一、流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数
1 工作条件：
1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ
1.2 环境温度:16-30℃
1.3 湿度：20-80%
2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。b5E2RGbCAP
3 技术规格和参数
3.1 激发系统：
3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。p1EanqFDPw
3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑
3.1.3 流动室规格：180x430μm
3.2 荧光收集和检测
3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。
3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。DXDiTa9E3d
*3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统
3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。RTCrpUDGiT
3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。
*3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。
3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、525/50nm、605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、575/25nm、695/40nm、780/60 nm；640nm红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。5PCzVD7HxA
*3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。jLBHrnAILg
*3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。
3.4 变异系数：全峰宽CV<3%
*3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。
3.6 最小样本量：≤30ul
3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm
3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。
3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。xHAQX74J0X
3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。LDAYtRyKfE
*3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。Zzz6ZB2Ltk
3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。dvzfvkwMI1
3.14 临床自动软件：标配临床自动软件，拥有具CFDA认证的4色及6色配套试剂，可自动完成4色或6色TBNK免疫分型和绝对计数、以及HLA-B27的自动检测，无需人员干预，并确保实验结果准确无误。rqyn14ZNXI
3.15 计算机：工作电脑1套：原配，DVD刻录光驱，21吋液晶显示器，激光彩色打印机。
3.16 净化电源：≥3KVA净化电源（220±5V，50-60GHz）
3.17 获得国家食品药品监督管理局的CFDA认证和美国FDA认证
4配置
4.1 三激光十色流式细胞仪主机：1套。
4.2 数据获取分析软件、淋巴细胞亚群自动分析软件：1套。
4.3 数据获取与处理系统：1套。
4.4 3千瓦净化稳压电源：1套。
4.5 5L清洗液：1桶。
4.6 5L关机液：1桶。
4.7 20L鞘液：1桶。
5安装调试及技术培训
5.1 合同签定后，卖方派有经验的技术人员无偿到买方现场进行场地等指导。
5.2 设备到货后，卖方按买方通知时间派有经验的技术人员到买方单位进行设备的安装、调试和试运行，直至设备正常运行。EmxvxOtOco
5.3 卖方免费负责对买方操作人员进行现场技术培训。
6 技术资料
6.1使用说明书，包括操作手册、软件手册等一套。
6.2附件、备用件的使用资料一套。
6.3 上述资料，如果有中文版本就提供中文版本，没有中文版本提供英文版本
7 质量保证
7.1 质量保证期
质量保证期为验收合格后1年。
7.2 质量保证期结束后，卖方有责任对买方的设备提供良好的维保服务，并在投标文件中说明指定维保代理人的情况。SixE2yXPq5
7.3售后服务要求
7.3.1 设备安装、调试、验收合格并做完设备全部功能项测试合格后，方可进入质量保证期。质量保证期内免费维修。质量保证期后提供终身优惠维修。6ewMyirQFL
7.3.2 质量保证期内的服务：在质量保证期内卖方提供4次保养服务，在国家法定工作日内开机使用合格率应达到95％以上，如果不能达到，按1:2加倍延长质量保证期内。卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。kavU42VRUs
7.3.3 质量保证期内的服务：卖方在接到买方维修电话后的24小时内到达用户现场维修或更换已损坏的零部件直至设备运转正常。y6v3ALoS89
7.3.4 卖方应在投标文件中声明终身售后服务承诺、售后服务的方式和能力。
7.3.5 卖方应在投标文件中声明北京地区或其他地区有技术服务及有经验的技术人员，有备件库，能够提供技术支持和培训。M2ub6vSTnP
8 包装和运输
卖方负责设备的包装，包装箱必须坚固，并做到防潮、密封，防水、防火、防锈和防震，同时要配齐必要的支架，便于以后的使用，并防止因运输而发生损坏，适于海、陆、空运输和整体吊装。包装材料必须符合中国进口动植物检验检疫的有关规定。0YujCfmUCw
二、原位杂交仪
技术参数：
1、每次可做12张切片，可储存40个程序
