莱菔硫烷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的线粒体途径机制研究
药物影响细胞衰老及抗肿瘤疗效的机制研究进展
药物影响细胞衰老及抗肿瘤疗效的机制研究进展刘娜;何琪杨【期刊名称】《老年医学与保健》【年(卷),期】2018(024)006【总页数】3页(P727-729)【作者】刘娜;何琪杨【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所,北京100050;中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所,北京100050【正文语种】中文近年来，随着对肿瘤发生机制的深入了解，肿瘤治疗取得了明显进展。
靶向药物的普遍应用，免疫疗法的成功实施，明显地提高了肿瘤患者的5年生存率，多数肿瘤有可能转变为慢性病 [1]。
根据国家癌症中心的统计资料，我国老年肿瘤占总肿瘤患者数量的60%以上 [2]，显然衰老因素在肿瘤发生及其治疗中起重要作用。
利用药物诱导肿瘤细胞衰老或清除衰老细胞，治疗疾病、改善健康，也取得了多项突破性的成果。
下面就药物与衰老及肿瘤等方面的研究进展进行综述。
1 以衰老细胞为靶点的药物研发随着年龄的增加，人体内衰老细胞的数量明显增加。
衰老细胞是活细胞，在体内能存活数年之久，这些“僵尸细胞”能分泌多种炎性因子、蛋白酶和基质蛋白，导致体内慢性炎症和老年病，促进肿瘤细胞的增殖和转移。
能否使用药物选择性地消除这些衰老细胞？以美国梅奥诊所为主的科学家得到了明确的答案，清除衰老细胞既能明显改善小鼠的健康，还能治疗疾病[3]。
该领域的研究成果已经2次被美国著名的“科学”杂志评为年度十大科技进展之一。
最早的研究是2011年发表的成果，研究者巧妙地建立了一种转基因小鼠模型。
衰老细胞标志分子 p16连接引起细胞凋亡的天冬半胱酶（caspase-8），使用药物AP20187可以激活该酶，杀死衰老细胞。
使用小鼠BubR1早老症模型，发现清除衰老细胞后，小鼠的疾病症状得到明显改善[4]。
随后，使用正常老年小鼠也证实，清除衰老细胞不仅能改善生理功能，还能明显延长小鼠寿命 [5]。
从现有的化合物或上市药物中，寻找能清除衰老细胞的药物，也取得了明显的进展。
香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究
香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究杨阳;林满洲;黄艺文;陈明【摘要】Objective To study the effect of Diosmetin on cell proliferation, cell apoptosis and cell cycle ar-rest in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells, and dissect the underlying mechanism. Methods MTT assay was performed to detect the viability of HepG2 cells under different levels of Diosmetin. The cell apoptosis rate and cell cy-cle arrest were analyzed by flow cytometry (FCM). Western blot was applied to measure the protein levels of P53, Bcl-2, Bax, Cleaved-caspase3, Cleaved-caspase8, Cleaved-PARP, Bak, cdc2, cyclinB1, P21. Results Diosmetin treat-ment on HepG2 cells significantly inhibited cell proliferation and induced cell apoptosis (P<0.05). FCM results showed that Diosmetin treatment significantly promoted cell cycle arrest in G2/M phase in HepG2 cells (P<0.05), with the pro-portion of cells in G0/G1 phase significantly reduced. Besides, Diosmetin significantly downregulates Bcl-2, cdc2, cy-clinB1, and up-regulated Bax, Cleaved-caspase3, Cleaved-caspase8, Cleaved-PARP, Bak, P53, P21. Conclusion Dios-metin inhibits HepG2 cell proliferation and induces cell apoptosis by activation of p53/Bcl-2 pathway. Meanwhile, Dios-metin treatment induces G2/M cell cycle arrest in HepG2 cell by down-regulation of cell cycle related protein cdc2, cy-clinB1 and up-regulation of P53, P21.%目的研究香叶木素对人肝癌HepG2细胞的增殖、凋亡及周期阻滞的影响并揭示其分子机制.方法 MTT方法检测不同浓度香叶木素对肝癌HepG2的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度香叶木素处理对HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡的作用;Western blot检测香叶木素处理对细胞p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-cas-pase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP、Bak、cdc2、cyclinB1、p21等细胞周期调节或细胞凋亡相关蛋白表达的调节.结果香叶木素能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并且诱导细胞凋亡(P<0.05);流式细胞术对细胞周期检测示:香叶木素处理HepG2细胞,使G0/G1期细胞比例显著降低,而G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05).香叶木素可下调HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、cdc2、cyclinB1的蛋白表达,上调p53、p21、Bax、Bak,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP等促凋亡蛋白.结论香叶木素在体外实验能通过激活p53/Bcl-2细胞凋亡通路抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及促进细胞凋亡,同时通过上调p53、p21下调cdc2、cyclinB1诱导细胞G2/M周期阻滞.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2016(027)003【总页数】4页(P354-357)【关键词】香叶木素;细胞凋亡;细胞周期阻滞;肝癌【作者】杨阳;林满洲;黄艺文;陈明【作者单位】广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001;广东医学院附属医院肝胆外科,广东湛江 524001【正文语种】中文【中图分类】R735.7肝细胞癌是常见的恶性肿瘤之一，我国肝癌患者多有肝炎肝硬化背景，手术切除率低，为延长肝癌患者生存期，化学药物治疗仍是一个重要措施，临床上化疗药物主要是通过诱导细胞凋亡来消除肿瘤细胞，其疗效过程中如何与抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡的水平有关。
十字花科植物中莱菔硫烷防癌机制研究进展
