植物组织培养项目二 无菌操作前的准备工作

任务三
培养基的配制
一、培养基的成分
1. 水
2. 无机营养（大量元素、微量元素） 3. 有机物（糖、维生素、肌醇、氨基酸、天然有机 附加物如椰乳、香蕉汁、番茄汁、马铃薯等） 4. 植物生长调节物质（IAA、CTK） 5. 凝固剂：琼脂、卡拉胶 6. 其他添加物：活性炭（吸附有毒有害物质）、抗 氧化物质
（二）洗涤灭菌室
主要完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等 应具备水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波 清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等设备。
（三）缓冲室
换实验服：已经灭过菌的卫生服、拖鞋、口罩，最好安 紫外灯，石英电力时控器（控制光照时数）。
（四）无菌操作室（接种室）
矿质盐浓度较高。
Miller培养基：无机元素用量较MS减少1/3~1/2，微量元素种类 减少，不含肌醇。
四、培养基的配制
（一）培养基母液的配制与保存
1. 母液的配制
一般将母液分成大量元素、微量元素、Fe盐、维生素、 氨基酸等母液；植物生长调节物质也可单独配制成母液， 一般浓度为0.5 ~ 1 mg/ml； 2. 母液的保存 一般将母液保存在0 ~ 5 ℃ 的冰箱内保存（分别在母液 瓶上贴上标签）。
二、培养基的pH
大多数植物要求培养基的pH为5.6 ~ 5.8； 用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl来调节其pH； pH＞6.0，培养基变硬，pH＜5.0，琼脂不容易凝固。
三、培养基的种类及特点 （一）培养基的种类
1. 根据营养水平，分为基本培养基（MS、White、B5、N6 等）、完全培养基 2. 根据物理状态，分为固体培养基、液体培养基
4. 生物反应器
五、培养容器与接种用具
培养容器
接种用具
六、其他器具
1. 空调机（25±2 ℃ ）
2. 除湿机
控制湿度在70% ~ 80%
3. 烘箱 80 ~ 100 ℃ 烘干玻璃器皿 160 ~ 180 ℃ 高温灭菌
4. 显微镜
5. 培养基灌装机及洗瓶机
思考题
1. 一个正规的植物组织培养实验室应具备那些房间？ 2. 植物组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3. 试阐述为什么要对器皿和用具进行严格的洗涤和灭菌？
3. 根据培养阶段，分为初代培养基、继代培养基
4. 根据培养的目的，分为诱导培养基、增殖培养基、壮苗 培养基、生根培养基
（二）几种常用培养基的配方
注意单位（mg/L）：MS、White、N6、B5
、 Heller 、 Nitsh 、 Miller 、 SH 等，具体配
方见P41-42。
（三）几种常用培养基的特点
4. 紫外灯 主要用于缓冲间、接种室和培养室必备的灭菌
三、无菌操作设备
1. 接种箱
2. 超净工作台
3. 无菌箱（灭菌器）
灭菌器
四、培养设备
1. 培养架
2. 培养箱
3. 摇床与转床
在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。 如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合 的温度及转速。
1. 植物组织培养实验室设计原则
（1）选址
（2）考虑事项
（3）原则 科学、高效、经济、实用
二、植物组织培养实验室的组成
标准的组织培养实验室包括：准备室、洗涤
灭菌室、缓冲室、无菌操作室和培养室。
（一）准备室（化学实验室）
器皿洗涤、培养基配制、分装、高压灭菌、植物材料预 处理、重蒸馏水的制备、生理生化因素的分析等。 其内放置：工作台、柜厨、水池、仪器、药品等。
MS培养基：无机盐浓度高，营养丰富。
White培养基：无机盐浓度低（生根培养、胚胎培养）
N6培养基：KNO3、（NH4）2SO4含量高，无Mo。 B5培养基：NH4+浓度低，NO3-、盐酸硫胺素含量高（适合于木 本植物）。 SH培养基：与B5相似，不用（NH4）2SO4而用（NH4）H2PO4
材料的灭菌接种、无菌材料的继代培养、丛生
苗的增殖、切割嫩茎插Baidu Nhomakorabea生根等。
其内放置：超净工作台（酒精灯、灭菌用的酒
精、灭菌剂、无菌水等）、空调机、医用小平
车等。
（五）培养室
培养架子、灯光 通风设施 边台
内设空调机、除湿机、温度湿
度计、换气扇等
任务二 植物组织培养中常用设备和仪器
注意事项
1. 培养基分装时，一般占试管、三角瓶等培养
容器的1/5 ~ 1/3为宜，若为塑料瓶，则培养基
的厚度应为1.5 ~ 2.0 cm。
2. 分装后应立即灭菌，若不及时灭菌应保存在
冰箱中，24 h内完成灭菌工作。
项目二 无菌操作前的准备工作
学习目标
掌握正规的植物组织培养实验室的组成； 植物组织培养常用的设备及其用途； 了解培养基的主要成分及其各自的作用； 掌握培养基的母液及培养基的配制及保存；
了解外植体的灭菌方法；
掌握外植体材料消毒灭菌时应注意的事项。
任务一 植物组织培养实验室设计与组成 一、植物组织培养实验室设计
7. 水浴锅
溶解难溶药品、熔化琼脂条。
7. 分装机（用于培养基的分装）
全自动培养基分装机
二、灭菌设备
1. 高压灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
2. 干热消毒柜
用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀，以及玻璃器皿的灭菌。
3. 过滤灭菌器
主要用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压 灭菌试剂的灭菌。
一、常规设备
1. 天平
2. 冰箱
用于在常温下易变性或失效的试
剂和母液的储藏，细胞组织和试 验材料的冷冻保藏，以及某些材 料的预处理。
3. 酸度计 用于校正培养基和酶制剂的pH。
4. 高速冷冻离心机
主要用于分离细胞和原生质体
5. 加热器
主要用于配制培养基
智能数显磁力加热搅拌器
6. 纯水机
大量元素母液
微量元素母液
铁盐母液
有机物母液
（二）培养基的配制及其灭菌
1. 培养基的配制方法 将母液按顺序放入烧杯 加糖 定容 熔化琼脂 加入生长调节物质 调整pH 加盖贴标签（注明培养基的名称 加琼脂
培养基分装到培养瓶中 与配制时间）
2. 培养基的灭菌
条件：压力：108 kPa 温度：121 ℃ 时间：15 ~ 20 min