药物定量分析和分析方法验证
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第四章 药物定量分析与分析方法验证
1、含卤素有机药物
含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环
如果测得理论板数低于规定的最小理论板数， 应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色 谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。
(2)分离度(R)
在定量分析时，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定 外，分离度应大于1.5。
分离度（R）的计算公式见下式：
R 2 t R2 t R1
含量（CX）= f
AX AS / CS
式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供
试品的浓度 。
丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品 对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成 每lmL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液 和内标溶液（1．6mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶 液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录
例
取盐酸麻黄碱0.1532g，精密称定， 加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞试液 2ml与结晶紫指示液1滴，用HClO4滴 定至绿色，用去0.1022mol/L的高氯 酸滴定液7.50m1，空白试验消耗高氯 酸滴定液0.08ml。已知每1ml高氯酸 滴定液（0.1mol/L）当于20.17mg的 C10H15ON·HCl。试计算盐酸麻黄碱 的百分含量？（99.80％）
1.分离原理
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
吸附色谱
根据填充剂吸附活性 对样品的吸收系数不 同而分离
充填剂：硅胶
分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
药物定量分析样品与分析方法验证
第四节 生物样品分析方法的 基本要求
二、样品的储存
血浆和血清都必须在采血后即时分离。否则，血凝后 冰冻保存，则因冰冻时引起细胞溶解，而阻碍血浆或 血清的分出，同时因溶血而影响药物浓度变化。
尿样宜立即测定，否则应加入防腐剂或低温冷藏。
第四节 生物样品分析方法的 基本要求
三、生物样品分析前处理技术
微量药物存在于大量生物介质中，若直接进行 测定，内源性物质可能干扰，药物浓度太低将 会达不到仪器灵敏度要求。因此，生物样品中 的药物必须经过分离、纯化与浓集，必要时还 需对待测组分进行化学改性处理，从而为最后 测定创造良好的条件。
第二节 定量分析方法的特点
二、光谱分析法 （1）紫外分光光度法
特点： 1.灵敏度高，10-4 -10-7g/ml。 2.准确度高，RSD%：2%-5%。 3.仪器价廉物美，操作简便，易于普及。 4.应用广泛。
第二节 定量分析方法的特点
二、光谱分析法 （1）紫外分光光度法
含量测定方法
1.对照品比较法 2.吸收系数法 3.计算分光分度法。 4.比色法
一、概述
原料:不经特殊处理直接测定 原料:经有机破坏后测定 制剂:排除处方中干扰组分
药物
二、不经有机破坏的分析方法
➢（一）直接测定法 ➢1.配位滴定法 ➢2.氧化还原法 ➢（二）经水解后测定法 ➢1.碱水解后测定法 ➢2.酸水解后测定法 ➢（三）经还原分解后测定
二、不经有机破坏的分析方法
➢ （一）直接测定法 ➢ 1.配位滴定法
第四节 体内药物分析简介
定义： 体内药物分析是通过分析手段了 解药物在体内数量与质量的变化， 获得各种药物动力学参数，代谢 的方式和途径等信息。
第四节 体内药物分析简介
药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证
○ A．做空白试验 B．做对照实验 ○ C．做回收试验 D．增加平行测定次数 ○ E．选用多种测定方法
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
药物定量分析与分析方法验证-综合
测定供试品中主成分含量外标法是以供试品的对照品或标准品作对照物质，相对比较以求得供试品的含量。
外标法可分为标准曲线法和外标一点法。
①标准曲线法
配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作出峰面积(或峰高)与浓度的标准曲线。然后在相同的
条件下，注入同量供试品，测得待测组分的峰面积(或峰高)，根据标准曲线或它的回归方程，计算供试品中待测组分的浓度。
药物定量分析与分析方法验证-综合
D
则，滴定度：
3、含量的计算
用容量分析法测定药物的含量时，滴定方式有两种，即直接滴定法和间接滴定法。其测定结果的计算方法分述如下。
(1)直接滴定法:
此法是用滴定液直接滴定，以求得被测药物的含量。
式中，V：消耗滴定液的体积；
W：供试品取用量；
T：滴定度。
滴定度在药典中是直接给出的，但在实际工作中，所配制的滴定液的摩尔浓度与药典中规定的摩尔浓度不一定恰好符合，此时就不能直接应用药典上所给出的滴定度(T)，但只要乘以滴定液浓度校正因数(F)即可换算成实际的滴定度( )，即
二、光谱分析法
紫外-可见分光光度法特点：
1、灵敏度高，可达10-4～10-7g/ml。
2、准确度高，相对误差为2％～5％。
3、仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。
4、应用广泛。许多化合物均可采用本法进行测定，同时还可以应用计算分光光
