植物组织培养项目二 无菌操作前的准备工作
6 植物组织培养实验二PPT课件
谢谢你的到来
学习并没有结束，希望大家继续努力
Learning Is Not Over. I Hope You Will Continue To Work Hard
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
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2、无菌操作要注意：每次操作前， 将双手用酒精棉球擦拭消毒；镊 子、解剖剪刀等金属工具用火焰 烧过灭菌，冷却后方可使用；尽 量减少无菌三角瓶或培养皿在空 气中的暴露时间；所有无菌操作 尽量快速完成，并要求在酒精灯 附近进行。
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3、请先在自然条件下练习外植体解剖， 分割成0.5cm2左右的小块（段），经操 作熟练，检查无误后，再进行无菌解 剖分割及接种，以减少植物材料染菌 或失水死亡的机率。
欢迎同学们进入奇幻的植物组织培养实验世界
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植物组织培养实验Ⅱ——— 外植体取材﹑表面消毒与接种
实验目的 实验原理、基本知识 实验用品、材料 实验要求 实验内容 、方法 实验报告——作业 下一次实验预告
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一、实验目的
1、掌握无菌操作技术，加深对无菌操作的了
解；
2、掌握常规的植物细胞组织培养技术，达到 能独立操作的能力
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7、打开三角瓶——铝箔纸的拿法
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8、瓶口在火焰上烧过
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9、铝箔纸的放法
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10、镊出黄瓜苗
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11、镊出黄瓜苗
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12、放入培养皿中
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13 、
黄 瓜
幼 苗 形 态
生 长 点
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——
14、剪取茎段
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15、剪好的外植体
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16、黄瓜切块的接种
植物组织培养实验报告
摘要：以大豆子叶为外植体，在MS 培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素，以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响，并练习无菌操作。
实验结果显示第 2 组即 MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即 MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高，为较佳的愈伤组织诱导组合。
关键词：大豆；植物组织培养；无菌操作；愈伤组织1.1 实验材料：大豆子叶1.2 实验试剂与仪器〔1〕试剂： 75%酒精、MS 干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂〔NAA、2，4-D、KT、6-BA〕、无菌水、升汞、 NaOH 溶液〔2〕仪器：超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。
1.3 实验方法培养基的配制与灭菌1.3.1.1 配制培养基的准备阶段〔1〕准备 80 个培养试管及封口膜， 2 个小培养皿、 1 个大培养皿，用洗衣粉、自来水洗净，再用蒸馏水把每一个培养试管、润洗一下。
带晾干后将试管编号 1-80；〔2〕在称量纸上用百分之一天平分别称取 1.5g 琼脂 4 份， 7.5g 蔗糖 4 份，在烧杯里用千分之一天平上称取 1.185g MS 干粉 4 份〔烧杯不要清洗〕；〔3〕剪小圆纸片 40，均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜；剪大圆纸片10，均分在两个大培养皿中。
然后分别用报纸包好。
〔4〕把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。
1.3.1.2 配制培养基〔1〕在装有 MS 干粉的烧杯中按下表参加植物生长调节剂实验所用的所有激素浓度均为 0.5mg/mL编号培养基配置激素的加样量(ml)6-BA N A A K T2,4-D1 23 4 MS+6-BA〔1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L)MS+6-BA〔2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)MS+KT〔0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L)MS+KT〔1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)0.51.00.250.50.250.50.51.0〔2〕用量筒量取250ml 〔稍多〕蒸馏水，取一个不锈钢杯子参加150ml 蒸馏水和称量好的琼脂，在电炉子加热沸腾 2min，再参加混合好的 MS 培养基 1 号和蔗糖，混合沸腾 2min，用剩余的蒸馏水定容至 250ml；〔3〕当温度降到 60℃摆布时，将溶液 pH 调至 5.8，普通加 4 滴 NaOH 溶液即可；〔4〕取编号 1-20 的培养试管，用大量注射器以每瓶 12.5ml 摆布培养基分装在培养试管中，用封口膜封口， 4 支一捆捆扎好。
