食用菌组织分离
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项
食用菌菌种分离的方法和操作步骤以及注意事项食用菌菌种分离的方法和操作步骤菌种分离即是进行食用菌菌丝纯化的过程，它是制种工作的重要环节，通俗地讲就是把食用菌菌丝从自然中单独分离出来进行纯培养，从而获得纯食用菌菌丝的过程。
菌种分离是一项重要而又细致的工作，每个环节都必须严格按照无菌操作规程进行。
食用菌的分离方法很多，常用的有组织分离法、孢子分离法和基内菌丝分离法三种。
1.组织分离法组织分离法是将食用菌的部分组织移接到斜面培养基上获得纯培养的方法。
其特点：一是属于无性繁殖，能够保持原有菌种的优良特性，是生产中获得纯菌种的常用方法，且简单易行，取材广泛，菌丝萌发快。
二是组织分离操作简便，又不易带入杂菌，容易获得纯菌种。
但对银耳、黑木耳等胶质菌因其子实体种菌丝极少，如用组织分离培养，则往往不易成功。
1.1子实体分离种菇要选择朵大盖厚、柄短、八九分成熟的优良品种。
切去菇体基部，在超净工作台用75%的酒精棉球进行擦拭菌盖与菌柄两次，进行表面消毒。
接种时，只要将种菇撕开，用消毒后的小刀在菌柄与菌盖的交界处切取一小块组织，再用接种针将组织块放入PDA培养基的试管斜面中间。
置于24℃温度下培养3-5天就可以看到组织块上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。
如香菇、平菇等可以使用此方法。
1.2菌核组织分离茯苓、猪苓、雷丸等食用菌的子实体不易采集。
而常见的是它储藏营养的菌核。
用菌核分离，同样可以获得菌种。
方法是将菌核表面洗净，用酒精消毒，切开菌核，取中间组织一小块，约黄豆大小，接种在PDA培养基斜面上，在24℃下培养，产生菌丝后进行分离纯化。
应注意的是，菌核是储藏器官，大部分是多糖类杂质，只有少量的菌丝，因此挑选的组织块要大一些，如果组织块过小，则不易分离出菌种。
1.3菌索分离法菌索分离常用于蜜环菌分离。
方法是选新鲜的活菌索，用75%酒精棉球将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀切成小段，接入PDA斜面培养基上，在24℃下培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法 -回复
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法-回复食用菌孢子分离和组织分离是研究食用菌的重要步骤。
通过这些方法，可以获得纯净的种子菌株，进一步进行研究和培育工作。
本文将详细介绍食用菌孢子分离和组织分离的方法。
食用菌孢子分离是从食用菌的子实体中提取和分离菌种的方法。
通常情况下，孢子是种子菌株的一种形态，具有较高的萌发率和遗传稳定性。
食用菌孢子分离的步骤如下：1. 孢子的收集：首先，需要选择新鲜的子实体作为材料。
将子实体放置在无菌条件下，避免受到外界的污染。
将子实体切成小块或研磨成粉末，然后加入适量的生理盐水、无菌蒸馏水或无菌缓冲液，将其悬浮起来。
2. 孢子的分离：将悬浮的子实体材料经过一系列稀释和分离操作，使得菌种的纯度逐渐提高。
常用的分离方法包括层析法、平板法和过滤法等。
- 层析法：根据菌种在特定环境中的生长特点，选取适当的培养基和培养条件，通过层析柱或滤纸片等材料将菌种分离出来。
层析法的优点是可以得到单独的孢子，分离纯度较高，缺点是操作过程相对复杂。
- 平板法：将悬浮的子实体材料均匀涂布在含有丰富养分的琼脂平板上，在适当的培养条件下培养。
随着细菌的生长，不同菌种会形成特殊的菌落形态，通过观察和筛选，得到纯净的菌种。
平板法简单易行，操作方便，但分离纯度可能较低。
- 过滤法：将悬浮的子实体材料过滤，使得孢子被隔离出来。
常用的过滤装置包括无菌纱布、无菌滤纸和无菌膜等。
过滤法分离快速方便，但分离纯度较低。
3. 孢子的培养：将分离得到的孢子接种到含有适当营养物质的培养基上，进行孢子的萌发和生长。
培养的环境因菌种而异，一般需要调节温度、湿度、光照等条件以促进其发育。
在培养的过程中，可以观察孢子的萌发率和生长状况，进一步筛选和培养纯净的种子菌株。
食用菌组织分离是从食用菌的组织中提取和分离菌种的方法。
与孢子分离相比，组织分离更加复杂，但可以得到更多更丰富的菌株资源。
食用菌组织分离的步骤如下：1. 组织的收集：选择新鲜的食用菌子实体作为材料，一般选择子实体颜色均匀、外观完整、没有腐败和感染的部分作为组织收集的对象。
香菇组织分离方法
试剂与培养基
制备所需的培养基和试剂 ，如孟加拉红培养基、 PDA培养基等。
菌种选择与准备
菌种选择
选择具有代表性的香菇品种。
菌种活化
将选定的香菇菌种在PDA培养基上进行活化，使 其恢复活力。
菌种扩大繁殖
将活化后的菌种接种到更大的培养基上，进行扩 大繁殖，以便后续的组织分离。
组织分离操作步骤
选取菌株
03 香菇子实体分离法
