费菜总黄酮提取工艺的研究

252
03% 。 准确称取原料粉末 1g 置入 150mL 锥形瓶中， 加入一定浓度、 一定 量 的 乙醇 溶液 超 声 辅 助 提 取， 后 转移到 恒 温 水 浴 锅 中 浸 提， 提 取 液 趁 热 抽 滤， 得滤 将滤液作为待测液进行含量的测定。 液， 122 测定波长的确定 13 ］ 。 献［ 测定波长的确定参照文
［ 12 ］
kamtschaticum
Fisch; total
flavonoids; ultrasound － assisted
extraction; ultraviolet
植物黄酮( flavonoids) 是一 类低分 子 天 然 植 物成 ， 分 广泛 存在 于 蔬 菜、 水果和 药 用 植 物中， 毒副作用 小， 是目 前人 们 比较 关 注 的一 类化 合 物。 有 很 多 药 用植物的主要活 性成 分 都 是 黄 酮 类， 包括 黄 酮、 异黄 、 。 ， 酮 黄酮醇等 最初 黄 酮 类 的 粗 制 品 仅 在染 料 方面 在上世纪 20 年 代， 国外 把 槲 皮 素、 芦丁 用 于 临 应用， ［ 1］ 床 后， 才 开 始 引起 人 们 的关 注 。 许多 研究表明， 黄 酮类化 合 物 具 有 多 种 生 物 活 性， 除 利 用 其 抗 菌、 消 炎、 抗突变、 降压、 清热 解 毒、 镇 静、 利 尿 等作用外， 在 抗氧 化、 抗 癌、 防 癌、 抑 制 脂 肪 氧 化 酶 等 方面 也 有显 ［ 2］ 著效果 。黄酮类化 合 物的 提 取 方法 一 般 有有 机溶 CO2 超临界流体提取 法、 剂提取法、 碱提酸沉淀法、 超 声波提取法、 微波 提 取 法、 酶法辅助提取法和加压流 体提取等
* 刘 飞， 王鸿飞 ， 林 燕， 毛方华 ( 宁波大学食品科学与工程系， 浙江宁波 315211 )
要: 采用乙醇浸提、 超声波辅助的方法从费菜叶中提取 总 黄 酮， 在 单 因素 实验的 基础 上 用 正 交 实验进行 工艺 参数 ， 。 的优化 采用紫外分光光度法测定总黄酮含量 其适 合 的 工艺 条件 为: 超 声 时间 50min， 乙醇 浓度 90% ， 料 液比 1∶50 ， 摘 乙醇浸提液 pH9 ， 浸提温度 60℃ ， 浸提时间 6h， 在此工艺条件下总黄酮的得率为 5822% 。 关键词: 费菜， 总黄酮， 超声辅助提取， 紫外分光光度法
图1
123
扫描图谱
标准溶液的制备和标准曲线的绘制 称取 00244g 芦丁 ( 120℃ 干 燥 至 恒 重 ) ， 置 于 100mL 容 量 瓶中， 加入适 量 的 30% 乙醇， 稍 加 热 溶 解， 冷却后用 30% 的 乙 醇 定 容 至 100mL。 此 时 芦 丁 的 浓 度 为: 0244mg / mL。精密移取标准 溶液 0 、 02 、 04 、 05 、 06 、 08 、 10mL 于 10mL 比 色 管 中， 各 加 入 2% 的 AlCl3 溶 以 30% 乙醇 定 容 至 刻 度， 静 置 20min 。 以 空 液 1mL， 白管 调 零 ， 在 275nm 下测定 吸光度 A， 得 到 的 回归 方 R = 09999 。 所 得 标准 曲 程为: y = 38631x + 00016 ， 线如图 2 。
［ 3－11 ］
。实
验以乙醇为 提 取 溶 剂， 采 用超 声 波 辅 助 的 方法从 费 菜叶中提取 黄 酮 类化 合 物， 研究 费 菜 叶 中 提 取 总 黄 酮的影响因 素， 并 采 用 正 交 实验 进行从 费 菜 叶 中 提 取总黄酮的工艺条件优化， 从而为生产提供指导。
1
11
材料与方法
由图 4 可见， 随着 乙醇 浓度 的 升 高， 总黄酮得率 ， 90% 不断增 加 乙醇 浓度 为 时， 达到 最高， 乙醇 浓度 高于 90% 时， 得率反而下降， 可 能 是 由 于 乙醇 浓度过 高， 其他醇溶性物 质 会 被 提出， 致 使 黄 酮 类化 合 物 溶