植物组织培养实验指导
植物组织培养实验指导2013.3附录培养基母液的配制（实验老师准备）一、实验目的：掌握培养基母液配制的方法。
二、实验原理：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
以MS培养基为例，所需配制的母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长物质母液，在不同类型的培养基中使用。
三、实验器具与药品：电子分析天平、托盘天平、烧杯（50ml, 100ml, 500ml, 1000ml）、量筒（1000ml,100ml, 25ml）、容量瓶（1000ml,500ml,100ml）、药勺、称量纸、玻璃棒、滴管、电炉、冰箱。
配制MS培养基所需药品按培养基的配方准备。
植物生长调节物质，2,4-D, NAA, 6-BA等。
四、培养基母液的配制过程首先，按下表“MS培养基母液的配制”，将各种母液根据各自的扩大倍数，计算出扩大后的称取量，然后，分别进行药品称取和母液配制。
（1）MS大量元素母液的配制按照MS培养基配方的用量扩大20倍，将大量元素配制成20倍的母液。
配制时先用量筒量取蒸馏水800ml，放入1000ml的烧杯中，依次分别称取KNO3 38g; NH4NO3 33g, MgSO4·7H2O 7.4g, KH2PO4 3.4g, CaCl2·2H2O 8.8g，按顺序先后倒入烧杯中，用玻璃棒搅动，待第一种化合物溶解后再加入第二种化合物，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液倒入1000ml的容量瓶，用蒸馏水定容至1000ml,然后，倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
配制培养基时每升MS培养基吸取该母液量为50ml。
（2）MS微量元素母液的配制将MS培养基配方中微量元素的无机盐用量分别扩大1000倍，用电子天平分别依次称取MnSO4·4H2O 22.3g，ZnSO4·7H2O 8.6g , H3BO3 6.2g，KI 0.83g，Na2MoO4·2H2O 0.25g，CuSO4·5H2O 0.025g，CoCl2·6H2O 0.025g，并用重蒸水逐个溶解，待全部溶解用容量瓶定容后，装入1000ml倒入细口磨砂试剂瓶中，贴上标签，注明配制日期、扩大倍数、配制人姓名、置于4℃冰箱保存备用。
无菌技术实验报告评价(3篇)
第1篇一、实验背景无菌技术是医学、生物学、微生物学等领域中非常重要的一项技术，其目的是通过一系列严格的操作步骤，确保实验过程中使用的物品和环境保持无菌状态，从而避免微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验报告针对无菌技术进行了详细的描述和总结，以下是对该实验报告的评价。
二、实验目的与内容1. 实验目的（1）掌握无菌技术的操作原则和方法。
（2）了解无菌技术的重要性及其在医学、生物学等领域的应用。
（3）培养严谨、细致的实验态度和团队协作精神。
2. 实验内容（1）无菌操作前的准备工作：洗手、戴手套、穿无菌衣等。
（2）无菌物品的取用与传递：无菌持物钳、无菌容器等。
（3）无菌操作过程中的注意事项：防止污染、保持无菌环境等。
（4）无菌技术的实际应用：植物组织培养、微生物培养等。
三、实验方法与步骤1. 实验方法本实验采用无菌技术操作，包括无菌操作前的准备工作、无菌物品的取用与传递、无菌操作过程中的注意事项等。
2. 实验步骤（1）无菌操作前的准备工作：洗手、戴手套、穿无菌衣等。
（2）无菌物品的取用与传递：使用无菌持物钳、无菌容器等。
（3）无菌操作过程中的注意事项：保持操作区域整洁、避免交叉污染、正确使用无菌器械等。
（4）无菌技术的实际应用：植物组织培养、微生物培养等。
四、实验结果与分析1. 实验结果通过无菌技术操作，成功实现了实验过程中物品和环境的无菌状态，保证了实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验分析（1）无菌操作前的准备工作：严格按照无菌操作规程进行，确保操作人员自身和操作环境的无菌状态。
（2）无菌物品的取用与传递：正确使用无菌持物钳、无菌容器等，避免污染。
（3）无菌操作过程中的注意事项：保持操作区域整洁、避免交叉污染、正确使用无菌器械等，确保实验过程中无菌状态。
五、实验评价1. 实验目的达成本实验报告详细描述了无菌技术的操作方法、注意事项及实际应用，达到了实验目的。
2. 实验方法科学实验方法遵循无菌操作规程，科学合理，保证了实验结果的准确性和可靠性。
简述植物组织培养无菌操作技术等一般流程
简述植物组织培养无菌操作技术等一般流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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实验二培养材料消毒和接种
• 二、实验原理
• 用于进行组织培养的组织、器官和细胞称为外 植体。在组织培养中，外植体如果是带菌的， 在接种前都必须进行表面消毒，这是取得培养 成功的最基本的和重要的前提。常用消毒剂对 外植体进行消毒。从室外取的材料，一般先用 自来水冲洗数分钟.
