番茄抗根结线虫Mi 基因研究进展

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番茄主要病害抗病基因分子标记的研究进展

的应用，可以大大提高选择的准确性和效率，缩短育种年限，加快育种进程。
收稿日期：２１－４２０１０— ５
基金项目：河北省科技支撑计划项目（１２１２一）１２００Ｄ３；河北省自然科学基金项目（２１００６）Ｃ０００８０作者简介：宋建军（９３）１６－，男，教授，硕士生导师，研究方向为番茄抗病育种。Ｅｍａｌｓｎｊ３ａｏ．ｏｃ－ｉｏｇ６＠ｙｈｏｃｎ．ｎ：ｊ
１１番茄黄化曲叶病毒病．．２
病初期下部叶片变黄，后期萎蔫枯死。有时仅出现植株的一边萎蔫，而另一边仍正常生长。病情由下向上发展，后期除顶端一些叶片外，整株叶片枯
死。剖开病茎，维管束变褐色。病菌在土壤中越冬，笠年随雨水、灌溉水及土壤传播。土温２８ｃｃ
ｄｉｅｓｅｉｔｎｅｉｅｏｈｏｔｉｐａｎｎｆｃｉｅｗａｓｔｏｔｏｓａｅ．Ｍｏｌｃｌｒｍａｋｓａｅｒｓｓａｃｓｏｎｆｔｅｍｓｍｏ￣ｔａｄｅｅｔｙｏｃｎｒｌｅｓｓｖｄｉｅｕａｒｅｒｔｃｎｑｅｐｏｉｅｅｅｃａｌｕｐｌｅｈｉｕｒｖｄｓａｂｎｆｉｐｅｍｅｎａｙｔｏｌｒｔｍａｏｄｓａｅｒｓｓａｃｗｈｃａｎｒｉｅｂｅｄｎｉｓｔｒｏｏｏｆｔｉｅｓｅｉｔｎｅ，ｉｈｃａｓｒｅｉｇｅｃｅｃｉｉｃｎｌｙｉｅｎｉｉｇｄｓｓｅｉｔｎｏｕｎＤＮＡｅｅｅｉｅｌｎａｐｄｙＴｈａｅｒｉｆｉｎｙｓｇｎｆａｔｂｉｙｄｔｙｎｉｅａｅｒｓｓａｔｌｃｓｏｆｌｖｌｐｒｃｓｙａｄｒｉｌ．ｅｐｐｒｖｅｄｈｓａｕｆｉｏ￣ｎｏａｏｄｉｅｓｓｎｔｅｅｅｃｏｅｓｎｅｉｗｅｔｅｔｔｓｏｍｐａｔｔｍｔｓａｅａｄｈｒｓａｒｈｐｒｇｒｓｏｍｏｅｕａｒｌｃｌｍａｅｒｋｒｒｆｏｄｉｅｓｓｓａｃｅｅｎｔｍａｔＴｈｔｉａｉｆｈｓｏｅｕａａｅｒｒｅ－ｓｉｔｄｓｌｃｉｓａｅｒｉｔｎｇｎｓｉｏｅｅｏ．ｅｕｉｔｌｏｎｏｅｅｍｌｃｌｒｍｒｓｉｍａｋｒａｓｓｅｅｅｏｎｚｔｋｎｔｗａｓｕｆｒｒ．ｓａｌｏｐｔｏｗａｄ