2、变性温度：50℃－99℃，0－30分钟
3、杂交温度：30℃－70℃，0－99小时
4、设定温度：30℃－99℃，0－99小时
5、加热时间：37℃－95℃，2分钟
6、冷却时间：95℃－45℃，5分钟
7、程序选择：变性与杂交；杂交；调节温度
8、杂交与变性可同时进行
9、操作简便，按键设置温度和时间，程序设置可保存
10、适用于荧光原位杂交（FISH）、原位杂交（ISH）和显色原位杂交（CISH）
三、核酸提取仪
1、主要用途：
1.1从多来源样本中全自动纯化基因组DNA
1.2从多来源样本中全自动纯化病毒总核酸及细菌DNA
1.3 从多来源样本中全自动纯化总RNA（包含miRNA）
1.4从动物样本中自动化提取病原微生物核酸
1.5 从粪便样本中自动化提取病原微生物核酸
2、工件条件: 温度：10-32℃，湿度：40-70%，电压：220-240V；
3、技术指标：
3.1纯化原理：基于硅胶膜真空抽滤法，并提供仪器原厂生产的硅胶膜纯化试剂盒
*3.2 样品通量和运行时间：一次运行不少于96个样本。纯化96个样本，用时1.5小时
*3.3 封闭式工作平台，配备原厂仪器外罩，配备原厂HEPA滤膜和UV紫外消毒装置，保护样品，避免交叉污染eUts8ZQVRd
3.4 移液通道数：大于等于8道，仅纯化8个样本时，无耗材浪费。
3.5活性炭滤器装置净化废气，保护操作人员安全；
*3.6机内提取过程中或者不需要使用枪头，如需使用枪头，用过的吸头被弃置于工作平台外部，保证工作环境中没有废弃物的堆积，避免交叉污染sQsAEJkW5T
3.7吸头可回放，重复使用
3.8仪器外罩打开时，纯化程序自动暂停，保护操作人员安全，再次关闭时继续原程序
3.9每纯化96个样本只需吸头1.5盒
3.10软件使用简易方便，用户可自行改编、优化运行程序
3.11数据可追溯性：可读取样本条形码信息，生成运行前/后报告
3.12电脑控制，可以编程，一个试剂盒针对不同应用有不同程序，可升级，可更新。
3.13原厂提供专门针对粪便中病原微生物核酸提取的试剂盒
3.14原厂提供专门针对多种动物来源病原体提取的试剂盒
#3.15 提取过程中的废液排出在工作台面以外。
4、基本配置：
4.1 主机一台
4.2 真空泵系统一套
4.3 电脑一台（要求配置高于等于8G内存，1t硬盘容量，处理器：Intel i7，独立显卡2G显存）GMsIasNXkA
4.4 核酸提取试剂耗材480份
5、技术资料
详细的英文操作指南
6、技术服务和培训
卖方须到买方提供的现场免费安装、调试设备，进行操作试验，直至运行正常，为仪器操作人员提供免费的操作及维护培训TIrRGchYzg
7、质量保证
测试验收合格后1年
8、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后服务承诺书（须针对本项目开具）。
四、生物安全柜质量检测仪（碘化钾法）
该测试设备适用于生物安全柜国际标准EN12469:2000及国家医药行业标准YY0569-2005中对生物安全柜的测试规程，用于Ⅰ类和Ⅱ类微生物安全柜防护参数的测试。该测试设备用来评价其防护水平和空间内的交叉污染，用来测试空间内有害物质的泄漏，以确保环境的安全。7EqZcWLZNX
1. 气溶胶发生系统
1.1 喷嘴真空压力2000Pa；
1.2 工作流量9min达20mL；
1.3 雾化转盘转速28000RPM；
1.4 喷嘴与转盘间距0.1mm；
1.5 KI溶液为15g/L的乙醇溶液，500mL/瓶
2. 采样系统
2.1 采样器采样流量100L/min；
2.2 滤膜孔径0.3μm，直径25mm；
2.3. 干燥用滤纸；
3. 显色计数系统；
3.1 55mm培养皿；
3.2 10倍放大镜；
3.3 1.0g/L的PaCl 0.1mol/L的盐酸溶液，500mL/瓶。
3.4 模拟手臂为63mm直径金属圆桶，模拟操作安全柜的操作者手臂。
3.5 支架，定位气溶胶发生器、采样器和模拟手臂。
3.6 为保障售后服务，国内计量系统用户不少于15家提供合同复印件。
3.7 由国内总代理商提供现场技术培训。
4、需提供制造厂商或总代理商针对本项目的授权书以及售后
五、高精度激光波长计
*1.波长范围：1-5um
2.被测激光类型：连续激光或者准连续激光（重频＞10MHz）
*3.绝对精度：± 0.2 ppm ± 0.0002 nm @ 1000 nm
± 0.002 cm-1 @ 10,000 cm-1
± 60 MHz @ 300,000 GHz
*4. 重复性：± 0.06 ppm (± 0.2 pm @ 3 μm)
*5.内置校准源：内置稳频HeNe激光器，无需返回原厂校准
6.显示位数：9位
7.显示单位：nm, μm, cm-1, GHz, THz
*8.最小输入功率：550 μW @1 μm 80 μW @3 μm) 750 μW @5 μm
9.输入方式：准直光输入
10.预热时间：小于15分钟
提供针对本项目的原厂商或总代理商授权及售后服务承诺书，加盖厂商或总代理商公章彩页。
六、电子万能材料试验机
主要参数及技术指标：
1.主机
1.1机架型式：双立柱台式(带预应力的单立柱滚珠丝杠和导杠结构)
1,2载荷能力：5kN
1.3试验速度：0.01－1000mm／min
1.4返回速度：1200 mm／min
1.5位置测量精度：+/-0.02mm
*1.6位置控制分辨率：≥0.06um
1.6速度控制精度：设定速度的+/-0.2％
*1.7载荷测量精度：从测力计满程至1/200量程，精度为+/-0.5％。
1.8应变测量精度：从引伸计满程至1/50量程，精度为+/-0.5％。
1.9横梁行程：≥1122mm
1.10试验空间：高）1193mm，宽）420mm
2.控制测量系统：
*2.1电气控制：试验机采用先进的32位全数字化控制。控制系统采用数字信号处理器（DSP）技术。
*2.2数据采集速率：计算机同步数据采集速率应≥500Hz。（即数字信号处理器(DSP)输出给计算机的4个通道有效数据, 为每个通道≥500Hz）lzq7IGf02E
2.3数据显示：4个实时显示通道。（位移、载荷、应变、时间）
2.5试验控制方式：速度控制、载荷控制、应变控制和应力控制。
*2.6载荷和应变测量：
1) 采用19位模/数转换器, 分辨率为1/500000(50万分之一)
2)测力计和引伸计的自动识别。
3)测力计和引伸计的自动标定和自动平衡。
*2.7 试验机接口采用以太网接口，能够有效克服接口松动及USB口供电电压不足引起的通讯故障，保障试验过程中试验机的可靠性。zvpgeqJ1hk
*3.试验软件：