• 接种材料使用消毒剂后，要用无菌水洗涤3～5 遍，最后用无菌纸擦干净。使用消毒剂的原则 是既要达到消毒目的，又不能损伤植物组织和 细胞，还要符合就地取材的原则。对一些容易 污染、较难灭菌的外植体进行表面消毒时，用 单一消毒剂不能收到好的效果，所以常选用两 种消毒剂交替浸泡法。
• （2）湿热灭菌 适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、 纸等。121℃ 维持20~30min
• （3）过滤灭菌
• 培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长 调节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。
• 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度， 用注射器注入微孔滤膜虑。制培养基时，现将 培养基高压灭菌，待降至50℃左右时，加入适 量的激素。
• A、新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物 质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净， 然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于 四小时），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲
洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。
• B、使用过的玻璃仪器的清洗 先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷
• 一般，首先用75％乙醇浸泡外植体数秒钟至 30s，然后置于0.1％氯化汞溶液5～10min 或 含有2％活性氧的次氯酸钠溶液5～30min，然 后用无菌水洗涤。有时在氯化汞或次氯酸钠灭 菌后，用无菌水洗，进一步剥去几层组织或器 官如叶片后，再用次氯酸钠灭菌3～5min，无 菌水漂洗3 次后，切割、用于接种。 消毒溶液对外植体消毒是在超净工作台上进行。 完成表面消毒的接种材料要尽快放置于培养基 中。
《植物组织培养技术》组培基本操作技术
《植物组织培养技术》组培基本操作技术模块介绍掌握组培基本操作技术是做好组织培养工作的前提和关键。
本模块介绍了培养基制备、无菌操作等组培基本操作技术，主要内容包括培养基的种类、成分、特点和配制技术，以及外植体处理、接种方法、无菌操作规程等理论知识和技术方法。
两个项目共设计6个工作任务，以工作任务为载体，开展项目实践活动，旨在培养学生无菌意识、团队精神和操作技能，使学生初步具备培养基制备工、接种工的基本素质与工作能力。
模块结构设计见表1。
表1 模块结构设计项目1 培养基制备一、学习目标（一）终极目标能够根据培养对象和培养目的准确配制培养基。
（二）促成目标1．准确识记组培药品及其作用；2．熟记植物激素的种类、生理作用、理化性质与配制要求；3．清楚常用基本培养基的种类与特点；4．掌握母液和培养基的配制目的与操作流程，能够熟练配制母液和培养基；5. 熟练使用相关设备与用具；6. 具备无菌意识，具有团队精神、创新意识和和责任心。
二、学习内容1．培养基的种类、特点与成分；2．激素种类、理化性质、生理作用与配制要求；3.母液配制目的与方法；4．培养基配制的目的与方法；5. 培养基灭菌方法。
三、知识点1．培养基的种类、特点与成分；2．母液配制目的与方法；3．培养基配制的目的与方法；4. 培养基灭菌方法。
四、技能点1.母液配制；2.培养基配制；3.培养基灭菌。
五、教学重点1.培养基的种类、成分与特点；2.激素种类、理化性质、生理作用；3.母液和培养基配制的目的与方法；4.培养基灭菌方法。
六、教学难点1.MS大量元素母液、激素母液和铁盐母液的配制；2.培养基配制操作的规范度和熟练度；3.影响培养基湿热灭菌效果的因素；4.培养基中加入活性炭、抗生素的作用；5.配制螯合铁的目的。
七、教学设计八、拓展学习1.MS干粉培养基；2.螯合剂与鳌合物；3.培养基保存；4.培养基不凝固的原因；5.无土栽培营养液与组培培养基的区别。
九、学习建议1.重视培养基制备。
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训
植物组织培养的基本设备和无菌操作培训植物组织培养是一种重要的生物技术，它可以用来繁殖纯种植物、快速繁殖难以繁育的植物、生产无性系等。
在进行植物组织培养实验时，需要一些基本的设备和无菌操作培训，以确保实验的准确性和成功率。
首先，进行植物组织培养实验需要准备一个无菌工作台。
无菌工作台是用于提供无菌工作环境的设备，它可以有效地防止外界微生物的污染。
在工作台上进行操作时，可以通过UV灯消毒空气和工作台表面，以确保实验材料的无菌状态。
其次，植物组织培养实验需要使用无菌培养箱。