子实体采集与处理
采集成熟、健康的香 菇子实体。
将子实体切割成合适 大小的小块，一般约 为1-2cm。
将子实体清洗干净， 去除杂质和残留物。
无菌操作技术
在超净工作台上进行无菌操作 。
使用70%酒精或0.1%次氯酸钠 溶液对子实体进行表面消毒。
用无菌水冲洗子实体，去除消 毒剂残留。
湿度控制
维持适宜的湿度，以防止菌种受潮或过于干燥。
3
空气质量控制
保持良好的空气流通，避免有害气体积累。
06 香菇组织分离方法的优缺 点及改进方向
香菇组织分离方法的优缺点
优点 分离方法简单易操作，对设备要求不高，适合小规模实验或分离少量菌株。
可以获得较为纯的菌丝体，减少了杂菌污染的可能性。
香菇组织分离方法的优缺点
香菇组织分离的应用场景
香菇组织分离技术广泛应用于香 菇菌种选育、品种改良等领域；
通过该技术可以获得纯度较高的 菌丝体培养物，为进一步研究香 菇的生物学特性、生理生化特性
等提供材料；
此外，香菇组织分离技术还可以 用于生产食用菌菇类食品，如香 菇酱、香菇罐头等，提高产品的
品质和安全性。
02 香菇菌丝分离法
采用先进的仪器设备和分离技术，提高香菇菌株 的纯度和产量。
实验五 菌种组织分离法
实验五菌种组织分离法
目前食用菌主要栽培种类如平菇、香菇、草菇等生产上多采用组织分法制备菌种。
一、目的：
了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤，制备出栽培用菌种。
二、实验器材：
1、平菇或香菇等子实体。
2、接种箱、解剖剪、解剖刀、镊子、试管斜面、75%酒精、酒精棉球、无菌水、培养皿、紫外线灯、或硫磺。
三、实验方法：
1、菌种的选择：在出菇场要选择肉厚肥大、鲜嫩，出菇早、菇形整齐、菌柄短且无病害的做种。
2、将种菇表面用清水冲洗干净，放在接种箱（或无菌室内）进行表面消毒。
用镊子将种菇放在培养皿内，用另一反镊子夹75%酒精棉球（或0.1%升汞棉球）对种菇进行表面消毒，然后移入另一培养皿内再用无菌水反复洗涤三次，洗净残留的消毒剂。
3、用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的0.3-0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上，置24℃恒温箱中培养。
4、每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移新的试管斜面。
若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长应予以淘汰。
四、作业：
叙述组织分离的方法步骤，体会和注意事项，观察记载斜面菌落生长速度和成功率。
菌种的分离与培养
菌种的分离与培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。
所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。
菌种分母种、原种、栽培种。
(一）母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。
形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。
待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。
方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。
并在纱布上倒少许升汞或无菌水。
移入20℃左右恒温箱培养。
②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。
什么是食用菌菌种的组织分离技术？如何进行？
什么是食用菌菌种的组织分离技术？如何进行？
食用菌菌种的组织分离属于无性繁殖或克隆技术，从理论上讲，所获菌种不易发生遗传重组等变异，因此常被生产上采用。
选择无污染且菇形健壮的食用菌幼菇（6分成熟），采摘后及时放入灭过菌的纸袋中带回接种室，连同试管培养基等用品起放入接种箱内紫外灯照射或气雾熏蒸消毒。
随后，在接种箱内进行菌种分离操作，先用75%的酒精消毒双手和工具，然后用0.1%升汞液消毒种菇表面，用消过毒的解剖刀从菌盖与菌柄连接处的中部纵切开，在菌盖与菌柄交界处切成长条形小块，用接种钩钩取小块菌肉，迅速接入培养基斜面的中部，塞好棉塞，在25℃下培养3～5天即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，15～18天菌丝即可长满试管。
挑选菌丝健旺、无污染的菌管进行转接扩繁，经出菇试验合格后作为生产用母种。
食用菌母种的分离
孢子收集器示意图
3、母种转管接种与培养。