硫代葡萄糖甙可分为３类：脂肪类、芳香类和吲 哚类硫代葡萄糖甙，定位在细胞的液泡中［６］。当植 株破损时，硫代葡萄糖甙受定位于特定蛋白体中的 黑芥子硫酸苷酶（ｍｙｒｏｓｉｎａｓｅ）酶解，产生异硫氰酸 盐（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅｓ，ＩＴＣ）［６。，莱菔硫烷（ｓｕｌｆｏｒａ－ ｐｈａｎｅ，ＳＦ）是众多异硫氰酸盐中的一种，是植物中 防癌和抗癌效果最好的天然活性物质之一，尤其对 食道癌‘７１、结肠癌‘８｜、前列腺癌‘９１、乳腺癌‘１“、肺 癌【１ｑ等有很好的防治效果，具有广阔的市场前景。 在十字花科植物中芸苔属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）是主要的 食用蔬菜，芸苔属植物包括西兰花（Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｉｔａｌｉｃａ）、花椰菜（Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ
（Ｂ．ｒａｐａ
ｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ
ｖａｒ．
Ｉ。．）、芜箐
Ｌ．）、羽衣甘兰（Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ
ｖａｒ．ａｃｅｐｈａｌａ
ＤＣ．ｆ．ｔｒｉｃｏｌｏｒ
ｅｔ
Ｈｏｕｔ）、芥菜［Ｂ．ｊ．ｎｃｅａ（Ｌ．）Ｃｚｅｒｎ．
ｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ
Ｃｏｓｓ３、卷心菜（Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ
Ｌ．）等。
ｔｌｍｏｌ・ｋｇ＿１・ｄ＿１）的ＳＦ，可以提高肝脏［ｎ¨、
中图分类号：Ｑ７８９ 文献标识码：Ａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ａｄｖａｎｃｅ ｏｆ Ｓｕｌｆｏｒａｐｈａｎｅ ｉｎ Ｃｒｕｃｉｆｅｒａｅ ａｂｏｕｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ
Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ＧＵＯ Ｃａｉ—ｊｉｅｌ’２，ＣＵＩ Ｎａｌ。。ＬＩ Ｊｉａｎ３，ＬＩ Ｔｉａｎ－ｌａｉ４
（１ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ
万方数据
１０期
郭彩杰，等；十字花科植物中莱菔硫烷防癌机制研究进展
中药抗肿瘤作用机制研究进展
2020年第24期广东化工第47卷总第434期 · 61 · 中药抗肿瘤作用机制研究进展芮莹，陆云飞，覃昊，徐庆，韦京辰*(桂林医学院药学院，广西桂林541199)[摘要]中药是我国的巨大财富，具有药效广泛、毒副作用小的特点，近几年，越来越多的中药在肿瘤治疗方面发挥作用。
但由于中药化学成分复杂、药理机制众多，目前对中药多靶点之间相互联系了解不够深入，以至于研究进程缓慢。
本文整理归纳了近几年国内外中药抗肿瘤作用机制的研究，为中药的临床使用提供一定的理论依据。
[关键词]中药；抗肿瘤；机制[中图分类号]TQ [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2020)24-0061-02Research Progress of Anti-tumor Mechanism of Traditional Chinese MedicineRui Ying, Lu Yunfei, Qin Hao, Xu Qing, Wei Jingchen*(Pharmaceutical College, Guilin Medical University, Guilin 541199, China)Abstract: Traditional Chinese medicine (TCM) is a great asset of our country. It has the characteristics of extensive efficacy and low side effects. In recent years, more and more TCM is playing a role in tumor treatment. However, due to the complex chemical components and numerous pharmacological mechanisms of TCM, the understanding of the interrelation and influence among multiple targets of TCM is not deep enough, so the research progress is slow. This article summarizes the research on anti-tumor mechanism of action of TCM at home and abroad in recent years. This reviews provides a certain theoretical basis for the clinical use of TCM.Keywords: Chinese material medical；anti-tumor；mechanism of action恶性肿瘤是一种危害人类健康的重大疾病。
探讨SPC在诱肝癌HepG2细胞凋亡中的作用机制
于 Ｈｅ Ｇ ｐ ２细胞 ２ ｈ后 ， 胞 内的 Ｃａ＋浓度 显 著 升 高 （ ＜ ．５Ｐ ００ ） 结 论 Ｓ Ｃ 能 够诱 导 肝 癌 细 胞 系 ＨｅＧ２细胞 凋 亡 ， 机 制 与 Ｓ Ｃ 升 高 ４ 细 ２ Ｐ ００ ，＜ ．１ 。 Ｐ ｐ 其 Ｐ 细胞 内 Ｃ ２ ａ＋浓 度 有 关。 关 键 词 ： 胞 凋 亡 ； 飞 蓟 宾 ； ｐ ２作 用机 制 细 水 Ｈｅ Ｇ ；
水飞蓟素是菊科植物水飞蓟（ｌ ｕ ａ ａｕ ） ｓｙ ｍ ｍ ｎ ｎ ｍ 的果实经提取精 ｉｂ 制而得 到的天然黄酮醇类物质 ， 由水 飞蓟 宾（ ｌ ｉ 或 ｓ ｙｉｉ） 是 ｓｙ ｎ ｉ ｂ ｎ 、 ｉｂ ｌ ｎ 水飞蓟宁（ｉ ｄ ｎ ） ｓｙ ｉ ｉ 及水飞蓟亭 （ ｌ ｈｉｉ ） ｌ ａｎ ｓｙ ｒ ｔ 等成份构成的混合 物。 ｉｃ ｓｎ 水飞蓟宾是水飞蓟素中的主要活性 成份 ， 含量最高。水飞蓟宾磷脂 酰胆碱 复合 物是在没有改 变水飞蓟宾原 有生物活性 基础 上的一种
医学信息 ２ １ 年 Ｏ 月第 ２ 卷第 ８ Ｍ ｄ ａ Ｉ ｏ ａ ｏ ． ｕ ． ０ ０ Ｖ １２ ． ｏ ００ ８ ３ 期 ｅｉ ｌ ｎ ｒ ｔ ｎ Ａ ｇ２ １ ． ｏ ３ Ｎ ． ｃ ｆｍ ｉ ． ８
【］ｔａ，Ｒｉｕｏ，Ｈｏ ｅ ａ．Ｐｓ ｏｄｔ ｎｎ ｈ ｍａ ａｔ ｉ ｕａｉｎ ３Ｓａｔ ｏｆｌ ｔＣ，ｔ １ ｏｔｃｎ ｉｏ ｉｇｔｅＨｕ ｎ Ｈｅｒ ｒ ｌｔ ｉ ．Ｃ ｃ ｏ
荔枝核抗肝癌作用的研究进展
荔枝核抗肝癌作用的研究进展作者：黄景珠李福建黄雪莲何志钧张国来源：《右江医学》2023年第09期［专家介绍］张国，中共黨员，教授，医学博士，留美博士后，博士生导师，享受国务院特殊津贴专家，国家临床重点专科（消化内科）学科带头人，广西优秀专家。
现任广西医学科学院·广西壮族自治区人民医院副院长。
现为中国医师协会消化医师分会全国委员、广西预防医学会消化病分会主任委员、中国人体健康科技促进会门静脉高压专业委员会副主任委员、广西医学会消化分会副主任委员等多项学术任职，是《中国临床新医学》《世界华人消化杂志》编委，《J Hepatology》（中文版）区域编委，《BMC cancer》等杂志审稿人。
主要从事慢性肝病的基础与临床研究，先后荣获广西第十六批“新世纪十百千人才工程”第二层次人才，广西医学高层次骨干人才“139”计划学科带头人（消化内科），荣获“科摩罗绿新月骑士勋章”，全区卫生系统创先争优健康卫士、广西卫生应急工作贡献突出个人、全区卫生计生系统记个人二等功。
承担国家自然科学基金课题、国家科技重大专项子课题等10余项科研项目，发表SCI论文30余篇，获广西科技进步二等奖1项，广西医药卫生适宜技术推广奖一等奖3项（排名第一）、二等奖1项，广西自然科学奖1项（排名第一）；参编肝病专著2部。
【摘要】肝癌是全世界最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率仍较高。
荔枝核（lychee seed）为无患子科植物荔枝的干燥成熟种子，是我国历版药典收载的中药，其因具有抗病毒、抗炎、抗肝纤维化、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用而备受关注。
研究发现，荔枝核具有显著抗肿瘤作用，在抗肝癌作用方面尤为突出，有望成为对抗肝癌的辅助用药之一。
迄今为止，多项研究表明，荔枝核抗肿瘤作用主要通过促凋亡、抗增殖和抗转移过程介导，在前列腺癌、结直肠癌中均表现出抗肿瘤活性。
该文在荔枝核抗肿瘤作用的基础上，进一步结合国内外相关文献对荔枝核的抗肝癌作用机制进行综述。
中医药对细胞自噬认识及实验研究进展
中医药对细胞自噬认识及实验研究进展宗文静;张华敏;唐丹丽【摘要】细胞自噬是真核细胞中普遍存在的重要生命现象,它既能实现细胞自身代谢需要及某些细胞器的更新,又能缓解外界有害条件对细胞的不利作用,对维持细胞内环境稳态具有重要意义.自噬研究已成为当今生命科学研究的热点,故概括近年来中医药领域在自噬方面的研究进展,对细胞自噬与中医理论的相关性、中药干预细胞自噬的作用机制等方面进行重点介绍.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2014(020)011【总页数】3页(P1593-1595)【关键词】细胞自噬;中医药;综述【作者】宗文静;张华敏;唐丹丽【作者单位】中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医药信息研究所,北京 100700;中国中医科学院医学实验中心,北京 100700【正文语种】中文【中图分类】R2-03细胞自噬是一种程序化的细胞内降解机制，是细胞通过溶酶体降解其自身胞质成分的过程[1]。
它将部分胞浆和细胞器隔离在双层膜(溶酶体)的囊泡中，再运送到溶酶体中进行分解，最终对分解所产生的大分子给予回收利用。
此过程可缓解多种胁迫条件(如营养限制、热以及氧化胁迫等)对细胞的不利作用，并能实现细胞自身的代谢需要及某些细胞器的更新，维持细胞内环境的稳态。
自噬尽管是细胞的一种自我保护功能，但过度的自噬会导致细胞死亡[2]，称为Ⅱ型程序性细胞死亡。
自噬功能失调与肿瘤、神经退行性疾病、病原微生物感染及衰老等密切相关[2]。
随着研究的不断深入，中医药在细胞自噬机制研究方面取得了一定进展，现将中医药领域在细胞自噬方面的研究现状分析如下。
1 细胞自噬与中医理论相关性研究1.1 细胞自噬与中医气虚痰瘀的关系关于自噬在细胞生存与死亡中的作用，形态学和基因研究的结论并不完全一致，对于自噬本质上是1个细胞生存机制或1个细胞死亡通路，二者尚无定论 [3]。
中医学者从传统理论观点亦作出与之类似的论述。
三氧化二砷诱导肝癌细胞系HepG-2自噬及其机制研究
三氧化二砷诱导肝癌细胞系HepG-2自噬及其机制研究朱传升;侯明;王金慎;王焱;徐文伟;董琳【期刊名称】《中国现代普通外科进展》【年(卷),期】2007(10)4【摘要】目的:测定不同浓度三氧化二砷(As2O3)诱导前后HepG-2细胞自噬水平改变,并初步探讨机制.方法:常规细胞培养,按As2O3不同浓度分组;采用MDC染色,荧光显微镜观察自噬囊泡,流式细胞术检测其荧光强度;RT-PCR检测Bcl-2基因转录,免疫组织化学检测细胞Bcl-2蛋白阳性百分率,并分析同自噬的关系.结果:经不同浓度As2O3作用后,HepG-2细胞生长明显受到抑制;荧光显微镜可观察到自噬囊泡的出现;Bcl-2基因表达降低;经相关性分析,HL-60细胞自噬水平与Bcl-2基因表达呈负相关.结论:As2O3可诱导HepG-2细胞自噬,V诱导HepG-2细胞自噬的机制可能与下调Bcl-2基因表达有关,自噬和凋亡存在交叉.【总页数】4页(P302-305)【作者】朱传升;侯明;王金慎;王焱;徐文伟;董琳【作者单位】山东省千佛山医院,血液科,山东,济南,250014;山东大学齐鲁医院,血液科,山东,济南,250012;山东省千佛山医院,血液科,山东,济南,250014;山东省千佛山医院,血液科,山东,济南,250014;山东省千佛山医院,血液科,山东,济南,250014;山东省千佛山医院,血液科,山东,济南,250014【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.天力克注射液诱导HepG-2肝癌细胞自噬及对端粒酶活性的影响 [J], 丁向萍;马力;魏书堂2.温郁金二萜类化合物C诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡及其机制研究 [J], 党宁3.鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用 [J], 牛海峰;景鸿恩;惠玲;闫蔚;王君;王宏宾;王晓临;周通;张国华;谭大勇;4.鬼臼毒素衍生物Lg-2对人肝癌细胞系HepG-2凋亡的诱导作用 [J], 牛海峰;谭大勇;景鸿恩;惠玲;闫蔚;王君;王宏宾;王晓临;周通;张国华5.石蒜碱诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制研究 [J], 李吉业;张晶;于淼;刘斌;辛国松因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制
载脂蛋白C1表达对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其机制宋慧娟;徐振华;何东宁【期刊名称】《吉林大学学报(医学版)》【年(卷),期】2024(50)1【摘要】目的:探讨载脂蛋白C1 (APOC1)表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步阐明其相关分子机制。
方法:通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平及其与患者预后的关系。
采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测不同肝癌细胞中APOC1mRNA表达水平,筛选APOC1低表达的人肝癌HepG2细胞作为研究对象。
将pcDNA3.1-APOC1质粒转染至HepG2细胞过表达APOC1 (APOC1过表达组),以转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞为对照组,采用MTS法和5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测2组细胞增殖活性和增殖率,Transwell小室实验检测2组细胞中迁移细胞数,流式细胞术和TUNEL法检测2组不同细胞周期细胞百分率和细胞凋亡率,Western blotting法检测2组细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化ERK(p-ERK)、蛋白激酶B (AKT)、磷酸化AKT (p-AKT)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase-3)蛋白表达水平。
结果:TCGA数据库分析,肝癌患者癌组织中APOC1 mRNA表达水平低于正常肝组织(P<0.05),并且APOC1 mRNA低表达组肝癌患者预后较差。
RT-qPCR法检测,HepG2细胞中APOC1 mRNA表达水平最低,选取该细胞作为后续研究对象。
与对照组比较,APOC1过表达组细胞增殖活性和增殖率明显降低(P<0.05或P<0.01),迁移细胞数明显减少(P<0.01), S期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。
槲皮素对肝癌细胞增殖及凋亡影响的研究
槲皮素对肝癌细胞增殖及凋亡影响的研究发布时间：2023-01-15T06:51:30.840Z 来源：《中国科技信息》2023年第17期作者：秦天卓马宁波梁光梅刘政[导读] 本文以人肝癌细胞HepG-2为研究对象，探讨槲皮素对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。
应用酶标仪、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪，秦天卓马宁波梁光梅刘政锦州医科大学食品与健康学院辽宁锦州 121001摘要：本文以人肝癌细胞HepG-2为研究对象，探讨槲皮素对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。
应用酶标仪、激光共聚焦显微镜及流式细胞仪，进行细胞毒性及形态学分析，凋亡率、细胞周期及线粒体膜电位检测，胞内钙离子稳态分析。
细胞增殖受到抑制、呈现典型的凋亡形态学变化，细胞线粒体膜电位降低，细胞内钙离子浓度增大，胞内钙离子稳态被打破。
槲皮素可通过阻滞细胞周期进程，降低线粒体膜电位，打破细胞内钙离子稳态来诱导肝癌细胞 HepG-2 凋亡。
关键词：槲皮素；肝癌细胞；增殖；细胞凋亡槲皮素在自然界中广泛分布于中草药或其他植物的叶、花、果实中，具有抗氧化、抗炎、抗病毒、降糖、降压及抗肿瘤等作用。