无菌培养箱是专门用来培养植物组织的设备，它可以提供恒温、恒湿和无菌的环境，保证植物组织的生长和繁殖。
在培养箱中进行实验时，需要定期清洁、消毒和更换无菌培养基，以保证培养环境的无菌性。
此外，进行植物组织培养实验还需要使用一些基本的无菌操作器具，如无菌吸管、无菌移液器、无菌培养瓶等。
这些器具可以帮助实验人员在无菌条件下进行操作，避免外界微生物的污染。
对于实验人员来说，他们需要接受一定的无菌操作培训，以掌握正确的无菌操作技能。
在无菌操作过程中，实验人员需要穿戴无菌手套、口罩和无菌服装，严格按照无菌操作规程和流程进行操作，避免外界微生物的污染。
总的来说，植物组织培养的基本设备和无菌操作培训是非常重要的，它们可以帮助实验人员在无菌条件下进行植物组织培养实验，保证实验的准确性和成功率。
只有做好无菌操作，才能获得高质量的植物组织培养材料，为后续的应用研究和生产提供可靠的支持。
植物组织培养是一项重要的生物技术，在农业、园艺和植物育种等领域具有广泛的应用。
通过植物组织培养，可以获得大量无病害的植物材料，实现植物繁殖、植物株型改良、基因转化等目的。
然而，植物组织培养实验过程中，需要一定的无菌操作技能和必要的设备，才能保证培养物的无菌状态，从而确保实验的准确性和成功率。
在进行植物组织培养实验时，无菌工作台是必不可少的设备之一。
无菌工作台能够提供无菌环境，有效地阻止外界微生物的污染。
植物组织培养的完整过程
植物组织培养的完整过程1.选择适宜的母体植物：选择具有优良性状和抗病虫害能力的母体植物，从中选择健康的叶片、茎段等组织作为外植体。
2.外植体的准备：将母体植物采集的叶片或茎段进行无菌处理，去除表面杂菌和泥沙，然后用75%酒精或漂白粉消毒外表。
3.外植体的切割：将无菌环境下的外植体切割成小片，大小约为0.5-1cm，同时尽量保持外植体的干燥，以防止外植体内部水分过多。
4.外植体的接种：将切好的外植体小片接种在含有植物生长激素的无菌培养基上。
培养基通常由无机盐溶液、有机源、糖和植物生长激素等组成，植物生长激素的种类和浓度会影响到后续培养过程中的分化和增殖。
5.分化：外植体接种到培养基后，会经历分化阶段，外植体的组织逐渐增殖和分化为不同种类的细胞，形成生长点。
6.增殖：通过定期的次级培养，子培养、分生器、病毒消除等手段，将外植体中的细胞不断分化和增殖，以便大量生产幼苗。
7.再分化：经过增殖后的外植体，可以再次进行分化，形成茎尖、腋芽或花蕾等器官，以便进一步培养和繁殖。
8.根的诱导：在合适的培养条件下，外植体可以诱导生成根系，这是为了使外植体脱离体外培养环境，继续生长的必要步骤。
9.移栽：当幼苗的根系已经发达足够，可以将外植体移栽到含有适宜营养成分的固体培养基上或直接移植到土壤中，进行实地管理和生长。
10.过程控制：在整个培养过程中，要控制好环境条件，例如温度、湿度和光照等，以保证培养的成功率。
11.病毒清除：植物组织培养中经常伴随着病毒感染问题，可以通过不同的方法对外植体和培养基进行检测和清除，以保证获得健康的植株。
总的来说，植物组织培养是一个复杂的过程，需要严格的无菌操作和合适的培养条件。
它广泛应用于植物的繁殖、遗传改良、新品种选育以及病毒和细菌的清除工作中，对推动植物学研究和农业生产具有重要的意义。
无菌操作的工作制度
无菌操作工作制度一、目的为了确保实验室生物安全和实验结果的准确性，规范无菌操作流程，防止微生物污染，制定本工作制度。
本制度适用于实验室无菌操作的各项工作，包括微生物培养、分子生物学实验、细胞培养等。
二、无菌操作原则1. 实验人员应具备无菌操作的基本知识和技能，经过专业培训并考核合格后方可进行无菌操作。
2. 实验人员应遵守实验室生物安全规定，穿戴适当的个人防护装备，如实验服、口罩、手套、护目镜等。
3. 实验操作应在生物安全柜或其他无菌操作条件下进行，确保实验过程中微生物不会污染环境。
4. 无菌试剂、培养基、实验器材等应妥善存放，避免交叉污染。
5. 实验操作过程中，应遵循“无菌操作规程”，严格控制无菌区的空气洁净度，保持无菌环境。
6. 实验结束后，应对实验器材进行清洁、消毒，防止污染传播。
三、无菌操作流程1. 准备工作（1）检查生物安全柜是否处于良好工作状态，确保空气流通和紫外线消毒功能正常。
（2）检查实验器材是否完好无损，是否经过消毒处理。
（3）准备无菌试剂和培养基，确保其有效期内使用。
（4）实验人员穿戴适当的个人防护装备。
2. 无菌操作（1）开启无菌试剂和培养基，使用无菌移液器或无菌工具取出所需量。
（2）将试剂和培养基转移到无菌容器中，避免接触容器外壁。
（3）进行实验操作，如微生物接种、分子生物学实验、细胞培养等。
（4）操作过程中，注意保持无菌区的洁净，避免污染。
3. 实验结束（1）将实验器材进行清洁、消毒，防止污染传播。
（2）关闭生物安全柜，对其进行紫外线消毒。
（3）实验人员脱去个人防护装备，进行双手清洗。
四、无菌操作注意事项1. 实验操作过程中，应避免直接接触实验物品，使用无菌工具进行操作。
2. 实验操作过程中，不得在无菌区咳嗽、打喷嚏、吸烟等，以免污染无菌环境。
3. 实验操作过程中，不得随意打开生物安全柜，避免外界微生物进入。
