铵态氮测量方法 (1)

铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）

1）方法原理

2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

2）试剂

（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O, 化学纯）7.06g、磷酸钠

（Na3PO4•12H2O, 化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O, 化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL 混合液中加入10 mol•L-1氢氧化钠0.5mL。

（5）2.5µg•mL –1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯]0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL –1的标准溶液备用。

3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。

4）分析步骤

（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。

（2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2µg～25µg)放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。

（3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，

同（2）步骤进行比色测定。

5）结果计算

土壤中NH4+—（N）含量（mg•kg-1）=

式中：ρ——显色液铵态氮的质量浓度(µg•mL –1)；

V——显色液的体积(mL)；

ts——分取倍数；

m——样品质量（g）。

6）注释

注1. 显色后在20℃左右放置1h,再加入掩蔽剂.过早加入会使显色反应很慢,蓝色偏弱;加入过晚,则生成的氢氧化物沉淀可能老

化而不易溶解.

硝态氮测定方法（双波长紫外分光光度法）

实验原理：利用硝酸根离子在220 nm处有较强的紫外吸收这一特性,定量分析了土壤浸提液中的NO3-. 溶解的有机物在210 nm和275 nm处均有吸收,而NO3-在275 nm处没有吸收,因此在275 nm 波长处做另一测量,以校正硝酸盐值. 最低检出浓度0.004 mg/ kg ,测定上限为4.000 mg/ kg ,适合高浓度土样浸提液的高倍稀释.

试剂：CaSO4 (分析纯) , 量浓度为1 mol/ L的盐酸(优级纯) 溶液, 质量浓度为100μg/ mL的硝酸盐氮标准贮备液, 质量浓度为25μg/ mL的硝酸盐氮标准使用液.

实验方法

标准曲线的绘制：

分别取硝酸盐氮标准使用液0.0 ,0.5 ,1.0 ,2.0 ,3.0 ,4.0μg/ mL 置于50 mL 比色管中, 各管中加入1.0 mL 1 mol的盐酸溶液,摇匀,用

紫外分光光度计在210 nm和275 nm处,用1 cm石英比色皿测定吸光度. 以ΔA= A210-kA275的计算方法求得校正吸光度. （系数k 的确定方法分别准确移取10μg/ mL 硝酸盐氮使用液2.00mL 、土壤浸提液2.00 mL 置于各自的50 mL 比色管中, 用二次蒸馏水

定容, 摇匀, 用1 cm 的石英比色皿,以二次蒸馏水作参比, 在紫外- 可见分光光度计上测定吸光值。土壤样品、硝酸盐氮在210 nm 处有最大吸收, 在275 nm 处吸收较弱,选取210 nm、275 nm 为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮,根据A210 - KA275 =0 的公式进行计算, 求得K的平均值。

土壤样品测定：称取10.00 g新鲜土样,分别置于150 mL具塞三角瓶,在三角瓶内加0.2gCaSO4 ,加100 mL二次蒸馏水,于振荡器上振荡15 min ,放置30 min后,倾出上清液,用中速或慢速无氮定量滤纸过滤. 吸取滤液50.00 mL (视NO3- N 的浓度而定) 置于50 mL 比色管中, 用水准确稀释至刻度, 加1.0 mL 1 mol的盐酸溶液, 测量吸光度. 结果计算:c =c0*V总*D*1000/M*103

式中: c 为NO3-N 浓度(mg/ kg) ; c0 为由曲线查得测定液质量浓度(μg/ mL) ; v总为比色测定液总体积(mL)此处为50ml ;D 为浸提液分取倍数，若不稀释D=1 ;M 为试样质量(g) .1000与103为单位换算数量级。