槲皮素是一种天然的黄酮类化合物，它对胃癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌等多种肿瘤均具有增殖抑制作用，可诱导肿瘤细胞凋亡[1]。
本文主要探讨槲皮素对肝癌细胞HepG-2增殖及凋亡的影响，为槲皮素开发治疗肝癌药物提供实验依据。
1材料与方法1.1主要试剂、药物及仪器槲皮素（纯度≥99%）购于成都曼思特生物科技有限公司；人肝癌 HepG-2 细胞株购于中科院细胞库；胎牛血清和DMEM 高糖培养基购于 GIBCO 公司；试剂盒、探针购于 BD 公司；Fluo-3/AM购于 Invitrogen公司；甲基噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜 (DMSO)、碘化丙啶 (PI) 购于美国 Sigma公司；二氧化碳培养箱(Binder)；倒置荧光显微镜(Olympus)；酶标仪(Flash闪谱)；流式细胞仪(Beckman)。
黄芩苷诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡作用观察
实用肝脏病杂志２ １ ０ ２年 ８月第 １ ５卷第 ４期
ＪＣｉ ｅ ａｏ， ｇ ２ １．ｏ．５Ｎ ． ｌ Ｈ ｐｔｌＡｕ ． ０ ２Ｖ １ ｏ ｎ １ ４
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基础研 究 ・
黄 芩苷诱 导人肝癌 Ｈ ｐ 一 ｅＧ ２细胞凋 亡作用 观察
梁慧敏 时小燕 和振 坤 徐庆杰
Ｄ ｐ ｒ ｅ ｔｏ ！ ｃｏ ｓＤｓａｅ ， ｕ ｉｅＨ ｓｉ ｌＡｆｌｔｄ ｔ Ｈｅａ ｎｖｒｉ ， ｉｎ ７ ０ １ Ｃ ｉ ｅ ａｔ ｎ ｆ ｈ ｅ ｔ ｕ ｉ ｓｓＨ ａ ｏｐｔ ，ｆ ｉ ｅ ｏ ｎ ｎ Ｕ ｉ ｓｙＫａｅ ｇ４ ５ ０ ， ｈｎ ｍ ｆ ｉ ｅ ｈ ａ ｉａ ｅ ｔ ｆ ａ
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NU7026对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响
[收稿日期]㊀2020-11-27[修回日期]㊀2021-02-11[基金项目]㊀湖南省教育厅科学研究重点项目(19A429)[作者简介]㊀李娟,硕士研究生,研究方向为放射医学,E-mail 为lijuan9508@㊂通信作者黄波,博士,硕士研究生导师,副教授,研究方向为放射医学,E-mail 为huangbo0930@㊂㊃基础医学㊃DOI :10.15972/ki.43-1509/r.2021.03.011NU7026对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响李娟,颜宇龙,万丹婷,李蕊,周美艳,周洁,黄波(南华大学公共卫生学院,湖南省衡阳市421001)[关键词]㊀NU7026;㊀肝癌;㊀HepG2细胞;㊀增殖;㊀迁移[摘㊀要]㊀目的㊀探讨NU7026对HepG2细胞的影响,为治疗肝癌提供理论基础㊂方法㊀用NU7026作用HepG2细胞,将实验分为空白组㊁对照组和NU7026组㊂CCK8实验检测NU7026对肝癌HepG2细胞存活率的影响㊂生长曲线实验和克隆实验检测HepG2细胞增殖能力,划痕实验检测HepG2细胞迁移能力,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡和周期㊂结果㊀与0μmol /L 组和DMSO 组比较,15μmol /L 和20μmol /L NU7026作用于HepG2细胞,细胞存活率明显下降(P <0.05);与DMSO 组相比,10μmol /L NU7026作用于HepG2细胞24㊁48㊁72h 后,细胞存活率下降(P <0.05);10μmol /L NU7026作用HepG2细胞,细胞增殖能力和迁移能力下降(P <0.05),细胞凋亡率增加(P <0.05),细胞周期无明显改变㊂结论㊀NU7026能抑制HepG2细胞增殖能力和迁移能力可能与促进细胞凋亡有关㊂[中图分类号]㊀R735.7[文献标识码]㊀AEffect of NU 7026on the biological behavior of human hepatocarcinoma cell HepG 2LI Juan,YAN Yulong,WAN Danting,LI Rui,ZHOU Meiyan,ZHOU Jie,HUANG Bo (School of Public Health ,University of South China ,Hengyang ,Hunan 421001,China )[KEY WORDS ]㊀NU7026;㊀liver cancer;㊀HepG2cell;㊀proliferation;㊀migration [ABSTRACT ]㊀㊀Aim ㊀To explore the effect of NU7026on HepG2cells,and provide a theoretical basis for the treat-ment of liver cancer.㊀㊀Methods ㊀HepG2cells were treated with NU7026,and the experiment was divided into the blank group,the control group and the NU7026group.㊀The CCK8assay was used to detect the effect of NU7026on the survival rate of HepG2cells.㊀The growth curve assay and clone formation assay were used to detect the proliferation ability of HepG2cells,and the scratch assay was used to detect the migration ability of HepG2cells.㊀Finally the cellular apopto-sis and cell cycle were tested by flow cytometry.㊀㊀Results ㊀Compared with the 0μmol /L group and the DMSO group,after 15μmol /L and 20μmol /L NU7026treated on HepG2cells,the cell survival rate was significantly decreased (P <0.05);Compared with the DMSO group,after treating HepG2cells with 10μmol /L NU7026for 24,48,and 72hours,the cell survival rate was significantly decreased (P <0.05);After 10μmol /L NU7026treated HepG2cells,the cell prolif-eration and migration ability decreased (P <0.05),the apoptosis rate was significantly increased (P <0.05),but the cell cycle did not change significantly.㊀㊀Conclusion ㊀NU7026can inhibit the proliferation and migration of HepG2cells,which may be related to the promotion of cell apoptosis.