度法不经分离直接测定混合物中各组分的含量。
备注：
比色皿校正：通常实验中用校正方法应对比色皿的误差。
(2)间接滴定法：间接滴定法包括生成物滴定法和剩余量滴定法。
剩余量滴定法亦称回滴定法，本法是先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物定量反应，待反应完全后，再用另一滴定液B来回滴定反应后剩余的滴定液A。
外标法可分为标准曲线法和外标一点法。
①标准曲线法
配制一系列已知浓度的标准液，在同一操作条件下，按同量注入色谱仪，测量其峰面积(或峰高)，作出峰面积(或峰高)与浓度的标准曲线。然后在相同的
条件下，注入同量供试品，测得待测组分的峰面积(或峰高)，根据标准曲线或它的回归方程，计算供试品中待测组分的浓度。
药物定量分析与分析方法验证-综合
D
则，滴定度：
3、含量的计算
用容量分析法测定药物的含量时，滴定方式有两种，即直接滴定法和间接滴定法。其测定结果的计算方法分述如下。
(1)直接滴定法:
此法是用滴定液直接滴定，以求得被测药物的含量。
式中，V：消耗滴定液的体积；
W：供试品取用量；
T：滴定度。
滴定度在药典中是直接给出的，但在实际工作中，所配制的滴定液的摩尔浓度与药典中规定的摩尔浓度不一定恰好符合，此时就不能直接应用药典上所给出的滴定度(T)，但只要乘以滴定液浓度校正因数(F)即可换算成实际的滴定度( )，即
二、光谱分析法
紫外-可见分光光度法特点：
1、灵敏度高，可达10-4～10-7g/ml。
2、准确度高，相对误差为2％～5％。
3、仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。
4、应用广泛。许多化合物均可采用本法进行测定，同时还可以应用计算分光光
度法不经分离直接测定混合物中各组分的含量。
备注：
比色皿校正：通常实验中用校正方法应对比色皿的误差。
(2)间接滴定法：间接滴定法包括生成物滴定法和剩余量滴定法。
剩余量滴定法亦称回滴定法，本法是先加入定量过量的滴定液A，使其与被测药物定量反应，待反应完全后，再用另一滴定液B来回滴定反应后剩余的滴定液A。
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
药物分析-药物定量分析与方法验证
44
特点：
仪器简单－滴定管、锥形瓶等玻璃仪器。 操作方便－通过观察溶液颜色变化确定滴
9
测 定 方 法 ： 取 本 品 约 0.1g ， 精 密 称 定 ， 加 乙 醇 5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml，加热回流 15min，放冷至室温，加水20ml与硝酸5ml，精 密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二 甲酸二丁酯5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁 胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定， 并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硝酸银 滴 定 液 (0.1mol/L) 相 当 于 6.216mg 的 三 氯 叔 丁 醇 （C4H7Cl3O·1/2H2O）。
13
（1） 碱性还原后测定
例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶 液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷 凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗 涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋 酸 5ml 与 曙 红 钠 指 示 液 5 滴 ， 用 硝 酸 银 滴 定 液 (0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L) 相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
富马酸亚铁 C4H2FeO4的含量测定
原理
d H2SO4
O
HC C O
C CH Oˉ
+
Fe2+
富马酸亚铁
Oˉ
富马酸
Fe2+ + Ce4+
滴定 Ce3+ + Fe3+
邻二氮菲指示剂
N
N
红色
Fe2+ + Ce4+
特点：
仪器简单－滴定管、锥形瓶等玻璃仪器。 操作方便－通过观察溶液颜色变化确定滴
9
测 定 方 法 ： 取 本 品 约 0.1g ， 精 密 称 定 ， 加 乙 醇 5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml，加热回流 15min，放冷至室温，加水20ml与硝酸5ml，精 密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二 甲酸二丁酯5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁 胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定， 并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硝酸银 滴 定 液 (0.1mol/L) 相 当 于 6.216mg 的 三 氯 叔 丁 醇 （C4H7Cl3O·1/2H2O）。
13
（1） 碱性还原后测定
例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶 液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷 凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗 涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋 酸 5ml 与 曙 红 钠 指 示 液 5 滴 ， 用 硝 酸 银 滴 定 液 (0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L) 相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
