11 CYP2C19基因检测标准操作流程
基因分析仪操作规程(3篇)
第1篇一、引言基因分析仪是现代生物技术研究中不可或缺的设备，广泛应用于基因克隆、基因测序、基因表达分析等领域。
为确保实验结果的准确性和可靠性，以下为基因分析仪的操作规程。
二、操作前的准备1. 确保仪器电源正常，连接好计算机和打印机。
2. 检查仪器各部件是否完好，包括毛细管、进样器、检测器等。
3. 准备好实验所需的试剂和样品，如PCR产物、标记荧光染料、缓冲液等。
4. 清洁实验台面，确保实验环境干净、整洁。
三、操作步骤1. 开机与预热（1）开启电源，等待仪器预热至设定温度。
（2）打开计算机，进入基因分析仪操作软件。
2. 样品制备（1）根据实验需求，对PCR产物进行纯化、浓度测定等处理。
（2）将PCR产物与标记荧光染料混合，确保混合均匀。
3. 样品进样（1）将混合好的样品置于进样器中。
（2）根据样品量和仪器要求，设置进样量。
（3）按下进样按钮，将样品送入毛细管。
4. 测序（1）启动测序程序，设置测序参数，如温度、电压、流速等。
（2）开始测序，观察电泳图谱，记录数据。
5. 数据分析（1）将测序数据导入分析软件。
（2）对数据进行质量评估、峰图分析、碱基序列分析等。
（3）根据实验需求，输出分析结果。
四、注意事项1. 操作过程中，注意避免样品污染，确保实验结果的准确性。
2. 根据实验需求，合理设置测序参数，以保证测序质量。
3. 定期对仪器进行清洁、保养，确保仪器正常运行。
4. 在操作过程中，如遇到异常情况，应及时关闭仪器，联系技术人员进行处理。
5. 严格遵守实验室安全规范，确保人身安全。
五、操作结束1. 关闭仪器电源，等待仪器冷却。
2. 清洁实验台面，整理实验用品。
3. 记录实验数据和分析结果。
通过以上操作规程，可以有效提高基因分析仪的使用效率和实验结果的准确性。
在实验过程中，请严格遵守操作规程，确保实验顺利进行。
第2篇一、引言基因分析仪是一种用于检测和分析DNA、RNA等生物大分子的设备，广泛应用于科研、临床、司法等领域。
CYP2C19基因多态性(SNP)检测
2005年12月，病人感到胸痛，但冠脉造影未发现血管狭 窄；
2007年11月，病人出现了持续性的胸痛和非ST段抬高的 心梗。冠脉造影发现在弯曲的支架处出现血栓，只好更换 新的药物缓释支架(2.75mmX18mm)；
3、为什么要检测CYP2C19基因多态性?
多中心，随机对照，双盲试验，研究增加剂量（up to 300mg）对CYP2C19突 变患者血小板聚集抑制的改善情况。
*1/*1
*1/*2
*2/*2
结论：CYP2C19 *1/*2型患者，维持剂量增加至225mg，其对血小板活性的抑 制程度方可达到*1/*1型患者的水平。而对于*2/*2型患者，即使维持剂量增加 至300mg，仍然难以达到相当的血小板抑制水平。
2009年7月，病人在打曲棍球时，又发生胸痛，并在弯曲 的支架处再次发生血栓，入院进行球囊扩张，重新安放支 架 (2.25mmX12mm)；
2009年8月对病人进行了CYP2C19基因型检测，结果为 *2/*2型，这提示他是个氯吡格雷的慢代谢患者。因此停 用氯吡格雷，改用普拉格雷；
2011年6月接受心脏造影，一切正常。
• 换用新药替格瑞洛（已在国内上市）； • 联用西洛他唑（cilostazol），两联改为
三联抗血小板治疗； • PCI效果不佳者，可考虑改做搭桥手术。
病例一：慢代谢患者使用5个支架后换用普拉格雷
2005年2月，医生为他进行经皮冠脉介入手术，植入一个 药物缓释支架 (2.75mmX16mm)，并开始服用氯吡格雷；
伏立康唑 Nelfinavir 那非那韦 Proguanil
氯胍
Thank you!