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及Mi-1基因检测

ＡｂｓｔｒａｃｔＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｏｔａｌ２８ｔｏｍａｔｏｂｒｅｅｄｉｎｇｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ２６ｔｏｍａｔｏａｕｔｏｇｅｎｙｍａｔｅｉａｒｌｓ，Ｍ．
ｉｎｃｏｇｎｉｔａ — ｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏｍａｔｏｃｕｌｔｉｖａｒ ‘ ＸｉａｎｋｅＮｏ．１ａｎｄｉｎｃｏｇｎｉｔａ — ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅｃｕｌｔｉｖａｒ ‘ Ａｎａｉｚｉ ’ ，ｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏ
分子植物育种，２０１５年，第１３卷，第４期，第８３２－８３９页
ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅ３，Ｎｏ．４，８３２ — ８３９
ｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｉｒｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＭ．ｉｎｃｏｇｎｉｔａｂｙｎａｔｕｒａｌｉｎｃｉｄｅｎｃｅｉｎｉｆｅｌｄａｎｄａｒｔｉｉｆｃｉａｌｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ、ａｎｄｄｅｔｅｃｔｅｄｔｈｅｉｒ
ＺｈｅｎｇＪｉｒｏｎｇＨｕＱｉａｎｑｉａｎ。ＬｉＸｕｑｉｎｇ
１ＨａｎｇｚｈｏｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ，３１００２４；２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｉｃｒｕｌｔｕｒｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ

根结线虫病害综合防治研究进展

对土壤养分和酸碱度也有不同的需求和影响,通
过轮作改换茬口可以平衡土壤养分,改良土壤理
化性质,达到减轻病害的效果。对于病害严重的
地块,水旱轮作可有效抑制根结线虫的发生,如设
施栽培中与水生蔬菜慈姑、荸荠等轮作可有效防
根分支过多,根毛减少,根尖受伤等。由于根系发
育不良影响植株吸收水分和养分的能力,地上部
分表现为叶片萎蔫、变黄,植株长势矮小,出现早
衰、
枯死等症状。根结线虫可侵染的寄主 30
0
0余
种,分属于 114 科,对茄科、十字花科、葫芦科作物
的侵害更为严重 [2]。根结线虫会与其他土传病害
式上又可分为 3 种。第一种为传统的地膜覆盖蒸
汽消毒法,该方法对浅层土壤的消杀效果较好,但
物残体和绿肥等。有机肥可以改善土壤团粒结
对超过 30cm 的深层土壤消杀作用极为有限。第
构,提高土壤保水保肥性能,促进植物根系生长,
压环境,让高温蒸汽能顺利进入深层土壤提高消
2023(
12):
136
141.
根结线虫病害综合防治研究进展
徐晨伟,袁玉娟,李
亚
(南通科技职业学院环境与生物工程学院/江苏省农业农村污染防治技术与装备工程研究中心,
江苏南通 226007)
摘要:根结线虫病是设施蔬菜栽培中常见的重要病害,严重影响作物的产量和品质。本文从农业防治、物理

番茄对南方根结线虫抗性遗传规律的研究

番茄对南方根结线虫抗性遗传规律的研究郑积荣;王慧俐【期刊名称】《安徽农业大学学报》【年(卷),期】2015(42)3【摘要】以南方根结线虫的抗病亲本P2(0897-2-1-2-3-1-2-1)、感病亲本P1(9905-1-2-1-1-1-1-1)及F1(P1×P2),F2(F1自交后代),BC1P1(Fl×P1)和BC1P2(Fl×P2)为试材,以南方根结线虫二龄幼虫为虫源,进行苗期二龄幼虫人工接种鉴定和病土盘栽自然发病鉴定,研究番茄南方根结线虫病的遗传规律。

结果表明,人工接种鉴定的植株在接种15 d左右,感病植株开始发病,接种45 d后感病植株已充分发病,表现为植株矮小,叶片变小、变黄,部分植株下部叶片黄枯,有的枯死;病土盘栽自然发病鉴定的植株较苗期接种鉴定的植株迟12 d左右发病,病症相似。

卡方检测表明,F1、F2、BC1P1和BC1P2群体中抗病植株和感病植株分别符合1:0、3:1、1:1和1:0基因模型,符合孟德尔遗传规律。

认为该试验所采用的抗性材料P2对番茄南方根结线虫的抗性是受一对显性基因控制的,为该材料的利用奠定基础,也为抗南方根结线虫番茄品种的选育提供参考。

【总页数】5页(P463-467)【作者】郑积荣;王慧俐【作者单位】杭州市农业科学研究院;杭州万向职业技术学院【正文语种】中文【中图分类】S433.1【相关文献】1.南方根结线虫侵染对2个不同抗性番茄砧木幼苗苯丙烷类代谢的影响2.Mi基因家族番茄对南方根结线虫的抗性鉴定及评价3.Cf-2/Rcr3pim番茄品系对南方根结线虫的抗性测定4.黑龙江省番茄栽培品种对南方根结线虫的抗性评价5.番茄根结内生真菌诱导植株对南方根结线虫的抗性研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及Mi—1基因检测