富马酸亚铁 C4H2FeO4的含量测定
原理
d H2SO4
O
HC C O
C CH Oˉ
+
Fe2+
富马酸亚铁
Oˉ
富马酸
Fe2+ + Ce4+
滴定 Ce3+ + Fe3+
邻二氮菲指示剂
N
N
红色
Fe2+ + Ce4+
药物分析第四章 药物定量分析与分析方法验证
• Pharmaceutical Analysis
2019/11/5
1
第四章 药物定论量分析与分析方法验证
主 要 内 容
2019/11/5
一、 定量分析样品的前处理方法 二、 定量分析方法特点 三、药品质量标准分析方法验证 四、 生物样品分析方法的基本要求
2
第一节 定量分析样品前处理方法
一、概述
含金属与卤素药物须处理后方可进行测定。
处理方法视结合牢固程度而异。
卤素与芳环相环相连牢固；与脂肪族碳相连 结合不牢固。
含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属 的有机药物，不牢固，一般直接测定；金属与碳 原子以共价键相连，结合比较牢固---为有机金 属药物，须适当处理。
2019/11/5
3
含卤素有机药物的分析
T 0.1 1 134.14 3.429(mg/ml) 4
2019/11/5
含量% (VI2 FI 2 -VNa2S2O3 FNa2S2O3 ) T 100 W
40
T M b B(mg/ ml) a
直接滴定法： 含量% V T 100%
W
含量% V T F 100% W
20203241药物分析?pharmaceuticalanalysis20203242一定量分析样品的前处理方法二定量分析方法特点三药品质量标准分析方法验证四生物样品分析方法的基本要求主要内容主要内容论第四章药物定量分析与分析方法验证20203243一概述含金属与卤素药物须处理后方可进行测定
药物分析
I
I
COOH
I
I
NH C (CH2)4 C NH
I
O
O
I
胆影酸
2019/11/5
1
第四章 药物定论量分析与分析方法验证
主 要 内 容
2019/11/5
一、 定量分析样品的前处理方法 二、 定量分析方法特点 三、药品质量标准分析方法验证 四、 生物样品分析方法的基本要求
2
第一节 定量分析样品前处理方法
一、概述
含金属与卤素药物须处理后方可进行测定。
处理方法视结合牢固程度而异。
卤素与芳环相环相连牢固；与脂肪族碳相连 结合不牢固。
含金属药物：金属不直接与碳相连为含金属 的有机药物，不牢固，一般直接测定；金属与碳 原子以共价键相连，结合比较牢固---为有机金 属药物，须适当处理。
2019/11/5
3
含卤素有机药物的分析
T 0.1 1 134.14 3.429(mg/ml) 4
2019/11/5
含量% (VI2 FI 2 -VNa2S2O3 FNa2S2O3 ) T 100 W
40
T M b B(mg/ ml) a
直接滴定法： 含量% V T 100%
W
含量% V T F 100% W
20203241药物分析?pharmaceuticalanalysis20203242一定量分析样品的前处理方法二定量分析方法特点三药品质量标准分析方法验证四生物样品分析方法的基本要求主要内容主要内容论第四章药物定量分析与分析方法验证20203243一概述含金属与卤素药物须处理后方可进行测定
药物分析
I
I
COOH
I
I
NH C (CH2)4 C NH
I
O
O
I
胆影酸
药物分析第四章定量分析与分析方法验证
标准偏差
三、专属性 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等） 系指在其它成份（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在 采用的方法能准确测定出被物的特性。 下，采用的方法能准确测定出被物的特性。 四、检测限（LOD） 检测限（ ） 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 指试样中被测物能被检出的最低浓度或量。 五、定量限（LOQ） 定量限（ ） 指样品中被测物能被定量测定的最低量， 指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果具有 一定的准确度和精密度。 一定的准确度和精密度。 六、线性 系指在设计的范围内， 系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈正比关系的程度，相关系数R-->1 ,用软件可得回归方程 用软件可得回归方程. 呈正比关系的程度，相关系数 用软件可得回归方程
VT 含量% = × 100% W
T—滴定度 滴定度;V—消耗滴定液体积 消耗滴定液体积;W—供试品取量 滴定度 消耗滴定液体积 供试品取量 校正因子F: 校正因子 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时,要校正 要校正: 当滴定液浓度与药典中规定浓度不相同时 要校正 实际摩尔浓度 F= 规定摩尔浓度 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度,而是 值 在药检部门实验里的试剂瓶子一般不标浓度 而是F值. 而是 实际滴定度:T’=TF 实际滴定度
