罗汉果甜苷提取工艺的研究

罗汉果甜苷提取工艺的研究

【摘要】目的建立适合工业化生产的罗汉果甜苷提取工艺。方法用ZTC1+1澄清剂除去罗汉果水提液中的杂质，以D101大孔吸附树脂分离罗汉果甜苷，D301R弱碱性离子交换树脂脱色。结果ZTC1+1澄清剂是一种很好的澄清剂，D301R弱碱性树脂具有很好的脱色能力，D101大孔吸附树脂能有效地分离罗汉果甜苷。结论生产工艺简单易行，产品收

率高，质量好，适合大工业生产。

【关键词】罗汉果甜苷提取工艺澄清剂D101大孔吸附树脂

罗汉果为葫芦科植物罗汉果Momordica grosvenori Swingler 的果实，是我国特有的传统保健药材，它味甘、性凉、具有清热润肺、滑肠通便、促进肠胃功能的作用，用于治疗急慢性支气管炎、急慢性扁桃体炎、大便秘结等［1］。罗汉果甜苷是罗汉果中主要成分，它是一种三萜烯葡萄糖苷，其配糖苷元是三萜烯醇［2］，具有非发酵性、低热量、甜度是蔗糖的300倍的特点，具有广泛的应用价值。广西是罗汉果的主产地，占全国产量的80%以上，因此研制开发出一种先进的罗汉果甜苷提取工艺，对于提高罗汉果商品价值、推动广西罗汉果产业化发展具有重要意义。对罗汉果甜苷提取方法的研究，国外大都采用无机吸附剂和无机脱色剂，操作工艺复杂，无法工业化生产。特别是工业生产中不能很好的解决罗汉果甜苷的脱色、除杂问题［3］。现代中药提取的新趋势是以合适的澄清剂来除杂，以大孔树脂来吸附中药有效成分及脱色，本研究正是应用这两项技术进行提取工艺的研究。现将结果报道如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（日本岛津），SPD-10A 检测器系统控制器，威玛龙色谱工作站，Shodex Asahipak NH2色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），试剂乙腈为色谱纯，水为去离子重蒸水；其余试剂均为分析纯。

罗汉果甜苷对照品由广西百年乐倩倩公司提供，纯度96.5%；鲜罗汉果购自广西永福龙江乡，经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授鉴定为葫芦科植物罗汉果Momordica grosvenori Swingler的果实，ZTC1+1澄清剂为天津正天成澄清有限公司产品，D101大孔吸附树脂为天津农药总厂产品，D301R弱碱性离子交换树脂为南开大学化工厂产品。

2 方法与结果

2.1 罗汉果甜苷的制备［4］鲜罗汉果→绞碎→溶剂提取→澄清剂处理→粗提液→大孔树脂→交换树脂脱色→干燥→超微粉碎→罗汉果甜苷成品。影响工艺的因素主要有澄清剂、大孔树脂及用于脱色的树脂种类，用于树脂洗脱的溶液浓度。经工艺优化后，选用ZTC-101澄清剂脱去溶液中的鞣质和蛋白质，D101大孔树脂富集罗汉果甜苷，D301R大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂脱色，50%乙醇液为树脂洗脱液，收集罗汉果甜苷。

2.2 薄层展开及罗汉果甜苷的含量测定

2.2.1 薄层展开取供试罗汉果甜苷用甲醇配成约1 mg/ml的溶液，同法另取罗汉果甜苷对照品用甲醇配成约1 mg/ml的溶液。分别吸取以上两种供试品液6 μl ，分别点于同一硅胶H薄层板，正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）展开，晾干，喷以硫酸乙醇溶液（1→10），105℃加热10 min。见图1。

1. 罗汉果甜苷提取物阴性样品

2. 罗汉果甜苷对照品

3. 罗汉果甜苷供试样品

图1 罗汉果甜苷TLC图（略）

2.2.2 罗汉果甜苷含量测定［5］取供试品约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液50 ml，称定重量，超声10 min，取出，放冷后，再称定重量，用70%甲醇补足减少的重量，0.45微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。对照品溶液的制备：精密称取罗汉果甜苷对照品适量，置量瓶中，加70%甲醇制成每毫升含罗汉果甜苷50 μg，即得。

色谱条件：乙腈-水（30∶70）为流动相，流速1 ml/ min；检测波长203 nm；柱温室温。

测定法：分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

供试品含罗汉果甜苷80%以上。

2.3 红外光谱比较罗汉果甜苷样品图谱与罗汉果甜苷对照品图谱一致，与有关文献相符。3 讨论

对影响本工艺的主要因素做了优化实验，结论如下。

溶剂曾选用50%乙醇和水比较，但水提的皂苷溶出性比醇提的好，且成本低，因此选用水为溶媒对影响本工艺的主要因素做了优化实验。溶剂量以原料重的10倍为宜。

澄清剂曾选用壳聚糖（浙江玉环化工厂），101澄清剂（上海华逊应用生物化学研究所），做了实验比较，除杂效果与罗汉果甜苷损失综合比较，ZTC1+1澄清剂较好。

样品图谱

压片

图2 对照品图谱（略）

曾选用AB-8吸附树脂（南开大学化工厂）做了实验比较，在中试实验中，D101大孔树脂柱吸附性、再生性、经济性更好。D101大孔树脂对罗汉果甜苷的吸附量约为每公斤树脂吸附40～50 g罗汉果甜苷。洗脱液曾用30%，50%，70%乙醇液比较，50%乙醇液罗汉果甜苷的收率最高，选用50%乙醇液为洗脱液。

曾选用D280强碱离子交换树脂做了实验比较，D280强碱离子交换树脂脱色能力好于D301R弱碱树脂，但树脂没办法再生重复利用，在工业大生产中，成本昂贵，故选用能再生重复使用的D301R弱碱树脂。

将洗脱液减压真空干燥，得浅黄色的罗汉果甜苷产品，纯度达80%以上，工艺得率达到1.3%。

【参考文献】

［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：147.

［2］王霆，黄志江，蒋毅珉，等.罗汉果甜苷的生物活性研究［J］.中草药，1999，30（12）：914.

［3］刘钟栋.罗汉果甜甙（Ⅴ）的精制研究［J］.离子交换与吸附，1999，15（4）：364.

［4］李雁群,王策，王文生.罗汉果皂甙的提取工艺研究［J］.天然产物研究与开发，1995，12（4）：87.

［5］余丽娟，陈全斌，义祥辉，等 .高效液相色谱法制备罗汉果甜苷Ⅴ标准品［J］.色谱，2003，21（4）：397.