土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法修订稿
土壤酶活性的测定方法
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤活性测定实验报告
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
利用土壤酶活性测定技术评估大棚蔬菜土壤质量
利用土壤酶活性测定技术评估大棚蔬菜土壤质量大棚蔬菜是现代农业生产中的重要组成部分，其土壤质量对蔬菜产量和品质至关重要。
土壤酶活性测定技术是评估土壤质量的重要手段之一。
本文将介绍利用土壤酶活性测定技术评估大棚蔬菜土壤质量的方法和意义。
土壤酶是土壤中广泛分布的一类生物催化剂，可催化许多与植物生长和养分转化相关的关键反应。
常见的土壤酶包括脲酶、过氧化物酶、葡萄糖氧化酶等。
土壤酶活性是指单位时间内酶催化反应所产生的酶活化合物的量，它可以反映土壤中酶类催化反应的速度和效率。
通过对大棚蔬菜土壤中常见酶活性的测定，可以了解土壤中的微生物活性、养分供给状况和土壤环境质量。
土壤酶活性测定技术在大棚蔬菜土壤质量评估中具有以下优势：首先，土壤酶活性测定技术能够直接、快速地评估土壤质量。
传统的土壤分析方法需要采集土壤样品送往实验室进行检测，耗时耗力。
而土壤酶活性测定技术可以在现场进行，只需少量土壤，几分钟内即可获得结果。
其次，土壤酶活性测定技术可以准确评估土壤中的养分供给能力。
土壤酶活性与土壤中的氮、磷、钾等养分密切相关，可以表征土壤的养分状况和养分转化速率。
通过测定土壤酶活性，可以精确判断土壤中的养分供给情况，为蔬菜的施肥管理提供科学依据。
再次，土壤酶活性测定技术可以评估土壤中的微生物活性。
土壤中的微生物是土壤生态系统的重要组成部分，对土壤有机质分解、养分转化和病原微生物的抑制等起着重要作用。
大棚蔬菜土壤中的微生物活性与土壤肥力和病虫害防控密切相关。
通过测定土壤酶活性，可以评估土壤中微生物的活力水平，为蔬菜的健康生长提供支持。
最后，土壤酶活性测定技术对大棚蔬菜的环境管理具有指导作用。
大棚蔬菜生产过程中，良好的土壤质量是保持蔬菜生长健康的基础。
通过测定土壤酶活性，可以及时发现土壤质量的问题，引导农民采取适当的措施，如调整施肥量、改善土壤通气性等，以提高大棚蔬菜的产量和品质。
综上所述，利用土壤酶活性测定技术评估大棚蔬菜土壤质量具有重要的意义。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
土壤酶检测报告
土壤酶检测报告1. 引言土壤是地球上最重要的自然资源之一，它对农田和生态系统的健康发展至关重要。
土壤酶是土壤微生物代谢的重要标志，其活性和种类对土壤质量和生态系统功能具有重要影响。
本文档旨在通过土壤酶检测报告提供有关土壤酶活性的信息，以便对土壤质量进行评估和改进农业管理实践。
2. 实验方法土壤酶检测使用的方法通常包括测定酶的活性以及酶的种类和含量。
本次检测采用以下方法实施：2.1 酶活性测定采用测定酶活性的方法来评估土壤中不同酶的活性水平。
常用的酶活性指标包括脲酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、硝化酶等。
2.2 酶种类和含量测定通过测定土壤中酶的种类和含量，可以更全面地了解土壤微生物群落的组成和功能。
常用的测定方法包括酶谱分析、PCR扩增和基因测序等。
3. 实验结果经过酶活性测定和酶种类和含量测定，我们得到了以下结果：3.1 酶活性酶名活性水平（单位）脲酶100过氧化氢酶50过氧化物酶80硝化酶1203.2 酶种类和含量经过酶种类和含量测定，我们发现土壤中存在多种酶，例如脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶。
其中脲酶的含量最高，过氧化氢酶和过氧化物酶的含量稍低。
4. 结果分析通过对土壤酶活性和酶种类和含量的测定结果进行分析，我们可以得出以下结论：1.脲酶活性较高，说明土壤中存在一定数量的氮素有机化合物，并能迅速转化为植物可用的无机氮。
2.过氧化氢酶和过氧化物酶活性适中，说明土壤中的有机物和废弃物可以被有效分解和降解。
3.硝化酶活性较高，说明土壤中存在一定的硝化作用，有机氮逐渐转化为无机氮。
5. 结论与建议根据检测结果的分析，我们得出以下结论和建议：1.土壤酶活性良好，说明土壤中的微生物群落活跃，有机物分解和养分转化能力强。
建议保持良好的农田管理实践，如定期施肥、轮作和集约耕作等，以促进土壤健康发展。
2.酶种类和含量的测定结果可作为土壤质量评估的重要指标之一，可用于监测农业管理措施的效果和土壤质量的变化情况，为农田管理提供科学依据。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定办法
土壤酶活性及微生物测定配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
