的 红 茶 色 素 的 系 统 分 析 法 以 及 氯 化 铝 （Ａ１Ｃ１３）比 色 法 、!－氨 基 乙 基 二 苯 硼 酸 酯 （Ｆｌａｖｏｇｎｏｓｔ）试 剂 法 、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－ ２０ 柱 层 析 法 、Ｗｈｉｔｅｈｅａｄ 法 、高 效 液 相 色 谱 法 、毛 细 管 电 泳 法 、高 速 逆 流 色 谱 法 等 。 在 上 述 这 些 分 析 方 法中对茶叶样品中茶黄素的提取一般有水提取 和有机溶剂提取法两种， 为了能规范统一茶叶的 提取， 正确反映茶叶中茶黄素的真实含量， 笔者 用 ＨＰＬＣ 法测定茶叶中茶黄素含量， 对茶叶中茶 黄素的提取方法做了初步的研究。
表 ３ 茶叶样品中茶黄素含量提取方法比较
提取 方法
ＴＦ 平行测定 平均值
ＴＦＤＧ 平行测定 平均值
０．２２
０．３４
Ａ
０．２０
０．２１
０．３４
０．３４
０．２２
０．３４
０．２４
０．３８
Ｂ
０．２４
０．２４
０．３９
０．３８
０．２３
０．３７
０．３６
０．８２
Ｃ
０３４
０．３５
０．８１
０．８１
０．３５
０．８１
说明： 茶黄素含量单位为质量百分含量（％）
组分
ＴＦ ＴＦＤＧ ＴＦ－３－Ｇ ＴＦ－３＇ －Ｇ
线性范围（!ｇ ／ｍＬ）
１０－ １５０ １０－ ２００ ２５－ ３００ １０－ １５０
回归方程
ｙ＝３８６８．７ｘ－ ７９３５．３ ｙ＝３８６５．４ｘ－ １１４３２ ｙ＝３８２１．３ｘ－ １２９３９ ｙ＝３９０４．９ｘ－ １１１７６
说明： ｙ： 峰面积； ｘ： 质量浓度（!ｇ ／ｍＬ）