3.1系统应采用最新版次的WINDOWS7中文界面, 可选用简体中文、英文等8种操作语言，在试验中可任意选择, 软件的试验方法应符合ASTM、ISO、GB等标准。并能进行材料的拉伸、压缩、弯曲、剥离等性能试验。NrpoJac3v1
3.2软件具有试验数据存储、检索和再分析等功能。
3.3试验报告可选择PDF格式。在屏幕上试验结果的数据和图形可直接粘贴到MS word 和MS Excel文档上. 原始试验数据可直接存入MS Excel 1nowfTG4KI
3.4软件具有拉伸、弯曲、压缩、模量、极值、平均值、标准偏差计算等功能。
*3.5软件应有各种试验方法的html格式中英文解释, 以便用户了解各种试验方法的定义和计算公式。
4.附件
4.1 1KN传感器一套
150％的过载保护。温度补赏0到50度。
*4.2 1kN气动拉伸夹具一套
双面平推气动夹具，配置脚踏开关进行夹持控制。
配置25mm×25mm平面夹面一套，采用磁力吸附方式装配夹面，更换方便。
4.3 空压机一套
技术参数:流量:20L/分,压力:0.6-0.8兆帕,电压:220V
4.4 电脑
CPUI7/8G RAM/1t硬盘/ DVD+/-RW /独立显卡2g显存/23宽屏显示器/W7中文专业系统（32位）fjnFLDa5Zo
*5.制造商资质
5.1制造商需有校准资质，不需要借助第三方即能够独立出具国际认可的计量校准证书，如符合ISO17025或能够符合CNAS认证要求。提供相关证书文件，以证明制造商能够在试验机使用年限内，始终具有保证试验机初始精度的能力。tfnNhnE6e5
5.2相关配置附件均应够在制造商中英文官方网站直接查询，并有相关技术说明。
5.3 制造商应提供中华人民共和国计量器具型式批准证书，以确保所提供产品符合国家相关法律法规规定。
流式细胞仪技术参数
一、流式细胞仪技术参数 1 工作条件： 1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ 1.2 环境温度:16-30℃ 1.3 湿度：20-80% 2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。 3 技术规格和参数 3.1 激发系统： 3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。 3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑 3.1.3 流动室规格：180x430μm 3.2 荧光收集和检测 3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。 3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。 *3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统 3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。 3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。 *3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。
3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、 525/50nm、 605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、 575/25nm、695/40nm、780/60 nm； 640nm 红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。 *3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。 *3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。 3.4 变异系数：全峰宽CV<3% *3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。 3.6 最小样本量：≤30ul 3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm 3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。 3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。 *3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。 3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。 3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。
CytoFLEX流式细胞分析仪快速入门
? 2015 Beckman Coulter, Inc. 1 / 16 B49009AC 2015年2月 CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 有关详细说明，请参阅 CytoFLEX 流式细胞分析仪使用说明。仅限研究用。 不用于诊断程序。 工作流程 启动 仪器准备 1.确保所有系统连接正确连接。 启动 ? QC ? 创建实验 ? 调节仪器设置和 补偿 ? 记录数据 ? 关闭 1.显示器 2.鼠标 3.键盘 4.计算机 5.细胞分析仪 6.流体容器托架
2 / 16 启动 3. 验证 USB 配置密钥已连接至 USB 端口。 注意 可能会出现仪器损坏。 从流体容器托架取下鞘液容器，并且远离仪器进行充注，以防止鞘液溢出损坏仪器电路。 4.从流体容器托架取下鞘液容器，并用提供的鞘液填充鞘液容器。 5.如有必要，拆下右侧盖子，并填充带有 1 部分 Contrad 70 和 1 部分 DI 水混合的深度清 洁溶液。 警告 漂白剂具有化学伤害危险。 为避免接触漂白剂，请使用包括防护眼镜、手套和适当的实验室服装在内的屏障保护。 使用化学药品前，请参阅有关化学品暴露的安全数据表以了解详细信息。 6.如有必要，清空废液容器。 将 400 mL 5% 至 6% 的漂白剂添加至废液容器。 仪器启动 1.打开仪器后盖上的电源开关，它位于电源电缆正上方。 2.登录计算机，双-击 以启动 CytExpert。 a.确保靠近显示器左下方的状态栏上的连接图标为绿色。 b.若图标不是绿色，确保仪器 USB 牢固地连接至计算机，并重新启动计算机。3.从“细胞分析仪”菜单中选择系统启动程序，并遵循软件提示。
