菌种来源

抑菌圈1法5
1、透明圈法
在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培 养基混浊；
能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明 圈，圈的大小初步反应菌株利用底物的能力。
分离水解酶产生菌时较多采用，如蛋白酶、淀粉 酶、脂肪酶、核酸酶等；
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例如用此法分离产生碱性蛋白酶的芽孢杆菌
土壤经巴氏消毒，以减少不产芽孢的微生物；然后铺在 pH8-9的琼脂培养基（含有均匀的不溶性蛋白质）表面； 碱性蛋白酶产生菌能消化平板上的不溶性蛋白质，产生 一透明圈。
若被检菌能分泌某些抑制菌生长的物质，如抗生素等， 便会在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈
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六、随机分离方法
有些微生物的产物对产生菌的筛选没有任何选择性好处， 因此常随机地分离所需菌种，为此发展了一些快速筛选方法 并归纳出高产培养基成分的选择准则如下：
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分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用透明圈 法初筛
在选择培养基中加入碳酸钙，使平板呈混浊状，产 酸菌能够把菌落周围的碳酸钙水解，形成清晰的透明 圈
如何分离磷细菌？
聚赖氨酸产生菌 （带正电、加美兰、排斥 呈现透明圈）
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透明圈的大小不能完全作为选择高产菌的依据， 因为在深层培养中的产酶单位与平板上圈的大小之 间并不完全成正比。
一般要求采用廉价的培养基或使用来源丰 富的原料
3、菌的稳定性
4、菌的产物得率和产物在培养液中的浓度
5、菌对所采用的设备和生产过程的适应性
6、容易从培养液中回收产物
3-6是用来衡量菌种的生产性能，如能满足这几条，便
有希望成为效益高的生产菌株
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三、含微生物样品的采集
土壤较（复丰杂富、；5应-2根5cm据、分土离质目、酸的碱灵度活、掌植握被状况、地理条件、季节）
又如 分离解脂微生物
豆油作底物 中性红（红～黄. 6.8～8.0. ）指示 菌落周围呈红色圈
甘油三丁酸酯为底物 罗丹明B为指示剂 荧光圈
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3、生长圈法
通常用于分离筛选氨基酸、核苷酸和 维生素的产生菌
工具菌（指示菌）是一些相对应的营养缺陷型菌株
将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺少所需营养物的平板上进 行培养，若某菌株能合成平板所需的营养物，在该菌株的菌 落周围便会形成一个混浊的生长圈
分离与筛选菌种的具体做法一般分4个步骤：
样品采集
增殖培养
纯种分离
生产性能测定
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调查研究（包括资料查阅）
筛
试验方案设计
选
增殖条件探索
采样 第一次增殖培养
第一次平板分离 第二次增殖培养
工 作 程 序
第一次原种斜面
根据实际情况进 行定量或半定量 测定
第二次平板分离 第二次原种斜面
定量或半定量测定
初筛（. 1株1瓶）
如 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合倒平 板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围出现生长圈的菌 落即为嘌呤产生菌
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4、抑菌圈法
常用于抗生素产生菌的分离筛选
据产工估生具计菌菌，；采筛因用选此抗，1生万设素个计的菌一敏株个感才准菌能确得、到快1速株的有筛用选的模抗型生十素 分重要。 抑菌圈法是常用的初筛方法
➢ 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势的情况下 进行。
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五、利用固体平板的生化反应进行分离 （方法之一）
利用特殊的分离培养对大量混杂微生物进行初步 分离的方法。 分离培养基是根据目的微生物特殊的生理特性或 利用某些代谢产物生化反应来设计的。 可显著提高分离效率
透明圈法
变色圈法 .
生长圈法
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第三次平板分离
第三次原种斜面
复筛 不纯 第四次平板分离
第三次菌种保藏
第四次原种斜面
初步工艺条件摸索
再复筛
种子培养
1株3-5瓶 较优菌株
保藏及进一步做生产性能试 验或作为育种的出发菌株
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某些必要试验和毒性试验 5
二、分离与筛选的设计要求
在筛选所需菌株时应考虑以下一些重要指标：
1、菌的营养特征 2、菌的生长温度
分离耐高渗透压酵母菌，可到甜果、蜜饯、甘蔗渣堆积处采样
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杨 尺 蠖
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赤 松 毛 虫
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侧 柏 毛 虫
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四、含微生物样品的富集培养
富集(enrichment)培养
是在目的微生物含量较少时，根据微生物的 生理特点，设计一种选择性培养基，创造有 利的生长条件，使目的微生物在最适的环境 下迅速地生长繁殖，数量增加，由原来自然 条件下的劣势种变成人工环境下的优势种， 以利分离到所需的菌株。
食品 、海水、动物、植物、极端环境
根据微生物的营养类型采样
森肉林类土加中工有厂相附当近多、枯饭枝店落排叶污和沟腐，烂易的分木离头到，蛋富白含酶纤和维脂素肪，酶
适根产合据生利菌微用。生纤物维的素生作碳理源特的性纤采维样素酶产生菌生长。
面筛粉筛选选高加产温工低酶厂温产等酶生场的菌微通所生常易物从分，温离可泉到从、冰火产窖山淀、爆粉南发酶极处、、、深堆糖海肥化等等酶采采的样样菌；
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第二节 菌种来源
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微生物工程工业生产水平 的三个决定要素:
生产菌种的性能 发酵和提取工艺条件 生产设备
获得优良的生产菌种是实现高水平微生物工程工业生产的 第一环节.
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一、菌种分离与筛选工作程序
发酵工业上使用的微生物菌种，最初都是从自然界中 分离筛选出来的。
但作为初筛的手段是有意义的
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2、变色圈法
对于一些不易产生透明圈产物的产生菌，可在底物 平板中加入指示剂或显色剂，使目的微生物菌落周围 呈现变色圈，从而能被快速鉴别出来；
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如 筛选果胶酶产生菌
用含0.2%果胶为唯一碳源的培养基平板，对含微 生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2%刚果 红溶液染色4h，具有分解果胶能力的菌落周围便会出 现绛红色水解圈。
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➢ 其要领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其 他菌型生长的条件，例如，供给特殊的基质或加入某些 抑制剂。
控制氧可将好氧微生物和厌氧微生物分开； 在分离培养中加入抗生素或某试剂可增加选择性 高如温分下离培真养菌可可将在土嗜豆热培微养生基物中加和入非链嗜霉热素微； 生物分开； ➢质控，需制从注分p而H离意可改细，分菌变所或离选需放嗜择菌线酸压菌型或力可生嗜在。长培碱的养微结基生中果物加有；入时制会霉改菌素变等培养基的性 ➢高重糖复或移高植盐几培次养后基接可种分少离量耐已高富渗集透的压培微养生物物到；固体培养 基上。