番茄育种种质对南方根结线虫抗性评价及Mi—1基因检测本文就广东珠海地区以及国内和国外各地区的番茄育种基地中的“仙客1号”进行对比分析，将南方根结线虫具有抗性的番茄及南方根结线虫为实验材料。

通过对多代筛选出来并且具有明显抗性的番茄种质，利用病土盘栽自然发病以及人工接种二期幼虫的方法进行鉴定，全面分析番茄育种种质的抗性。

同时运用了合理的方法对番茄中的Mi-1基因进行检验，希望能为关注这一领域的人士提供一些参考意见。

标签：番茄育种种质；南方根结线虫；Mi-1基因检测；仙客1号在近几年的实验成果中得出Mi系列的1至9号抗性基因中Mi-1基因的抗虫性效果最突出，且已经广泛地应用到美国、荷兰等国家的番茄育种当中。

我国在此领域中起步较晚，但也取得了一些具有研究价值的成果。

通过对番茄后代植株中是否含有Mi系列基因进行监测，能帮助我国农业领域实现新的突破。

一、“仙客1號”番茄育种种质对南方根结线虫抗性测评1.实验方法（1）病土盘栽引病法。

将分别来自亚洲地区、国内其他地区以及广东省珠海市地区育种中心的实验用“仙客1号”番茄不同种质同时进行播种，模拟番茄自然生长的环境、雨水和光照等因素对其进行培育。

控制番茄播种土壤为变量，番茄生长的土壤控制为含有大量南方根结线虫幼虫的病土，将病土、肥料和砻糠灰按照7：1：2的比例进行混合。

由于珠海市地区的土质松软并且砂性较强，适合南方根结线虫繁殖生长，因此培育番茄的病土中数量会达到800条以上。

将影响番茄生长的温度、湿度等其他因素作为定量，把盘栽的番茄幼苗生长环境调整适宜，并且不对其进行杀虫剂和其他农药喷洒，使其自然发病。

（2）引入二期病虫幼虫方法。

对“仙客1号”番茄种质使用浓度为5%的氯酸钠溶液进行杀毒清洗十分钟之后，再用清水洗净种子上的溶液残留物质。

之后将种子分别放在含有双层滤纸的培养器皿当中，控制温度和湿度等作为定量，对种子催生发芽。

待种子根部生长至5毫米时，再将其移植到无菌土壤当中。

根结线虫侵染对Micro—Tom番茄同工酶变化的研究

ｔａｈｎｙｓｏＯａｄＰＤｎｔｍａｏｉｆｃｅｙＭｅｏｄｇｎｎｏｎｔａｄｄｐｉｅｒｓｏｓｎｏｄｒｔｈｔｔｅｅｚｍｅｆＳＤｎＯｉｏｔｎｅｔｄｂｌｉｏｙｅｉｃｇｉｈｄｍａｅａａｔｅｐｎｅｉｒｅｏａｖ
ＭｉｏＴｍ番茄源于ＦｏｉａＢｓｅｃ —ｏｒｌｄａｋｔ和Ｏｉｒｈｏ
ｖｕ等微生物常见的寄主［ｉｓｒ３１。被微生物感染的植物，
４１— 杂交后代选育出的观赏用品种，其显著特０３３征就是植株矮小［可高密度栽培，１］，其种植密度可高达１５株／。７ｍ；３生命周期短，一般播种后７～０ｄ５９果实就已成熟［２］。这些特征十分有利于节省研究空
ＨＯＮＧａ — ｈｎＱｕｎｃｕ（ｅａｔｅｔｆＬｅＳｉｎｅＳａｇｉＮｒｌｎｖｒｔＨｎｎ４６０，ＲＤｐｒｎｉｃｅｃ，ｈｎｑｕｏｍａＵｉｓｙｅａ７００Ｐｍｏｆｅｉ，
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＭｉｒＴｍｏｔｓｅｌｇｒｎｃｌｔｄｗｔｌｉｏｙｅｎｏｎｔｇｓｉａｏａｏｙｈｆｓｃｏ－ｏｔｍａｏｅｄｉｓｗｅｅｉｏｕａｅｉＭｅｏｄｇｎｉｇｉｅｇｎｌｂｒｔｒ．Ｔｅｉｔｎｈｃａｒ
ｒｓｓｉｅｔｎｅｉｔｎｃｉ．ｆｏ
ＫｅｒｓＭｅｉｏｙｅｉｃｇｉ；ｃｏＴｍｔａｏｓｐｒｘｅｄｓｕａｅ（Ｄ；ｅｏｉｓＰＤ；ｓｚｍｅｙｗｏｄ：ｌｄｇｎｏｎｔＭｉ－ｏｍｔ；ｕｅｏｉｉｔＳ）ｐｒｘａｅ（Ｏ）ｉｙｏｎａｒｏｄｍｓＯｄｏ