母种的接种必须在严格的无菌条件下进行。 否则将会造成严重污染，给生产造成造成巨大损失。 然后将所有试管及接种器具放入接种箱里进行消毒 灭菌，力求灭菌彻底。在点燃酒精灯火焰上进行操 作，将菌种试管和接种用斜面培养基放在火焰旁。 拨去棉塞，把消毒灭菌的接种针伸入菌种试管内， 挑小块菌种放入斜面培养基中（见下图）
3.工艺流程：
称量→煮制→分装→灭菌 → 排斜面→无菌检验
培养基的分装及排斜面示意图
（二）、母种的接种与培养
1．组织分离法制母种（无性繁殖） 将子实体、菌核、菌索等一小块组织放
于斜面培养基上，使其萌发为纯菌丝的方法， 称为组织分离。该法具有简便、易成功、能 保持原菌种性状等优点，但重复多，易退化， 应与孢子分离交替进行。组织分离法适用于 绝大多数食用菌
② 棉子壳培养基：棉子壳99.5%，石膏 0.3%，水适量。适用于培养平菇、猴头、金 针菇、鸡腿菇。
3.培养料的配制 ⑴ 木屑、棉籽壳培养料的拌料配制
木屑、棉籽壳培养料按配方称量后，堆制 混和，加水拌料，配方中的糖也可先溶于水 中再拌入。拌料时要控制料的含水量在60﹪ 左右 。
⑵ 谷粒培养料的配制
菌柄与菌盖交界处取组织块
用解剖刀或鲜剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把自己消毒 的种菇纵切开，然后用菌盖笔菌柄交界处，切取长宽的 0.3~0.5厘米的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上，置 24℃恒温箱中培养。
检查选
每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上 长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝 转移新的试管斜面。若在组织块附近或其他地方出现其他颜 色杂菌生长应予以淘汰。
谷粒因其营养较丰富，制作的菌种具有菌 丝萌发早、吃料快、抗衰老能力强、产量高 等优点，在生产中应用较多。一般是采用浸 泡法或煮熟法，也可用石灰水浸泡。
食用菌组织分离技术实验
实验四食用菌组织分离技术一、实验目的通过实验，熟悉食用菌组织分离原理，掌握通过组织分离技术获得食用菌纯菌种的方法。
二、实验原理组织分离法是指切取食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织接种到培养基上培养成纯菌丝体的方法。
组织分离是一种无性繁殖技术。
食用菌子实体或菌核等由双核菌丝体组成，在无菌条件下切取消毒后的组织小块，接种到制备好的斜面培养基上进行适温培养就可以获得纯菌丝体菌种。
三、方法步骤（一）种菇选择选择外观典型、中等大小、菌肉肥厚、无病虫害、七八分成熟（未开伞）的菇作种菇。
（二）种菇消毒切取菇体基部，放入已消毒灭菌好的超净工作台上。
用75%的酒精棉球对菇体进行表面消毒后再用无菌水冲洗2～3次，然后用无菌纱布或滤纸吸干菇体表面水分。
（三）组织块接种用灭菌后的解剖刀或手将消毒后的菇从中间切开或掰开为两半，用无菌镊子夹取菇柄与菇盖交接处绿豆大小的菌肉组织一块，接在斜面培养基的中央。
（四）菌种培养将接种后的斜面培养基放在25℃下培养，经过7～15天，菌丝即可长满斜面。
培养期间要经常检查，及时捡出感染试管。
以下事情找陈老师商量一下：1.本实验用双孢蘑菇或香菇做分离材料，因为目前平菇菇质较差，不适于进行组织分离，让他购买未开伞的双孢蘑菇或香菇。
菇要提前晾两天，以减少水分影响。
2.需要使用两个实验室的超精工作台同时进行实验。
3.给陈老师讲一下每个同学至少接种两只试管，预防感染。
4.75％酒精棉球、无菌水、解刨刀、镊子等工具要准备好。
5.最好做个预备实验，讲解时可以给学生做示范。
6.讲解时把超精工作台的紫外线灯打开，以节约时间。
香菇组织分离实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握香菇组织分离的基本原理和操作技术。
2. 通过实验，分离出香菇的纯菌种，为后续的香菇育种和栽培研究提供菌种资源。
二、实验原理香菇（Lentinula edodes）是一种珍贵的食用菌，其子实体含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质等营养成分。
香菇组织分离是指利用香菇子实体的菌肉组织作为接种物进行培养，从而获得纯菌种的方法。
该实验方法简单、快速、安全，是香菇菌种分离的重要手段。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜香菇子实体- PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）- 无菌水- 灭菌锅- 灭菌器械- 玻璃器皿- 显微镜2. 实验仪器：- 高压蒸汽灭菌器- 电子天平- 灭菌柜- 培养箱四、实验步骤1. 香菇子实体表面消毒：将新鲜香菇子实体用无菌水冲洗干净，用75%酒精棉球擦拭表面，再用无菌水冲洗。
2. 香菇组织分离：- 取一小块香菇菌肉组织，用无菌手术刀切下。
