221动物细胞培养
动物细胞培养
操作步骤 （1）单细胞悬液接种于96孔培养 板；103-104细胞/孔，每孔培养基总 量200微升（96孔培养板每孔容积 370微升），37℃、5％CO2培养箱 中培养一段时间（根据实验目的决 定培养时间） （2）加入2毫克／毫升的MTT液 （50微升／孔）；继续培养3小时。 （3）吸出孔内培养液后，加入 DMSO液（150微升／孔），将培养 板置于微孔板扳荡器上振荡10分 钟，使结晶物溶解。 （4）酶标仪检测各孔OD值（检测 波长为570 nm）。记录结果，绘制 细胞生长曲线
培养细胞生长的条件
1 细胞的营养需要 2 细胞的生存环境 温度: 37 ℃ O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3pH: 7.2-7.4 渗透压 3 无污染 4 无毒
实验室
பைடு நூலகம் 实验准备
实验用品：
超净工作台，压力蒸汽消毒器，电热干燥箱，滤器，CO2培养箱
倒置显微镜 酶标仪、微孔板震荡器
液氮罐
自动双重纯水蒸馏器，纯水仪 耗材：培养瓶，吸管，电动吸引器，培养板， 冻存管
压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用于玻璃
器皿消毒
滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、
酶液等均采用滤过法除菌
超净工作台：为细胞操作提供无菌环境 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料
培养皿和培养板等表面消毒
超净台
超净工作台的工作 原理是利用鼓风机 驱动空气遁过高效 滤器除去空气中的 尘埃颗粒，使空气 得到净化。净化空 气徐徐通过工作台 面，使工作台内构 成无菌环境。
滤 器
CO2培养
高一生物动物细胞培养的介绍
高一生物动物细胞培养的介绍高一生物动物细胞培养知识点该知识点包括动物细胞培养的过程､动物细胞培养的条件､动物细胞培养的应用等几个要点知识。
1.动物细胞培养的过程:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。
其基本流程是取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
在培养过程中会出现细胞贴壁生长和接触抑制现象。
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。
细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。
2.动物细胞培养的条件:①无菌､无毒的环境:培养液应进行无菌处理。
通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。
此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养:合成培养基成分:糖､氨基酸､促生长因子､无机盐､微量元素等。
通常需加入血清､血浆等天然成分。
③温度:适宜温度:哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;pH:7.2~7.4。
④气体环境:95%空气+5%CO2。
O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。
3.动物细胞培养的应用:①用于基因工程(培养它作受体细胞);②制备病毒疫苗､干扰素､生产单克隆抗体,制皮肤细胞等;③检测有毒物质的毒性､培养医学研究的各种细胞等。
【动物细胞培养考点分析】在平常测试中,该知识点有很大比例,多以选择题或简答题的形式出现。
通常考查动物细胞培养过程､条件等相关知识,出题形式灵活,难度不大。
在高考中,从近几年生物试题看,本部分知识一直是高考命题的热点之一,多以简答题形式考查,多以动物细胞培养过程图解结合其他动物细胞技术进行综合考查。
【动物细胞培养知识点误区】对动物细胞培养原理记忆不清､培养过程中胰蛋白酶的作用不清楚及培养条件模糊都是易错的原因。
动物细胞培养
动物细胞培养
动物细胞培养是一种重要的生物技术手段，广泛应用于医药、生物学研究、食
品工业等领域。
通过细胞培养，可以获取大量同质的细胞群体，为疾病治疗、新药研发提供重要的支持。
动物细胞培养的原理
动物细胞培养是将动物组织或细胞在人工培养基中进行维持、增殖、传代等过程。
培养基通常包括营养物质、生长因子、激素等成分，提供细胞生长所需的营养和环境。
动物细胞培养的步骤
1.细胞来源：从动物体内收集组织样本，获得原代细胞。
2.细胞分离：通过消化酶等手段将组织分离成单个细胞。
3.传代培养：将分离的细胞在培养基中培养，定期传代以增殖细胞数
量。
4.检测与分析：对培养的细胞进行检测、分析，确保其健康状态。
动物细胞培养的应用
1.生物医学研究：细胞培养在癌症、遗传疾病等方面的研究中发挥重
要作用。
2.药物研发：通过细胞培养可以进行药物筛选、毒性测试等工作。
3.食品工业：利用细胞培养技术可以生产细胞培养肉等食品。
动物细胞培养的发展
随着生物技术的不断发展，动物细胞培养技术也在不断创新和提升。
新的培养
基配方、生长因子的发现以及工程技术的应用，使得动物细胞培养在医学和生物学领域有着广阔的应用前景。
动物细胞培养作为一种重要的生物技术手段，将继续在各个领域发挥重要作用，为人类健康和科学研究进步做出贡献。
2-1-1动物细胞培养条件和过程
原理： 细胞增殖
操作原因：将组织块分散成单 个细胞后，细胞所需的营养容 易供应，其代谢废物容易排出。
01 动物细胞培养的条件
2.培养条件：
培养基的构成：合成培养基 + 血清等天然成分
将细胞所需的营养物 质按种类和所需量严 格配制而成的培养基
提示：可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增； 目前，科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养，以获得适合临床上使用 的人造皮肤。
人造皮肤：人体再生术的秘密
01 动物细胞培养的条件
1.动物细胞培养：
对象： 一般是指动物胚胎或出生不久的幼龄动物组织， 因为这些组织细胞比老龄动物的组织细胞生命力旺盛， 易于培养，同时增殖能力也更强。
培养皿
（2）传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养。
（3）细胞贴壁：大多数体外培养的细胞需要贴附于某些基质表 面才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现 象称为细胞贴壁。
（4）接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细 胞通常会停止分裂增殖，这种现象称为接触抑制。
培养瓶
【从社会中来】
在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤 进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用 他人皮肤来源又不足，而且会产生免疫排斥反应。
那么： 怎样才能获得大量的自体健 康皮肤？ 能不能用自体皮肤的单个细 胞培养出可供移植的皮肤？
通过细胞培养构建的人造皮肤
含人类未知、细胞生长增 殖所必需的物质，满足细 胞对未知营养成分的需求。
一般使用液体培养基，也称为培养液
《动物细胞培养技术及其应用》 讲义
《动物细胞培养技术及其应用》讲义一、动物细胞培养技术的概述动物细胞培养是指在体外模拟体内环境，使从动物体内取出的细胞在适宜的条件下生长、繁殖和分化的技术。
这一技术的发展为生物学、医学等领域的研究和应用提供了重要的手段。
细胞培养需要适宜的环境条件，包括温度、pH 值、渗透压等。
通常，培养温度在 37℃左右，pH 值在 72 74 之间，渗透压与细胞内液相当。
此外，还需要提供充足的营养物质，如氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐等，以及血清等生长因子。
动物细胞培养的基本过程包括取材、原代培养、传代培养等步骤。
取材时要选择健康的组织或器官，并进行严格的无菌处理。
原代培养是将获取的细胞直接在体外培养，传代培养则是当细胞生长到一定密度后，将其转移到新的培养容器中继续培养。
二、动物细胞培养的关键技术1、无菌操作技术在细胞培养过程中，防止微生物的污染至关重要。
所有的操作都要在无菌环境下进行，包括实验器具的消毒、培养基的灭菌、操作人员的无菌操作等。
2、细胞培养容器常用的细胞培养容器有培养瓶、培养皿、多孔板等。
不同的容器适用于不同的培养需求，如培养瓶常用于大规模细胞培养，多孔板则适用于细胞筛选和药物测试等。
3、培养基的选择和配制培养基的成分和配方对细胞的生长和分化有着重要影响。
常见的培养基有天然培养基（如血清）和合成培养基（如 DMEM、RPMI-1640 等）。
在实际应用中，常常根据细胞的类型和实验目的选择合适的培养基，并添加一定的补充成分。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，需要将细胞进行冻存。
在冻存过程中，要添加保护剂（如 DMSO），并采用逐步降温的方法，以减少细胞损伤。
复苏时则要快速解冻，并尽快将细胞转移到适宜的培养环境中。