流式细胞仪入门
流式细胞仪入门 ----- 秦华 译
目录 前言 第1章综述 第2章液流系统 第3章散射光信号及荧光信号 3.1 散射光信号 3.2 荧光信号 第4章光电系统 4.1 光平台 4.2 光学滤片 4.3 信号探测器 4.4 阀值 第5章数据分析 5.1 数据采集及显示 5.2 设门 5.3 细胞亚群的数据分析 5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析第6章分选 6.1 分选 第7章激光器及光路校正 7.1 激光器的工作原理 7.2 光路校正 第8章习题答案
序论 学习仪器的最好方法是操作仪器，然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。 本书介绍了流式细胞仪的基本知识，并从不同角度详尽阐述了各种台式机（FACScan TM，FACSort TM，FACSCalibur TM，和BD LSR）与大型机（FACS Vantage TM，FACSVantage TM SE，和FACStar PLUSTM）之间的不同，且附习题及答案。阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。
第一章综述 流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小，密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。通过光电系统记录细胞的散射光信号和荧光信号可得知细胞特性。 流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统；光路系统以及电系统。其作用如下： z液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区。 z光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片产生光信号，并传送到相应的探测器。 z电系统：把光信号转换为电信号。对于有分选装置的仪器，电系统可初始化分选条件。 在流式细胞仪中，细胞被传送到液流中的激光照射区。任何存在于悬液中的直径为0.2-150微米的粒子或细胞都适用于流式分析。在实际工作中，用实体组织进行流式细胞分析往往是不可能的，分析之前必须对其进行分解。被液滴包绕的粒子称为细胞液柱，当粒子经过激光照射区时，通过激光激发产生散射光。含有荧光的粒子就会表现出其荧光特性。散射光和荧光由光路系统（相应的透镜，滤片和探测器）收集。分光器和滤光片引导散射光和荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号。 单个粒子通过其表现出的光散射和荧光属性，通过列表模式（List mode）完成数据采集，并对样本中的细胞亚群进行分析。
流式细胞仪的原理及应用
山西大学研究生学位课程论文（2013 ---- 2014 学年第一学期） 学院（中心、所）：生物技术研究所 专业名称：微生物学 课程名称： 论文题目：流式细胞仪的原理及其应用 授课教师（职称）：崔晓东 研究生姓名：常姣 年级：研一 学号：201323001003 成绩： 评阅日期： 山西大学研究生学院 年月日
流式细胞仪的原理及其应用 姓名常姣专业微生物学 摘要本文简要论述了流式细胞仪( flowcyt ometry, FCM) 的工作原理, 并对其某些科学领域研究中的应用进行阐述, 包括在生物学、免疫学、临床学中的研究应用。 关键词 FMC；生物学；免疫学；临床学 流式细胞仪( fl o w c y to me tr y, F CM) 研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。近代流式细胞仪，由于单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛和重要，尤其在生物学中对细胞周期的动力学分析、细胞因子、细胞凋亡、信号传导、R N A / D N A 的分析、细胞表面受体及特异性抗原的分析等领域发挥着独特作用，具有操作简单、分析精确、重复性好、费用低廉、分析速度快等优点。 1流式细胞仪的构成及工作原理 流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液, 经荧光染料染色后加入样品管, 在一定气体压力下待测样品被压入流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列, 依次通过检测区, 被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后, 产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管(PMT) 接收。散射光分为前向角散射(forwardscatter, FSC) 和侧向角散射(sidescatter, SSC) 。前者主要反映被测细胞的大小, 后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等, 以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后, 经光电倍增管接收后转为电信号, 再经数/模转换器转换为可被计算机识别的数学信号, 以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来[1,2]。 流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选, 它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体, 可以产生高频振荡, 使液流断裂为均匀的液滴, 待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷, 当带电液滴通过电场, 便会在电场的作用下发生偏转, 然后落入相应的收集器中, 从而实现细胞分选[2]。 2流式细胞仪的应用 流式细胞术的应用，简单用一句话概括就是，凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测。其中细胞生物学领域是流式细胞术在基础研究中应用范围最广泛的领域，因为最初这个技术就是为此目的而设计的。 2.1流式细胞仪在生物学中的应用 流式细胞仪在生物学中的应用越来越广泛,如在细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、神经生物学、微生物学、分子免役学、植物学等等许多生物学基础学科的应用和在细胞凋亡、细胞周期调控、细胞因子及细胞分型等研究中的应用[3]。 2.1.1 对凋亡细胞的分析 细胞凋亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象, 在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持
