液相色谱手册-液相色谱柱与分析方法指南

84 词汇表
115
• 固相萃取
85
索引
142
• 液-液萃取(LLE)
86
• 支持液膜萃取(SLE)
87 安捷伦产品和
• QuEChERS
88 订购信息订购信息
148
使用高纯度级别溶剂的重要性
89
UHPLC 的特殊考虑
89
3
前言
从何说起呢？液相色谱是一个庞大而复杂的话题，但也 是一个我们永不会失去兴趣的话题。
液相色谱手册
液相色谱柱与方法开发指南
液相色谱手册
液相色谱柱与方法开发指南
目录
前言
4 性能的关键：
色谱的基本概念
柱效 (N) 保留因子 (k) 选择性或分离因子 (α) 分离度 (Rs) 压力 van Deemter 曲线 梯度方程
HPLC 柱的选择
5 色谱柱的配置和设置
26
6 减少柱外体积的重要性
23 反相色谱流动相的选择
54
• 流动相操作
54
• 流动相和流动相改性剂问题排查
54
2
• 流动相混合
55 在线过滤器
90
• 流动相脱气
55
• 低体积在线过滤器
90
用流动相改性剂控制 pH
55 保护柱
91
• UV 检测器常用的缓冲液
57 溶剂饱和柱
91
• LC/MS 的考虑因素
58 色谱柱入口筛板
77 美国药典指定填料
102
• HILIC
77 溶剂相溶性
108
• 正相色谱
79 流动相改性剂的 UV 截止波长
111
• 离子交换色谱
81 固相萃取吸附剂
112
• 凝胶渗透色谱/体积排阻色谱
82 SPE 吸附剂条件
113
色谱结果的保护
83 其它推荐的读物
114
样品制备
84 其它安捷伦资源
114
• 样品过滤
选择性 (C-B) α = k2/k1 α = kc/kb = 5.2/3.6 = 1.44 α = 1.44
选择性 (B-A) α = k2/k1 α = kb/ka = 3.6/1.5 = 2.4 α = 2.4
91
• 流动相改性剂问题排查
60 色谱柱保护和保存
91
• 问题排查实例：基线漂移
60
• 最大限度延长柱寿命
91
• 问题排查实例：高 pH 造成的峰展宽和
• 保存注意事项
93
峰分裂
62
• 疏通色谱柱
93
• 问题排查实例：流动相改性剂与选择性 62 色谱柱变坏时的快速检查
93
优化反相色谱条件
64 确保方法在全球范围内都重现
图 1. 柱效、保留因子和分离度的色谱示意图
柱效 N = 16 (tR/wt)2 对于色谱峰 B，16 (4.5 分钟/0.9 分钟) 2 = 400 塔板数 k = (tR-t0)/t0
保留 kA = (2.5 - 1)/1 = 1.5 kB = (4.6 - 1)/1 = 3.6 kC = (6.2 - 1)/1 = 5.2
4
色谱的基本概念
我们都还记得在学校里学习数学的感觉，总是想知道怎 么把它用到实际生活中去。科学家们要比专业人员学习 更多的数学，本章将告诉我们其中的原因。
这里，我们将简要概述一下色谱概念所涉及的公式和理论。对这些概念的理解将帮助您获得最好的结果，并 在遇到问题时进行排查。 我们将从以下的性能基本概念开始： • 柱效 • 保留 • 选择性 • 分离度 • 压力 这些都是理解如何优化结果、成功开发方法的关键。 我们还将探讨一些较复杂的概念： • van Deemter 曲线 • 梯度方程 这两项内容对方法开发也很重要。
94
• 等度优化
65
• 提高方法的耐用性
94
• 梯度优化
68
• 有关驻留体积的提示
95
用于反相色谱的聚合物色谱柱
70
快速故障排查指南
96
反相色谱等度方法开发步骤指南
71
从常规柱向高效柱进行方法转移的技巧
73 有效排查故障的要点
96
自动化方法开发工具
75 有用的参考资料
102
其它 HPLC 模式的方法开发
27
7 使用良好的连接接头
28
7
• 进行良好的连接
29
8 进样
31
设置数据采集速率
32
9
驻留体积及其对色谱的影响
33
10
• 测量系统的驻留体积
35
10
• 评估驻留体积的影响
37
12
• 驻留体积与分析时间
38
HPLC 模式
13 螯合物
38
色谱柱选择的基本信息：常规柱
14 pH 与流动相改性剂
39
• 高效液相色谱 (HPLC) 柱
45
• 生物表征柱
19
色谱柱的特性
20 方法开发
46
• 硅胶
20 方法开发：从何处入手
47
• 键合相
20
• 模式选择
47
• 聚合物
20
• 选择色谱柱和填料规格
50
ห้องสมุดไป่ตู้
• 孔径
21
• 选择固定相
51
• 粒径
21 反相色谱的方法开发
51
• 色谱柱规格
22 反相色谱固定相的选择
51
卡套柱系统
5
柱效 (N) 柱效用于比较不同色谱柱的性能。柱效可能是描述色谱柱性能引用频率最高的参数，以理论塔板数 N 表示。
柱效
保留时间
峰底宽
方程 1. 柱效方程 保留时间
半峰宽
方程 2. 计算柱效的变换方程
塔板数高的色谱柱柱效更高。理论塔板数高的色谱柱与理论塔板数低的色谱柱相比，在给定保留时间内的色 谱峰更窄。
遍及世界各地的色谱工作者正在使用 HPLC 技术，确保我们食物和水的安全、开发挽救生命的药物、保护我 们的环境、保卫公共健康，而这仅仅是其应用的一角。您对色谱技术了解得越多，您能应用这一神奇技术所 能做的工作就越多。 如今，有更多的色谱柱和填料供您选择，以适应日益广泛的应用需求。安捷伦现在有 2000 多种色谱柱可供选 择，覆盖了最广泛的应用和条件。这就增加了根据您的需要选择最适用色谱柱的机会。 帮助您得到最好的液相色谱结果是我们承诺的一部分，因此，我们编制了这本液相色谱柱选择手册，其中包 含了大量的提示和技巧，让您的工作更轻松、更高效。另外，我们还以 40 多年积累的经验为基础，为您提 供色谱柱和接头日常使用中常见的问题提供建议。本指南涵盖了液相色谱中的主要色谱柱，重点是反相高效 液相色谱。 如何使用本指南： • 为便于查询，各章节有不同颜色标记。 • 附加的词汇表非常全面。虽然限于篇幅，我们没能收录本书中的每个词汇术语，但仍不失为良好的资源。 • 虽然本书也涉及了其它技术，但重点是反相 HPLC。
15 梯度操作
40
• UHPLC 柱
16 优化色谱柱的再平衡
41
• 表面多孔填料柱
16 色谱柱老化
43
• LC/MS 柱
17
• 键合相流失
43
• 快速色谱/纯化柱
18 清洗反相硅胶柱
43
• 凝胶渗透色谱（GPC）柱、体积排阻
清洗正相硅胶柱
45
色谱（SEC）柱和凝胶过滤色谱（GFC）柱 19 清洗反相聚合物柱