遗传学实验八-果蝇基因组DNA提取

注意事项： A 实验前将部分药品（酚、氯仿、异戊 醇、异丙醇）4℃预冷。 B 消化液要预热,以抑制DNase,加速蛋白变性,促进 DNA溶解 C 避免在操作过程中机械振动过于剧烈，以免 造成DNA的断裂。 D 使用离心机要注意安全，先定时，再将转速 从零慢慢增大。 E 乙醇洗涤DNA后一定要晾干，否则电泳点 样时样品容易上漂。

基因组DNA的提取图片



五、药品和试剂 酚（Tris饱和酚）、氯仿、异戊醇、十二烷基硫酸钠 (SDS)、Tris 碱、乙二胺四乙酸（EDTA）、异丙醇。 溶液配制： 消化缓冲液：含100mM的Nacl，10mM Tris.cl （PH8.0）, 25mM的EDTA（PH8.0）, 0.5％的SDS。 TE缓冲液（PH8.0）：含10mM Tris.cl（PH8.0）,1mM 的EDTA（PH8.0）。 电泳缓冲液TAE： 电泳缓冲液（50×TAE）：取Tris24.2g ，冰醋酸 5.7ml， 0.25mol/L EDTA (pH8.0)20ml ，加蒸馏水至 100ml。 1×TAE 为配制琼脂糖凝胶及其电泳的应用缓冲液。 0.7％琼脂糖凝胶的配制：称取0.28g琼脂糖，加入40ml 1×TAE，于电炉上加热至沸腾，待凝胶冷却至50℃左 右（手试微烫），加入3μl GoldViewTW荧光染料，混 匀后将胶倒入插好梳子的制胶板上，冷却后备用。
《遗传学实验》
深圳大学生命科学学院 实验楼205
实验八、果蝇基因组DNA的提取

一、实验目的
源自文库
通过实验掌握动物基因组DNA抽提的操作过程， 了解DNA提取的意义。
预备知识

核酸是重要的生物大分子之一，脱氧核糖 核酸（DNA）是核酸的一种，DNA是绝大 多数生物（除少数RNA病毒外）记录、存 储、传递遗传信息的分子。近年来，分子 生物学技术迅速发展，在分子遗传学研究 领域的诸多方面涉及到抽提基因组DNA的 方法。DNA的提取是进行PCR扩增、 Southern杂交、限制性片段长度多态性分析 等实验的基础。
5）14000rpm离心10分钟，让线团状物质沉 到管底或管壁，小心倒出液体。 6）用400μl 70％的乙醇洗涤沉淀， 12000rpm离心5min,倒掉乙醇，倒置晾干 至乙醇味道消失，沉淀用50μl TE 缓冲液 溶解。 7）取5-8μl DNA溶液,与2μl上样buffer混合, 然后上样于0.7％的琼脂糖凝胶上，120伏 电压下电泳30min。 8）将琼脂糖凝胶置于紫外分析仪中观察 DNA条带的绿色荧光。
二、实验原理
使用消化缓冲液使DNA从细胞内释放出来， 65度温育可以加速DNA溶解，酚——氯仿异戊 醇抽提可以将蛋白质与DNA分离，冷的异丙醇 沉淀DNA，70％的乙醇洗去DNA表面的残留 有机溶剂。
三、实验材料 新鲜存活的果蝇或－20℃冻存1h的果蝇个 体5～10个。 四、实验仪器及用具 器具：玻璃棒、烧杯、离心管、量筒、 分析天平、水浴锅、台式高速离心机、 4℃冰箱、长玻璃吸管、微量加样器、枪 头、紫外分析仪、琼脂糖电泳装置。


六、实验步骤



1）取6只麻醉的果蝇（让乙醚挥发干净）放入 1.5ml离心管中，加入消化缓冲液30μl，用200μl Tip枪头迅速捣碎。 2）补加消化缓冲液400μl，混匀，置65℃温浴30分 钟每10分钟摇荡一次，以使样品被充分消化。 3）取出离心管加入400μl酚，400μl氯仿：异戊醇 （24：1）的混合物，盖紧管盖，上下颠倒充分混 匀，抽提样品5min,12000rpm离心5分钟。 4）小心吸取上清转移至新的离心管中。加入 400μl异丙醇，轻轻混匀3min，此时可见白色线团 状物质出现。