七、八、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用0.8(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用pH7.0的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用pH5.0的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（pH9.0），再加入3毫升2.5%的铁氰化钾和3毫升0.5%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
(生物科技行业)土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法
土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。
土壤学酶活性实验报告
土壤学酶活性实验报告实验目的：本实验的目的是通过测定土壤样品中的酶活性，了解土壤中酶活性对土壤养分转化和有机质降解的影响，为土壤肥力评价提供参考依据。
实验原理：土壤是一个复杂的微生物生态系统，其中微生物和土壤酶活性对于土壤有机质降解和养分转化起着关键作用。
本实验选择常用的酶活性指标进行测定，包括脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。
脲酶是土壤中一种主要的氨氧化酶，催化氨离子氧化为亚硝酸离子。
本实验采用亚硝酸盐评价方法，根据脲酶催化下苏亚硝酸盐的生成量来测定酶活性。
过氧化氢酶是一种氧化酶，催化过氧化氢（H2O2）分解为水和氧气。
在本实验中，加入过氧化氢和酶作用后，通过测定生成的氧气体积来计算酶活性。
蔗糖酶是一种糖酶，催化蔗糖降解为葡萄糖和果糖。
在实验中，将土壤样品与蔗糖溶液反应，再通过添加硫酸酸化，使用菲林试剂测定生成的还原糖量来测定酶活性。
实验步骤：1. 收集土壤样品，并将其空气干燥后研磨成粉末状。
2. 准备酶活性测定所需的荧光素磷酸盐、过氧化氢、蔗糖等试剂，按照说明书配制所需的溶液。
3. 酶活性测定前，先将土壤样品与适量的氯仿进行均匀摇匀，以杀死微生物活性。
4. 进行脲酶活性的测定，依次将土壤样品溶液、反应液和荧光素磷酸盐溶液加入96孔板中，放入荧光光度计中进行测量。
5. 进行过氧化氢酶活性的测定，将土壤样品溶液、过氧化氢和缓冲液加入96孔板中，加入过氧化氢酶溶液后，用气泡计测定产生的气体体积。
6. 进行蔗糖酶活性的测定，将土壤样品溶液、蔗糖溶液和酸化剂加入96孔板中，加入菲林试剂后，使用分光光度计测定溶液的吸光度。
实验结果：根据实验步骤测定得到的数据，可以计算出脲酶、过氧化氢酶和蔗糖酶的活性值。
根据实验条件和添加的试剂浓度，可以计算出单位土壤样品中酶活性的相对值，以便进行土壤酶活性的比较和评价。
实验结论：通过测定土壤样品的酶活性，可以了解土壤中微生物代谢活性和有机质降解程度。
较高的脲酶活性表明土壤中氮转化能力较强，有机氮物质较容易转化为无机氮形式。
测土壤酶活方法
测土壤酶活方法酶活性是评价土壤质量和生物活性的重要指标之一。
测定土壤酶活性可以帮助我们了解土壤中微生物的活动水平和土壤中有机物的分解能力，从而判断土壤的肥力和健康状况。
本文将介绍几种常用的测土壤酶活性的方法。
一、脲酶法测定土壤酶活性脲酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中脲酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
脲酶是一种催化尿素分解的酶，可以将尿素分解为氨和二氧化碳。
测定土壤中脲酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
脲酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有尿素和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的尿素，计算出脲酶的活性。
二、过氧化氢酶法测定土壤酶活性过氧化氢酶法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中过氧化氢酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可以将过氧化氢分解为水和氧气。
测定土壤中过氧化氢酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
过氧化氢酶法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有过氧化氢和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的过氧化氢，计算出过氧化氢酶的活性。
三、醋酸红法测定土壤酶活性醋酸红法是一种常用的测定土壤酶活性的方法。
该方法是通过测定土壤中醋酸红酶的活性来间接反映土壤中的酶活性。
醋酸红酶是一种催化醋酸红分解的酶，可以将醋酸红分解为醋酸和二氧化碳。
测定土壤中醋酸红酶的活性可以反映土壤中微生物的活动水平和有机物的分解能力。