CYP2C19 基因检测
2006 2007 2008 2009 2010
May, 2008
Trenk et al find CYP2C19 polymorphism is associated with adverse outcomes for patients on clopidogrel followed for one year
4
精品文档
药物安全与个体化医疗
因药物不良反 应住院的病人
250万/每年
直接 死亡 20万
25-30%的药 物代谢基因 为慢代谢型
5
精品文档
药物代谢可能特别慢，造成 代谢产物堆积或有效活性浓
度不足等不良反应
合理用药影响因素
性别
年龄 老年、儿 童、新生
儿
身高、体重 合并症
遗传结构与基 因型
环境因素 食物/ 吸烟 /
4. Eur Heart J, 2003, 24:193 5. Circulation, 2004, 109:3171
Emerging information established a role for CYP2C19 in clopidogrel response
October, 2006
Hulot et al identify CYP2C19 polymorphisms as major determinant of variability in platelet aggregation in healthy subjects; additional publications later confirm this finding
剂量 300/75 300/75 600/75 75 300/75
发生率 28% 31-35% 5-11% 31% 25% 5-35%
CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂技术指导原则(征求意见稿20180905)
附件1CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂技术指导原则（征求意见稿）一、前言本指导原则旨在指导注册申请人对CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对CYP2C19药物代谢酶基因多态性检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，也不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、范围药物代谢酶在药物体内代谢过程中起着重要作用，其活性强弱是药物代谢速率的重要影响因素，直接决定了药物作用的强度和持久性。
人体内的药物代谢酶主要有细胞色素P450（CYP450）同工酶和N-乙酰转移酶（NAT）等。
CYP2C19酶是一种重要的CYP450同工酶，临床以CYP2C19酶为主要代谢酶的药物包括抗血小板药物（如：氯吡格雷）和质子泵抑制剂等。
氯吡格雷是一种抗血小板药物，广泛用于：1、急性冠脉综合征（ACS）患者，包括非ST段抬高性ACS（不稳定性心绞痛UA或非Q波心肌梗死）和ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者，其中，非ST段抬高性ACS包括经皮冠状动脉介入术后置入支架的患者；2、外周动脉性疾病患者；3、近期心肌梗死或近期缺血性卒中患者。
氯吡格雷作为一种前体药物，本身并无药理活性，主要经CYP2C19酶代谢活化，产生活性代谢产物，后者与血小板表面的P2Y12受体不可逆结合，抑制血小板聚集，干扰ADP介导的血小板活化，发挥抗血小板效应。
CYP2C19SOP-操作流程
2.2取出原先分装好的扩增液，在管内按照如下体系配制PCR反应液，并做好标记。每人份检测使用1管CYP2C19扩增液1(19μl/管)和1管CYP2C19扩增液2(19μl/管)
反应温度(℃)
仪器内取样位置
取样次数
试管盒位置
试剂名称
1
5
42
A
预杂交液
1
2
30
42
B
杂交反应液
1
3
6
42
C
洗液1
2
4
5
28
D
洗液2
2
5
20
28
E
抗体液
1
6
5
28
D
洗液2
2
7
3
28
F
洗液3
1
8
30
42
G
显色液
1
9
2
28
A
预杂交液
2
3.7取出CYP2C19基因芯片，做好标记，将基因芯片插入杂交仪插片口中，旋紧密封旋钮。
海口海瑞康生物科技有限公司
操作规程/细则编号：FD/PRO/0001
内容：CYP2C19基因检测
部门：技术部
变更版本记录：2010年第一版
生效日期：
批准：
目的：为保证本实验室检测实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
标本要求：
1.样本的收集：静脉取血1ml，加至EDTA抗凝管中。
4扫描
基因检测标准化操作流程
基因检测标准化操作流程
基因检测是一种用于检测个体基因组中特定基因或基因组序列的技术，可以帮助人们了解自己的遗传信息，预测疾病风险，指导个性化治疗等。
然而，由于基因检测技术的复杂性和多样性，标准化操作流程对于确保检测结果的准确性和可靠性至关重要。
基因检测标准化操作流程包括以下几个关键步骤：
1. 样本采集：首先，需要采集来自被检测个体的生物样本，通常是唾液、血液或组织样本。
样本采集的质量和准确性对后续的检测结果至关重要。