三、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产利用动物细胞培养技术可以大规模生产疫苗、抗体、激素等生物制品。
例如，通过培养哺乳动物细胞来生产乙肝疫苗、流感疫苗等，为疾病的预防和控制提供了重要的手段。
动物细胞培养基本操作
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
课件2：2.2.1 动物细胞培养
二、动物细胞培养的条件
补充资料： 1、血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等， 2、氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物
细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。 3、血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未
2、干细胞分布： 早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中
3、干细胞类型：
胚胎干细胞 （ ES细胞）
成体干细胞
全能干细胞 多能干细胞 专能干细胞
Hale Waihona Puke 三、干细胞培养及其应用4、胚胎干细胞应用： 体外诱导小鼠 成纤维细胞
诱导多能干细胞 iPS
定向诱导分化
多种体细胞
临床治疗人类疾病
如：白血病、帕金森病、阿而茨海默病等
培养基特有成分
蔗糖、植物激素
培养结果
植物体
培养目的
快速繁殖、培育无病毒 植株等
动物细胞培养 细胞增殖
液体培养基 葡萄糖、动物血清 细胞株、细胞系 获得细胞及代谢产物
三、干细胞培养及其应用
1、胚胎干细胞： 存在于早期胚胎中，具有分化成为成年动物体内任何一 种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚 至个体的潜能。
动物胚胎或幼龄动 物的组织、器官
去掉组织 间蛋白
胰蛋白酶 单个细胞
剪碎
加培养液
细胞悬 浮液
分化程度低， 增殖能力强
细胞
少部分突破细胞寿限 “癌变”，无限传代
50代细胞
细 胞 贴 壁
剥离、分瓶
10代细胞
原 代 培 养
出现接触抑制
动物细胞培养不能 最终培养成动物体
《动物细胞培养HXY》课件
动物细胞培养是一个重要的技术，它可以在无菌条件下，让多种细胞在基质 中生长、增殖并分化成各种细胞类型，被广泛应用于药物筛选、细胞学研究、 基因工程和疫苗生产领域。
什么是动物细胞培养？
定义
将动物组织的细胞单元分离，通过营养液、基质及一定环境条件的供给来生长、增殖并分化 成各种细胞类型。
培养箱
提供温度、湿度、气体、点式无菌操作空间等多项控制
培养皿
常用的有T25、T75等规格，可根据培养的细胞数目选择不同的规格
培养基
细胞体外生长所需的营养物质、激素、生长因子和抗生素等，市面上有多种不同配方的基质 可选
动物细胞培养的步骤培养箱准备、培养基配置等
2
细胞分离
取得原代细胞、细胞株或原代细胞的稳定细胞株，需要通过胰酶、蛋白酶等对细胞进行分离
3
细胞培养
将细胞接种到培养皿中，放到培养箱中进行培养，根据细胞类型和实验要求，需选择不同的 培养基；
4
细胞观察和实验
观察细胞形态、活力、增殖、分化等指标，开展实验，如药物筛选、克隆、基因转染等
常见问题及处理方法
1 污染
处理方法很多，如节制制 作培养基的污染、通过使 用无菌器具和无菌条件等 预防性方法、使用抗生素 等
原理
细胞的培养和生长需要营养物质、生长因子和一定的温度、湿度以及氧气浓度等物理条件， 其中培养基是一个关键环节。
为什么要进行动物细胞培养？
应用领域
药物研发、疫苗生产、细胞治疗、基因工程、细胞 学研究等
优势
体外培养条件可以模拟体内环境，对细胞及分子生 物学研究提供了突破性的手段
动物细胞培养的设备和培养基
广泛应用于药理学的研究和药物 筛选中，特别是高通量药物筛选
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，在体外模拟体内的生理环境，使其生长、分裂、分化并维持其功能的一种技术。
这一技术为生物学、医学等领域的研究和应用提供了重要的手段。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境细胞培养必须在严格的无菌条件下进行，以防止微生物的污染。
这包括对培养器皿、培养基、操作工具等进行灭菌处理，以及在无菌操作箱中进行细胞的接种、传代等操作。
2、合适的培养基培养基为细胞提供了生长所需的营养物质，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
