积雪草苷与羟基积雪草苷及积雪草苷-B的分离与制备

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药用植物积雪草中活性成分积雪草苷的提取工艺研究互联网+大赛策

药用植物积雪草中活性成分积雪草苷的提取工艺研究互联网+大赛策积雪草是一种传统的中草药,具有多种药理活性,应用前景广泛。

但长久以来,积雪草的药理活性成分不明确,特定成分的分离提纯难度大,限制了积雪草的应用。

因此,研究积雪草中活性成分的提取分离工艺具有良好的社会、经济和应用价值。

目前对积雪草中极性成分的研究多集中于积雪草总苷,它能够有效促进伤口愈合,具有抑菌消炎等活性。

积雪草总苷中包含积雪草苷-B、羟基积雪草苷和积雪草苷三种有效成分,三种物质化学结构十分相近,采用常规的分离方法很难实现这三者的完全分离。

本文引入一种新的分离技术——模拟移动床色谱SMB,分两步从积雪草总苷中分离出三种活性物质,得到积雪草苷产品的纯度为98.7%,回收率为93.5%；羟基积雪草苷产品的纯度为87.62%,回收率为80.66%；积雪草苷-B产品的纯度为81.77%,回收率为83.67%。

对于积雪草中的弱极性成分,目前研究较少,药理实验显示积雪草的弱极性成分具有抗抑郁、抗菌、抗氧化等多种药理活性,越来越受到人们的重视。

本文采用超临界CO2萃取技术在60℃、30MPa 下提取积雪草中的弱极性成分,提取率约为2%(w/w)。

通过测定酸价、皂化值,并进行甲酯化反应,结合GC等分析手段,间接推断出萃取物中含有棕榈酸、硬脂酸、亚油酸等成分。

以动物实验测定萃取物的抗抑郁活性,结果显示萃取物具有实验性抗抑郁活性；以DPPH法测定萃取物的抗氧化活性,其IC50为4.985 mg/mL。

积雪草的超临界CO2萃取物成分复杂,对其进行色谱分离后进行气质鉴定。

以硅胶作为固定相,二氯甲烷作为流动相,进行层析分离,分段收集流出液,浓缩后进行气质鉴定。

共鉴定出27种物质,其中含有大量的短链不饱和烯烃类物质和长链脂肪酸、脂肪酸酯等物质。

经硅胶柱一次分离后得到一个单一化合物,气质鉴定为邻苯二甲酸二正辛酯。

选择抗氧化活性最高的组分1进行硅胶柱二次分离,以正己烷作为流动相,得到第二个单一化合物,气质初步鉴定为(E)-7,11-二甲基-3-亚甲基-1,6,10-十二碳三烯。

制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

收稿日期： !""( )"# ))& 第一作者：高明哲，助理研究员 ’ *+& ：（ "*)) ） #*&(+%%( ，,)-".& ：/"%-0 , 1.23’ "2’ 24’ 通讯联系人：肖红斌，研究员 ’ *+& ：（ "*)) ） #*&(+($% ，,)-".& ：567."% , 1.23’ "2’ 24’ 基金项目：中国科学院知识创新工程重要方向性项目（ 89:;! )<=)!)& )"! ） ’
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#" 结果与讨论
# ! !" 制备色谱条件的优化 ! ! 制备色谱条件的优化从样品的溶解开始。通过分析型色谱来优化分离条件，然后运用线性放大技术在制备色谱中放大。 ! ! 通过优化色谱条件使目标成分与干扰成分在分析型色谱中的分离度 ! 0 大于 ) ，保证分析型色谱条件放大后经简单调整即可在制备型色谱中达到满意的效果。使用反相制备色谱制备对照品时，通常小的保留因子 " 对制备分离更有利，因为小的保留因子 " 意味着小的出峰体积及洗脱液中化合物具有更高的浓度［ &" ］。本实验中积雪草甙和羟基积雪草甙的 " 分别约为 ". )ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和 (. ) 。 ! ! 制备型色谱流动相的流速、进样量分别按照如