2. 样本处理：采集到的样本需要进行处理，包括提取DNA或RNA等核酸物质。
样本处理的过程中需要遵循严格的操作规程，以确保提取到的核酸质量和纯度符合检测要求。
3. 实验操作：在进行基因检测实验时，需要按照标准化的实验操作流程进行。
这包括PCR扩增、测序、基因芯片分析等步骤，每一步都需要严格控制实验条件和操作流程，以确保结果的准确性和可重复性。
4. 数据分析：得到实验数据后，需要进行数据分析和解读。
这包括对基因序列、变异位点等信息进行比对和分析，以确定个体的基因型和可能的遗传风险。
5. 结果报告：最后，需要将分析结果整理成报告，向被检测个
体提供详细的基因检测结果和解读。
报告中需要包括检测方法、结
果解读、可能的遗传风险等信息，以帮助个体理解自己的遗传信息。
在整个基因检测标准化操作流程中，严格遵循操作规程、保证
实验条件的稳定性和结果的准确性是至关重要的。
只有通过标准化
操作流程，才能确保基因检测结果的可靠性和可信度，为个体提供
准确的遗传信息和健康指导。
CYP2C19 基因多态性和 ApoE 基因分型 检测质量控制品的制备说明书
作者单位：100176 北京，北京艾德摩医学检验实验室通信作者：郝繁运，Email ：**************DOI ：10.3969/j.issn.1674-7151.2020.04.004CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质量控制品的制备郝繁运【摘要】 目的 制备CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质量控制（质控）品并评估其质量。
方法 收集医院血库过滤血液后的滤膜，经洗脱后稀释，进行基因扩增实验，制备CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测质控品，在6个月保存期内重复检测，评价均匀性和稳定性。
结果 收集样本的CYP2C19基因多态性检测出*1/*1、*1/*2、*2/*2、*1/*3、*3/*3基因型，未检出*1/*17、*2/*3、*2/*17、*3/*17、*17/*17基因型；ApoE 基因分型检测出ε3/ε3、ε3/ε4、ε2/ε3、ε2/ε2、ε4/ε4基因型，未检出ε2/ε4基因型。
自制质控品在6个月保存周期内的检测结果随着时间延长无明显变化，与已知结果一致。
结论 自制质控品均匀性和稳定性良好，可用于临床实验室CYP2C19基因多态性和ApoE 基因分型检测的质控。
【关键词】 基因分型； 基因多态性； 自制质量控制品Preparation of quality control products for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection Hao Fanyun. Beijing Ademo Medical Laboratory, Beijing 100176, China Correspondingauthor:HaoFanyun,Email:**************【Abstract 】 Objective To prepare quality control (QC) products for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection. Methods The filter membrane in the hospital blood bank was collected and diluted after elution, and then the gene amplification experiment was carried out. The QC samples for CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection were prepared, and repeated detection was conducted within 6 months storage period to evaluate the homogeneity and stability. Results The genotypes of *1/*1, *1/*2, *2/*2, *1/*3 and *3/*3 were detected in CYP2C19 gene polymorphisms, while *1/*17, *2/*3, *2/*17, *3/*17 and *17/*17 were not detected; the genotypes of ε3/ε3, ε3/ε4, ε2/ε3, ε2/ε2 and ε4/ε4 were detected, and ε2/ε4 was not detected. The self-made QC products showed no obvious change in 6-month storage period, and was consistent with confirmed results. Conclusion The self-made QC products for nucleic acid testing have good uniformity and stability, and can be used for the QC of CYP2C19 polymorphism and ApoE genotyping detection.【Key words 】 Genotyping; Genetic polymorphism; Self-made quality control productsCYP2C19基因多态性检测可用于氯吡格雷等药物用药安全监测和用药指导，ApoE 基因分型检测结果可以作为心脑血管疾病及阿尔兹海默病（Alzheimer's disease，AD ）临床辅助诊断和风险评估的重要指标。