此外，培养基中还常常添加血清，血清中含有多种生长因子和激素，有助于细胞的生长和增殖。
3、适宜的温度和 pH一般来说，动物细胞培养的温度通常在 37℃左右，pH 则在 72 74 之间。
保持稳定的温度和 pH 对于细胞的正常代谢和生长至关重要。
4、气体环境细胞培养需要一定的气体环境，通常是 95%的空气和 5%的二氧化碳。
二氧化碳可以调节培养基的 pH 值。
三、动物细胞培养的基本流程1、取材从动物体内取出所需的组织或细胞，例如通过手术获取肿瘤组织、从血液中分离白细胞等。
2、原代培养将取出的组织或细胞进行处理，使其分散成单个细胞，然后接种到培养器皿中，这就是原代培养。
在原代培养中，细胞会经历一个适应体外环境的过程。
3、传代培养当原代培养的细胞生长到一定密度时，需要将其分成若干份，重新接种到新的培养器皿中继续培养，这就是传代培养。
传代培养可以使细胞不断增殖。
4、细胞冻存与复苏为了长期保存细胞，可以将细胞在液氮中冻存。
当需要使用时，再将其复苏，使其恢复生长和代谢能力。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产利用动物细胞培养技术可以生产多种生物制品，如疫苗、抗体、蛋白质药物等。
例如，通过培养骨髓瘤细胞来生产单克隆抗体，用于疾病的诊断和治疗。
2、医学研究在医学领域，动物细胞培养技术为疾病的发病机制研究、药物筛选和药效评价提供了重要的实验模型。
高中生物选修三 动物细胞培养
离体培养的细胞对 微生物和有毒物质 没有防御能力
培养器皿
动物细胞培养瓶内表面为什么 要光滑、无毒？
5、动物细胞培养技术的应用
（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体等。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （3）用于检测有毒物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究， 为治疗和预防疾病提供理论依据 （5）作为基因工程的受体细胞
6.下图是动物细胞培养的过程示意图。据此图回答。
(1)容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取 幼龄动物的器官或组织、动物胚胎 自___________ 。 (2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理 剪碎 是__________ ，然后用 胰蛋白 酶处理，这是为了 使细胞分散开来。这样做的目的是 使每个细胞能与培养液接触 _______________. (3)培养首先在B瓶中进行。瓶中的培养基成分有 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清 _______ ___等。在此瓶中培 养一段时间后，一般传到第 10 代，有许多细 胞衰老死亡，到这时的培养称为___________. 原代培养 (4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用_____ 胰蛋白酶 细胞悬浮液 ，再分装。 处理，然后配置成___________ (5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全 细胞没有发生瘤变 部死亡。原因是_________________________ 。
动物组织细胞间隙中含有一定 2. 动物细胞培养过程 量的弹性纤维等蛋白质，将细 胞网络起来形成具有一定弹性 • 胚胎或幼龄动物的组织器官 和韧性的组织和器官。 比老龄动 剪碎 胰蛋白酶 物的组织 细胞增殖 用胰蛋白酶分散 细胞悬液 能力强， 细胞，说明细胞 贴壁生长 有丝分裂 间的物质主要是 10 代以内，保持正常二倍体核型 原代培养 接触抑制 旺盛。分 蛋白质。动物细 化程度越 10代细胞 传代培养 胞培养适宜的 低，增殖 PH为7.2—7.4， 洗涤、稀释、 能力越强， 此环境下胃蛋白 越容易培 分离 酶（2.0）没有 细胞增殖 养。 50代细胞 缓慢，核 活性，而胰蛋白 动物细胞培养 型可能变 酶(7.2-8.4)的活 不能最终培养 性较高。 化 成生物体
动物细胞培养
• 渗透压：维持细胞内外液体平衡
培养条件优化
• 调节培养条件，促进细胞生长
• 提高细胞生长速度和产量
动物细胞培养过程中的质量控制与监测
质量控制
监测
• 控制细胞来源和质量
• 实时监测细胞生长情况
• 控制培养条件和方法
• 分析细胞培养过程中的数据
• 控制细胞收获和储存
• 保证细胞培养的成功
04
动物细胞培养的挑战与解决方案
• 建立完善的细胞质量控制体系，提高细胞培养的成功率