4. 实验操作过程中，如发生污染，应立即停止实验，进行清洁、消毒处理。
植物组织培养的各个阶段和完整流程
导读：本文很通俗的介绍了组培快繁技术在实际应用中的5个阶段：准备阶段——初代培养——继代增殖——生根诱导——炼苗移栽，不同品种流程略有差异，不过基本框架大体一样的。
一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：1. 准备阶段查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。
准备阶段又分为两步：1. 1 培养基的配置与灭菌根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。
1. 2 外植体选择与消毒选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。
将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药。
2. 初代培养将外植体接种到诱导培养基后置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。
这一阶段主要为获得无菌苗、嫩茎、丛芽或愈伤组织，从而建立起无菌培养体系。
3. 继代增殖培养将初代培养获得的芽、丛芽、嫩茎或胚状体等培养物经切分，反复转移到新的增殖培养基上，进行扩大增殖培养，当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分接种到分化培养基，培养无根芽苗，另一部分保存或继续扩繁。
进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。
4. 生根诱导刚分化形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可以接种到生根培养基上，生根培养基的特点是降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。
5. 炼苗移栽选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。
当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。
例如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。
常规情况下详细的生产流程图如下：对不同的品种词流程会略有差异，如进行果树育苗还需进行嫁接等操作流程，但对组培工厂化育苗而言，一般可根据上面的流程图来安排各项作业，只有相互衔接好、配合好，才能提高生产效益。
植物组织培养的工作流程
植物组织培养的工作流程植物组织培养是一种常见的生物技术方法，用于研究植物生长发育、遗传转化和产生新品种等。
本文将介绍植物组织培养的一般工作流程。
1. 选择母本植物植物组织培养的第一步是选择合适的母本植物。
母本植物应具有所需的性状和遗传特性，通常选择优良的品种或种质资源作为母本。
此外，植物组织培养还可以利用野生植物进行基因资源的保护和利用。
2. 提取组织样品从母本植物中提取组织样品是植物组织培养的关键步骤。
样品通常包括茎、叶、种子、花等部位，根据具体的实验目的进行选择。
提取样品时要注意无菌操作，以避免外源性微生物的污染。
3. 表面消毒为了去除样品表面的细菌和真菌，需要将样品进行表面消毒处理。
常用的消毒剂包括70%的乙醇或含有一定浓度的次氯酸钠溶液。
消毒时间和浓度应根据具体材料的特性进行调整。
4. 建立无菌培养基无菌培养基是植物组织培养的基础，它提供了植物生长所需的营养物质和激素。
根据不同的实验目的，可以选择不同种类和配方的培养基。
常用的培养基包括MS培养基、B5培养基等。
5. 培养组织样品将经过消毒处理的组织样品转移到无菌培养基上进行培养。
通常使用无菌操作箱或无菌室进行操作，以确保无菌条件。
培养过程中需要控制培养基的温度、光照和湿度等条件，以促进组织生长和增殖。
6. 分化和再生在培养基上，组织样品会经历分化和再生的过程。
通过调整培养基的激素含量和类型，可以控制组织样品的分化方向和再生能力。
例如，增加激素的浓度可以促进根的生成，减少激素的浓度则有利于芽的发生。
7. 鉴定和筛选经过一段时间的培养，组织样品会产生不同的形态和表型。
在此阶段，可以对组织样品进行鉴定和筛选。
鉴定可以通过形态学、生理学和分子生物学等手段进行，以确定组织样品的特性和品质。
8. 根据实验目的进行后续处理根据具体的实验目的，可以对培养的组织样品进行进一步的处理。
例如，可以进行基因转化、组织分化、植株再生等实验，以获得所需的研究结果。
植物组织培养实验
植物组织培养实验植物组织培养是指将植物的一些组织细胞分离出来，在特殊的培养基中进行培养和生长，目的是繁殖和获取大量的纯种植物。
本次实验通过试验实现相应的目标。