二、光谱分析法 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射， 光照在物质上，物质内部发生能级跃迁而产生辐射，利用 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 光谱进行定性或定量的结构分析称为光谱分析法。 1、紫外-可见分光光度法（200nm—760nm) 、紫外 可见分光光度法 可见分光光度法（ (1)朗伯 比耳定律 朗伯-比耳定律 朗伯 A=ELC A-吸光度；L-液层厚度；C-溶液浓度；E-吸收系数 吸光度； 液层厚度 液层厚度； 溶液浓度 溶液浓度； 吸收系数 吸光度 （2）百分吸收系数 ）百分吸收系数E 1% 溶液浓度为1%（ 溶液浓度为 （W/V）厚度为 ）厚度为1cm的吸收度 E1cm 的吸收度 A （3）吸收系数法测含量 ） ×D 1% E1cm 含量%= ×100% W × l ×100 A-供试品吸光度；D-供试品稀释倍数； 供试品吸光度； 供试品稀释倍数 供试品稀释倍数； 供试品吸光度 W-供试品取量（标示量）（ ）； 液层厚度（cm） 供试品取量（ ）（g）； 液层厚度（ ） 供试品取量 标示量）（ ）；L-液层厚度
第4章-药物定量分析
验证分析方法的具体内容
鉴 别 准确度 重复性 精密度 中间精密度 专属性 检测限 定量限 线性 范围 耐用性 － ＋ － － － － ＋ ＋* ＋ －** ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ － － － ＋ ＋* ＋ － － ＋ ＋ ＋ － － 杂质检查 定量 ＋ ＋ 限度 － － 含量测定及 溶出度测定 ＋ ＋
系统适用性试验
色谱柱的理论塔板数 分离度 重复性 拖尾因子
色谱柱的理论塔板数
N = 5.54 (tR/W1/2)2 = 16(t/W)2 改变柱长、内径、固定相牌号、固定 相颗粒粒径等
分离度
定量峰与其它峰或内标峰之间的分离度 R应大于1.5
重复性
取各品种项下的对照品溶液，连续进样5 次，其峰面积测量值的RSD不应大于 2.0% 配制相当于80%，100%，120%的对照品 溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种 不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平 均校正因子，其RSD不应大于2.0%
全血（加抗凝剂） 测定血样中平均分布于细 胞内和细胞外的药浓
• 种类：
硫酸-硝酸法 硫酸-高氯酸法 硫酸-硫酸盐法 硝酸-高锰酸钾法
凯氏定氮法
（二）干法破坏
1.高温炽灼法
---- 将有机物灼烧灰化 • 适用于湿法不易破坏完全的有机药物及 某些不能用硫酸破坏的有机药物 • 不适用于含易挥发金属有机药物的破坏 （砷、汞） • 常加入无水碳酸钠或轻质氧化镁助灰化
二．精密度
1．表示方法 • 标准偏差SD
• 相对标准偏差
relative standard deviation RSD
即变异系数 coefficient of variation CV
2. 重复性
• 在相同操作条件下，由同一个分析人员 测定同一种样品所得结果的精密度。
第四章 药物定量分析与分析方法验证(药物分析)学习参考资料
分析
案例的实施和实验操作
案例选择：选择具有代表性的药物品种和相应的分析方法 实验设计：根据药物品种和分析方法，设计合理的实验方案 实验操作：按照实验设计进行实验，注意实验操作的规范性和准确性 数据分析：对实验数据进行处理和分析，评估方法的可行性和可靠性
案例的总结和经验教训
案例分析：介绍具体的药物定量分析与分 析方法验证案例，包括实验设计、操作过 程、结果分析和结论。
生产控制：药物定量分 析可确保生产过程中的 药物成分一致，提高产 品质量和生产效率。
药品质量控制：通过药 物定量分析，可对药品 进行质量控制，确保药 品的安全性和有效性。
临床应用：药物定量 分析有助于医生根据 患者的病情制定合理 的用药方案，提高治 疗效果。
药物分析方法验证的定义和目的
定义：药物分析方法验证 是通过一系列实验，证明 所建立的分析方法是否符 合药品质量控制的要求和 标准的过程。
解释
实验设计的目的和原则
目的：确保药物分析方法的准确性和可靠性 原则：对照原则、重复原则、随机原则、均衡原则
实验操作的流程和注意事项
实验前准备：确保实验室环境、 仪器和试剂符合要求，制定详 细的实验计划和操作步骤。
样品处理：根据实验需要，对 药物样品进行适当的处理，如 溶解、稀释、离心等。
仪器操作：按照仪器说明书进 行操作，确保仪器处于正常状 态，并记录仪器使用情况。
注意事项：确保 实验操作规范， 避免误差，保证 实验结果的准确 性和可靠性
实验数据分析和处理的方法
实验数据的收 集和整理：确 保数据的准确
性和完整性
数据分析方法 的选择：根据 实验目的和数 据类型选择合
适的方法
数据处理流程： 对数据进行预 处理、统计分 析和可视化处
案例的实施和实验操作
案例选择：选择具有代表性的药物品种和相应的分析方法 实验设计：根据药物品种和分析方法，设计合理的实验方案 实验操作：按照实验设计进行实验，注意实验操作的规范性和准确性 数据分析：对实验数据进行处理和分析，评估方法的可行性和可靠性
案例的总结和经验教训
案例分析：介绍具体的药物定量分析与分 析方法验证案例，包括实验设计、操作过 程、结果分析和结论。
生产控制：药物定量分 析可确保生产过程中的 药物成分一致，提高产 品质量和生产效率。
药品质量控制：通过药 物定量分析，可对药品 进行质量控制，确保药 品的安全性和有效性。
临床应用：药物定量 分析有助于医生根据 患者的病情制定合理 的用药方案，提高治 疗效果。
药物分析方法验证的定义和目的
定义：药物分析方法验证 是通过一系列实验，证明 所建立的分析方法是否符 合药品质量控制的要求和 标准的过程。
解释
实验设计的目的和原则
目的：确保药物分析方法的准确性和可靠性 原则：对照原则、重复原则、随机原则、均衡原则
实验操作的流程和注意事项
实验前准备：确保实验室环境、 仪器和试剂符合要求，制定详 细的实验计划和操作步骤。
样品处理：根据实验需要，对 药物样品进行适当的处理，如 溶解、稀释、离心等。
仪器操作：按照仪器说明书进 行操作，确保仪器处于正常状 态，并记录仪器使用情况。
注意事项：确保 实验操作规范， 避免误差，保证 实验结果的准确 性和可靠性
实验数据分析和处理的方法
实验数据的收 集和整理：确 保数据的准确
性和完整性
数据分析方法 的选择：根据 实验目的和数 据类型选择合
适的方法
数据处理流程： 对数据进行预 处理、统计分 析和可视化处