• 采用先进的细胞储存和运输技术，降低污染风险
⌛️
动物细胞培养未来发展趋势与展望
01
细胞培养技术与其他生物技术的结合
• 利用细胞培养技术与其他生物技术相结合，推动生物技
术的发展
• 为生物制药、生物医学研究、生物技术等领域提供更多
的技术支持
02
细胞培养技术的个性化和精准化
动物细胞培养技术的现状
• 目前已广泛应用于生物制药、生物医学研究、生物技术等领域
• 动物细胞培养技术不断创新和改进，提高细胞生长速度和产量
• 动物细胞培养技术与其他生物技术相结合，推动生物技术的发展
动物细胞培养的基本原理及关键技术
动物细胞培养的基本原理
• 细胞离体后，在适宜的条件下进行生长和繁殖
• 细胞生长需要充足的营养物质和适宜的环境条件
细胞来源
细胞选择
• 原代细胞：直接从组织中分离细胞
• 选择生长速度快、适应性强的细胞类型
• 细胞系：通过无限传代获得永生化细胞株
• 保证细胞质量和活性，提高细胞培养的成功率
• 器官细胞：模拟体内环境，培养具有功能的器官和组织
动物细胞培养条件与优化Fra bibliotek培养条件• 温度：控制细胞生长和繁殖的温度
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养，简单来说，就是在体外模拟体内的环境，让动物细胞能够生长、繁殖的一项技术。
它的发展有着重要的意义。
在过去，我们对于细胞的研究往往受到活体组织的限制，而细胞培养技术的出现，为我们打开了一扇全新的窗户，让我们能够更直接、更深入地研究细胞的各种特性和功能。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境这是至关重要的一点。
任何微小的细菌、真菌或者病毒的污染，都可能导致培养失败。
所以，在进行细胞培养时，实验室的消毒、操作的规范都要严格把控。
2、合适的培养基培养基就像是细胞的“食物”，得为细胞提供所需的各种营养成分，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等等。
而且，不同类型的细胞，所需的培养基成分还可能有所不同。
3、适宜的温度和 pH大多数动物细胞在 37℃左右、pH 在 72 74 之间时生长状态最佳。
保持这样的条件，细胞才能正常地代谢和分裂。
4、气体环境细胞培养需要一定的气体环境，比如氧气和二氧化碳。
氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则可以调节培养基的 pH 值。
三、动物细胞培养的基本流程1、取材从动物体内取出要培养的细胞组织。
这一步需要非常小心，尽量减少对细胞的损伤。
2、分散细胞把取出的组织分散成单个细胞，通常会使用酶解法，比如胰蛋白酶。
3、原代培养将分散的细胞接种到培养瓶中，让它们贴壁生长，这就是原代培养。
4、传代培养当细胞长满培养瓶后，需要把它们分瓶继续培养，这就是传代培养。
四、动物细胞培养的类型1、贴壁培养许多细胞，如成纤维细胞，需要贴附在培养瓶的表面才能生长。
2、悬浮培养像淋巴细胞等一些细胞，可以在培养基中悬浮生长。
五、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产比如疫苗、抗体等。
通过培养特定的细胞，可以大量生产这些生物制品，用于疾病的预防和治疗。
以疫苗生产为例，利用细胞培养技术可以大规模生产病毒疫苗。
先将病毒接种到细胞中，让病毒在细胞内大量复制，然后收集并处理这些含有病毒的细胞，制成疫苗。
2021动物细胞培养的过程完美版PPT
人耳鼠
在京展出的数天，尽管门票高达20元，但还是有将近20 万人，心甘情愿地掏钱一睹“人耳鼠”的风采。
人耳鼠的出现，透露了怎样的信息？
华南虎是我国特有的虎种。华南虎于1996 年被国际自然保护联盟列为极度濒危的十大物 种之一。到目前为止，中国存活的圈养华南虎 仅为70只，其中包括正在南非野化的2只。国内 动物园圈养的华南虎只有68只，散布在全国18 家城市动物园中。
更为重要的是，新的细胞培养法有助于人类灵活应对大 规模暴发的流感。近年来，高致病性禽流感的爆发总让人担 心届时疫苗够不够用。用鸡蛋培养病毒的话，生产多少疫苗 必须提前做出精确计划，但一般来说流感暴发时，人们很难 在短时间内购置生产疫苗所需的数百万只鸡蛋。而新方法可 在很小的生产空间，很快地制造出大批纯净的疫苗。
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什么是动物细胞培养?
从动物机体中取出相关组织，将它们分散 成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让 这些细胞生长和增殖。
如何进行细胞培养?