醋酸红法的操作步骤如下：1. 取一定质量的土壤样品，将其与含有醋酸红和缓冲液的试剂混合。
2. 反应一段时间后，加入酸性试剂停止反应。
3. 用碱性试剂滴定未反应的醋酸红，计算出醋酸红酶的活性。
测定土壤酶活性可以通过脲酶法、过氧化氢酶法和醋酸红法等方法来进行。
(完整word版)土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤脲酶的测定方法(苯酚钠—次氯酸钠比色法）一、原理脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。
它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素,水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。
土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。
根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。
人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量,也可以通过测定未水解的尿素量来求得。
本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。
二、试剂1）甲苯2）10％尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6。
7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH)溶于蒸馏水.将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6。
7，用水稀释定容至1000ml。
4）苯酚钠溶液（1。
35mol/L)：62。
5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18。
5ml丙酮，用乙醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中;27gNaOH溶于100ml水（B液）。
将A、B溶液保存在冰箱中。
使用前将A 液、B液各20ml混合,用蒸馏水稀释至100ml.5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0。
9%,溶液稳定。
6)氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml)制成氮的工作液（0。
01mg/ml）.三、操作步骤称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶液和20ml PH 6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。
培养结束后过滤，过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中,再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液,随加随摇匀。
20min后显色，定容.1h内在分光光度计与578nm波长处比色。
土壤酶活性测定方法
土壤酶活性测定方法土壤酶活性测定方法一、蔗糖酶: 3，5-二硝基水杨酸比色法1. 试剂配制（1）2N氢氧化钠200mL：称取16g 氢氧化钠，用蒸馏水溶解，定溶于200mL容量瓶中。
（2）3，5-二硝基水杨酸溶液1000mL：称5g二硝基水杨酸，溶于200mL2N氢氧化钠和500mL蒸馏水中，再加300g酒石酸钾钠，用蒸馏水稀释至1000mL（不超过7天）。
（3）1/15M 磷酸氢二钠1000mL：23.867g N a2HPO4·12H2O 溶于1000mL蒸馏水中。
（4）1/15M 磷酸二氢钾1000mL：9.078g KH2PO4溶于1000mL蒸馏水中。
（5）pH5.5磷酸缓冲液100mL：5 mL磷酸氢二钠(1/15M)加95mL磷酸二氢钾(1/15M) （6）8%蔗糖1000mL：称取80g蔗糖，用水溶解，稀释至1000mL。
（7）甲苯。
（8）标准葡萄糖溶液（1mg/mL）1000mL：取少量葡萄糖在真空干燥箱中，于55℃条件下真空干燥至恒重。
然后取1.00g葡萄糖溶于100ml蒸馏水中成标准葡萄糖母液（10mg还原糖/ml）。
取此母液10ml, 用蒸馏水定容至100mL即成标准葡萄糖液（1mg/ml）；2. 操作步骤（1）标准曲线绘制：分别取标准葡萄糖液0.4mL，0.8 mL，1.2mL, 1.6mL, 2.0mL,2.8mL, 3.2mL于50 mL比色管中，另取一管做空白对照。
用蒸馏水补足至10mL。
加入3.0mL 3，5-二硝基水杨酸，沸水浴5min，随即在自来水流下冷却。
最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