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限
浅谈药品分析方法验证试验中检测限和定量限摘要：药品分析方法的验证是质量控制的重要环节，为检验分析方法提供制定依据。
在建立药品质量标准、变更药品生产工艺或制剂组分、修订原分析方法是需进行分析方法验证。
在检验前期需通过验证试验得到合适的分析方法对药品进行检验，确保分析方法的可靠性，能准确检验产品质量。
分析方法验证遵循的GMP规定，根据检验项目要求预设验证内容进行验证，使样品检验达到预期要求。
本文就药品分析方法验证试验中检测限和定量限的运用进行的分析讨论。
关键词：药品分析方法；验证试验；检测限；定量限引言：药品分析方法的验证试验主要参考中国药典分析方法验证指导原则，主要涉及的验证参数有专属性、准确性、精密度、线性、检测限、定量限、耐用性、范围。
方法验证的建构应当满足所预期的检测目的及用途，对所涉及的有关参数予以验证。
检测限是指能从被测试样中检出的最低量，考察的是其是否具备灵敏检测能力。
定量限是指能从被测试样中定量测定的最低量，其测定结果符合准确度和精密度要求。
运用于杂质定量试验，能把极少杂质含量精准测定出来，从而达到更好的检测效果，保证药品的质量符合规定。
1药品分析验证方法成功的条件药品分析验证是按照药品生产GMP药物分析方法学进行验证，保障药物分析结果的准确性。
为了排除其它因素的影响，需具备所用仪器在校正有效期内，使用可靠稳定对照品和稳定试剂，确保受试溶液满足稳定性要求，在规定时间内不能出现降解现象，同时还要考虑其专属性、线性、准确度、定量限、检测限、系统适用性等影响。
除此之外，还要对分析方法的验证评价进行严格考量，应使分析方法具有专属性，能区分其共存物质、基团、目标化合物等，从而使分析方法验证达到整体性和系统性要求。
2药品分析方法验证试验中检测限和定量限的概念按照中国药典分析方法验证指导原则，检测限和定量限是重要的验证指标。
检测限是指被测试样能检出的最低量，依靠置信度能检测组分中的最小量和最小浓度，检测限仅作为限度测试指标和定性鉴别依据，无定量意义。
药物定量分析与分析方法验证
02:44:02
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成 分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤 纸包裹
02:44:02
③氧气 ④吸收液 A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分 解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒 等，定量地吸收并转变为一定的便于测定 的价态
02:44:02
第二节 样品分析的前处理方法
一、不经有机破坏的前处理方法
(一) 水解法; (二) 还原法
二、经有机破坏的前处理方法
02:44:02
(一) 干法破坏; (二) 湿法破坏
进行药物定量分析之前，一般都 需要对样品进行前处理。
根据待测元素在药物分子中结合 的牢固程度，前处理方法各异。
在分析含金属或含卤素、氮、硫、 磷等元素的有机药物前，需进行适当 的样品前处理。
(flame photometry)
02:44:02
三、色谱分析法
特点与应用
(1) 高灵敏度:ng-µg/ml (2) 高专属性:选择性检测 (3) 高效能与高速度
复方制剂含量测定 的首选方法
分类
依据分离原理：
吸附;分配;离子交换; 分子排阻色谱法
依据分离方式：
纸色谱;薄层色谱;柱色谱; 气相色谱;高效液相色谱法
I
O
O
I
胆影酸
02:44:02
COOH
I
I
CH3CONH
CONHCH3
I
碘他拉酸
02:44:02
I
I
CH2CHCOOH
H2N
C2H5 I
碘番酸
02:44:02
I
CH3
CH (CH2)8 COOCH2CH3
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成 分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤 纸包裹
02:44:02
③氧气 ④吸收液 A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分 解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒 等，定量地吸收并转变为一定的便于测定 的价态
02:44:02
第二节 样品分析的前处理方法
一、不经有机破坏的前处理方法
(一) 水解法; (二) 还原法
二、经有机破坏的前处理方法
02:44:02
(一) 干法破坏; (二) 湿法破坏
进行药物定量分析之前，一般都 需要对样品进行前处理。
根据待测元素在药物分子中结合 的牢固程度，前处理方法各异。
在分析含金属或含卤素、氮、硫、 磷等元素的有机药物前，需进行适当 的样品前处理。
(flame photometry)
02:44:02
三、色谱分析法
特点与应用
(1) 高灵敏度:ng-µg/ml (2) 高专属性:选择性检测 (3) 高效能与高速度
复方制剂含量测定 的首选方法
分类
依据分离原理：
吸附;分配;离子交换; 分子排阻色谱法
依据分离方式：
纸色谱;薄层色谱;柱色谱; 气相色谱;高效液相色谱法
I
O
O
I
胆影酸
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COOH
I
I
CH3CONH
CONHCH3
I
碘他拉酸
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I
I
CH2CHCOOH
H2N
C2H5 I
碘番酸
02:44:02
I
CH3
CH (CH2)8 COOCH2CH3
第四章药物定量分析与分析方法验证
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供 试 品 ＋ 试 剂A 化 合 物 B 化 合 物 B＋ 滴 定 液 C 化 合 物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量