- 将切下的菌肉组织置于无菌培养皿中。
- 在无菌条件下，用接种针挑取一小块菌肉组织，接种于PDA培养基平板上。
- 将接种后的平板放入培养箱中，于适宜温度下培养。
3. 观察与记录：- 每日观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色、大小等特征。
- 当菌落长至适宜大小后，挑取单菌落进行纯化培养。
4. 菌种纯化：- 将单菌落接种于新的PDA培养基平板上。
- 再次放入培养箱中培养。
- 观察菌落生长情况，确保菌种纯度。
5. 菌种保存：- 将纯化后的香菇菌种接种于斜面培养基上。
- 放入4℃冰箱中保存。
五、实验结果与分析1. 香菇组织分离成功，获得了纯菌种。
2. 菌落特征：菌落呈白色，表面光滑，边缘整齐，质地致密。
3. 菌种纯度较高，未发现杂菌污染。
六、实验结论1. 香菇组织分离是一种简单、快速、安全的菌种分离方法，适用于香菇菌种分离。
2. 通过实验，成功分离出香菇纯菌种，为后续的香菇育种和栽培研究提供了菌种资源。
七、实验讨论1. 实验过程中，注意无菌操作，避免杂菌污染。
简述食用菌孢子分离和组织分离的方法
食用菌是指可以食用并具有药用价值的真菌类食物，如蘑菇、姬松茸等。
而食用菌的孢子分离和组织分离则是对食用菌进行研究和培育的重要步骤。
在食用菌的育种工作中，为了培育出更好的品种，更高产的果实，需要对食用菌的孢子和组织进行分离，以便于选育和培育工作的进行。
下面将从孢子分离和组织分离两个方面进行详细介绍。
一、食用菌孢子的分离方法食用菌的孢子是食用菌繁殖的重要途径，通过对孢子的分离研究可以得到更多的信息，为食用菌的培育提供更多的可能性。
食用菌孢子的分离方法主要有以下几种：（一）取材准备：首先需要选取新鲜的食用菌菌丝体，将其移植到含有蔗糖和琼脂的琼脂培养基上进行培养，使其长出菌丝。
（二）孢子成熟：待菌丝长成成熟后，可以使用电镜或显微镜观察孢子的成熟情况，判断孢子是否已经成熟，如果孢子已经成熟，则可以进行下一步的提取和分离工作。
（三）孢子提取：将成熟的孢子用生理盐水进行冲洗，得到高纯度的孢子悬浮液。
（四）孢子分离：通过对孢子进行稀释和悬浮，可以使孢子在琼脂培养基上形成分立的克隆菌落，方便后续的研究工作。
二、食用菌组织的分离方法食用菌的组织分离是为了研究食用菌的生长发育规律，以及进行病原菌的筛查和检测等工作。
食用菌组织的分离方法主要有以下几种：（一）细胞分离：通过组织分离酶的作用，可以将食用菌组织细胞从整个菌体中分离出来，得到高纯度的细胞悬浮液。
（二）组织培养：将分离出的食用菌组织细胞进行培养，可以观察到组织的生长和分化情况，并进行相关的研究工作。
（三）组织切片：将食用菌组织进行切片处理，通过显微镜观察组织的结构和形态，为后续的研究提供可靠的数据基础。
（四）组织冻存：将分离出的食用菌组织进行冷冻保存，以备后续的实验和研究。
通过以上对食用菌孢子分离和组织分离的方法进行详细介绍，可以看出，食用菌孢子分离和组织分离是食用菌育种和研究工作中重要的前期准备工作。
通过不断改进和优化这些分离方法，可以为食用菌的培育和研究工作提供更多的可能性和便利。
食用菌组织分离法实验报告
食用菌组织分离法实验报告食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。
利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。
二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。
2. 培养基：PDA培养基斜面。
3. 仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。
三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用 70%的酒精轻擦表面进行消毒；3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
2. 要等刀片冷却后再切取组织块。
六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的PDA培养杂菌没有菌落产生基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。
第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌无杂菌，也无目的菌落实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。
接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。
实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。