氯吡格雷用药指导的基因检测之欧阳科创编
氯吡格雷用药指导的基因检测氯吡格雷是治疗急性冠状动脉综合征和经皮冠状动脉介入术后抗栓的基础药物，但4%~30%患者在治疗期间出现氯吡格雷疗效下降，甚至出现氯吡格雷抵抗。
氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。
CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。
中国人群中14%为CYP2C19慢代谢型，常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；而在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。
2010年美国FDA修改的氯吡格雷说明书中黑框警示：CYP2C19基因型检测结果应作为医生调整治疗策略的参考，对于CYP2C19PM型患者，建议考虑调整治疗方案或治疗策略。
此外，ABCB1-3435C>T影响到氯吡格雷在肠道的吸收，突变型(TT型)肠道吸收减少，生物利用度降低，心血管事件发生率明显高于野生型(CC型)。
同时携带ABCB1突变基因和CYP2C19突变基因与携带ABCB1和CYP2C19野生型等位基因相比，其心血管事件发生风险比达到 5.31。
最新研究证实，PON1在氯吡格雷生物转化上起着关键作用。
PON1-G576A基因多态性可影响氯吡格雷中间代谢产物2-氧代-氯吡格雷转化为活性硫醇衍生物的能力，从而影响氯吡格雷抗血小板活性。
与PON1-576GG型比较，GA 型患者半年后出现支架内血栓的风险比为 4.52，出现心肌梗死的风险比为 2.3，而AA型患者发生的风险比分别为12.90和4.93，携带此等位基因的患者往往存在氯吡格雷抵抗风险。
因此，建议在使用氯吡格雷前进行PON1、CYP2C19和ABCB1基因检测，依据患者基因型确定合适给药方案。
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药物代谢酶多态性检测标准操作规程
一、检验目的
为保证本实验室检测药物代谢酶基因型时DNA提取、PCR扩增及扩增产物杂交、显色、芯片扫描实验操作的标准化，确保检测结果的准确性、重复性，制定本规程。
二、适用范围
适用于血液样本基因组DNA的提取、PCR扩增、杂交显色及报告。
三、方法原理
采用基因芯片技术，测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。
当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列，据此可重组出靶核酸的序列。
CYP2C19基因在体内主要表达细胞色素P450（Cytochrome P450,CYP）同功酶也称药酶，是由一系列结构和功能相关的酶组成的超家族，是体内药物代谢的主要酶系。
其中，CYP2C19基因由于遗传多态性，不同个体间表达的药酶活性存在显著不同。
通过该酶代谢的药物（如质子泵抑制剂，抗惊厥药等）随患者基因型不同，其疗效和副作用也有明显不同。
本项目检测患者基因组DNA中CYP2C19基因型，通过对患者基因分型检测，判定患者的药物代谢速率类型，从而帮助医生正确选择药物并合理调整药物剂量，提高药物使用有效性，并降低毒副作用。
四、性能指标
1. 最低检出限：20ng基因组DNA。
2. 准确度：以6种CYP2C19基因型的DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别；以10份企业标化的阴性质控品进行平行两次检测，结果一致且均为阴性；以浓度为8ng/ul 的CYP2C19基因型基因组DNA样品分别检测试剂盒，结果符合相应型别。
2. 精密度：以6种CYP2C19基因型的DNA样品分别对同一批试剂盒平行检测20次，每天4次，分为5天，检测结果一致。
五、标本收集
1. 标本类型：静脉血的全血标本作为检测标本(抗凝剂为EDTA，抗凝剂的质量应符合
化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准)。
2. 标本保存: 室温保存不超过7天，2～8℃不超过1个月，-20℃不超过7周，反复冻融不超过5次，全血的运输必须遵守国家相关规定。
3. 标本拒收:与1、2所述不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决方案或建议，并做好相关记录。
试剂的分装：扩增液（1、2）融溶后，将其分装到0.2ml离心管中，22μl/管。
11-1。