实验材料及器械：1. 培养基：MS培养基（Murashige和Skoog培养基）、B5培养基（Gamborg培养基）、N6培养基（Chu培养基）、KN培养基（Knudson培养基）等；2. 植物组织：初代愈伤组织，生长点、芽，小叶片；3. 水平台，无菌工作台，培养箱，显微镜，中性纸，平板培养瓶，筛网，剪刀，酒精灯，卷尺，移液枪，枪头等。
实验步骤：1. 资料准备：对不同材料的特点、培养基的制备方法及组成、实验的目的等进行归纳、总结和分析。
2. 组织处理：先将绿色植物的各种组织根据类型进行分离，选取具有分化能力的愈伤组织或生长点进行培养。
去除杂质后，取少量组织接种到平板培养瓶中，有的需要进行酶解，提高细胞分裂能力。
3. 培养基准备：按照MS、B5、N6、KN等培养基制备方法，称取培养基粉末，加入适量的蔗糖、植物激素等，将pH调整到5.8-6.2。
接种前对制备的培养基冷藏保存。
4. 组织接种：取出平板培养瓶，用无菌水加热消毒后，将组织以均匀的分布覆盖于培养基表面。
将试管装入培养箱中，控制温度、湿度、光照等条件进行培养。
5. 观察记录：每隔一段时间拿出培养样本，进行显微镜观察。
观察组织细胞的形态、颜色、大小、分化程度、生长情况等。
根据实验进程记录主要观察的实验数据。
实验结果及分析：1. 愈伤组织培养：初始培养时，愈伤组织的生长状况不同，在不同的培养条件下，细胞分化能力、再生器官的形成也有所不同。
初步培养的愈伤组织有不同的再生能力和生长状态：生长状况下降、枯死、增殖等。
愈伤组织需要在适宜温度、适宜光照的情况下进行培养，严格执行无菌操作，才能获得大量高质量的细胞。
在不同的培养环境下，诱导他们进行特定细胞分化，从而提高愈伤组织再生的成功率。
2. 生长点培养：生长点培养时，需要先将其消毒，以免污染飞溅到培养基上。
植物组织培养灭菌技术
植物组织培养灭菌技术对培养基和器皿的彻底灭菌及正确的无菌操作是防止染菌、保证组培材料正常生长及分化的关键，是植物组织培养工作中最基本，也是最重要的技术。
一、植物组织培养灭菌1．湿热灭菌（培养基）：在制备后的24h内完成灭菌工序。
⑴对高压灭菌后不变质的物品，可以延长灭菌时间或提高压力。
⑵对于一些布制品，洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min。
⑶高压灭菌前后的培养基，其pH值下降0.2-0.3单位，要控制好灭菌的温度和时间⑷高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖，从而改变培养基的渗透压。
⑸培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解，高压下蔗糖水解大大增强，添加1%活性炭，蔗糖水解率可达5%。
注意事项：防止高压灭菌培养基变化的方法)经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料，及时采取有效措施。
(2)设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。
如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇，以IBA代替IAA，控制活性炭的用量(在0.1%以下)注意pH值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。
(3)配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。
如将磷、钙和铁放在最后加入。
(4)注意高压灭菌后培养基pH值的变化及回复动态。
如高压灭菌后的pH值常由5.80升高至6.48。
而96h后又回降至5.8左右。
这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。
2.过滤灭菌（不耐热的物质）如一些抗生素类物3.紫外线和熏蒸灭菌（空间）(1)紫外线灭菌：在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。
紫外线的波长为200—300nm，其中以260nm的杀菌能力最强，但是由于紫外线的穿透物质的能力很弱，所以只适于空气和物体表面的灭菌，而且要求距照射物以不超过1.2m为宜。
在接种前打开紫外灯进行房间及超净台灭菌30min，然后进行接种。
(2)熏蒸灭菌：用加热焚烧、氧化等方法，使化学药剂变为气体状态扩散到空气中，以杀死空气和物体表面的微生物。
植物组织培养实验
实验一植物组织培养实验室的构造和功能一、目的要求：掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。
三、方法步骤1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。
2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。