食用菌菌种分离方法及其特点
食用菌菌种分离方法及其特点
(1)组织分离法:组织分离法是指采用食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。
(2)菇木分离法:又称为耳木分离法、寄主分离法、基质分离法，是从生长食用菌的菇木或耳木中获得纯菌丝体的方法。
菇木分离培养的菌种一般生活力都较强。
在实际生产中，由于这种方法污染率高，所以能用组织分离或孢子分离获得菌种的菇类一般都不采用此法。
(3)孢子分离法:孢子分离法是用食用菌成熟的有性孢子(担孢
子或子囊孢子)萌发培养成菌丝体而得到菌种的方法。
食用菌的有性孢子具备双亲的遗传特性，变异的机会多，生命力强，培育成的菌种质量好。
有性孢子是选育优良新品种和杂交育种的好材料。
但分离方法复杂。
在生产上最常用的是组织分离方法，该方法属无性繁殖，简便易行，菌丝生长发育快，能保持原有性状。
此法是大多数食用菌进行菌种分离的最简便又有效的方法，也是人们在野外分离菌种最常采用的简便方法。
在生产上常被用于菌种的复壮、新品种的选育和栽培种优良性状的稳定。
食用菌组织分离实训报告
一、实训目的本次实训旨在通过食用菌组织分离技术，掌握食用菌菌种分离、纯化、培养和保存的方法，提高学生对食用菌菌种学基础理论和实践技能的理解与应用能力。
二、实训时间2023年X月X日至X月X日三、实训地点XXX大学生物实验室四、实训材料与设备1. 材料与试剂：- 食用菌样品：香菇、金针菇、平菇等- PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）- 酵母提取物、葡萄糖、琼脂粉、氯化钠、琼脂糖、蒸馏水等- pH试纸- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌手套、灭菌镊子、酒精灯、剪刀、解剖针、培养皿、移液管等2. 设备：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌器- 灭菌工作台- 培养箱- 显微镜五、实训内容与方法1. 食用菌样品的处理（1）选取新鲜、无病虫害的食用菌样品，用无菌剪刀剪去菌柄、菌盖等非菌丝组织。
（2）将菌丝组织置于无菌培养皿中，用解剖针轻轻挑取菌丝，置于另一无菌培养皿中。
2. 菌丝组织的表面消毒（1）用75%酒精对菌丝组织进行表面消毒。
（2）待酒精挥发后，用无菌水冲洗菌丝组织，去除残留的酒精。
3. 菌丝组织的分离与纯化（1）将消毒后的菌丝组织剪成小块，置于无菌PDA培养基上。
（2）将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度和湿度条件下培养。
（3）观察菌丝生长情况，挑选单菌落进行纯化培养。
4. 菌种保存（1）将纯化后的菌种接种于PDA斜面培养基上。
（2）将斜面培养基放入4℃冰箱中保存。
六、实训结果与分析1. 食用菌菌丝组织的分离与纯化在本次实训中，成功分离出香菇、金针菇、平菇等食用菌的纯菌丝。
通过观察菌落特征，如菌落形状、颜色、菌丝密度等，可以初步判断菌种的纯度。
2. 菌种保存在4℃冰箱中保存的菌种，经过一段时间后，仍能保持良好的生长状态，说明菌种保存方法可行。
七、实训总结通过本次实训，我掌握了食用菌组织分离的基本方法，提高了对食用菌菌种学基础理论和实践技能的理解与应用能力。
以下是实训过程中的几点体会：1. 实验操作过程中，无菌操作至关重要，要严格遵守无菌操作规程，避免污染。
菌种的分离与培养
菌种的分离与培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的.所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来,通过培养，获得纯的优良菌种.菌种分母种、原种、栽培种。
（一）母种的分离培养食用菌母种的分离,可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂,一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法，有以下几种:①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。
形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。
待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。
方法是选好种菇后，按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。
并在纱布上倒少许升汞或无菌水.移入20℃左右恒温箱培养。
②褶上涂抹法：按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。
微生物食用菌的组织培养
