生物制品复习资料

自然主动免疫指机体受到各种病原体隐性或显性感染后主动产生的特异性免疫。

自然被动免疫指机体经胎盘或初乳被动获得的特异性免疫。

根据作用分类

1、人工主动免疫用生物制品供预防用的疫苗、菌苗和类毒素。现在国际上把细菌、病毒、螺旋体、立克次体和类毒素等抗原性生物制品统称为疫苗。

2、人工被动免疫用生物制剂供治疗或紧急预防用的抗细菌、抗病毒、抗毒素血清及高免卵黄液。３、诊断液４、非特异性生物制剂及其它

免疫调节剂：（1）细胞因子：干扰素、白细胞介素、集落刺激因子、红细胞生成素；（2）转移因子。

疫苗由病原微生物、寄生虫所制成的，用于人工自动免疫用的生物制品，接种机体后能产生自动免疫、预防疫病的一类生物制剂均称为疫苗。

单价苗：利用同一种微生物菌（毒）株或同一种微生物的单一血清型菌（毒）株的培养物所制备的疫苗。

多价疫苗：利用同一种微生物两种以上血清型菌（毒）株的培养物而制备的疫苗。多价苗能使免疫动物获得较为安全的保护，且可在不同地区使用。

多联苗：指利用不同种微生物的增殖培养物或其代谢产物，按免疫学原理、方法组合而成的疫苗。是一种一针防多病的生物制剂。

同源疫苗;指利用所要预防的传染病的病原体本身或其弱毒及无毒变种制成的疫苗，而又应用于同种类动物免疫预防的疫苗。如鸡瘟、猪瘟等。

异源疫苗;)利用具有共同性保护抗原的异种微生物所制成的疫苗。如

（3）基因工程苗①基因工程亚单位苗：指利用基因工程技术所构建的重组表达载体在高效表达系统中表达出来的强毒病原体的某种免疫原性成分而制成的疫苗。②基因缺失苗或突变苗) ：利用基因工程技术，在DNA水平上造成毒力有关基因的缺失或突变，即切去基因组中编码致病性物质的某一片段核苷酸序列或使其突变失活，使该微生物致病性丧失，但仍保持其免疫原性及复制能力。③基因工程活载体疫苗：将病原体的保护性Ag基因片段插入到活载体病毒或细菌的基因非必需区内而获得重组活载体疫苗。④DNA疫苗：又称核酸疫苗，是应用基因工程技术将编码某种抗原蛋白质的外源基因与载体重组后直接导入动物体内，利用免疫原基因在宿主体内表达出的抗原蛋白质引起机体的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。2、类毒素(：又称脱毒毒素，细胞在生长繁殖过程中所产生的外毒素，经化学药品（如0.3-0.4%甲醛）处理后，成为无毒性而保留其免疫原性的生物制剂。

3、诊断制品：利用微生物，寄生虫及其代谢产物或者含有特异性抗体的血清制成的生物制剂，用于传染病或寄生虫的诊断、群体检疫、检测免疫状态以病原体的鉴定。

诊断液包括两大类：(１)诊断抗原（２）诊断血清：是应用已知的Ab制剂去检测未知的Ag。包括一般的阳性血清、单克隆抗体、荧光抗体、酶标抗体及各种因子血清等诊断制剂。

4、抗病血清(antiserum): 又称高免血清，为含有高效价特异性抗体的血清制剂。

即动物经反复多次地免疫后，机体的体液尤其是血清中就产生大量抗此中抗原的抗体，采取次此种动物的血液分离所得血清，即为高免血清、免疫血清、抗血清。

疫苗生产的根本菌种--培养--灭活--配苗--分装--检验--临床应用

1.毒力鉴定凡用作制备灭活苗和效力检验攻毒用的强毒菌种，需要确定其对本动物及实验动物的致死剂量；弱毒菌种必须明确其致死和不致死实验动物的范围及对被接种动物的安全程度。