动物细胞培养的过程
放入二氧化碳 培养箱中培养
思考：
每一步操作的理 由或目的是什么？
在培养过程中， 出现了哪些我们以前 没有涉及过的现象或 处理方法？
你觉得在了解细 胞培养过程的知识中， 应该抓住哪些关键词？
动物细胞培养的过程
皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要 保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层 真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健 康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人 自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活 人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的， 取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈 合过程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就 要被身体排斥。
动物细胞培养
第二章
细胞工程
第一节动物细胞培养
什么叫细胞工程？
细胞工程是指应用细胞生物学和分子 生物学的原理和方法，通过细胞水平或细 胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改 变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一 门综合科学技术。
1.1细胞培养的概念
是细胞工程中最基础的技术， 它是把机体的某一组织或器官取 出，分散为单个细胞，使其在人 工培养条件下继续生存、生长、 甚至增殖的过程。
原理：细胞增殖
1.2动物细胞培养的条件：
1.无菌、无毒的环境: 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液 2.营养: 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因
4．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是 （ ） A.动物细胞培养 B.动物细胞融合 C.单克隆杭体 D.胚胎、核移植 5．在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无 限制地传代下去，这种传代细胞称之为: A．原代培养 B．传代培养 C．细胞株 D．细胞系 6．卫生部2005年4月6日发布了《苏丹红危险性报告评 估》，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素(工业染 料)，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用 一定的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害，你认为 采取下列哪种技术手段最合适： A．动物细胞融合 B．动物细胞培养 C．胚胎移植 D．核移植
5、在动物细胞培养的有关叙述中，正确的是（B ）
A．动物细胞培养的目的就是为了获得大量的细胞分 泌蛋白 B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散 C．细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中 D．培养至50代后继续传代的细胞是细胞株 6、在动物细胞培养中有部分细胞可能在培养条件下无 限制地传代下去，这种传代细胞称之为（ D ） A．原代培养 B．传代培养
动物细胞培养
典型过程培养
动物细胞培养
低温下CO2溶解度增加，引起 溶解度增加，引起pH 温度 低温下 变化。 变化。 黏度 培养基的黏度主要受血清含量 的影响。 的影响。在搅拌条件下黏度大则细胞受 损伤小。 损伤小。加入羧甲基纤维素或聚己烯基 吡咯烷增加培养基黏度
典型过程培养
动物细胞培养
细胞培养基的基本组成 1、水 、 细胞培养用的各种液体都要用水来配置， 细胞培养用的各种液体都要用水来配置，对水 的纯度要求很高。 的纯度要求很高。通常细胞培养用水的污染物 标准可参考医药上注射用水标准， 标准可参考医药上注射用水标准，单原则上应 高于注射用水标准。 高于注射用水标准。 2、能源和碳源 、 主要是糖和糖酵解的产物和谷氨酰胺。 主要是糖和糖酵解的产物和谷氨酰胺。细胞能 用的糖主要是六碳糖，特别是葡萄糖。 用的糖主要是六碳糖，特别是葡萄糖。葡萄糖 很容易被大多数细胞转化为乳酸。 很容易被大多数细胞转化为乳酸。昆虫细胞更 偏爱蔗糖。 偏爱蔗糖。在多数培养基中谷氨酰胺作为主要 的能源和碳源。 的能源和碳源。使用谷氨酰胺最大的问题是它 的自发降解，降解量与时间、温度、 的自发降解，降解量与时间、温度、血清和磷 酸浓度有关，降解产物为氨，对细胞有毒性。 酸浓度有关，降解产物为氨，对细胞有毒性。
典型过程培养
动物细胞培养
转化细胞由于有无限寿命， 转化细胞由于有无限寿命，在培养中更 易生长，被广泛用于生成生物制品， 易生长，被广泛用于生成生物制品，如 重组蛋白药物、病毒疫苗等。但是， 重组蛋白药物、病毒疫苗等。但是，人 们对她们的安全性仍然非常关心， 们对她们的安全性仍然非常关心，对可 能造成的生物危害性进行严格的检测和 控制。 控制。
典型过程培养
动物细胞培养
一、动物细胞培养的特性 动物细胞培养是指在合适的培养条件下， 动物细胞培养是指在合适的培养条件下， 动物细胞离体生长和增殖， 动物细胞离体生长和增殖，并保持其特性 和功能的技术，这些细胞不再形成组织。 和功能的技术，这些细胞不再形成组织。
动物细胞培养(201X.3.26)ppt课件
细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞 生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的 改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这 种传代细胞为细胞系。
细胞株和细胞系的区别： 细胞系的遗传物
质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，
容易传代培养。
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总结：动物细胞培养过程
动物胚胎或幼龄动物的 组织、器官
剪碎、用胰蛋白酶处理
.
3、（旁栏思考）胰蛋白酶真的不会把细胞消 化掉吗？为什么？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长 时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤 作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。
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4、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或 组织做动物细胞培养材料？
.
