A粗糙脉胞菌顺序四分子分析杂交B植物染色体组型分析

3.能进行有性生殖，有性生殖的生活史短，染色体结 构、功能类似于高等动植物；
4.子囊孢子是单倍体，没有显、隐性复杂关系，表型 直接反映基因型；
5.有性生殖产生的顺序排列的子囊孢子便于进行四分
子分析。
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粗糙脉胞霉的遗传(n=7)
有性生殖过程： +、-接合型菌丝接合受精→在子囊果的子囊菌丝细
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实验步骤
2．杂交：
（１）同时在杂交培养基上接种两亲本菌株的 分生孢子或菌丝（先接缺陷型，后接野生型）， 然后在培养基上放入一灭菌的折叠滤纸，25℃ 温箱进行混合培养。
注意要贴上标签，写明亲本菌株、杂交日期、 自己的名字。（记号笔写在试管上）
在杂交后5-7天就能看到许多棕色的原子囊果 出现，以后原子囊果变大变黑成子囊果，在约 21天左右，就可在显微镜下观察。
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接种环的制作
酒精灯灯芯的制作 无菌操作技术练习
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实验预期结果：
实验用赖氨酸缺陷型（Lys-）与野生型（Lys+） 杂交，得到的子囊孢子分离为4个黑色的（+） 和4个灰色的（-）。
黑色孢子是野生型，而赖氨酸缺陷型孢子成熟 迟，在野生型孢子成熟变黑时，还未变黑，而 呈浅灰色。
指长臂和短臂的长度（分别量到着丝点中部） 比值，即：
臂比值=
长臂 短臂
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从一个脉孢霉子囊壳来的子囊照片
一对等位基因（野生型和突变型）通过减数分裂 所产生的子囊孢子的分离和有序排列方式
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Ｂ.植物染色体组型分析
实验目的： 1.了解染色体组型分析原理及各项参数的意义； 2.学习染色体组型分析的方法。
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实验原理：
染色体组型分析（核型分析）就是分析细胞 中染色体的数目、大小、形态、着丝点的位 置以及次缢痕、随体的有无等形态特征，并 用表格、图示将这些特点展示出来。
放大的染色体长度（mm）
绝对长度（μm） =
× 1000
放大倍数
绝对长度往往不稳定！
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染色体组型分析常用指标：
3. 相对长度：以百分数表示，即：
待测的单个染色体长度
相对长度（%）=
× 100％ 整套染色体组的总长度
整套染色体组的总长度 = 该细胞单倍体全部染色体长度 （包括性染色体）之和
根据黑色孢子和灰色孢子在子囊中的排列顺序，
可知合子在减数分裂时，基因和着丝粒之间发
生交换的情况。
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注意事项：
观察子囊孢子时，要掌握适当的时期。如果时间偏 早，虽有子囊，但孢子均未成熟，无论野生型还是 缺陷型都显灰色；
过迟都成熟了，全为黑色，都不能分辨子囊类型；
最好在子囊果发育至成熟大小，子囊壳开始变黑时， 每日取几个子囊果压片观察，到合适时期置于 4~5℃冰箱保存。
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用碱性染料对染色体进行染 色，当两个臂被染色时，着丝 点不着色，在光镜下，好象染 色体在此区域是中断的。于是 又称着丝粒区域为主缢痕（初 级缢痕）（primary constriction）。
次缢痕
随体
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染色体组型分析常用指标：
2. 染色体绝对长度：以微米表示，可在显微 镜下通过测微尺测量，也可在放大的照片上 进行，然后按下面公式计算：
染色体的形态以有丝分裂中期最为显著，所 以一般都分析该时期的染色体。
另一类是分析减数分裂（粗线期）时期的染 色体数目和形态，以得到染色体组型。
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核型分析通常包括两方面的内容： A. 确定一物种的染色体数目 B. 辨析每条染色体的特征
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染色体组型分析常用指标：
A. 确定一物种的染色体数目
四分子分析：对四分孢子进行遗传分析，通过四分子 观察，可直接观察其分离比例，检验其有无连锁。
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实验材料
1．粗糙链孢霉野生型菌株，Lys+(分生孢子 粉红色）；
2．粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株，Lys-(分 生孢子白色）。
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实验步骤
1．菌种活化：
为使菌种生长得更好，先要进行菌种活 化。把野生型和赖氨酸缺陷型菌种从冰 箱中取出，分别接在两支完全培养基试 斜面上，28℃温箱培养5天左右。培养到 菌丝的上部有分生孢子产生。
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粗糙脉胞菌（粗糙链孢霉）
真菌门、子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属 菌丝为单倍体n=7
无性孢子——分生孢子
有性孢子——子囊孢子
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粗糙脉胞菌用于遗传分析的优点：
1.体积小，易增殖，易培养，杂交程序简单，一次杂 交可产生大量后代；
2.可以通过X射线、紫外线照射或某些化学药品处理 的方法诱发产生多种突变体；
胞中形成二倍体合子(2n)→减数分裂→形成4个单倍的 子囊孢子(四分孢子)→有丝分裂→形成8个子囊孢子、 按严格顺序直线排列在子囊内。
脉胞菌减数分裂的4个产物保留在一起，称为四分子→ （子囊的外形狭窄，以致分裂的纺锤体不能重叠，只 能纵立于长轴中，所有分裂后的核——8个子囊孢子都 从上到下顺序排列）顺序四分子。
Ａ.粗糙脉胞菌顺序四分子 分析（杂交）
Ｂ.植物染色体组型分析
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Ａ.粗糙脉胞菌顺序四分子分析（杂交）
实验目的： 1.了解粗糙脉胞菌的生活周期及特性； 2.学习粗糙脉胞菌的培养方法和杂交技术； 3.学习顺序四分子的遗传学分析方法，进行有 关基因与着丝点距离的计算和作图。（第八周）
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1. 染色体数目：
一般以体细胞染色体数目为准，至少统 计5~10个个体、30个以上细胞的染色 体数目为宜，在个体出现不同数目时， 则应该如实记录其变异幅度和各种数目 的细胞或百分比，而以众数大于85%者 为该种类的染色体数目。
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B. 辨析每条染色体的特征
染色体的排列原则： ①染色体的大小（即长度） ②着丝粒的位置 ③特殊标记，如随体的有无
eg: 大麦 2n=14, n=7
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染色体组型分析常用指标：
4. 染色体长度比：
指核型中最长染色体与最短染色体的比值，即：
最长染色体 染色体长度比=
最短染色体
可以简写为Lt/Ls,这一数值在核型分析中 是衡量核型不对称程度的主要指标之一。
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染色体组型分析常用指标：
5. 臂比值：