自己总结：流式细胞仪的原理和用途
流式细胞仪（Flow Cytometry） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年，Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置测量的设想。1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。近20年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程中的应用，非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是13年前出版的，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统
最详细的流式细胞仪实验方法
流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病
第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或
流式细胞仪检测细胞凋亡
流式细胞仪检测细胞凋亡:PI单染色法 基本原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面： 1. 细胞核的改变：由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其DNA可染性降低。许多学者把这种DNA可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。 2. 光散射特性：凋亡细胞形态上的改变影响它们的光散射特性。在流式细胞仪上，前散射光与细胞的大小有关，而侧散射光反映的是光在细胞内的折射作用，与细胞内的颗粒多少有关。在细胞凋亡时，细胞固缩，体积变小，故前散射光降低，这一特性往往被认为是凋亡细胞的特点之一。此外细胞凋亡时由于染色体降解，核破裂形成，细胞内颗粒往往增多，故凋亡细胞侧散射光常增加。细胞坏死时，由于细胞肿胀，其前散射光增大；侧散射光在细胞坏死时也增大，因此可根据前散射光和侧散射光区别凋亡细胞和坏死细胞。但需要注意的是，根据前散射光和侧散射光判断凋亡细胞的可靠性受被检测细胞形态上的均一性和核胞浆比率影响很大。因此在某些淋巴细胞凋亡中，用光散射特性检测凋亡的可靠性较好，而在肿瘤细胞凋亡中，其可靠性就较差。根据光散射特性检测凋亡细胞最主要的优点是可以将光散射特性与细胞的表面免疫荧光分析结合起来，用以区别经这些特殊处理发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。也可用于活细胞的分类。 试剂与仪器 PBS溶液； PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存。 70%乙醇 400目筛网 流式细胞仪 实验步骤 1. 收集细胞｛数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500 ~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。 2. 3ml PBS洗涤1次。 3. 离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。 4. 离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。 5. 400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去PBS。 6. 用1ml PI染液染色，4℃避光30min。 7. 流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。 8. 结果判断：在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。 注意事项 细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
流式细胞仪分析技术及应用题库1-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]关于液流系统的鞘液，下述哪项是不正确的（）. A.鞘液是辅助样本作正常检测的基质液 B.鞘液是用来与样本作对比的 C.鞘液是包裹在样本流周围 D.使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确性 E.防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞 鞘液是辅助样本作正常检测的基质液，其主要作用是包裹在样本流周围，使样本保持处于喷嘴中心位置，保证检测精确，同时又防止样本流细胞靠近喷孔而形成堵塞。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]分选速度与细胞悬液中分选细胞的下述哪项直接相关（）. A.细胞含量 B.细胞性质 C.细胞大小 D.有否胞膜 E.单核或多核 分选速度与细胞悬液中分选细胞的细胞含量直接相关。一般分析速度为5000～10000；分选速度掌握在1000以下。
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的主要组成不包括（）. A.A.液流系统 B.光路系统 C.抗原抗体系统 D.信号测量 E.细胞分选 (天津11选5 https://www.360docs.net/doc/8a13559923.html,)
问题： [单选,A4型题,A3A4型题]流式细胞术是一种对单细胞或其他生物粒子膜表面以及内部的化学成分，进行定量分析和分选的检测技术，它可以高速分析上万个细胞，并能从一个细胞中测得多个参数，是目前最先进的细胞定量分析技术。流式细胞仪的技术特点不包括（）. A.A.采用鞘流原理 B.以激光作激发光源 C.使用散射光检测 D.检测荧光信号 E.采用电阻抗及化学染色原理
双激光流式细胞仪参数
双激光流式细胞仪参数 一、设备名称、技术参数及功能要求： 1.设备名称 分析型流式细胞仪 2.设备数量：1套 整套设备应包括：液流系统、光学系统、电子系统、数据采集系统，电脑工作站以及分析软件。 3.设备功能 能够进行细胞周期、细胞凋亡、细胞浓度、细胞绝对计数、免疫分型、药物筛选、抗体测定、细胞活性鉴定等细胞全方位分析。 4.工作条件 4.1 电源：220V, 50Hz交流电 4.2 环境温度：5- 50℃ 4.3 相对湿度：30 % -90 % 4.4 运行：可连续运行。 5.主要技术和性能规格要求 5.1技术指标 5.1.1激光光源：双激光，488nm蓝色固态激光器，640nm红色固 态激光器，同时根据用户需要可以定制375nm、405nm、561nm、730nm 激光器。 5.1.3液流系统：采用流体动力学聚焦技术。
5.1.4液流动力系统：微处理器精确控制的双蠕动泵驱动系统 5.1.5荧光检测通道：FL1：533/30nm；FL2：585/40nm；FL3：>670nm；FL4：675/25nm 5.1.6荧光检测系统，光路稳定，即使搬运也无需调整光路 *5.1.7数据数字采集：不用调电压即可实现一个图上6个数量级的数据动态范围同时显示。信号处理系统:24-bit，并且具有1600万道的数值化数据解析度。 5.1.8样本分析速度：≥10,000事件/秒。 *5.1.9流动室直径：≥200um 5.1.10荧光分辨率:<3% CV 5.1.11荧光线性：2±0.05% (CEN) *5.1.12检测器必须为光电倍增管（PMT） 5.1.13散射光分辨率：可成功分辩人外周血中的粒、单、淋细胞5.1.14单个样本事件收集数：≥100万事件/孔。 *5.1.15细胞流速调节模式，共4种速度模式：低速(14μl/min)；中速(35μl/min)；快速(66μl/min)；用户自定义，样品流速设定：10-100μl/min，可在此范围内自由选择。 5.1.16推荐鞘液：经0.2um过滤器过滤的纯水，无需专门鞘液。 5.1.17光路调校：固定免调校光路设计。 5.1.18管路自动清洗功能：具有，维护方便。 5.1.19试剂与耗材：完全开放,使用通用试剂和耗材,可以使用各种类型的管子，至少能用12x75mm、5ml、2ml、1.5ml、0.5m和PCR
流式细胞仪工作原理与应用范围
流式细胞仪工作原理与应用范围 2008-11-01 10:30 流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体，是一种非常先进的检测仪器，被誉为试验室的“CT”。 流式细胞术（Flow CytoMeter，FCM）是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。 工作原理 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。 这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，液可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。 检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 应用范围 可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开
流式细胞仪主要技术参数
流式细胞仪主要技术参数 1.光学系统： 1.1*激光配置:配置488nm和638nm两根全固态激光器，激光功率均大于等于 50mW以上； 1.2检测参数：可同时激发和检测6色荧光. 1.3光路设计：固定校准的光路设计，智能监控确保激光稳定工作。光学滤光 片可由用户根据实际应用自行更换，无需专业人员调校； 1.4采用专利的FAPD（Fiber Array Photo Detector）能够达到5倍于传统高 性能PMT的光电转换效率； 1.5检测器电压可以调节，以适应不同特性样品的检测，提高实验灵活性； 1.6光信号收集系统, 能将大视野范围内的光信号准确地传递到接收光路中， 最多可以支持到7个空间独立的激光同时激发的信号收集； 1.7*系统具备进一步升级的能力，最高可升级至3激光13色。 2.分析性能： 2.1*颗粒检测能力：可准确区分0.1um、0.2um和0.3um的细胞或微粒； 2.2*荧光灵敏度：FITC的荧光灵敏度少于30 MESF，PE的荧光灵敏度少于10 MESF； 2.3荧光分辨率：CV<3%（G0/G1期最高峰）； 2.4无需微球的绝对计数功能，在检测的同时即可自动计算样本浓度，结果准 确。 3.电子系统： 3.1信号处理精度：24比特原始信息量； 3.2高达107的线性动态范围，可以将强信号和弱信号都完全显示在一张图上；3.3*支持多色荧光信号共同采集，信号获取速度（上样速度）达到30,000个/ 秒； 3.4荧光补偿：全矩阵荧光补偿，可脱机补偿，离线分析； 4.液路系统： 4.1半自动化上样系统，具有自动混匀和自动清洗功能，降低样本间交叉污染； 4.2液流系统日常维护简单、清洗简便，自带开关机程序；
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell） 产品型号：Cell Lab Quanta SC 当前价格：0.00元 产品数量：0 新旧程度：全新 有效期至：0000-00-00 所在地： 产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等 详细信息 仪器简介： T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19, κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。 抗体的质量控制是实验的关键环节。抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。对这一些，一些商业化的公司对常用单抗的检验均推出了一系列质控物。如BECKMAN COULTER公司的Cyto-Trol、Immuno-Trol等（见表一）。 （三）染色方法 细胞表面染色：大多数免疫表型分析均采用此方法。但由于许多抗原也同时存在细胞内，所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异性。表面标记又分溶血前标记和溶血后标记。若红细胞对标记有影响或血浆成分对标记有影响的，适合溶血后标记，但要注意溶血剂膜抗原的影响，所以，溶血剂一般不含固定剂。如免疫球蛋白轻链检测和阵发性血红蛋白尿的检测等。 细胞内染色：有些胞内抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD79a 。胞内染色的关键是使细胞膜通透，把抗体或核酸染料导入胞内而不影响细胞骨架的完整性。还要保证固定和透膜的步骤不影响有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合。某些适用于胞内染色的试剂可能不适于表面标记分析。通常胞内染色不能与细胞活性的检测同时进行，除非用EMA的方法。对于胞内染色，所用的荧光素应足够小到能穿透到胞膜内。对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活细胞染料，无需固定或透膜。 胞膜和胞内染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。 三、数据的获取和分析 流式细胞仪数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。由于流式细胞仪是基于对散射光信号和荧光信号进行分析的仪器，因此，仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定直接影响结果。同型对照的设定尤为重要。同型对照是指与单抗种宿来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物的免疫球蛋白。同时考虑浓度、F/P值尽量相同，这样阳性阈值的界定才比较准确，特别是对于弱表达抗原阳性率的测定。而DNA倍体分析中参照物的设定非常重要，一般鸡红细胞作为内参照物。为了结果的可靠性，对获取的细胞量至少应在10000-20000个。但不同的实验目的对于获取的细胞量要求一般是不一样的，如DNA倍体分析，至少应获取10000个细胞；微小残留病灶（MRD）的检测，要求达到10-4数量级水平，则应至少分析100000个细胞；干细胞移植中CD34的检测，应至少获取100个CD34阳性细胞或75000个有核细胞。 对于获取的数据，应保存在listmode文件中，便于分析。设门（gating）对于流式数据分析至关重要。设门实际就是确定分析区域。在DNA倍体分析中，设门实际就是圈定
BDFACSCantoII流式细胞仪参数
流式细胞仪参数 一、总体要求 1 ,仪器为全新整机进口产品，用于基础医学研究兼顾临床检测分析。 ★2，仪器通过中国SFDA认证，提供注册信息，以符合临床的需要。 ★3，江西省内至少有5家同等型号的用户，以方便学术和临床交流，江西省内有制作厂商的售后服务工程师 二、技术参数 1；光学系统 ★( 1)，标准配置两根激光器同时激发6色及以上荧光，第一激光器：488nm蓝色激光器；第二激光器：633n m红色激光器； ★( 2)，可以升级配置405nm紫色激光器 (3)，荧光信号收集方式：采用八角形和三角形的全反射光路设计，先收集波长最长的弱信号(如PE-Cy7)，再收集波长最短的荧光信号(如FITC)，以保证是最高效的荧光信号收集。 (4)，光信号通过光导纤维传输，非空气传输模式，保证光信号在传导过程中的最小能量损失。 (5)，激光光路固化，无需人工调试校正光路 (6)，多激光配置采用空间立体激发，保证多激光同时激发简便易行 (7)，检测方式：180 X430g m矩形石英流动检测室 (8)，仪器具有激光功率监控系统，在操作界面可以随时监控激光的功率和状态是否处于正常情况，确保激光器处于最佳的状态。| 2;检测分析系统 ★( 1)，荧光灵敏度：提供SFDA检测报告，实测值FITCV12MESF PE<11MESF (2 )，样本交叉污染率<0.1% (3)，最小样本量W 50 g L，适合微量样本和稀有样本的检测(如婴幼儿血液)。 ★( 4)，样本流速范围：10-120g L/分钟 ★( 5)，最大检测颗粒直径为50 (6)，具备单管手动进样和全自动进样两种模式，两种模式独立并存，并可自由切换。 3;信号处理系统 ★( 1),电子系统采用高达32比特的浮点运算，电子死时间为0，以最大程度保证数据检测精度和分辨率。 (2)，最大数据储存量超过10的20次方，确保检测数据的完整和准确。
流式细胞仪分析技术及应用
第二十二章流式细胞仪分析技术及应用 本章要点 1.流式细胞仪的分析及分选原理 2.数据的显示与分析 3.流式细胞仪免疫分析的技术要求 4.流式细胞术在免疫学检查中的应用 概述：流式细胞术（FCM）是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确地对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。流式细胞仪的发展综合了激光技术、计算机技术、显微荧光光度测定技术、流体喷射技术、分子生物学和免疫学等多门学科的知识。流式细胞仪：是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。 第一节流式细胞仪的分析及分选原理 流式细胞计的基本结构流式细胞计主要由四部分组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。 一、工作原理 （一）基本组成结构 1.流动室和液流系统：流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液，一般限制液流速度<10m／s。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体，受到振荡信号可发生振动。
