革兰氏阴性杆菌-大肠杆菌介绍详解

底层黄色，斜
产酸产气
面保持红色
能产硫化氢菌株
因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色
对照 假单胞菌 志贺氏菌 沙门氏菌 大肠杆菌 变形杆菌 三糖铁培养基
吲哚试验
甲基红试验 V-P试验
IMViC试验
枸橼酸盐试验
三、大肠杆菌的基本结构
❖ (一)细胞壁 ❖ 大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。 ❖ 外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、
作用，有抵抗抗体和补体的作用 。
❖ （二）所致疾病 ❖ 1．肠道外感染：多为内源性感染，以泌尿系感染为
主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌 性脑膜炎 。
❖ 2．急性腹泻 ❖ （1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC） ❖ （2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC） ❖ （3）肠致病性大肠杆菌（EPEC） ❖ （4）肠出血性大肠杆菌（EHEC） ❖ （5）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC ） ❖ （6）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）
大肠杆菌
大肠杆菌的历史
❖ 肠杆菌科,为革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、血清 学试验、DNA同源性研究，肠杆菌科至少包括28个 菌属，110个以上的菌种。
❖ 埃希菌属（Escherichia）中最重要的是大肠埃希菌 (E. coli) ，常称为大肠杆菌。
❖ 大肠杆菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌 和人及动物的病原菌。多数是人和动物肠道正常菌 群的重要成员。
1g
硫酸亚铁
0.2g
蒸馏水
1000mL
硫代硫酸钠 0.2g
琼脂
1 2g
2%酚红溶液 12.5ml
❖ ②原理
❖ 测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及 能否产生硫化氢。可鉴别肠道菌。
葡萄糖 乳糖 蔗糖 硫酸亚铁
大肠杆菌 沙门菌
发酵葡萄糖和乳糖；底层和斜面均呈
大量产酸产气
黄色，底层有气
泡
只发酵葡萄糖
❖ ⑥血平板：一些致病性菌株常β溶血。
麦康凯琼脂培养基 伊红美兰琼脂培养基 SS琼脂培养基
血平板
2、 生化特性
I：吲哚试验 M：甲基红试验
V：V-P试验 C：枸橼酸盐利用实验
❖ （1）三糖铁培养基
❖ ①配方
❖ 牛肉膏
5g
❖ 氯化钠
5g
❖ 蛋白胨
20g
❖ 蛋白胨
5g
❖ 乳糖
10g
❖ 蔗糖
10g
❖ 葡萄糖
❖ B型K抗原：100℃ 1h 破坏其抗原性与相应抗体的 凝集性，但保留其与相应抗体结合力。
❖ （二）血清型
❖ 可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19， 表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。
❖ 致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含K抗原外， 还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并 列写于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19 中 K88即为粘附素抗原。
❖ 据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。
❖ L型K抗原：对热敏感，100℃ 1h破坏其抗原性，并 失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中， 偶见于荚膜中。
❖ A型K抗原：耐100℃ 1h ，但121℃ 2.5h破坏其抗 原性和O不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。 位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出 现荚膜肿胀现象。
❖ 1、培养特性
❖ ① 兼性厌氧；
❖ ② 最适生长温度37℃，最适生长pH7.2～7.6； ❖ ③ 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半
透明、灰白色菌落，直径约2~3mm；
❖ ④ 普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁 有菌环。
❖ ⑤ 肠道菌鉴别培养基 ❖ 麦康凯琼脂培养基：红色菌落。 ❖ 伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。 ❖ SS琼脂培养基：一般不生长或生长较差，生长者呈红色。
❖ 肠产毒性大肠杆菌（ETEC）
ETEC是致人和幼畜腹 泻最常见的病原菌； 毒力因子有粘附素性 菌毛和肠毒素。
致病过程
七、抵抗力
❖ 大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。 ❖ 55℃加热60min或60℃加热15min仍有部分细菌存
活。
❖ 胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作 用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道 选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。
蛋白质和脂多糖组成。
❖ 脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴 性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性 及对噬菌体的敏感性有关。
细胞质膜
周质
外膜
（二）质粒
❖ F因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。 有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F因子 的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+和F-细菌 的接合，F因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株 转变为F+菌株。
六、致病性
❖ （一）致病物质源自文库❖ 1、定居因子（Colonization factor ，CF）；也称粘附素，
即大肠杆菌的菌毛。 ❖ 2、肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外
毒素，分为耐热和不耐热两种。 ❖ ①耐热（ST）：100℃20min不破坏，免疫原性弱。 ❖ ②不耐热（LT）：65 ℃30min破坏，免疫原性强。 ❖ 3．其他：细胞壁脂多糖的类脂A具有毒性；K抗原有抗吞噬
❖ 20世纪中叶，认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对 人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常 引起严重腹泻和败血症。
一 、大肠杆菌的一般特性
❖ 1、G－直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。
革兰染色
2、周身鞭毛，能运动，无芽孢 ，有的有荚膜。 3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型 。
二 、培养及生化特性
❖ R因子 ：抗性转移因子和抗性决定因子 。
❖ Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌 素。
四、大肠杆菌的特殊结构
❖ 1、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即 K抗原 。
❖ 2、鞭毛
❖ 由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动 有关。
❖ 3、菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状 体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。
大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传 物质。
五、抗原及血清型
❖ （一）抗原
❖ O抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激 机体主要产生IgM类抗体。
❖ H抗原， 即鞭毛抗原 ，H抗原主要刺激机体产生IgG 类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。
❖ K抗原，即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖。具 有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫 “O不凝集性”。