微生物实验报告(土壤)

吉林化工学院环境与生物工程学院微生物学实验报告土壤微生物的分离、培养及鉴定

学生学号：10350106

学生姓名：王慧

专业班级：生技1001

指导教师：谢莹

吉林化工学院

Jilin Institute of Chemical Technology

土壤微生物的分离、培养及鉴定

王慧、王宇、邓赛、丛学琦

（环境与生物工程学院，生物技术1001）

摘要：利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据菌落形态观察及一系列生理生化试验的结果，对照种属特征初步鉴定分离纯化的微生物所属类群。

关键词：细菌、放线菌、霉菌、培养基的配制、高压灭菌。

1前言

培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。高氏一号培养基是一种用于培养放线菌的合成培养基。马丁氏培养基用于霉菌的分离培养。

2材料与药品

2.1材料

土壤（选定采土地点后，铲去表涂层2～3cm，取3～10cm深层土壤10g。）、天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸、无菌培养皿、无菌移液管、玻璃涂棒等。

2.2药品

牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、NaOH溶液（1mol/L）、无菌水、1％重铬酸钾。

3 实验方法

3.1 培养基的配制

3.1.1肉膏蛋白胨培养基的配制

1．培养基成分

牛肉膏0. 3g

蛋白胨1g

NaCl 0.5g

琼脂 1.5g

水100mL

pH 7.2~7.4

2．配制方法

（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。

（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2~7.4。

（5）分装、加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。

3.1.2高氏一号培养基的配制

1．培养基成分

可溶性淀粉20g

KNO3 1g

NaCl 0.5g

K2HPO4 0.5g

MgSO4 0.5g

FeSO4 0.01g

琼脂20g

水1000mL

pH 7.2～7.4

2．配制方法

（1）称量及溶化：先称量可溶性淀粉，置于一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，加热，使淀粉完全融化。再分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4、MgSO4，依次逐一加入水中溶解。

（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/lLNaOH溶液调pH至7.2~7.4。

（5）分装、加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。

3.1.3马丁氏培养基的配制

1．培养基成分

葡萄糖10g

蛋白胨5g

K2HPO4 1g

MgSO4•7H2O0.5g

琼脂16g

水1000mL

链霉素溶液（10000U/ml） 3.3mL（临用前加入）的

2．配制方法

（1）称量：称取培养基各成分的所需量。

（2）溶化：在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加入并溶化培养基各成分。（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（4）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。（5）加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

（7）临用前，加热融化培养基，待冷却至60℃左右，按每1000ml培养基以无菌操作加入3.3ml的链霉素溶液，迅速混匀。

3.2微生物的分离

3.2.1细菌分离

1．制备土壤稀释液

称取土样1g，加入盛有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10min，使土壤中菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成10－2稀释度的土壤稀释液。然后按10倍稀释法进行稀释分离，以制备10－7稀释度为例，具体操作过程如下：取4.5ml无菌水试管6支，按10－3 (10)

－7顺序编号，放置在试管架上。取移液管一支，准确吸取0.5ml10－2土壤稀释液，此为10－3稀释度的土壤稀释液，依次操作，制成10－4、10－5、10－6、10－7的土壤稀释液。

2．涂布分离