2.免疫原性鉴定将菌(毒）种制疫苗免疫实验动物，经1-3周后攻毒，观察其保护情况。

3.稳定性试验通过传代培养鉴定其毒力稳定与否。细菌20-30代，病毒10代以上。

一、细菌的规模化培养1、固体培养基表面培养法：属于手工操作。一般将种子液均匀地接种于固体培养基表面（平皿、大扁瓶），平放于室温内进行静置培养，培养完后弃去凝集水，收集菌落、菌苔制成混悬液。用于制备诊断抗原和疫苗，此法可根据需要调节细菌浓度，但产量受限制，且劳动强度大。2、液体静置培养法：此法适用于一般菌苗的生产。培养容器可用大玻璃瓶，也可用一般发酵罐。按容器的深度加入1/2-2/3的培养基，灭菌后接种种子液1%-2%，在一定温度下静止培养。厌氧培养时培养基加入约70%，并在灭菌后冷却至37℃，立即接种种子液，在厌氧条件下培养本法简便、但细菌浓度不高。

3、液体深层通气培养法：又称反应罐通气培养。本法能加速细菌的生长繁殖，提高菌苗的产量和浓度，缩短培养时间，适宜于大量的培养，是目前菌苗生产的主要方法。应注意：

•①补充营养物质：根据不同细菌的营养要求，在培养过程中，要适量补充营养物质，添加葡萄糖补充碳源；添加蛋白胨补充氮源，这样才能更好地发挥通气培养作用，增加菌数。•②通气供氧：通气量必需适当，对要培养的细菌特性，必须要预先进行测量，掌握一定的规律，再进行大量培养。空气中的氧是通过溶氧状态供细菌利用的，而氧容量与通气量、通气方式、搅拌装置和速度、温度等有关系，另外，不同细菌在不同的生长时期其需氧量也不相同，故必需预先测定，掌握最佳的通气量。通气量过大，不能增加氧容量，反而会增加消泡剂的用量。③控制最适生长的PH：④通入气体必须是无菌的：

•4、透析培养法：指培养液与培养基之间隔一层半透膜的培养方法。

这种透析膜只允许小分子量的营养成分透过，而不允许大分子的细菌或毒素通过，因此可使培养基中高浓度的营养物质通过透析膜扩散到接种有细菌的培养室内，使细菌在生长过程中，不断获得必需的营养物质。因此，该法可获得高浓度的细菌或毒素。

二、病毒的培养（一）动物培养法（二）禽胚培养法（三）细胞培养法

SPF 动物(specific pathogen-free animals, SPF),无特定病原体动物，指在一个动物群中，不存在某些特定的病原微生物和寄生虫的动物。接种途径：常用的途径有尿囊腔：9－11日龄

绒毛尿囊膜：11－13日龄卵黄囊：6－9日龄羊膜腔：10－12日龄

（三）细胞培养（２）细胞培养的方法

①静置培养将细胞悬液接入培养瓶或培养板中置温箱内静置培养，细胞贴壁生长繁殖成单层后即可接毒②转瓶培养将细胞悬液接入转瓶后置于细胞转瓶机上进行培养，使贴壁细胞不始终浸于培养液中，从而有利于细胞呼吸和物质交换而加速细胞的生长。③悬浮培养通过振荡或转动装置使细胞始终分散悬浮于培养液内的培养方法。④微载体以细小的微载体颗粒作为细胞载体，通过搅拌悬浮于培养液内，使细胞在微载体表面长成单层的一种细胞培养技术。该方法扩大了细胞的附着面，能充分利用生长空间和营养液，因此大大提高了细胞的生长效率和产量。培养时多在发酵罐中进行，兼有单层和悬浮培养的优点。

3、细胞的制备抗原液的培养→灭活→浓缩（稀释）→与佐剂配苗→分装→检验

一、抗原液的培养1、细菌的培养菌种=>> 种子培养（纯粹检查、活菌计数）=>>>种子液=>>> 菌液培养2、病毒的培养动物培养法→组织灭活细胞培养法→细胞灭活苗鸡胚培养法→鸡胚灭活苗

二、灭活1、定义指破坏或杀灭微生物使其成为无生命物质的过程，即破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但尽可能保留其免疫原性。

（1）甲醛：占95%。甲醛为无色气体，易溶于水和乙醇，36-40%的水溶液称福尔马林，为无色液体，有刺激性气味。

其作用机制——甲醛的醛基作用于蛋白质的氨基、酰氨基及核酸上的嘌呤或嘧啶上的非氢键结合的氨基而形成交联，使微生物结构发生轻微的改变，但不影响其抗原性。

甲醛的常用浓度：一般需氧细菌：0.1－0.2%，最大达0.8%厌氧细菌：0.4－0.5%类毒素：0.4% 病毒：0.05－0.1%作用温度、时间为：37－38℃１６－24h。：猪肺疫：0.1% 37－38℃7