一种从积雪草中提取积雪草苷、羟基积雪草苷的方法[发明专利]

专利名称：一种从积雪草中提取积雪草苷、羟基积雪草苷的方法
专利类型：发明专利
发明人：李宇,杨丽,段迪,钟鸣,傅玉萍,袁诚,李金华
申请号：CN201410834162.5
申请日：20141230
公开号：CN104592341A
公开日：
20150506
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从积雪草中提取积雪草苷、羟基积雪草苷的方法。

方法的操作步骤如下：1)积雪草干草加入50~90%乙醇(v/v)水溶液提取，提取液过滤后，减压浓缩去除乙醇，浓缩液加水稀释，离心过滤得积雪草总皂苷水溶液；2)总皂苷水溶液过树脂柱，分别用水、15~30%乙醇
(v/v)、50~80%乙醇(v/v)洗涤树脂柱，分段收集洗脱液；3)50~80%乙醇(v/v)洗脱部分经浓缩，再加入活性炭脱色后得上柱液，上柱液过滤后进制备色谱，甲醇/水做流动相，分段收集含羟基积雪草苷、积雪草苷的洗脱液，浓缩干燥即得纯品。

该方法工艺过程简单，可操作性强，提取效率高，制备的积雪草苷、羟基积雪草苷纯度高，适合工业化生产。

申请人：广州白云山汉方现代药业有限公司
地址：510240 广东省广州市海珠区江南大道中134号
国籍：CN
代理机构：广州市深研专利事务所
代理人：姜若天
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制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品高明哲;袁晓艳;肖红斌【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2008(26)3【摘要】积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分,本研究利用制备型高效液相色谱从积雪草提取物中同时分离纯化得到这两个成分.对制备色谱的流动相组成、流速、进样量和检测波长等制备参数进行了优化.采用的色谱柱为C18柱(50 mm×200 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(体积比为60∶40),流速100 mL/min;二极管阵列检测器在220 nm检测;进样体积为1.5 mL.在20 min的运行时间内,积雪草甙和羟基积雪草甙与干扰成分得到很好的分离,产品纯度达到98%以上.此方法具有快速高效、产品纯度高的特点,可以用于制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品.【总页数】4页(P362-365)【作者】高明哲;袁晓艳;肖红斌【作者单位】中国科学院大连化学物理研究所,辽宁,大连,116023;中国科学院大连化学物理研究所,辽宁,大连,116023;中国科学院大连化学物理研究所,辽宁,大连,116023【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.RE-HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量 [J], 陈瑶;蒋毅;秦路平;郑汉臣;翁志龙2.应用反相高效液相色谱法同时测定积雪草提取物中羟基积雪草苷、积雪草苷及其苷元 [J], 申潜;余露山;周慧;曾苏3.积雪草中积雪草甙的薄层色谱鉴别 [J], 方晓明;刘信顺4.积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响 [J], 章庆国;赵士芳5.积雪草中羟基积雪草甙的分离和鉴定 [J], 罗思齐;金惠芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法[发明专利]

专利名称：一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法专利类型：发明专利
发明人：卢照凯,谢冬养,钟德品,周晓青,卢桦香
申请号：CN201410619551.6
申请日：20141105
公开号：CN104341479A
公开日：
20150211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从积雪草中提取羟基积雪草甙的方法，包括下述步骤:原料处理、高压提取、双水相萃取、脱盐、浓缩干燥，得到羟基积雪草甙。

具有含量高，提取率高，工艺简单，适合生产，生产成本低等优点。

申请人：桂林三宝生物科技有限公司
地址：546600 广西壮族自治区桂林市荔浦县马岭镇长水岭工业区
国籍：CN
代理机构：桂林市持衡专利商标事务所有限公司
代理人：汤凌志
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制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

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栏目类别：研究论文
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积雪草中羟基积雪草苷提取工艺研究综述