比色后，以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶活性测定：称5.00g土样，置于50mL三角瓶中，注入15.0mL 8%蔗糖溶液，5.0mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
土壤酶活性测定方法综合
土壤酶活性测定方法综合引言：土壤酶活性是指土壤中特定酶在一定时间内分解特定底物的能力，是评估土壤生态系统功能和土壤肥力状况的重要指标。
土壤酶活性测定方法是研究土壤酶活性的关键手段之一、本文将综合介绍常用的土壤酶活性测定方法，包括蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法。
一、蔗糖酶活性测定方法：蔗糖酶是一种重要的有机磷酸酶，广泛存在于土壤中，能够水解蔗糖为葡萄糖和果糖。
测定土壤蔗糖酶活性可以反映土壤中酶的数量和活性。
1.提取土壤酶液：将土壤与玻璃棒研磨均匀，用0.5mol/L甘油缓冲液（pH6.8）溶解土壤，离心沉淀，得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入蔗糖底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应30分钟，用酒精停止反应，加入硫酸，取样测定比色液的吸光度。
3.统计分析：根据比色液吸光度与标准曲线对照，计算出土壤蔗糖酶活性。
二、过氧化氢酶活性测定方法：过氧化氢酶是一种氧化还原酶，能够催化过氧化氢分解为氧气和水。
测定土壤过氧化氢酶活性可以反映土壤中氧化还原反应的发生情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与甘油缓冲液混合，加入液氮使其冷冻破碎，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：取一定量的土壤酶液加入过氧化氢底物和缓冲液，在25℃恒温振荡下反应一定时间，停止反应后加入酒精，用紫外分光光度计测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与过氧化氢递减曲线对照，计算出土壤过氧化氢酶活性。
三、脲酶活性测定方法：脲酶是一种解脲酸酯的酶，能够水解尿素为氨和二氧化碳。
测定土壤脲酶活性可以反映土壤中氮循环的情况。
1.提取土壤酶液：将土壤与脲酸酯缓冲液混合，用玻璃棒研磨均匀，离心沉淀得到土壤酶液。
2.酶活性测定：将一定量的土壤酶液加入脲酶底物和缓冲液，在37℃恒温振荡下反应一定时间，反应停止后加入酒精，用比色法测定吸光度。
3.统计分析：根据吸光度与标准曲线对照，计算出土壤脲酶活性。
结论：以上就是蔗糖酶活性测定方法、过氧化氢酶活性测定方法和脲酶活性测定方法的综合介绍。
微生物量碳和酶活性的测定
微生物量碳测定（此指标是反映土壤中微生物总量---群落大小的一个指标）称取经前处理相当于20-g烘干基的新鲜土样，盛装在50ml的烧杯中，放置于真空干燥器中，并放置盛有去乙醇的氯仿（约2/3烧杯）的50ml烧杯1只，烧杯内放入少量沸石(洗净烘干的瓷片，0.5mm大小)，用真空泵抽空使氯仿沸腾5分钟，关闭真空干燥器阀门，在室温避光下熏蒸24小时。
熏蒸24小时结束后，打开干燥器的阀门，取出盛装有氯仿的烧杯，然后用真空泵抽空3-4次（每次抽真空后应慢慢的打开阀门），使渗透到土样中的氯仿全部被排除。
熏蒸结束后将土样转移到250ml的三角瓶中，三角瓶中加入80ml 0.5M K2SO4溶液震荡1小时，用中速定量滤纸过滤，并收集滤液。
重复两次。
过滤时添加空白2个。
提取液应立即分析，或在－18℃下保存。
在熏蒸的同时，称取另外两份鲜土样直接加入80ml 0.5M K2SO4溶液震荡1小时，后过滤收集滤液。
重复两次。
过滤时添加空白2个。
注意，低温（－18℃）下保存的土壤提取液，解冻后会出现一些白色沉淀，不必除去，但取样前应充分摇匀。
提取液中的碳用总碳分析仪测定。
（稀释20倍—吸取2.5ml到50ml容量瓶，上机。
）试剂准备：氯仿；硫酸钾。
标准曲线：0 0.5 1 3 5微生物生物量碳(Bc) 用下面公式计算:Bc = Fc/ Kc。
式中Fc为熏蒸与不熏蒸土壤在培养期间CO2 的释放量的差值,Kc为熏蒸杀死的微生物量中的碳在培养过程中被分解,并以CO2 释放出来的比例, 目前一般都采用0. 45。
(一般用K2Cr2O7氧化法测定有机碳, Kc为0. 33～0. 38; TOC分析仪测定, Kc一般为0. 45 )酶活性的测定包括脱氢酶（Dehydrogenase），脲酶（Urease），精氨酸水解酶，碱性磷酸酯酶，β-葡萄糖酶等。
脲酶（Urease）和精氨酸水解蛋白酶（N-a-benzoyl-L-argininamide, BAA）活性的测定。
土壤微生物数量的测定方法
土壤微生物数量的测定方法土壤微生物数量的测定方法是指用来确定土壤中微生物的数量的一系列方法。
微生物在土壤中的数量是影响土壤肥力、健康状态以及生物多样性的主要因素，所以对土壤微生物数量的测定十分重要。
目前，有几种常用的测定土壤微生物数量的方法，包括计数法、分子生物学方法和非分子生物学方法。
一、计数法计数法是目前最常用的测定土壤微生物数量的方法。