3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养室的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。
四.实验报告1.将本次实验内容整理成实验报告2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二 MS培养基母液的配制与保存一、目的要求通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
二、材料与用具配制MS培养基所需的药品（见附表）。
植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、标签、冰箱等。
三、方法与步骤1.母液的配制(将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制)2.植物生长调节物质母液的配制①称量：用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。
②溶解：生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。
③定溶：将溶解的植物生长调节物质倒入50ml容量瓶，用水冲洗小烧杯数次，最后加蒸馏水定容至50ml，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
3.母液的保存①装瓶：将配好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液号、配制倍数（或浓度）以及配制日期。
②储藏：将母液瓶储放在4℃冰箱内备用。
四、实验报告将本次实验内容整理成实验报告（叙述母液配置过程）。
无菌操作技术实验报告
无菌操作技术实验报告实验四植物材料的准备与无菌操作技术实验四植物材料的准备与无菌操作技术一、实验目的1.通过实验掌握选择合适的外植体，并进行科学的体表灭菌，获得无菌植物材料的方法。
2.通过在超净工作台上进行无菌操作训练，掌握植物组织培养的无菌操作技术。
二、实验药品与用具超净工作台、75%酒精、次氯酸钠、MS培养基、接种器械（接种盘、解剖刀、镊子）、酒精灯、植物材料、小型喷雾器。
三、实验方法（一）外植体消毒1、外植体处理后在自来水流水下冲洗。
（以下的步骤都在超净工作台上进行）2、放到75%酒精中浸泡30 s，倒掉后用无菌水冲洗。
3、用2%次氯酸钠处理10min后，无菌水清洗数次，备用。
（二）无菌操作技术1．操作人员进入接种室前必须用水和肥皂洗净双手，换上已消毒的工作服、帽子、口罩、鞋子后方可进入接种室。
2．接种前用70-75%酒精喷雾或擦洗工作台台面，开紫外灯照射20~30min；，在送风15~30min，让过滤空气吹拂工作台面和台壁四周。
3．用75%酒精消毒双手，并用酒精将装有培养基的培养瓶进行消毒后放进工作台上。
4．接种工具用95%酒精浸泡后在酒精灯上灼烧灭菌。
，5．接种时，腰带口罩，不准讲话或对着实验材料或培养容器呼吸。
打开瓶塞或瓶盖时注意不要污染瓶口。
瓶口在拔塞前灼烧灭菌。
手不能接触接种器械的前半部分（及直接切割植物材料的部分），接种操作时（包括拧开或拧上培养瓶盖时），培养瓶、试管或三角瓶应水平放置或倾斜一定角度（45。
以下），避免直立放置而增大污染机会。
手和手臂应避免在培养基、植物材料、接种器械上方经过。
在接种过程中，接种器械要重新灼烧灭菌。
6．切割外植体时，应在预先经灭菌的接种盘或培养皿、牛皮纸上进行。
7．在每次操作之前尽量把操作过程中必须使用器械盒药品先放入台内，不要中途拿进。
同时，台面上放置的东西也不宜太多，特别注意不要把东西迎面堆得太高，以致挡住气流。
四、实验作业1.将本次的实验内容整理成实验报告。
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大量元素母液
微量元素母液
铁盐母液
有机物母液
（二）培养基的配制及其灭菌
1. 培养基的配制方法 将母液按顺序放入烧杯 加糖 定容 熔化琼脂 加入生长调节物质 调整pH 加盖贴标签（注明培养基的名称 加琼脂
培养基分装到培养瓶中 与配制时间）
2. 培养基的灭菌
条件：压力：108 kPa 温度：121 ℃ 时间：15 ~ 20 min
3. 根据培养阶段，分为初代培养基、继代培养基
4. 根据培养的目的，分为诱导培养基、增殖培养基、壮苗 培养基、生根培养基
（二）几种常用培养基的配方
注意单位（mg/L）：MS、White、N6、B5
、 Heller 、 Nitsh 、 Miller 、 SH 等，具体配
方见P41-42。
（三）几种常用培养基的特点
材料的灭菌接种、无菌材料的继代培养、丛生
苗的增殖、切割嫩茎插植生根等。
其内放置：超净工作台（酒精灯、灭菌用的酒
精、灭菌剂、无菌水等）、空调机、医用小平
车等。
（五）培养室
培养架子、灯光 通风设施 边台
内设空调机、除湿机、温度湿
度计、换气扇等
任务二 植物组织培养中常用设备和仪器
7. 水浴锅
溶解难溶药品、熔化琼脂条。
7. 分装机（用于培养基的分装）