园， 摘功能叶干燥备用; 芦丁 标准 品 ( 含 量 ≥95% ) 国药集团化学试剂 有限 公司; 无 水 乙醇、 结 晶 三氯 化 铝 山 东 青 州市精 诚机械有限 公司; SB3200D 型 超 声 波清洗 机 宁 波 新芝 生物 科 技 股 份 有限 公司; Orion 420A + 酸 度 计 美 国 Thermo 公司; Cary 50 Scan 紫外分光光度计 美 国瓦里安技术中国有限公司。 均为分析纯; 水 纯水。 WK－200B 型 高 速 药 物 粉碎 机
Study on extraction of total flavonoids from Sedum kamtschaticum Fisch
LIU Fei， WANG Hong－ fei * ， LIN Yan， MAO Fang－ hua ( Department of Food Science and Engineering， Ningbo University， Ningbo 315211 ， China) Abstract : Total flavonoids from Sedum kamtschaticum Fisch was extracted by ultrasonic wave On the basis of single － factor experiments， the orthogonal experiment was used in the optimization of technological parameters The results showed that the optimum conditions were as follows: supersonic time was 50 min， ethanol concentration was 90 % ， ratio of raw material and liquid was 1∶50 ， pH 9 ， optimum extraction temperature and time was 60 ℃ and 6 h By the total flavonoids extraction rate was 5822 % the above conditions， Key words: Sedum spectrophotometry 中图分类号: TS2012 文献标识码: B 文 章 编 号: 1002－0306 ( 2011 ) 04－0252－04 ， 全草， 始 载 于《救荒 本 草 》 其 性平、 味 酸; 具有 活 血、 、 、 、 。 止血 宁心 消 肿 解 毒等 功 效 民 间 用 于 治 疗 跌 打 损伤、 咳血、 吐 血、 便 血、 心 悸、 痈 肿 等 疾病。 费 菜 含 马栗 树 皮 素、 杨 梅 树 皮 苷、 金 丝 桃 苷、 槲 皮 素、 山奈 酚、 杨梅黄素 3－ 葡萄 糖 苷 等 黄 酮 及 黄 酮 甙 类
2、 3、 4 号， 1、 2 号各 取 4 个 25mL 容量瓶， 编号 1 、 3、 4 号 各 加 入 1mL 芦丁 标准 溶液 加入 1mL 样品液， ( 0244mg / mL) ， 4 号各加入 2% AlCl3 溶液 1mL， 在 2、 4 个容量瓶都 用 30% 乙醇 定 容， 混 匀 后 放 置 20min ， 1cm 分别 置 于 石 英 比 色 皿 中， 于 紫 外 分光光度 计 上 在 200～800nm 波长范围内扫描。 由图 1 的扫描 图 谱 可 见， 在 紫 外区， 在 30% 乙醇 溶液 中， 样品提取液中总黄酮最大吸收波长为 270nm， 芦丁 标准 溶液 的 最 大 吸 收 波 长 为 265nm; 在 样品提 取 液 中 总 黄 酮 的 三氯化铝 30% 乙醇 溶液 中， 最大吸收波长为 275nm， 芦丁标准溶液的最大吸收波 长也为 275nm。三氯化 铝 的存在 使样品 黄 酮 和 芦丁 的吸收峰发生了 红 移， 使 他们 的 最 大 吸 收 波 长重 合。 因此， 实验 以 芦丁 为标准 品 在 275nm 测 定 费 菜 叶 总 黄酮的含量。