锁状联合及担孢子形成的简介
担子菌子实体成熟后产生担孢子，担孢子从成 熟的子实体菌褶里弹射出来
担子和担孢子形成的连续阶段 (A) 双核菌丝的顶端细胞膨大；（ B ）核配后的单核双倍体担子；（ C ）
减数分裂后含四个子核的担子，担孢子梗开始长出； (D) 担孢子梗上产生 担孢子原基， 细胞核准备移入其中； (E) 细胞核移入担孢子原基中； (F) 高度液泡的成熟担子，其上着生四个单核的担孢子。
双核菌丝体及锁状联合的观察平菇双核菌丝体及锁状联合的观察平菇载玻片中央滴一滴水用解剖针于试管斜面或培养料内挑载玻片中央滴一滴水用解剖针于试管斜面或培养料内挑取少许菌丝置于载玻片液滴中并将菌丝体挑开使之分散取少许菌丝置于载玻片液滴中并将菌丝体挑开使之分散加盖玻片后观察双核菌丝体及锁状联合的形态结构
实验十一 食用菌的组织分离及子实 体的形态结构
三、材料及用具
1.材料： 各种食用菌。 2.用具：电炉，培养箱，接种针等
四、实验步骤 （一）、食用菌的组织分离及培养
1 香菇及平菇的组织分离及培养（2皿/人；3块/皿）。先到平 板（2皿/人）
菇体表面用70%酒精消毒；用手从菌柄处对开菌盖；解剖 刀过火；从菌柄与菌盖交界处的菌肉组织取黄豆粒大小的 组织块（3块）；用接种针挑取放入平皿；25度培养；下次 实验观察结果
目的： 1 认识和掌握常见的栽培食用菌子实体的形态特征； 2 观察食用菌双核菌丝的形态及其锁状联合结构
方法： 1 识别香菇、双孢磨菇、平菇、木耳、金针菇等的形态特征 2 用解剖刀纵切香菇、双孢磨菇、平菇的子实体，观察其菇 盖组成、菌肉 的颜色、质地、菌褶形状和着生情况（离生、 延生、直生、弯生）；再观察菌柄的质地，中空或中实。 3 双核菌丝体及锁状联合的观察（平菇） 载玻片中央滴一滴水，用解剖针于试管斜面或培养料内挑 取少许菌丝置于载玻片液滴中，并将菌丝体挑开使之分散， 加盖玻片后观察双核菌丝体及锁状联合的形态结构。
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超净工作台
⑴ 使用注意事项（提问同学） ① 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30 组织分离操作
③菇体消毒：将子实体菌柄基部切 除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1 ％的升汞水浸几分钟，再用无菌水 冲洗并揩干，或用75％酒精棉球擦 拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。
（一）实训目的 1.掌握母种培养基的配制操作及 高压灭菌方法; 2.理解组织分离法制母种的原理; 3.掌握组织分离接种技术; 4.会使用超净工作台和培养箱.
（二）实训原理
组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯 菌丝的方法。 组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体 没有经过重组，因此组织分离基本上可保持 亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法 能使遗传特性稳定下来。 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快， 比较常用。
实训三 组织分离制母种
实训第一大部分
讲解及演示 指导老师
王德芝
食用菌味道鲜美 风味独特
下面请同学们欣赏几道
美味的菜肴
菇香美味迎客来
花好月圆蘑菇香
香菇招来蝶恋花
金针系珠相思豆
团团圆圆蘑菇圈
龙凤呈祥猴头宴
银耳黑耳齐争艳
蘑菇全席大师宴
味道鲜美君品尝
食用菌保健酒及饮料系列
食用及药用菌的药用提取物
组织分离部位的选择
菌肉组织如图
菌核组织如图
示 范操 作
④ 组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇 柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片 在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小 方块。 ⑤ 接种：在无菌条件下，随后挑取一组 织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上， 并塞好棉塞。
示范操作
⑥ 贴标签培养：试管从接种箱取出之前， 应逐支试管正面的上方贴上标签，写明 菌种编号、接种日期，随后把试管放入 培养箱（室）中，置适宜温度（平菇 22℃，香菇25℃）下培养，待组织块长 出菌丝无污染即为纯种。
组织分离制母种
好树结好果, 好种出好菇! 美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种!