计算同直接滴定法
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴 定液A，使它和样品反应，等反应结束后，再 用另一种滴定液B来回滴剩余的滴定液A。
含有机结合的卤素
间接银量法测定
例：三氯叔丁醇的含量测定
2、水解后测定法 例：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4
定量、过量
△
MgSO4 + 2 C17 H35COOH
Na2SO4 + 2H2O
2NaOH + H2SO4
过量剩余
(三)经氧化还原后测定法
1、酸性或碱性还原后测定
（1）对照品比较法 供试品的浓度为：
AX CX Cr Ar
原料药：
Ax C r D CX D 含量% 100%＝ 100% W Ar W
Ax C r D 平均片重 片剂：标示量 ＝ % 100% Ar W 标示量
Ax C r D V 液体制剂：标示量 ＝ % 100% Ar V 标示量
1% E1cm ②
：一定波长下，溶液浓度为1%（W/V）， 液层厚度为1cm时，物质的吸收度- -定量依据
两者间的关系：
M 1% E1cm 10
或
E
1% 1cm
10 M
2、对溶剂的要求 溶剂的截止波长：使用范围不能小于截止
使用波长
溶剂的纯度：检查所用溶剂在检测波长处
是否符合要求
药物分析基础(二)
片剂的重量差异限度
平均片重或标示片重 0.30g以下
0.30g及0.30g以上
重量差异限度 ±7.5% ±5%
结果判断
超出重量差异限度的不得多于2片，并不得有1片超 出限度的1倍。
（二）崩解时限
口服固体制剂在规定的介质 中，以规定的方法进行检查， 崩解溶散并通过筛网所需时间 的限度（不溶性的包衣材料或 破碎的胶囊壳除外）。
药物制剂
❖ 防治和诊断疾病的需要 ❖ 保证药物用法和用量的准确 ❖ 增强药物的稳定性 ❖ 药物使用、贮存和运输的方便 ❖ 延长药物的生物利用度 ❖ 降低药物的毒性和副作用
制剂分析的特点
制剂分析是利用物理、化学、物理化学或生物学的方 法对不同剂型的药物制剂进行质量检验，以确定该制剂 是否符合其质量标准规定的要求。
（三）含量均匀度
试验结果 结果判断
含量
含量
/标示量%
/标示量%
1 105.64 6 101.23
2 100.71 7 104.48
3 104.64 8 100.63
4 104.66 9 101.00
5 100.81 10 102.50
X ＝102.26
A = ∣100-X ∣=2.26 S＝2.06 A+1.8s＝5.97 合格
使用范围：组分含量在1%以上；化学原料药的含量测定。 特点：准确度高、操作简便、快速；仪器简单、价廉。 局限：专属性差。
光谱分析法
（一）紫外可见分光光度法
朗伯-比尔定律：分光光度法进行药物定量测定的依据，表明 物质分子对特定波长光的吸收程度与被测物 质溶液浓度及液层厚度的关系。 A lg I lgT ECL I0
测定方法：取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠试液30ml 与锌粉1.0g，加热回流30分钟，放冷，冷凝管用少量水洗涤， 滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并， 加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液（0.1mol/L） 滴 定 。 每 1ml 硝 酸 银 滴 定 液 （ 0.1mol/L ） 相 当 于 20.46mg 的 C11H9I3N2O4。
药物定量分析与分析方法验证
方法验证的内容与步骤
准确度
通过对比已知浓度的样品测量值 与真实值，评估方法的准确度。
精密度
通过多次测量同一样品，评估方 法的重复性和再现性。
专属性
验证方法是否能够区分目标成分 与其他物质的干扰。
耐用性
验证方法在不同条件下的稳定性 及变化程度。
范围
验证方法适用的浓度范围。
线性
验证方法在一定浓度范围内的响 应是否呈线性关系。
响应值应无明显交叉干扰，能够准确区分目标物质与杂质。
专属性验证结果
根据响应值判断分析方法的专属性是否符合要求。
检测限与定量限验证
检测限与定量限验证方法
逐渐降低样品浓度，观察信号响应值的变化。
检测限与定量限验证要求
检测限和定量限应满足预设的灵敏度要求。
检测限与定量限验证结果
根据信号响应值判断分析方法的检测限与定 量限是否符合要求。
分析方法验证的意义
分析方法验证是确保药物定量分析结果准确可靠的重要手段。通过验证，可以证明所选用 的分析方法适用于该药物的分析，并确保其在各种条件下的稳定性和可靠性。
当前发展状况
随着科学技术的发展，药物定量分析的方法和技术也在不断进步。目前，高效液相色谱法 、气相色谱法和质谱法等先进技术已被广泛应用于药物定量分析中，大大提高了准物质进行多次测定，计算相对标准偏 差（RSD）。
精密度验证要求
RSD应符合预设的接受范围，通常不超过±5%。
精密度验证结果
根据RSD大小判断分析方法的精密度是否符 合要求。
专属性验证
专属性验证方法
采用具有相似结构或相同成分的物质进行测定，比较其响应值。
专属性验证要求
中药有效成分的定量分析
中药是我国传统医学的重要组成部分， 中药有效成分的定量分析对于确保中 药质量和临床疗效具有重要意义。
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例 碘苯酯的含量测定 ChP（2005）
原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分 解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘， 并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反 应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴 - 醋酸溶 液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸 及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反 应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与 淀粉结合所显的蓝色消失即为终点