㊀㊀肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,2015年中国肝癌发病人数为37.0万人,发病率为26.92/10万,死亡人数32.6万,死亡率23.72/10万[1]㊂原发性肝癌发病隐匿,病程短,发展迅速,当前主要治疗手段有手术切除㊁放射治疗㊁药物治疗㊁肝移植等㊂但肝癌易复发㊁易转移,预后差,且对放化疗具有抵抗性,寻求治疗肝癌的药物具有重要意义㊂原发性肝癌中最常见的肝癌组织类型是肝细胞癌[2]㊂本文探讨了NU7026抑制DNA-PKcs 对肝癌细胞的增殖㊁迁移能力的影响,为治疗肝癌提供理论依据㊂1㊀材料和方法1.1㊀材料㊀㊀肝癌细胞(HepG2)由军事科学医学院周平坤研究员惠赠㊂HepG2细胞在含10%胎牛血清(杭州四季青公司)的DMEM培养基(Gibco),37ħ㊁5%CO2培养箱中培养㊂NU7026(LY293646,C17H15NO3)购于MCE公司,纯度为99.95%㊂细胞凋亡试剂盒㊁细胞周期试剂盒购于南京凯基公司㊂1.2㊀CCK8实验取处于指数生长期的HepG2细胞,用含10%胎牛血清的培养液配成单个细胞悬液接种于96孔板中,加入适量的细胞悬液(约7000~8000个/孔),待细胞贴壁后,分别用5㊁10㊁15㊁20μmol/L NU7026进行处理,设3个复孔,继续培养24㊁48㊁72h,每孔加入10μL CCK8溶液,孵育1h,用酶联免疫检测仪测定450nm波长处的光密度值(OD),计算细胞存活率㊂细胞存活率(%)=(实验组OD值-空白孔OD值)/(空白组OD值-空白孔OD值)ˑ100%㊂1.3㊀生长曲线实验按2ˑ104个/孔细胞接种于6孔细胞培养板, 10μmol/L NU7026处理细胞每组设3个复孔,每隔24h计数1次,连续计数3天,以时间为横坐标,细胞数为纵坐标绘制生长曲线图㊂1.4㊀克隆实验将细胞接种于6cm细胞培养皿,10μmol/L NU7026处理细胞,10天后弃掉培养基,PBS洗2遍,加入固定液3mL,固定30min;再加入3mL Gi-emsa染色30min,最后用流水缓慢冲洗,晾干㊂计数含50个细胞以上的克隆数,克隆形成率(%)=克隆数/[实验组接种细胞数ˑ(对照组克隆数/对照组接种细胞数)]ˑ100%㊂1.5㊀划痕实验将细胞接种在6孔细胞培养板中,细胞贴壁后用200μL无菌的枪头尖端在每孔相同位置做线性划痕,再用PBS轻轻冲洗2~3遍,10μmol/L NU7026处理细胞,分别在0㊁24㊁48㊁72h后于显微镜下拍照观察划痕,采用Image J软件观察计算细胞划痕面积,面积愈合率(%)=(0h划痕面积-培养后划痕面积)/0h划痕面积ˑ100%㊂1.6㊀细胞凋亡与细胞周期试验将细胞接种于6孔细胞培养板,10μmol/L NU7026处理细胞,按照说明书步骤进行,1h内用流式细胞仪检测细胞凋亡情况㊂取适量HepG2细胞接种于6cm细胞培养皿中,用10μmol/LNU7026处理0㊁4㊁8㊁12㊁24h后收样㊂按照说明书步骤进行,用流式细胞仪检测细胞周期㊂1.7㊀统计学分析采用SPSS18.0进行统计分析,数据以xʃs表示,多组间用单因素方差分析,P<0.05为差异有显著性㊂2㊀结㊀果2.1㊀不同浓度NU7026对HepG2细胞活性的影响随着NU7026浓度的增加,HepG2细胞存活率下降㊂与0μmol/L组和DMSO组比较,15μmol/L 和20μmol/L NU7026作用HepG2细胞后,细胞存活率下降(P<0.05;图1);10μmol/L NU7026作用HepG2细胞24㊁48㊁72h后,与DMSO组细胞存活率比较,差异有显著性(P<0.05),与0μmol/L 组细胞存活率比较,差异无显著性(P>0.05);查阅文献[3]及根据前期研究[4],本研究中10μmol/L NU7026对HepG2细胞没有明显的毒性作用,故选择10μmol/L NU7026进行后续实验㊂将实验分为空白组㊁对照组(0.1%DMSO)和NU7026组(10μmol/L NU7026)㊂图1㊀CCK8检测不同浓度NU7026对HepG2细胞活性的影响a为P<0.05,与0μmol/L组比较;b为P<0.05,与DMSO组比较㊂2.2㊀各组HepG2细胞增殖能力比较NU7026作用HepG2细胞72h后,NU7026组细胞数明显低于对照组(P<0.05;图2);NU7026组细胞克隆数少于对照组,克隆形成率明显降低(P< 0.05;图2)㊂图2㊀各组HepG2细胞增殖能力的比较A 为培养10天后克隆实验细胞分布图(Giemsa 染色)和柱状图;B 为细胞生长曲线图㊂a 为P <0.05,与空白组比较;b 为P <0.05,与对照组比较㊂2.3㊀各组HepG2细胞迁移能力NU7026作用细胞24h 后,与对照组相比,面积愈合率无明显差异(P >0.05);NU7026作用细胞48h后,划痕面积比对照组稍大,面积愈合率无明显差异(P >0.05);但在作用72h 后,NU7026组划痕面积大于对照组,面积愈合率明显降低(P <0.05;图3)㊂图3㊀各组HepG2细胞迁移能力比较A 为细胞划痕实验迁移(200ˑ);B 为细胞划痕愈合率折线图㊂a 为P <0.05,与空白组比较;b 为P <0.05,与对照组比较㊂2.4㊀各组HepG2细胞的凋亡与周期NU7026作用HepG2细胞24㊁48㊁72h 后,细胞凋亡率增加(P <0.05;图4)㊂随着NU7026作用时间增加,HepG2细胞凋亡率逐渐增加㊂NU7026作用HepG2细胞12h 后,出现了轻微的G2/M 阻滞现象,但细胞周期未出现明显改变(图5)㊂3㊀讨㊀论肝癌在全球恶性肿瘤发病谱中排第六,其中中国肝癌新发病例数将近占全球发病的一半[5]㊂DNA-PKcs 是一种相对分子质量约为470kDa 的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,与共济失调毛细血管扩张症基因(Ataxia telangiectasia mutated,ATM)㊁RAD3相关蛋白(Ataxia telangiectasiaand Rad3-related protein,ATR)同属于磷酸酰肌醇3-激酶相关蛋白激酶(PIKK)家族㊂DNA-PKcs 和ATM 在DNA 双链断裂修复中起着重要的作用,ATR 主要参与DNA 单链断裂修复㊂DNA-PKcs 不仅参与淋巴细胞的V(D)J 重组和类别转换重组,保护染色体末端,而且DNA-PKcs 响应胰岛素信号传导,促进肝脏中碳水化合物转化为脂肪酸[6-7]㊂DNA-PKcs 抑制剂有渥曼青霉素㊁NU7441㊁NU7026㊁IC 化合物等㊂NU7026对DNA-PKcs 抑制性特异度高,能有效抑制DNA-PKcs Ser2056磷酸化[4]㊂本研究通过生长曲线实验和克隆实验检测图4㊀各组HepG2细胞凋亡比较A 为细胞凋亡图;B 为细胞凋亡率柱状图㊂a 为P <0.05,与空白组比较;b 为P <0.05,与对照组比较㊂图5㊀各组HepG2细胞周期的比较A 为流式细胞术检测细胞周期图;B 为细胞周期占比图㊂细胞增殖能力,表明NU7026抑制DNA-PKcs 将降低HepG2细胞增殖能力,与其他研究结果相一致㊂用siRNA 介导肝癌HepG2细胞中DNA-PKcs 沉默,细胞增殖速度减慢,且高表达DNA-PKcs 可通过AKT /GSK3/c-myc 信号通路调节肝癌细胞增殖[8]㊂同样用siDNA-PKcs 转染肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu 后,细胞增殖能力降低,可能抑制DNA-PKcs 后胸腺嘧啶合成酶(TS)表达下降,从而抑制DNA 合成,细胞增殖生长变慢[9]㊂但也有研究表明NU7441抑制DNA-PKcs 促进肺成纤维细胞中SSEA4+间充质祖细胞增殖[10]㊂沉默DNA-PKcs 不仅抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖,而且也抑制细胞迁移和侵袭[11]㊂本文结果显示抑制DNA-PKcs 能降低HepG2细胞迁移能力㊂有研究表明将沉默DNA-PKcs 的HepG2细胞移植到裸鼠中,其肿瘤生成率明显降低[8]㊂DNA-PKcs通过RhoA/ROCk2通路调节基质金属蛋白酶-2和磷酸化肌球蛋白轻链2表达,促进体内外骨肉瘤细胞迁移和侵袭[12]㊂也有研究发现ITGA5和SDC4基因与DNA-PKcs可能对细胞迁移侵袭运动具有互相调节作用[13]㊂本研究用NU7026抑制DNA-PKcs24㊁48㊁72h, HepG2细胞凋亡增加,与其他研究结果一致㊂有研究表明沉默DNA-PKcs后,通过线粒体凋亡途径促进肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu凋亡[14]㊂也有研究表明沉默DNA-PKcs后,有丝分裂细胞纺锤体异常,胞质分裂失败,有丝分裂延长等,最终导致细胞有丝分裂灾变而凋亡[15]㊂用TDR将HeLa细胞同步化至G1期后释放,沉默DNA-PKcs的HeLa细胞在6h出现明显的G2/M期阻滞,表明抑制DNA-PKcs会引起G2/M期阻滞[16]㊂用nocodazole同步化细胞后释放,抑制HeLa细胞DNA-PKcs,H3-pS10阳性细胞增加,表明细胞阻滞在有丝分裂期[17]㊂也有研究表明沉默MG-63细胞DNA-PKcs48h,细胞周期无明显改变[11]㊂在本研究中NU7026抑制DNA-PKcs对HepG2细胞周期无明显改变,可能是因为细胞DNA 损伤不严重,DNA修复时间较短,细胞能较快地通过周期检查点,故未出现明显G2/M期阻滞㊂综上所述,NU7026能抑制HepG2细胞增殖能力和迁移能力,其机制可能与促进细胞凋亡有关㊂[参考文献][1]郑荣寿,孙可欣,张思维,等.2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J].