你了解吗?
噢 菌种很重要！
食用菌的栽培
母种
原种
栽培种
子实体(菇体)
实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种
（一）实训目的 （二）实训原理
（三）实训设计思路
（四）实训器材 （五）实训步骤 （六）注意事项 （七）实验作业
注意
③培养终止，关掉电源，取出培养物；
④培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风； 保持培养箱内空气干净，并定期消毒；
实训第二大部分
学生分组操作
分组操作
每班同学可分为二大组6小组； 第一大组3台双人超净工作台，每次可6 人操作； 第二大组可在无菌室内操作；
第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进 行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分 进行组织分离，作对比观察。
常见的杂菌观察
青霉、黑曲霉
（五）组织分离制母种应注意的事项 （提问同学）
环境用具严格消毒； 组织小块大小要适宜(黄豆粒大小)； 接种时要严格无菌操作； 培养时调节到该菌的适宜温度。
（六）实训作业
1.组织分离法制母种过程中的注意事项 有哪些？ 2.记录你制作的母种的生长状态; 3.是否有杂菌污染,如有分析其原因.
复习上一节 母种培养基的配制步骤
• • • • • 1.按配方称量：见下面的配方 2.煮制 3.分装 4.灭菌 5.排斜面
母种培养基配方： 1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml
2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、 水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、 玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸 镁2g，VB11片（10mg）。 此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、 灵芝生长尤其茁壮。 可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。
培
养
置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到 组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大 即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、 草菇、猴头菌等多采用此方法。
附：数显式恒温 培养箱的使用
数显式恒温培养箱的使用
培养箱是通过对周围环境条件的控制制 造出一个能使细胞、组织更好地生长的 环境，条件控制的结果就会形成一个稳 定的条件 ①调节适宜温度，并使温度稳定，再放 培养物; ②培养过程中要观察温度稳定性和生长 状态，并注意培养时间；
（四）组织分离操作的主要步骤：
①挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中， 无病虫害，具有本品种优良性状的菇体 或组织作为种菇。 ②环境、用具严格消毒：即超净工作台 或无菌室的使用，形成无菌的环境。
超净工作台的使用
超净台可将空气通过由特制的微孔的 “超级滤清器”后吹送出来，形成连续 不断的无尘无菌的超净空气层流，即所 谓“高效的特殊空气”，它除去了大于 0.3μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。 工作人员就在这样的无菌条件下操作， 保持无菌材料在转移接种过程中不受污 染。
再 见 !
实训设计思路
1. 母种培养基的成分不同对 菌丝生长有什么影响； 2. 组织分离选用的材料及分 离的部位不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响； 4.杂菌污染的原因
（三）实训器材
新鲜菇(耳)体、刀片、镊子或接种针 试管斜面培养基 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、 75%酒精及酒精棉球等 培养箱等。
原因分析
1.菌丝未萌发：①组织块太小②烫伤严 重③培养条件如温度不适宜。 2.有杂菌污染： ①培养基灭菌不彻底； ②培养基成分适宜杂菌生长； ③环境、用具消毒不严格； ④菇体耳体消毒不严格； ⑤接种操作控制不当，要无菌操作。
常见的杂菌观察
常见的杂菌主要有细菌、放线菌；
常见的杂菌观察
细菌、霉菌等。
分组辅导
注意同学们的操作； 及时纠正不规范动作。
接种操作完毕，收集试管进行培养。
数显式恒温培养箱的使用
注意事项（提问同学）
实训第三大部分
结果观察
母种培养生长状态观察
母种培养生长状态可分4种情况. 1.菌丝已萌发，生长旺，无污染 (如图所示)；
2.菌丝已萌发，但有杂菌污染； 3.菌丝未萌发，无污染； 4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重；
培养基的高压灭菌
使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ （提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压 力在0.1－0.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。