aA bB cC dD Wa W b aM A bM B Wa Wb aM A bM B
m 滴定液的摩尔浓度 （mol/l)
a nB M A b
滴定度T
aA bB cC dD
例：用碘量法测定 VitC(176.13） m(I2)=0.05mol/l
aMA b WA mBV
取本品约 20mg ，精密称定，照氧瓶燃烧法 进行有机破坏，用氢氧化钠试液 2ml 与水 l0ml 为 吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾 10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴 0.4ml，再加冰 醋酸使成 1000m1)l0ml ，密塞，振摇，放置数分 钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流 约 3 ～ 5min 以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾 2g ， 密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02 Mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续 滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校 正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于 1.388mg的C19H29IO2。
C. 检查甾体激素类药物中的氟
D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定
第二节
一、 容量分析法
定量分析方法特点
（一） 容量分析法的特点
（二） 容量分析法的计算问题
1． 滴定度 2． 滴定度（T）的计算 3． 百分含量计算 （1） 直接滴定法
（2）回滴定法（剩余滴定法 ）
A:被测药物，B：滴定剂
放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，
合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。
然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、
检查或含量测定。
③氧气 ④吸收液
A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分
解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等， 定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态
B. 吸收液的选择
氟 氯 溴 碘 硫 硒 水 （HF） NaOH溶液（HCl) H2O2-NaOH( NaOH饱和溶液-SO2(Br2,HBr)
第四章
药物定量分析与分析方法验证
第一节
• 一、概述
定量分析样品的前处理方法
• 分析含金属或含卤素、氮、硫、磷、硒等特殊元素药 物分析的前处理方法。 • 含金属或卤素的药物，如葡萄糖酸锑钠，硬脂酸镁、 碘苯酯、磺溴酞钠等，处理方法因金属或卤素在分子 中结合的牢固程度而异，如：有机卤素药物，所含卤 素原子均直接与碳原子相连，但不同药物中卤素所处 的位置不同，则与碳原子结合的牢固程度就有差异。 如果卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳 原子相连接，则结合不牢固；
根，下端呈螺旋状或网状
②称样用材料及称样
A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分 的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹
③样品的燃烧
点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放
入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶
口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分
振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，
a WA T mB M A b a T m M A b C6 H8O 6 I 2 C6 H 6O6 2HI a T m M A b 1 0.05 176.1 1 8.806( mg / ml )
VT 含量（%） = 100% W
T:药典规定的摩尔浓度的滴定度
ci %
fi f内标
Ai m内标 100 A内标 m
内标物和标准物是同一物质时
m内标 Ai fi 100 A内标 m
• 应用示例
（一）黄体酮测定-HPLC • 柱:C18 • 流动相:甲醇-水(65:35) • 检测波长:254nm • 内标物:已烯雌醇1mg/ml • 对照品:黄体酮标品
机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将
燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根 据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、 检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素 的有机药物。
本法是快速分解有机物的简单方法，它不需 要复杂设备，就能使有机化合物中的待测元素定 量分解成离子型。该方法被各国药典所收载。 1． 仪器装置 燃烧瓶为500ml、1000ml、或