该方法通过对样本中的细胞进行数目和形态的观察，来获得关于微生物数量的信息，然后通过计算微生物数量来估计土壤微生物总数。
1. 总体计数法总体计数法是使用显微镜观察和计数样品中的微生物，把检测到的微生物总数乘以一定的系数，就可以估算出土壤中的总微生物数量。
该方法是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此不能精确测定土壤中的微生物数量。
2. 半定量计数法半定量计数法是通过将土壤样品进行细胞悬液制备，然后用显微镜观察和计数，来估算土壤中的微生物总数。
该方法也是实时性强，耗时少，易于操作，但是由于细胞大小不一，活性差异大，难以检测到的微生物会影响准确性，因此也不能精确测定土壤中的微生物数量。
二、分子生物学方法分子生物学方法是指使用基于DNA或RNA的技术来测定土壤中的微生物数量的方法。
目前，常用的分子生物学方法有PCR方法、qPCR方法、FISH方法、DGGE方法和pyrosequencing方法。
1. PCR方法 PCR方法是使用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。
PCR方法可以快速检测出土壤中的微生物，但它不能检测出细菌的种类。
2. qPCR方法 qPCR方法是使用定量聚合酶链反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction, qPCR）技术来检测土壤中的微生物数量的方法。
qPCR技术可以检测出微生物的种类，并且可以准确测定土壤中的微生物数量。
土壤酶的测定方法
参考关松萌等编制的土壤酶及其研究法一、土壤蔗糖酶3，5- 二硝基水杨酸比色法：1、试剂的配制①3，5- 二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20ml2N氢氧化钠和50ml水中，加30g的酒石酸钾钠，用水稀释至100ml.（不超过七天）②pH5.5磷酸缓冲溶液：1/15M磷酸氢二钠（11.867gNa2HPO4.2H2O溶于1L蒸馏水中）0.5ml加1/15M磷酸二氢钾（9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中）9.5ml即成。
③8%蔗糖溶液。
④甲苯。
⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50—58℃条件下，真空干燥至恒重。
然后取500mg溶于100ml苯甲酸溶液中（5ml还原糖/ml）,即成标准葡萄糖溶液。
再用标准溶液制成1ml含0.01—0.05mg葡萄糖工作溶液。
标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。
2、操作步骤称5g风干土，置于50ml的三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，5ml pH5.5磷酸缓冲溶液和5滴甲苯。
摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24h。
到时取出，迅速过滤。
从中吸取滤液1ml，注入50ml容量瓶中，加3ml3，5- 二硝基水杨酸溶液,并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。
溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50ml，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。
为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个实验需做无土对照。
无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。
无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。
3、结果计算蔗糖酶活性以24小时后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。
葡萄糖（毫克）=a×4式中：a——从标准曲线查得的葡萄糖毫克数4——换算成1g土的系数二、土壤淀粉酶3，5- 二硝基水杨酸比色法:1、试剂配制①1%淀粉。
土壤微生物群落多样性与酶活性研究
土壤微生物群落多样性与酶活性研究土壤是人类赖以生存的基础，土壤中的微生物群落对于土壤的生态功能具有重要作用。
土壤微生物群落多样性与酶活性研究是当前土壤生物学研究热点之一。
本文将结合先进的生物学技术和实验研究结果，从不同角度探讨土壤微生物群落多样性与酶活性的关系。
一、土壤微生物群落多样性土壤是一个复杂的生态系统，其中微生物群落多样性是其中重要的组成部分。
微生物群落包括细菌、真菌和原生生物等。
不同种类的微生物在不同的土壤环境下生长和发展，从而形成了不同的微生物群落。
土壤微生物群落的多样性反映了土壤生态环境的复杂程度，具有重要的生态、环境和农业意义。
微生物的多样性可以通过分子生物学或传统培养技术进行研究。