中华肿瘤杂志,2019,41(1):19-28.[2]龙晓兰,张万勇,吴勇军,等.Cofilin-1与肝癌细胞迁移侵袭能力的相关性研究[J].中南医学科学杂志, 2019,47(6):571-575.[3]AMREIN L,LOIGNON M,GOULET A C,et al.Chloram-bucil cytotoxicity in malignant B lymphocytes is synergisti-cally increased by2-(morpholin-4-yl)-benzo[h]chomen-4-one(NU7026)-mediated inhibition of DNA double-strand break repair via inhibition of DNA-dependent protein kinase [J].J Pharmacol Exp Ther,2007,321(3):848-855.[4]黄波,龙颖,唐艳,等.NU7026对肝癌细胞放射增敏作用及机制研究[J].辐射研究与辐射工艺学报,2013, 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实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究
实验报告细胞凋亡的诱导与调控机制研究实验报告：细胞凋亡的诱导与调控机制研究一、引言细胞凋亡是一种基本的生物学现象，对于多细胞生物的发育、稳态维持和疾病发生发展具有重要意义。
深入研究细胞凋亡的诱导与调控机制，有助于我们更好地理解生命过程，并为相关疾病的治疗提供新的思路和策略。
二、实验目的本实验旨在探究不同因素对细胞凋亡的诱导作用以及相关的调控机制。
三、实验材料与方法（一）实验材料1、细胞系：选用了人肝癌细胞系 HepG2 和人乳腺癌细胞系 MCF-7。
2、试剂：凋亡诱导剂（如阿霉素、顺铂等）、抗凋亡蛋白抑制剂（如 ZVADFMK）、细胞凋亡检测试剂盒（如 Annexin VFITC/PI 双染试剂盒）、蛋白提取试剂盒、抗体（如 cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax 等）。
（二）实验方法1、细胞培养：将 HepG2 和 MCF-7 细胞分别培养在含有 10%胎牛血清、1%双抗的 DMEM 培养基中，置于 37℃、5% CO2 培养箱中培养。
2、药物处理：将处于对数生长期的细胞接种于培养板中，待细胞贴壁后，分别加入不同浓度的凋亡诱导剂和抗凋亡蛋白抑制剂，处理一定时间。
3、细胞凋亡检测：采用 Annexin VFITC/PI 双染法检测细胞凋亡率。
收集处理后的细胞，用 PBS 洗涤两次，然后加入 Annexin VFITC 和 PI 染液，避光孵育 15 分钟，最后通过流式细胞仪检测。
4、蛋白表达检测：采用 Western blotting 法检测相关蛋白的表达水平。
收集处理后的细胞，提取总蛋白，进行 SDSPAGE 电泳，转膜，封闭，然后分别加入相应的一抗和二抗，最后通过化学发光法显影。
四、实验结果（一）凋亡诱导剂对细胞凋亡的影响1、阿霉素处理后，HepG2 和 MCF-7 细胞的凋亡率均呈剂量依赖性增加。
在低浓度（05 μM）时，凋亡率较低；随着浓度的增加（10、20 μM），凋亡率显著升高。
异硫氰酸异丁酯抑制肝癌细胞HepG2生长的效应与机理
异硫氰酸异丁酯抑制肝癌细胞HepG2生长的效应与机理周巧巧;匡政坤;张洪权;熊丽;周诗毅【期刊名称】《华中师范大学学报:自然科学版》【年(卷),期】2022(56)5【摘要】为了探究异硫氰酸异丁酯(isobutyl isothiocyanate)对肝癌细胞HepG2的生长抑制效应及其分子机制,该研究通过MTT实验检测化合物对细胞的生长抑制率,计算出IC 50值为3.5μg·mL^(-1);通过流式细胞技术检测发现0.437μg·mL^(-1)以上浓度的化合物能诱导HepG2细胞凋亡;通过划痕实验检测发现0.875μg·mL^(-1)以上浓度的化合物能抑制细胞迁移;进一步通过生物信息学分析表明异硫氰酸异丁酯的靶蛋白可能为巨噬细胞迁移抑制因子(MIF),且HepG2细胞中MIF表达量高于低敏感株.免疫印迹实验也进一步发现化合物不仅能够抑制蛋白酪氨酸激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的激活,还能下调p53蛋白表达.研究结果表明,异硫氰酸异丁酯可能通过靶向HepG2细胞中的MIF 蛋白,影响MIF与其受体CD74相互作用,从而下调p53蛋白表达,阻滞细胞周期的正常进行,诱导细胞凋亡,对肝癌具有特异性的抑癌潜力.【总页数】7页(P834-840)【作者】周巧巧;匡政坤;张洪权;熊丽;周诗毅【作者单位】湖北第二师范学院化学与生命科学学院;湖北第二师范学院化学与生命科学学院植物抗癌活性物质提纯与应用湖北省重点实验室;华中师范大学生命科学学院【正文语种】中文【中图分类】Q291【相关文献】1.索拉菲尼与异硫氰酸4-（甲基亚磺酰）丁酯体外协同杀伤肝癌细胞实验研究2.苯己异硫氰酸酯通过抑制组蛋白去乙酰化和诱导去甲基化来抑制MDS细胞生长3.辣木籽异硫氰酸酯衍生物抑制结肠癌HCT-116细胞的生长和迁移4.异硫氰酸酯通过调节氧化--还原平衡抑制非小细胞肺癌A549细胞生长5.研究揭示异硫氰酸酯抑制真菌生长产毒机理因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人肝癌细胞HepG2培养方法探究与分析
人肝癌细胞HepG2培养方法探究与分析郝广萍【摘要】① 目的探究人肝癌细胞HepG2最合适的培养方法.② 方法对比复苏中先40℃ 水浴溶解后37℃ 温浴与37℃ 水浴溶解细胞的存活率,确定最佳复苏方法;对比采用一步消化法和分步消化法的细胞状态以选择最适传代消化方法;对比手动慢速冻存法、程序降温盒慢速冻存法与玻璃化冻存法冻存效果以选择合适冻存方法;对比刚复苏细胞用10％、12％、15％血清浓度DMEM培养液培养,确定其所需血清最适浓度.③ 结果复苏采用先40℃ 水浴溶解后37℃ 温浴,细胞平均存活率(81.0％)显然比37℃ 水浴溶解(69.3％)高;分步消化法效果比一步消化法效果好;冻存采用程序降温盒效果最佳,玻璃冻存法次之,手动慢速冻存效果最差;采用10％血清浓度的DMEM培养液培养刚复苏细胞增殖慢,死细胞多,12％血清浓度的死细胞少,但是增殖慢,而15％血清浓度的死细胞少且细胞增殖快.④ 结论 HepG2细胞复苏采用先40℃ 水浴溶解后37℃ 温浴,消化传代用分步消化法,冻存用程序降温盒,-80℃冰箱过夜,随后液氮中保存;刚复苏的细胞采用血清含量为15％的DMEM培养液效果好.【期刊名称】《河北联合大学学报（医学版）》【年(卷),期】2018(020)001【总页数】4页(P7-10)【关键词】人肝癌细胞HepG2;复苏;细胞传代;冻存;血清浓度【作者】郝广萍【作者单位】山西医科大学汾阳学院检验系山西汾阳 032200【正文语种】中文【中图分类】R657.3人肝癌细胞系HepG2普遍用于肝癌发病机制、抗肝癌药物的研究[1～3]，充分把握该细胞系在体外的生长特性及培养方法，对临床研究应用有重要的意义。
但HepG2细胞较其他癌细胞培养难度大，常会因各种影响因素导致实验失败，因此我们根据本院实验条件，对HepG2细胞复苏方法、传代方法、冻存方法及培养血清浓度选择进行探究优化。
1 材料与方法1.1 一般材料1.1.1 细胞株 HepG2细胞为汾阳学院检验系任来峰老师惠赠1.1.2 试剂、耗材 DMEM高糖基本培养液(Gibco)、无噬菌体低内毒素胎牛血清(杭州四季青公司)、0.25%胰蛋白酶EDTA(hyclone)、青链霉素双抗(hyclone)、PBS粉末(按1:2000比例稀释即可)、DMSO普通级别(索莱宝公司)、25mL细胞培养瓶(康宁)、iCellBox程序降温盒(杭州柏恒科技有限公司)1.2 方法1.2.1 细胞复苏 6管冻存细胞(相同条件、同一时间冻存)，分别通过下列两种方法复苏：①3管快速放到40℃的水浴锅中，不断摇荡直到完全溶解，转入37℃水浴锅中，慢慢摇荡2分钟[3,4]，移入已加有DMEM完全培养液的3支离心管中，离心，弃上清，磷酸盐缓冲液(PBS)重悬，离心，弃上清，分别加入含15%血清的DMEM培养液混匀后，于5%CO237℃的细胞培养箱里培养，做标记。
放疗对人肝癌细胞株HepG_2凋亡的诱导作用
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研究发
核 白细胞 呼吸爆 发氧 化代 谢的 影响 [ J ] . 卒 中与 神经 疾 病, 2002, 9 ( 1) : 9212.