50 為紅科技2018年•第6期积雪草中羟基积雪草苷提取工艺研究综述陈慧®陈文®王湘君®何鸿源®林勇®吕晓通®钱明①①海南热带海洋学院海洋科学技术学院②海南热带海洋学院生命科学与生态学院本文通过查阅大量文献，发现积雪草有多种有效化学成分，其具有抗焦虑、抗肿瘤、抑制疤痕形成、促进创伤愈合等作用；分析国内外多名专家对提取积雪草成分的方法和研究结果，发现提取羟基积雪草苷的方法主要有正交法、回流法、闪式提法、超声波法等；实验设计拟用超声波法辅助 HPLC提取羟基积雪草苷，为后续研究积雪草及药物开发奠定基础。

1前言1.1积雪草简介积雪草（CentellaasiaticaL,Urban)为伞形科积雪草属植物的全草，主要分布于长江流域以南各地，始记载于《神农本草经》，又称落得打、雷公根、半边钱、崩大碗、马蹄草等，其性寒味苦，为多年生匍匐草本。

査阅文献发现，积雪草化学成分有正二十七烷、2A6-三叔丁基苯、对羟基苯甲酸、万寿菊素、槲皮素、二十六醇辛酸酯、山奈酿、槲皮素、胡萝卜素、香草酸、丁二酸、积雪草酸、terniinolicacid、羟基积雪草酸、积雪草苷、积雪草二糖苷、轻基积雪草苷、积雪草-B[1_21。

其有清热利湿，消肿解毒，活血化瘀，利尿之功效，在临床上用于治疗镊血管病、传染性肝炎、急性肾小球炎、流行性脑脊椎膜炎、皮肤创伤、流行性腮腺炎'亦具抗抑郁、抗胃溃疡、抗肿瘤、抗静脉机能不全、保护肝细胞、抗菌消炎，促进创伤愈合的作用、増强免疫系统的功能，还影响成纤维细胞的超微结构，抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成等药理作用'1.2研究目的、意义积雪草中的主要活性成分是三疏皂苷类物质，其包含积雪草苷、羟基积雪草苷及积雪草苷-B三种化合物，而羟基积雪草苷是积雪草含量较高的成分，具有减少炎性细胞的浸润，促进真皮纤维细胞增生形成上皮；在体内可以促进血管形成；还可以刺激细胞生长，促进伤口愈合；能杀死病变周围生长的病菌，防止伤口感染等活性1M1。

高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B的制备方法[发明专利]

(10)申请公布号 CN 102477063 A (43)申请公布日 2012.05.30C N 102477063 A*CN102477063A*(21)申请号 201010558562.X (22)申请日 2010.11.24C07J 63/00(2006.01)(71)申请人上海医药工业研究院地址200040 上海市静安区北京西路1320号(72)发明人邵燕陈云艳孔德云翁小香周靖欧阳丹薇吕峰高雯张静成亮(74)专利代理机构上海金盛协力知识产权代理有限公司 31242代理人解文霞(54)发明名称高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法(57)摘要本发明涉及羟基积雪草苷与其同分异构体积雪草苷B 的提纯方法技术领域。

本发明所述的高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法，是通过制备型高效液相色谱仪，流动相内添加环糊精，根据色谱峰分别采集得到两种收集液，然后将两种收集液分别回收溶剂后萃取去除环糊精。

本发明在制备型高效液相色谱分析方法基础上利用环糊精流动相添加剂法分离出积雪草苷B 与羟基积雪草苷，不需特殊分析柱就分离提纯出了积雪草苷B 与羟基积雪草苷，该方法价廉易行，与其他方法相比具有实质性的进步和优势。

(51)Int.Cl.权利要求书1页说明书3页(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页说明书 3 页1/1页1.高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法，该方法是通过制备型高效液相色谱仪，流动相内添加环糊精，根据色谱峰分别采集得到两种收集液，然后将两种收集液分别回收溶剂后萃取去除环糊精。