分子生物学技术包括16S rRNA或ITS等序列分析、荧光原位杂交等方法，可以更准确地研究微生物群落的多样性。
传统的培养方法则通过平板计数和形态判定等方法得出微生物菌株的数量和种类，不过这种方法存在着一定的局限性。
许多研究表明，土壤微生物群落多样性受到许多因素的影响，如土壤pH值、土壤含水量、土壤有机质含量和氮素含量等。
例如，酸性土壤中细菌的丰度相对较低，而真菌的丰度相对较高；高含水量的土壤中真菌的多样性相对较高。
二、土壤酶活性土壤中的酶是微生物代谢活动所产生的一类生物催化剂，对土壤生态系统的物质转化和能量流动有着重要作用。
酶的种类繁多，如脲酶、过氧化物酶、葡萄糖氧化酶等。
不同种类的酶在土壤中所扮演的角色也有所不同。
酶活性是指单位时间内单位质量的酶对底物的催化效率。
酶活性的高低反映了土壤微生物代谢活动的强弱。
酶活性的测定方法包括直接法和间接法。
直接法是直接测定酶催化后产生的物质量，例如葡萄糖氧化酶活性的测定可以测定氧化后生成的双酮的量；间接法则通过测定酶催化反应前和反应后的底物含量或产物含量之比来间接测定酶活性。
土壤酶活性的影响因素也非常多，如土壤温度、土壤湿度、土壤pH值等。
例如，酸性土壤中磷酸酶的活性相对较低。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法土壤中的微生物是维持土壤生态系统健康的重要组成部分，土壤酶活性则可以作为评价土壤肥力和生物活性的重要指标。
因此，在土壤微生物量和土壤酶活性测定方面的研究非常重要。
本文将介绍几种常用的土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法。
一、土壤微生物量测定方法1.铺平法：将土壤样品铺平在玻璃板上，使用显微镜对土壤中的微生物进行直接观察和计数。
这种方法的优点是简单易行，但需要大量的时间和人力。
2.累积碳法：通过测定土壤中的有机碳含量来间接估算土壤微生物量。
有机碳水平与微生物量密切相关，所以可以通过测定土壤中的有机碳来推测微生物的数量和活性。
3.培养法：将土壤样品接种到适当的培养基上进行培养，然后通过菌落计数或直接计数来估算微生物的数量。
这种方法适用于数量较多的微生物，如细菌和真菌。
4.傅里叶变换红外光谱法（FTIR）：通过测量土壤样品的傅里叶变换红外光谱，分析土壤中的微生物量。
该方法具有快速、准确、非破坏性等优点。
1.浊液法：通过观察测定液中的混浊度来测定土壤中的脲酶、过氧化氢酶等氧化酶的活性。
这种方法简单易行，但对于不同种类的土壤酶效果不一样。
2.比色法：采用酶底物与酶催化产物之间的化学反应，通过测定反应产物的颜色来估算土壤酶活性。
比色法可以用于测定脱氢酶、脱氢酶、脱氧核苷酸酶等酶的活性。
3.荧光法：将有机物和荧光试剂一起加入土壤样品中，经过反应后，在荧光分析仪中测定产生的荧光强度来测定土壤酶的活性。
荧光法适用于测定蔗糖酶、酚氧化酶和脱氢酶等酶的活性。
4.比浊法：通过加入酶底物后，观察土壤样品的混浊度来测定土壤中酶的活性。
比浊法适用于黄酶、脱氢酶等酶的活性测定。
5.电导法：通过测定土壤样品溶液中的电导率变化来估算土壤中酶的活性。
电导法适用于磷酸酶和脱氢酶等酶的活性测定。
总结起来，土壤微生物量和土壤酶活性的测定方法多种多样，选择合适的方法需要考虑样品特性和实验条件等因素。
每种方法都有其优点和局限性，研究者应根据需要选取合适的方法进行测定。
林区土壤酶活性及微生物群落多样性研究
林区土壤酶活性及微生物群落多样性研究随着人类经济社会的快速发展，大量的化学农药和化肥的过度使用已经导致许多问题的出现，其中包括土壤生态环境的严重恶化和人类健康的威胁。
为了充分利用林区土壤的资源，保护生态环境和维护人类的寻常健康，研究林区土壤酶活性及微生物群落多样性成为许多科学家的关注焦点。
一、林区土壤酶活性研究土壤酶是一种在土壤中广泛分布的生物催化剂，通过酶催化，平衡土壤中的营养成分，调节土壤食物网，进而影响植物生长和生态系统的稳定和平衡。
其中，蛋白酶、脲酶和多酚氧化酶在林区土壤中占据着主要位置。
因此，研究林区土壤酶活性及其分布规律对林区土壤的发展起到重要的指导作用。
林区土壤酶活性受许多因素的影响，主要包括温度、湿度、气候、土壤pH值、有机质含量、植物根系和林地管理等因素。
二、林区土壤微生物群落多样性研究土壤微生物群落具有高度多样性和复杂性，是土壤生态系统中最活跃和最为多元化的群体之一。
它们参与了许多重要的土壤过程，例如营养循环、养分转化、物质分解和生物修复等过程，同时也有助于抑制病原微生物、降解有毒物质、促进植物生长等方面。
因此，研究林区土壤微生物群落多样性成为重要的研究领域。
在林区土壤中，常见的微生物群落主要包括细菌、真菌和放线菌。
可以通过采样、培养，以及分析次级金字塔结构和土壤生物量等方法研究微生物群落多样性。
例如，林区土壤中的真菌群落多样性与植被类型密切相关，而细菌群落多样性受土壤pH、土壤水分和有机质含量等环境因素的影响更加显著。
三、林区土壤酶活性与微生物群落多样性的联系林区土壤酶活性与微生物群落多样性之间存在着密切关系。
土壤酶活性能够启动土壤呼吸过程，产生二氧化碳，进而影响微生物的生长和代谢。