△河北省承德市科学技术指导计划项目 (2 00 61 00 5) 3 承德医学院附属医院放 、 化疗科
现, 急 性肾 I�R 损伤 时肾小管上皮 细胞凋亡数 增多, B cl22, B ax 蛋白表 达增强 , B cl22 � B ax 比值 下降 , 肾功 能恶化。 预防性使用川芎嗪能明显改善肾功能 , 减少肾 小管上皮细胞凋亡, 并下调 Bax 蛋白表达 , 增强 B cl22 蛋白表达, 使B cl22� B ax 比值增高。本实验发现假手术 组脊髓B ax、 2 2 基因表达基本呈阴性 , 模型组可见大 B cl 量细胞凋亡, B ax 蛋白 在缺血组织中大量 表达, B cl22 由表达较低, 两者比例失调。 川芎嗪对明显抑制脊髓缺 血 再灌注后B ax 的表达 , 促使 Bcl22 蛋白表达上调, 提 示川芎嗪可能通过调节凋亡相关蛋白B cl22� B ax 的表 达而保护脊髓神经细胞 , 抑制凋亡的发生。 参考文献
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莱菔硫烷诱导人肝癌HepG-2细胞G2／M期阻滞作用及机制研究
明 ，ｌｌ ｌＬ ０ｘ ｌＬ ０ｘ ｌＬ的 Ｓ Ｎ作 用 Ｈ ｐ Ｏ￣ ／ 、２ １ ／ 、４ ｔ ／ ｍｏ ｍｏ ｍｏ Ｆ ｅＧ一２细 胞 ４ ８ｈ后 ，均 可显 著 下 调 Ｃ Ｋ１ Ｄ 和 ｃｃｉＢ ｙｌ １的蛋 白表达 水平 ，同时显 著 上调 Ｐ—Ｃ ｋ （ ｈｌ 的表 达 ，与对 照 组 比较 差异 具 有 ｎ ｄ ｌ Ｔ ｒ４）
胞 的抑 制作 用 与其抑 制 Ｎ Ａ Ｔ活性 有一 定关 系 。
莱菔硫烷诱 导人肝癌 Ｈ ｐ ２细胞 Ｇ ／ ｅ Ｇ一 Ｍ期 阻滞作 用及 机制研究
季宇 彬 ‘ 薄文 伟 邹翔
哈尔滨 商业 大学 生命 科学 与 环境科 学 研究 中心
国家 教 育部抗 肿瘤 天然 药物 工程 研究 中心
发 展 的分 子靶 点 ，有 效地 预 防 肝 癌 、肺 癌 、前 列 腺 癌 等 多 种 癌症 ，是 一 种 潜 在 的肿 瘤 预 防和 治 疗 药 物 ，因此 近年来 受 到广泛 关 注 。近 年 来 相继 发 现 Ｓ Ｎ 可通 过 影 响 细胞 周期 及 诱 导肿 瘤 细 胞 Ｆ
的凋亡 发挥 抗肿 瘤作 用 。 因此 ，本论 文拟研 究 Ｓ Ｎ体 外诱 导 人 肝 癌 Ｈ ｐ ２细胞 Ｇ ／ 期 的阻 Ｆ ｅ Ｇ一 Ｍ
统计学意义 （ ００ 或 Ｐ＜ ．５ 。结论 ：Ｓ Ｎ对人肝癌 Ｈ ｐ ２细胞具有 Ｇ ／ Ｐ＜ ． １ ００ ） Ｆ ｅＧ一 Ｍ期阻滞作用；
Ｓ Ｎ可通 过下 调 Ｈ ｐ ２细胞 内 Ｃ ｋ Ｆ ｅ Ｇ一 ｄ ｌ和 Ｃ ｃ ｎ １蛋 白的 表达 、上 调 Ｐ—Ｃ ｋ （ ｈｌ ） 的蛋 白 ｙｌ Ｂ ｉ ｄ ｌ Ｔ ｒ４
期细胞 比例逐 渐升 高 ，同 时 Ｇ 期 比例 降低 ，且 呈一 定 的剂量 依赖 性 ；当 Ｓ Ｎ浓 度达 到 ４ ｍｏ Ｆ ０ｔ ｌ ｘ ／
仙鹤草对人肝癌HepG2细胞凋亡作用研究
２２ Ｆ Ｍ 测细 胞 凋 亡率 ． Ｃ
０ １５２ ０和 ４ ０ ｇｍＬ １ 、 １、３ ６ ｏ －
物对肿瘤细胞的抑制率 ， 并按 中效方程计算 Ｉ５ 。 Ｃ ０
细胞 生长抑制率 （ ＝（一给药组吸光度值 ／ ％） １ 对照组 吸
光 度值 １ ０ ％ ×１０
的正丁醇层作用于 Ｈｐ ２ ｅＧ 细胞 ４ 后 ， ８ ｈ 其细胞凋亡率分别为
２１ ＭＴ ． Ｙ法见表 １ 正丁醇层作用 ７ ， ， ２ ｈ后 细胞的生长增
殖作用被抑制 ， 且随着浓度增加抑制率逐 渐增加 ， 剂量 依 呈
赖关系 ， Ｉ ５ 其 Ｃ ０为 ２４４ ｇｍ 一 。 ３ ．１ ｏ Ｌ １
ＨｅＧ ｐ ２细胞 内活性氧 ， 可能是通过线粒体途 径来 诱导细胞 凋亡 。 所以 ， 仙鹤草对 Ｈ ｐ ２细胞有较强 的抑制作用 ， ｅＧ 其诱 导 Ｈ ｐ ２细胞 凋亡的作用 机制可能 与增 加细胞 内活性氧 ｅＧ
有关 。
基 金 项 目 ： 龙 江 省 留 学 回 国人 员 重 点 科 技 项 目： 人 发 黑 黑
ｆ０ ９２ ２ ０ ］３号
其中阿霉素组 ， 丁醇层 中、 正 高剂量组与 阴性组相 比具 有显 著性差异 （ ＜ ． ） Ｐ ００ 。 ５ ３ 讨论 近年来的研究发现 ， 肿瘤 的发生 、 发展不仅 与 肿瘤分化异常及细胞增殖过度有关 ，而且亦 与细胞凋亡有
素 ， 浓度为 ２ ｇｍＬ １ 阴性组 加相 同体积的培养 液 。 终 Ｏ ｏ 一； ４ ８ ｈ后处理 ， Ｄ Ｆ — Ａ染液 ，７Ｃ 加 ＣＨＤ ３ ￣孵育 ３ ｉ， ０ｍｎ 处理 ， 过
率逐渐增 加 ， 即具有剂量依 赖关系 ，０ ｇｍＬ １的正 丁醇 ５ ｏ 一 层对 细胞 的抑制率 较低 ，０ １０—１０ ｇｍＬ １的正 丁醇层 ５ ｏ －