3、过程
增殖能力强，分裂旺盛，分化 程度低，容易培养
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原代培养 细胞贴壁
原代细胞
接触抑制
胰蛋白酶 分瓶传代培养
遗传物质未 改变
10—50代细胞(细胞株)
遗传物质己 改变
传代培养 无限传代（细胞系）
.
强调：细胞株、细胞系（了解即可，老课本体系）
细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞 生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存 活到40-50代，这种传代细胞为细胞株。
分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排 出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞 的营养供应和代谢废物的排出都较困难。
.
2、（旁栏思考）用胰蛋白酶对动物组织进行 处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白 酶可以吗？
细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6 时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的 适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的 适宜pH为7.2～7.4。
动物细胞培养
失去神经体液的调节和细胞相互间的影响
2.主要表现
失去原有组织结构和细胞形态
分化减弱或不显
细胞趋向单一化；发生转化
不能将之与体内的细胞完全等同
二、动物细胞培养的研究历史
1885年， Roux将鸡胚神经板在温暖的生理盐水中培 养几个月，首次提出组织培养的概念。 1907年，Harrison 的髓管培养试验，将蛙胚的神经 管的一片组织移植到蛙的淋巴液凝块中，从细胞中 长出轴突——这是公认的组织培养的真正开始。 1912年，Carrel 将无菌操作引入组培试验
第一节 动物细胞培养简介
一、培养细胞优缺点 培养细胞优点
1.研究的对象是活细胞
可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的 情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2. 研究条件可以人为控制 可控制包括pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等条 件，同时，可以施加严格控制之下的化学、物理、 生物等因素作为条件而进行实验观察。
器官培养：培养对象是器官的原基、器官的一 部分或整个器官， 放在模拟体内的生理环境 的体外，使之存活、生长并保持一定功能的技 术。
与细胞培养的区别：抑制细胞从器官培养物中 迁移出来。抑制细胞的脱分化，维持器官培养 物的结构和功能不变，维持细胞的分化状态。
细胞固定化培养即包埋培养：
材料：凝胶－海藻钙、胶原、交叉胶和琼胶等。 贴壁细胞：胶原。 非贴壁细胞:海藻钙。 方法：细胞悬液与2％～3％的海藻钙混合，通过成滴器 滴入50～100mmol/L的CaCl2 溶液中，约1h后形成许多 稳定的内含细胞的多孔珠（ 3～6mm）用生理盐水洗 涤然后将多孔珠放入培养容器中。 回收：加适量EDTA使多孔珠溶解，离心回收细胞。
原代培养的方法：
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二、动物体细胞核移植技术和克隆动物
(一)动物细胞核移植概念
将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉 细胞核的 卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的 胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物 个体。
用核移植的方法得到的动物 称为克隆动物。
分 胚胎细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易 类 体细胞核移植：细胞分化程度高，恢复全能性不容易
接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触 时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞 的接触抑制。
部分细胞突变，获 得不死性，向癌细 胞方向发展，糖蛋 白减少。50代以后 Nhomakorabea接触抑制
失去接触抑制
（三）动物细胞培养条件
1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理；
在培养液中添加一定量的抗生素;
2、叙述动物细胞培养的过程。
动物细胞培养过程 1、原代培养：动物组织消化后的初次培养。
2、传代培养：贴满瓶壁的细胞需要重新用胰蛋白酶等处理， 然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖，这样的培养过程通常 称为传代培养。
动物的组织
胰蛋白酶
单个 加培养液 细胞
细胞
悬液
部分细胞无限传代
传代 培养
原代 培养
1. 动物细胞培养对培养的材料有要求吗？ 通常取动物胚胎或幼龄动物的组织、器官
比较项目 原理
培养基性质 取材 过程
植物组织培养
细胞的全能性
动物细胞培养
细胞增殖
固体培养基
液体培养基
植物的器官 和组织
脱分化、再分化
幼龄器官和 组织
原代培养、 传代培养
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