W
单位制剂的平均装量，如：g/片，g/粒，g/ml, ml/ml B:标示量:单位制剂的标示量（ g/片，g/粒，g/ml, ml/ml ）
5ml CH2Cl2 异维A胶囊20粒，精密称取V ml 移取 2ml 361nm测A x 定容50ml量瓶 定容100ml
50 100 D =2500（ml) 2
标示量(%)=
cx D V 100% VB
2）吸收系数法
Ax cx = 1% E1cm 100
含量(%)= cx D 100% W Ax D = 1% 100% E1cm 100 W
cx D W 标示量(%)= 100% WB A D W = 1% x 100% E1cm 100 W B
• 二、 光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法 1．特点紫外-可见分光光度法是根据物质分子对波 长为200nm～760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所 建立起来的光谱分析方法。主要特点如下： （1）灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml 。 （2）准确度高，相对误差为2% ～5%。 （3）仪器价格较低廉，操作简单，易于普及。
2000ml磨口、硬质玻璃锥形瓶，瓶塞应严密、空
心、底部熔封铂丝一根（直径为1mm），铂丝下 端做成网状或螺旋状，长度约为瓶身长度的2∕3 ， 如图
2． 称样 3． 燃烧分解操作法
4． 吸收液的选择
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为250、500、1000
或2000ml无色、磨口、厚
壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶 塞空心，底部熔封铂丝一
溴
取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录Ⅶ C）进行有 机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液10ml， 浓过氧化氢溶液0.5ml与水10ml作为吸收液，俟生成的烟 雾完全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸5分钟， 放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液 （0.1mol/l）20ml，摇匀，再加硫酸铁胺指示液2mL，用 硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白 试验校正。每1mL硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于7.990mg 的溴(Br)。
2．郎伯-比耳定律 3．仪器校正和检定
4．对溶剂的要求
5．测定方法
1)对照品比较法
cx
Ax A C R x CS AR AS
含量(%)=
cx D 100% W D:供试品溶液稀释体积
标示量（%）：制剂含量相当于标示量的百分数
cx D W 标示量(%)= 100% WB
NaOH饱和溶液-SO2(I2,HI)
浓H2O2溶液 硝酸溶液
（3）操作方法
①燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加 入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地 通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。 ②样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法 包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。
2． 酸性还原后测定
3． 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量
三、 经有机破坏的分析方法 （一） 湿法破坏 1． 硝酸-高氯酸法 2． 硝酸-硫酸法
3． 硫酸-硫酸盐法
4． 其它湿法 （二） 干法破坏
（三） 氧瓶燃烧法
氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method）系将有
→6molI2→12molI→12molNa2S2O3 反应摩尔比为1∶6
cM 0.02 416.34 T 1.388mg / ml n 6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶
B. 磨口软质玻璃锥形瓶
C. 铂丝 D. 铁丝
E. 铝丝
选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶
• （二） 荧光分析法 • 1．特点 • 2．荧光分析仪 • 3．含量测定
Fx - F0 Rx - Rxb cx cs cr Fs - F0 Rr - Rrb
三、 色谱分析法
（一） 高效液相色谱法
1．对仪器的一般要求
２．系统适用性实验
（1）色谱柱的理论塔板数（n）
（2）分离度
３.
测定法
（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分含量：
内标法
样品中加入内标物，以待测组分和内标物的响应 信号对比定量
溶剂溶解 ml 或l级 过程：ms m （含mi样品） 定容混匀 进样 测Ai和As
mi fi Ai
'
m内标 f
' 内标
A 内标
Ai mi fi ms As
（5）应用 例 磺溴酞钠的含量测定 ChP (2000)
Br Br Br C O Br
C O
HO SO3Na
OH SO3Na
Br Br O OBr NaO S HO Br O O ONa S O O OH
O2 燃烧分解
HBr + S2- + SO4 + …
HBr +
S2-
NaOH, H2O2