同时，微生物也会通过分泌酶类促进有机质的降解和营养元素的循环。
因此，土壤酶活性与微生物群落多样性互相制约，相互影响，共同维护了土壤健康和生态平衡。
四、林区土壤酶活性及微生物群落多样性的重要意义1. 保护生态环境和维护生态平衡。
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土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100μg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：，50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：，80毫升l硼砂（）和l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于、、、、、、毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。
实验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物质的矿化起着主要作用；土壤的磷酸酶活性，在很大程度上取决于土壤的腐殖质含量，活性磷量，能矿化有机磷化合物的微生物数量，植物类型等因素，土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况。
二、实验仪器恒温箱、分光光度计、三、实验药品甲苯、苯磷酸二钠、酚、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、四、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（），再加入3毫升%的铁氰化钾和3毫升%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克数表示。
脲酶活性测定一、试验原理土壤的脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。
根基土壤可测得最大的脲酶活性，人们常用土壤的脲酶活性表征土壤的氮素状况。
二、实验仪器锥形瓶、定性滤纸、震荡器、分光光度计、1mm筛、三、实验药品酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、铵态氮标准溶液、双蒸水四、实验步骤1、准确称取10.00g过1mm筛的风干土样，置于150mL锥形瓶中，注入50mL20%的NaCl溶液，将瓶塞紧，在振荡30min(120r/min)后，用定性滤纸过滤。
2、取20mL滤液于50mL容量瓶中，加双蒸水稀释至40mL左右，加2mL25%酒石酸钠，充分摇动静置5min，使其与Cd，Mg离子络合；3、再加入10滴1%阿拉伯胶，摇动后加2mL纳氏试剂，边加边摇，定容至刻度，5min后用490nm比色，配制铵态氮标准溶液，绘制标准曲线，比色后求算土壤脲酶活性。
4、结果分析滴定法测定过氧化氢酶活性一、试验原理土壤的过氧化物酶活性，与土壤的呼吸强度和土壤微生物活动相关，在一定程度上反映土壤微生物过程的强度。
根际土壤的过氧化物酶活性，远较根际外土壤为高。
有机质含量高的土壤，过氧化氢酶活性较强。
因此，土壤过氧化物酶的活性可以表征土壤总的生物学活性和肥力状况。
本试验采用滴定法测定过氧化氢酶活性，即通过定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量。
二、实验仪器致密滤纸、酸式滴定管、1mm筛三、实验药品双蒸馏水、H2SO4、过氧化氢、KMnO4、四、实验步骤准确称取5.00g过1mm筛的风干土样，置于150mL锥形瓶中，注入40mL 双蒸馏水和%过氧化氢，另设对照，塞紧瓶盖，振荡30min(120r/min)后，注入LH2SO4终止反应，用致密滤纸过滤，取滤液25mL，用LKMnO4滴定至微红色。
土壤的过氧化氢酶活性，用100g土重的LKMnO4毫升数表示。
土壤微生物检测一、取样工具无菌刮铲、土样采集器、镊子、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。
二、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品立即进行处理或放在4℃冰箱中暂存。
三、所需培养基及配置方法1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl?5g，琼脂15～20g，水1000ml，～，121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水?1000ml，～。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。
121℃灭菌20min。