细胞分裂和分 化特点
培养基特有成分
分裂：愈伤组织
分化：形成根、 芽
蔗糖、植物 激素
只分裂不分化 贴壁生长
(二)体细胞核移植的过程
供体细胞培养
减数第二次分裂中期
（ MⅡ卵母细胞）
将供体细胞注入去核卵母细胞
核移植 胚胎移植
对比多莉羊和课本高产奶牛的克隆过程，找出操 作过程的不同点？
核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？用 此细胞作为受体细胞有什么好处？
MⅡ中期卵母细胞
卵母细胞体积大，便于操作；含有营养物质丰富， 提供早期胚胎发育所需的营养；含有激活细胞核 体现全能性的物质。
6.胰蛋白酶的作用是什么呢？细胞间隙主要含有 什么物质成份？
胰蛋白酶将动物组织细胞间隙中的蛋白质分 解，使细胞分散开。 7.为何要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下 来？
当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会 停止分裂增殖—细胞出现接触抑制。
8.细胞贴壁生长对培养容器有何要求？
培养瓶的内表面要光滑、无毒、易于贴附。
定期更换培养液；
2、营养
葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等
动物血清、血浆
3、温度和pH
能否用胃蛋白酶
温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 代替胰蛋白酶？
4、气体环境
O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。
植物细胞和动物细胞培养的比较
植物组织培养
在无菌和人工控制的条件下,将离体的植物 器官、组织、细胞，培养在人工控制的培养 基上，给予适宜的培养条件，诱导其产生愈 伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。
（二）动物细胞培养的过程 结合图2-16，阅读P44最后一段至P46第一段结束。
1、找出关键词并理解它们的含义。 细胞悬液 细胞贴壁 细胞的接触抑制 原代培养 传代培养
结合图2-21，阅读P47-50
1.卵母细胞从哪来？ 2.如何去除细胞核？ 3.对供体牛有何要求？ 4.克隆动物的过程中实际有哪些技术支持？ 5.克隆牛的性别和主要性状与哪头牛相同？
回忆克隆羊“多莉”的培育过程
Ａ母绵羊 卵细胞
Ｂ母绵羊 乳腺细胞
核移植
融合后的卵细胞
卵裂
早期胚胎
胚胎移植
C母绵羊子宫 妊娠 分娩 多莉羊
会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。
5.人类一般保存的是哪类细胞呢？为什么？
保存10代以内的细胞。 因为10－50代部分细胞的细胞核型可能发生变化，
有少部分还发生突变向癌细胞方向发展。
动物细胞生长特性：
细胞贴壁—— 悬液中分散的细胞很快就贴附在 瓶壁上，称为细胞贴壁。
要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、 易于贴附。
因为其分化程度低、增殖能力强，更容易培养。 2. 为什么在培养前要将组织分散成单个细胞？ 成块的组织不利于培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养。 3. 用胰蛋白酶处理，组织就会分散成单个细胞，说明了什么？
说明细胞与细胞间的主要物质是蛋白质 4.胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？
胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也
接触抑制 葡萄糖、动 物血清
培养结果
植物体
细胞群体
（四）动物细胞培养技术的应用
阅读P46-47
1、生产生物制品
病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；
2、作为基因工程中的受体细胞，动物基因工程 离不开动物细胞的培养；
3、用于检测有毒物质及，判断某种物质的毒性
4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、 病理、药理等方面的研究。
2.2 动物细胞工程
提问：
? 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？
植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术
动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、 动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
（一）概念 ? 从动物机体中取出相关的组织,将它分散
成单个细胞，然后, 放在适宜的培养基中, 让这 些细胞生长和增殖。
9.什么是原代培养与传代培养？ 将动物组织消化后的初次培养就是原代培养。
当原代培养的细胞贴满瓶壁后，用胰蛋白酶处理， 制成细胞悬浮液后再次分瓶继续培养就是传代培 养。 10.动物细胞培养液的主要成分是什么？
通常含有葡萄糖、氨基酸、促生长因 子、无机盐、微量元素、动物血清等。
离体的植物组织或细胞在适宜的条 件下可发育成完整的植株，那么我们 是否可以利用类似的方法，使动物细 胞发育成一个完整的个体呢？
1.动物细胞工程的基础是什么？
动物细胞培养技术
2.动物细胞培养的基本原理是什么？
离体的细胞在适宜的条件下可以增殖
3.进行动物细胞培养的材料一般有何特点？
一般取胚胎组织或幼龄动物的组织 .
4.为什么要将组织分散成了单个细胞再进行培养？
5.怎样将动物组织分散成单个的细胞？ 用剪刀剪碎组织，再用胰蛋白酶处理。