算总黄酮得率。 总黄酮得率( % ) = 125 样品液中总黄酮的质量 × 100% 干物料的质量
单因素及正 交 实验设 计 一 般 采 用 乙醇 作为 提取剂， 可以避免 有毒和有 害 物 质 的 残 留， 采 用超 声 波辅助萃取， 可以 加 速 细胞 的 破碎， 有 利 于 有效成 分 的溶出。实验利用超 声 波 辅 助， 通 过 对 乙醇 浓度、 料 液比、 乙醇浸 提 液 pH、 超 声 时 间 等 影响 费 菜 总 黄 酮 得率的因素 进行单因 素 实验， 并 在 此 基础 上 设 计 了 四因素三水平的正交实验， 以确定最佳工艺条件。 4 表 1 L9 ( 3 ) 正交实验因素水平表
70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% 对费菜总黄酮得率的影
图2
124
芦丁标准曲线
分别吸 取 1mL 待 测 液
费菜叶 总 黄 酮 的 测 定
来自百度文库
图4
乙醇浓度对总黄酮得率的影响
于 10mL 容量瓶中用相应的乙醇 溶液 定 容， 再 分别吸 取 1mL 待测液于 10mL 比色管中， 各 加 入 2% 的三氯 化铝 溶 液 1mL， 以 30% 的 乙 醇 定 容 至 刻 度， 静置 20min 。以 空 白 管 调 零， 在 275nm 下 测 定 吸光度， 计
材料与仪器
费菜 采自江苏 沛 县 野 生 蔬 菜 研究 所 张 寨 示 范
。 碱 提 酸 沉 法 需 要控制 浸 提 液 的 pH，
在强碱性下 尤 其加 热 时会 破 坏 黄 酮母 核， 酸性 过 大 会形成佯盐， 致使析出 的 黄 酮 类化 合 物 又 重 新 溶 解， 降低产品 收 率。 有 机 溶 剂 提 取 法 目 前 应 用 最 为 广 泛， 如配合超声、 微 波 和 酶 辅 助， 这 样 不 仅 省 时 省 力， 低污染， 节约原料， 而 且 提 取 率 比 单 纯 有 机溶 剂提 取 都 显著提高。费菜( Sedum kamtschaticum Fisch ) 俗称 救心草、 景天三七， 系 景 天 科 景 天属 植 物 费 菜 的 带 根
12
121
实验方法
收稿日期: 2010－03－24
* 通讯联系人
作者简介: 刘飞( 1983－ ) ， 女， 硕士， 主要从事食品科学方面的研究。
费菜叶总黄酮的提 取 将 新 鲜 费 菜 叶 在 70℃ 干燥 24h ， 然后用药物粉碎机粉碎 并过 80 目筛， 称取 105℃ 干 燥 2h ， 一定 量 的 费 菜 叶 干 粉， 使水分含量在
图3
超声时间对总黄酮得率的影响
从图 3 中可见， 随着 超 声 时 间 的 延长， 总黄酮得 50min 后 得 率 增 加 不 大， 率随之增 加， 为 了降低 时 间 和能量消耗， 以 50min 为宜。 212 乙醇浓度对 费 菜 总 黄 酮 得 率 的 影响 在 料 液 40℃ 比 1∶40 ， 乙醇浸 提 液 未 调 pH， 超 声 提 取 50min ， 水浴 浸 提 1h 的 条 件 下， 分 别 研 究 乙 醇 浓 度 60% 、 响。实验结果见图 4 。
水平 1 2 3
A 料液比 ( mL·g － 1 ) 1∶30 1∶50 1∶70
因素 B 浸提液 C 浸提温度 D 浸提时间 pH ( ℃) ( h) 8 40 2 9 50 4 10 60 6
2
21
结果与分析
单因素实验
超声时间对 费 菜 总 黄 酮 得 率 的 影响 在 乙醇
211
40℃ 水 浓度 90% ， 料液比 1∶40 ， 乙醇浸 提 液 未 调 pH， 20 、 30 、 40 、 浴浸提 1h 的 条 件 下， 分 别 研 究 超 声 10 、 50 、 60min 对费菜叶总黄酮 得 率 的 影响。 实验 结果 见 图 3。