3、无氮培养基（自身固氮菌、钾细菌）甘露醇（或葡萄糖）10g，KH2PO4 0.2g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·2H2O 0.2g，CaCO3 5g，蒸馏水1000ml，～，113℃灭菌30min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1/3000孟加拉红（rosebengal，玫瑰红水溶液）100ml，琼脂15～20g，pH自然，蒸馏水800ml，121度灭菌30min。
临用前加入%链霉稀释液10ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、蛋白胨琼脂培养基蛋白胨5克、KH2PO40.5g，NaCl 0.25g，琼脂18克，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4 0.01克，水1000毫升，，一气压灭菌20分钟灭菌。
四、所需药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、甘露醇（或葡萄糖）、CaSO4·2H2O、CaCO3、孟加拉红、链霉素五、检测方法土壤中放线菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中检测放线菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶高氏一号培养基可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO40.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水?1000ml，～。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。
121℃灭菌20min。
三、实验步骤1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10g，分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。
用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1ml 移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。
如此操作，一直到10-10。
稀释。
(另外，要知道所称土样的含水量)2、倒人45℃恒温水浴的灭菌高氏l号培养基，水平放置，凝固待用；分别无菌吸取各样品10-4、10-5、10-6、10-7稀释液，加入灭菌平皿中(每稀释度3皿，每皿lml)，用玻璃涂布棒涂抹均匀，将平皿倒置于28℃恒温培养箱中培养。
放线菌的培养时间较长，故制平板的培养基用量可适当增多3、培养48h后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。
每克土壤中菌落形成单位＝同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。
土壤中细菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中分离细菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl?5g，琼脂15～20g，水1000ml，～，121℃灭菌20min。
三、实验步骤1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10 g，分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。
用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1ml移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。
如此操作，一直到10-10。
稀释。
(另外，要知道所称土样的含水量)2、分别无菌吸取各样品10-5、10-6、10-7、10-8稀释液，加入灭菌平皿中(每稀释度3皿，每皿lml)，倒人45℃恒温水浴的灭菌牛肉膏蛋白胨培养基，混匀。
（稀释倍数是情况而定）3、待培养基凝固后，将平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养。
4、培养24h后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。
每克土壤中菌落形成单位＝同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。
土壤中真菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中检测真菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶、灭菌水马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100ml，琼脂15～20g，pH自然，蒸馏水800ml，121度灭菌30min。