2.激光源和光学系统：经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的光源有弧光灯和激光；激光器又以氩离子激光器为普遍，也有配合氪离子激光器或染料激光器。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。氩离子激光器的发射光谱中，绿光514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80%；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料做为激光器泵浦的一种成份，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodamine 6G 水溶液的染料激光器，则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。为使细胞得到均匀照射，并提高分辨率，照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经透镜会聚。色散棱镜用来选择激光的波长，调整反射镜的角度使调谐到所需要的波长λ，为了进一步使检测的发射荧光更强，并提高荧光讯号的信噪比，在光路中还使用了多种滤片。带阻或带通滤片是有选择性地使某一滤长区段的光线滤除或通过。例如使用525nm带通滤片只允许FITC（异硫氰荧光素）发射的525nm绿光通过。长波通过二向色性反射镜只允许某一波长以上的光线通过而将此波长以下的另一特定波长的光线反射。在免疫分析中常要同时探测两种以上的波长的荧光信号，就采用二向色性反射镜，或二向色性分光器，来有效地将各种荧光分开。
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤
流式细胞仪检测细胞周期操作步骤 取对数生长期的A549细胞，按1×106 cells/mL以1mL接种于 100mm培养皿内 ↓ 24h后，进行所需的处理（比如加药,照射） ↓ 特定时间后终止培养，进行下一步的实验 ↓ 收集原培养液，洗后的PBS和消化后的细胞，将三者混匀放入15ml 离心管中 ↓ 1000rpm离心5min（短时低速离心） ↓ 弃上清，用1.5ml预冷PBS，1000rpm离心5min后去除PBS和细胞 悬液内的细胞碎片 ↓ 加入1.5ml预冷PBS,在涡旋状态下加入3.5ml无水乙醇，混匀后，于4℃固定30min,或-20℃长期保存。 ↓ 1000r/min,离心5min ↓
将乙醇吸除，加PBS清洗混匀 ↓ 1000r/min,5min再离心一遍，将残留在细胞上的乙醇除去 ↓ 吸除离心管内PBS，加入200ul PBS和2ul的RNA酶（0.25mg/ml）(37℃下孵育30min) ↓ 加入0.5ml的50ug/ml的PI溶液室温下避光染色30min ↓ 将离心管内的细胞过滤(300um尼龙网膜)至含有PBS的EP管中（PI 具有很强的粘附性，容易使细胞聚团），标记EP管 ↓ 提前一天网上预约 ↓ 开机（先开仪器后开软件） ↓ 流式细胞仪的结构一般分为5部分：①流动室及液流驱动系统；②激光光源及光束成形系统；③光学系统；④信号检测、存贮、显示、分析系统；⑤细胞分选系统。 ↓ 检测前先涡旋使细胞混匀悬浮呈单个细胞，然后插入流式细胞仪上
↓ 流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱 ↓ 液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm激 发光源） ↓ 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞DNA分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例） ↓ 在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出 结果分析——Modfit软件分析
流式细胞仪主要技术参数
流式细胞仪主要技术参数： 1.光学系统： 1.1激光器配置:配置488nm ,638nm和405nm固体激光器，功率均≥50mw，激光功率可由 软件实时监控，空间独立排列 1.2▲检测通道设置：488nm激光可激发五色荧光，638nm激光可激发三色荧光， 405nm 激光可激发五色荧光，共13色荧光通道，以及前向角散射光检测通道（FSC）和侧向角散射光检测通道(SSC)。 1.3光路设计：固定校准的光路设计，每根激光间信号独立传播。用户可自行安装开机， 无需专业人员调校 1.4采用最新的的FAPD（Fiber Array Photo Detector）检测器，能够达到5倍于传统高 性能PMT的光电转换效率 2.分析性能： 2.1 ▲荧光灵敏度：FITC的荧光灵敏度≤30 MESF，PE的荧光灵敏度≤10 MESF 2.2 荧光分辨率：CV≤2%（G0/G1期最高峰） 3.电子系统： 3.1 信号处理精度：24比特（16,777,21道）数字信号精度 3.2 高达107的线性动态范围，可以将高信号和低信号都完全显示在一张图上 3.3 ▲支持多色荧光信号共同采集，15个参数检测时，信号获取速度（上样速度）达到30,000个/秒以上 4.液路系统： 4.1自动化上样系统，具有自动混匀和内外管壁自动清洗功能，降低样本间交叉污染 4.2可支持多种常用的进样管，如5 mL的聚苯乙烯和聚丙烯流式管,1.5 mL 和 2 mL EP管4.3内置自动化的液流系统维护程序，例如开关机程序、启动（初始化）、每日清洗、排气 泡、反冲等全部由自动软件控制。 5.软件功能： 5.1操作系统：Window 7或以上版本 5.2▲支持中英文操作界面，全部采用图形化参数调节 5.3全自动质控程序：内置的质控程序自动检测仪器配置，激光器功率、激光延迟、每个 通道的rCV值、增益值和平均荧光强度等
流式细胞术原理及功能介绍
流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B- D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能 ,多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理 流动室及液流驱动系统 流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信 号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 流动室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide) 四. 流式细胞仪主要构造和工作原理 激光光源及光束形成系统