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哈尔滨
１ ０６ ５ ７ ０
１０７ ５０６ １０７ ５０６
肿 瘤坏死 因子相关 凋 亡诱导 配体 Ｔ Ａ Ｌ （ ｕ ｏ ｅｒｓ ａｔ — ｅａ ｄＡ ｏ ｔ ｉ Ｉｄ ｃ ｇＬｇ Ｒ Ｉ Ｔ ｍ ｒ ｃｏｉ ｆ ｏ Ｒ ｌ ｅ ｐ ｐｏ ｓ ｎ ｕｉ ｉ— ｎ ｓ ｃｒ ｔ ｓ ｎ ａｄ ｎ ）是 最 近发 现 的 Ｔ Ｆ家 族 的又一新 成 员 ，与 Ａ ｏ一１Ｌ （ ａＬ 有 较 高 的 同源性 。和 Ｔ Ｆ家 Ｎ ｐ Ｆｓ ） Ｎ
养 液 ；用流 式细 胞仪检 测 Ｈ ｐ ２细胞 凋 亡率 ；采 用 ＷｅｔｎＢｏ法 测 定 Ｓ Ｎ对 Ｈ ｐ ｅＧ一 ｓ ｒ ｌ ｅ ｔ Ｆ ｅＧ一２细 胞
内 Ｃ ｔ 蛋 白表 达 的影 响 ；酶 活性检 测试 剂 盒测 定 Ｓ Ｎ对 Ｈ ｐ ２细 胞 内 ｃｓａｅ一３和 ｃｓａｅ ｙＣ ． Ｆ ｅ Ｇ一 ａｐ ｓ ａｐ ｓ
照组 比较差 异具 有统 计学 意义 （于 Ｈ ｐ ２细胞 ４ ｈ后 ，细胞 Ｆ ｅ Ｇ一 ８
内 Ｃｓａｅ ａｐｓ 一３和 Ｃ ｓａｅ一 ａｐｓ ９活性 随 ＳＮ浓 度的增 加不 断增 强 ，其 中 ２ ｌ ｌＬ和 ４ １ ｏ／ Ｆ ０ｘ ／ ｍｏ ０￣ ＬＬ剂量 ｍ
组与对 照 组 比较 差异 显著 （ ０ ０ ） Ｐ＜ ． ５ 。结论 ：Ｓ Ｎ可诱 导 人 肝癌 Ｈ ｐ ２细 胞发 生 凋 亡 ； 由于 Ｆ ｅ Ｇ一
Ｃｔ ｙ— Ｃ的释 放 是 线 粒 体 凋 亡 路 径 的 关 键 步 骤 ，而 Ｓ Ｎ 可 促 进 Ｃｔ Ｆ ｙ— 释 放 ，并 进 一 步 激 活 Ｃ的 ｃｓａｅ一 ，再 激活下 游 ｃｓａｅ ，因此 启动线 粒体 凋 亡途 径 可 能 是 Ｓ Ｎ诱 导 人 肝 癌 Ｈ ｐ ２ ａｐｓ ９ ａｐｓ 一３ Ｆ ｅＧ一
一
９酶活性 的影响 。结 果 ：Ｓ Ｎ能够 有 效 地诱 导 ＨｅＧ一２细胞 凋 亡 ，１ 、２ 、４ １ ｌＬ的 Ｓ Ｎ Ｆ ｐ ０ ０ ０ｘ ／ ｍｏ Ｆ
作 用于 ＨｅＧ 一２细 胞 ４ ｈ后 ，Ｈ ｐ 一２细 胞 的 凋 亡 率 随 着 药 物 浓 度 的 增 加 而 升 高 ，分 别 为 ｐ ８ ｅＧ
细胞 发生 凋亡 的 主要 机制 之 一 。
Ｔ ＡＩ及其受体 Ｄ ４ Ｒ ＲＩ ． Ｒ 、Ｄ ５与肿瘤细胞凋亡
申奥 汲晨 锋 季 宇彬
哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究 中心药 物研究所博士后科研 工作站 国家 教育 部抗 肿瘤 天然 药物工 程研究 中心 哈尔滨 哈 尔滨商 业大 学药 物所博 士后 科研 工作 站 哈尔 滨
２ ． ２ 、４ ． ３ 、５ ． ２ ，与对 照组 （ ． ％ ） 比较 凋 亡 率 显 著 升 高 （ ７４ ％ ６５％ ８９ ％ １６ Ｐ＜０ ０ ） ． １ ；不 同浓 度
的 Ｓ Ｎ均 可使 Ｈ ｐ ２细胞胞 浆 中 Ｃ ｔ Ｆ ｅＧ一 ｙ— 白表 达量 显 著 升 高 ，且 呈 一定 的剂 量依 赖 性 ，与对 Ｃ蛋
哈尔滨 哈尔 滨 哈 尔滨
１０７ ５０６ １０ ７ ５０ ６ １０ ７ ５０ ６
目的 ：莱 菔硫 烷 （ｕ ｏａ ｈ ｎ ，Ｓ Ｎ）是 富含 于 十字花科 蔬菜 中的一种 异硫氰 酸盐 ，在青 花 ｓｌ ｒｐ ａ ｅ Ｆ ｆ 菜 中含 量最 高 。近年来 研究 发现 ，Ｓ Ｎ可 在 肿 瘤 发 生 、发 展 的 多个 阶段 发 挥 作 用 ，达 到 防 癌 抗 Ｆ 癌作 用 。我们 前期 研究 也 发现 Ｓ Ｎ可 诱 导 人 肝 癌 Ｈ ｐ ２细 胞 凋 亡 ，本 论 文 在 此 基 础 上 研 究 Ｆ ｅ Ｇ一
族 其他 成员 不 同的是 ，Ｔ Ａ Ｌ在 体 内仅 以膜结 合 型 存在 。 目前 发现 的 Ｔ ＡＬ受 体 有 两类 ，一类 ＲＩ Ｒ Ｉ
３２
Ｓ Ｎ诱导 Ｈ ｐ ２细胞凋 亡 的作用机 制 。方法 ：以终 浓 度为 １ 、２ 、４ Ｉ ｏ／ Ｆ ｅＧ一 ０ ０ ０ｘ ｌＬ的 Ｓ Ｎ处 理体 外 ｍ Ｆ
培养 的 ＨｅＧ一 ｐ ２细胞 株 ４ ｈ ８ ，阳性 对 照 组 为 ０ ５ｘ ｏ Ｌ的阿 霉 素 ，阴 性对 照组 加 相 同体 积 的培 ．Ｉ ｌ ｍ ／
中 国药 理 通 讯 ２ １ 第 二 十 七 卷 第 二 期 ０ ０年
莱菔硫烷诱导人肝癌 Ｈ ｐ ２细胞凋亡 的线粒体途径机制研究 ｅＧ一
季宇彬 张志坚 邹翔 高鹏 。
哈尔滨 商业 大学 生 命科 学与环 境科 学研究 中心 国家教育 部 抗肿 瘤天 然药 物工程 研究 中心 哈 尔滨商 业大 学 药物 所博 士后科 研工作 站