全自动培养基分装机
二、灭菌设备
1. 高压灭菌锅 用于培养基、蒸馏水和接种器械的灭菌消毒。
2. 干热消毒柜
用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀，以及玻璃器皿的灭菌。
3. 过滤灭菌器
主要用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压 灭菌试剂的灭菌。
任务三
培养基的配制
一、培养基的成分
1. 水
2. 无机营养（大量元素、微量元素） 3. 有机物（糖、维生素、肌醇、氨基酸、天然有机 附加物如椰乳、香蕉汁、番茄汁、马铃薯等） 4. 植物生长调节物质（IAA、CTK） 5. 凝固剂：琼脂、卡拉胶 6. 其他添加物：活性炭（吸附有毒有害物质）、抗 氧化物质
注意事项
1. 培养基分装时，一般占试管、三角瓶等培养
容器的1/5 ~ 1/3为宜，若为塑料瓶，则培养基
的厚度应为1.5 ~ 2.0 cm。
2. 分装后应立即灭菌，若不及时灭菌应保存在
冰箱中，24 h内完成灭菌工作。
（二）洗涤灭菌室
主要完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等 应具备水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波 清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等设备。
（三）缓冲室
换实验服：已经灭过菌的卫生服、拖鞋、口罩，最好安 紫外灯，石英电力时控器（控制光照时数）。
（四）无菌操作室（接种室）
项目二 无菌操作前的准备工作
学习目标
掌握正规的植物组织培养实验室的组成； 植物组织培养常用的设备及其用途； 了解培养基的主要成分及其各自的作用； 掌握培养基的母液及培养基的配制及保存；
了解外植体的灭菌方法；
掌握外植体材料消毒灭菌时应注意的事项。
任务一 植物组织培养实验室设计与组成 一、植物组织培养实验室设计
MS培养基：无机盐浓度高，营养丰富。
White培养基：无机盐浓度低（生根培养、胚胎培养）
N6培养基：KNO3、（NH4）2SO4含量高，无Mo。 B5培养基：NH4+浓度低，NO3-、盐酸硫胺素含量高（适合于木 本植物）。 SH培养基：与B5相似，不用（NH4）2SO4而用（NH4）H2PO4
4. 紫外灯 主要用于缓冲间、接种室和培养室必备的灭菌
三、无菌操作设备
1. 接种箱
2. 超净工作台
3. 无菌箱（灭菌器）
灭菌器
四、培养设备
1. 培养架
2. 培养箱
3. 摇床与转床
在液体培养基中，可改善培养基中的培养材料的通气状况。 如从疏松的愈伤组织中获得单个细胞。但注意要设定适合 的温度及转速。
一、常规设备
1. 天平
2. 冰箱
用于在常温下易变性或失效的试
剂和母液的储藏，细胞组织和试 验材料的冷冻保藏，以及某些材 料的预处理。
3. 酸度计 用于校正培养基和酶制剂的pH。
4. 高速冷冻离心机
主要用于分离细胞和原生质体
5. 加热器
主要用于配制培养基
智能数显磁力加热搅拌器
6. 纯水机
1. 植物组织培养实验室设计原则
（1）选址
（2）考虑事项
（3）原则 科学、高效、经济、实用
二、植物组织培养实验室的组成
标准的组织培养实验室包括：准备室、洗涤
灭菌室、缓冲室、无菌操作室和培养室。
（一）准备室（化学实验室）
器皿洗涤、培养基配制、分装、高压灭菌、植物材料预 处理、重蒸馏水的制备、生理生化因素的分析等。 其内放置：工作台、柜厨、水池、仪器、药品等。
矿质盐浓度较高。
Miller培养基：无机元素用量较MS减少1/3~1/2，微量元素种类 减少，不含肌醇。
四、培养基的配制
（一）培养基母液的配制与保存
1. 母液的配制
一般将母液分成大量元素、微量元素、Fe盐、维生素、 氨基酸等母液；植物生长调节物质也可单独配制成母液， 一般浓度为0.5 ~ 1 mg/ml； 2. 母液的保存 一般将母液保存在0 ~ 5 ℃ 的冰箱内保存（分别在母液 瓶上贴上标签）。
4. 生物反应器
五、培养容器与接种用具
培养容器
接种用具
六、其他器具
1. 空调机（25±2 ℃ ）
2. 除湿机
控制湿度在70% ~ ห้องสมุดไป่ตู้0%
3. 烘箱 80 ~ 100 ℃ 烘干玻璃器皿 160 ~ 180 ℃ 高温灭菌
4. 显微镜
5. 培养基灌装机及洗瓶机
思考题
1. 一个正规的植物组织培养实验室应具备那些房间？ 2. 植物组织培养常用的设备有哪些？各有何用途？ 3. 试阐述为什么要对器皿和用具进行严格的洗涤和灭菌？
二、培养基的pH
大多数植物要求培养基的pH为5.6 ~ 5.8； 用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl来调节其pH； pH＞6.0，培养基变硬，pH＜5.0，琼脂不容易凝固。
三、培养基的种类及特点 （一）培养基的种类
1. 根据营养水平，分为基本培养基（MS、White、B5、N6 等）、完全培养基 2. 根据物理状态，分为固体培养基、液体培养基