2.如权利要求1所述的高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法，其特征在于：所说的流动相为乙腈-环糊精水溶液系统。

3.如权利要求2所述的高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法，其特征在于：所说的环糊精水溶液浓度为2-8mmol/L 。

4.如权利要求3所述的高纯度羟基积雪草苷及积雪草苷B 的制备方法，其特征在于：所说的环糊精水溶液浓度为2mmol/L 。

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文章编号：１０－０５２１）３０７－６０３９１（０００－３６０
积雪草苷与羟基积雪草苷及积雪草苷．Ｂ的分离与制备
王阳阳，肖文广，邢华斌，杨亦文，任其龙，吕秀阳
（浙江大学化学工程与生物工程学系二次资源化工国家专业实验室，浙江杭州３０２）１０７
Ｃｅｔｌａａｉｔａｔｔｌｒｔｒｅｏｉｓｐｎｎｂｅｅｓｄｐａｅｐｅｒａｉｅｌｑｉｈｏｔｇａｈ．Ｕｓｎｎｅｌｓａｉｏａｔｉｐｎｄａｏｉｓｙｒｖｒｅ — ｈｓｒｐａｔｉｕｄｃｒｍａｏｒｐｙｃｅｖｉｇａ
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体积２。在该工艺条件下，得到积雪草苷产品纯度为９．％，收率为９．％。采用ＰｅｏｎＨｅｐｅ８半０ｍＬ８８９８ｈｎｍｅｘＹｐｒｒｐＣ１制备柱（５２０ｍｍ× ０ｍｍＩ，ａ，水／１Ｄ８ｌｍ）乙腈（０２，ｖｖ作为流动相，柱温３ ℃，流速３ｍＬｍｉ～，将ＹＭＣＯＤ－８：０／）Ｏ・ｎＳＡＣｌ８制备柱分离得到的羟基积雪草苷部分溶解于５％甲醇水溶液中，进样浓度为Ｏ０４ｇｍＬ０．２・～，进样体积５，分离Ｏ得到羟基积雪草苷和积雪草苷．Ｂ，纯度分别为７＿％和８Ｉ％。本工艺操作简便，分离效率高，产品质量好，为积雪６２２３草苷，羟基积雪草苷和积雪草苷．Ｂ的制备研究提供了一种新的方法。
第２４卷第３期２１年６月００
高校化
学
工程Biblioteka 学报ＮＯ３、０．４．，１２Ｊｎ２ＯｕｅＯ１
ＪｕｎｌｆＣｈｍｉａｇｎｅｉｆＣｈｎｓｉｅｓｔｅｏｒａｏｅｃｌＥｎｉｅｒｏｎｇｉｅｅＵｎｖｒｉｉｓ
关键词：反相制备液相色谱；积雪草苷；羟基积雪草苷；积雪草苷．；Ｃ８Ｂ１柱
中图分类号：Ｔ２．；Ｑ４．９Ｑ０８８９６８３文献标识码：Ａ
ＳｅａａｉｎａｄＰｒｐａａｉｎｏｉｔｅｓｄｅＭａｅａｓｓｄ，ｎｄＡｓａｉｏｉｅＢｐｒｔｏｎｅｒｔｏｆＡｓａｉｏｉ，ｄｃｓｏｉｅａｉｔｃｓｄ－
摘
要：用反相制备液相色谱法从积雪草总苷中分两步分离得到了高纯度的积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷－Ｂ。
采用ＹＤ．Ｉ制备柱（５ｘ０ｉＩ。５ａ．ｔ）考察了柱温、ＭＣＯＳＡＣ８２０ｍｍｌ１ｍＷａｒ，５ｍｌＤｌｅｓ流动相流速和上样量等对分离的影响，确定了适宜的工艺条件：流动相为甲醇／１，ｖ）水（：／，柱温３＂ｌｖ０Ｃ，流速５．ｎ，进样浓度为Ｏ２・一０ｍｉｍＬ～．５ｍＬ，进样０ｇ
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