番茄种质材料对南方根结线虫的抗性鉴定及Mi-1基因检测

（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＧｕａｎｇｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＧｕａｎｇｘｉＮａｎｎｉｎｇ５３０００７，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕａｎｇｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
ＴｏｍａｔｏＣｕｌｔｉｖａｒｓｔｏＭｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａ
ＬＵＸｉｕ — ｈｏｎｌｉｎｇ。・．一，ＬＩＵＺｈｉ．ｗａｎｇ・－一，ＱＩＮＢｉ．ｘｉａ。－一，ＷＡＮＹｕ－ｌｉ
ｎｉｎｇ５３０００５，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇｔｈｅｐｏｔｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆ２ｉｎｓｔａｒｌａｒｖａｅｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｇａｉｎｓｔＭｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａｉｎ６Ｓｏｌａｎｕｍｌｙｃｏ￣ｒｓｉｃｕｍｔｏｍａｔｏ
５３０００７；２．广西作物病虫害生物学重点实验室，广西南宁
５３０００７；３．广西大学
要：采用盆栽接种２龄幼虫法，对６份番茄Ｓｏｌａｉｒｕｍｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ种质材料进行了对南方根结线虫Ｍｅ￣ｉｄｏｇｙｎｅｉｎｃｏｇｎｉｔａ的抗性

番茄抗根结线虫病基因的RAPD和SCAR标记

１１２病原病原线虫为南方根结线虫（ｅｉ．．Ｍｌ— ｏ
ｄｇｎｃｇｉ）由本课题组提供。ｏｙｅｎｏｎｔ，ｉａ
１２方法．
１２１番茄根结线虫病抗性鉴定．．
用水培繁殖方
基金项目：国家高技术研究发展计划（／，－” “Ｌｘ￣计划）目（０Ａ２７１－）项２２Ａ００３５通讯作者：李景富，教授，主要从事番茄育种研究；－ａ：ｈｉ８ｏ．ｏＥｍｉｚｉ５＠ｔ１ｍｃｌｚ１ｍ３
离到Ｍｉ因。另外，基随着转基因研究的进展，可
利用转入人工抗线虫基因使番茄获得对根结线虫
抗性成为可能。目，前在植物抗病育种中，分子标记技术的发展为育种工作提供了有力的辅助工具，利用紧密连锁的分子标记可以在任意发育阶段对品种的抗性
收稿日期：２０－３２０５０－４；修回日期：２０－－１０５００９
进行鉴定。ＲＰ标记是目前最常用的分子标记ＡＤ之一，但其可靠性、稳定性较差。根据ＲＰＡＤ标记两端序列，设计ｌ２８～５碱基的引物，通过ＰＲ特Ｃ异扩增，以将ＲＰ标记转化为ＳＡｓ— 可ＡＤＣＲ（ｅ
ｑｅｃｈｒｃｒｅｍｐｉｅｅｉ）记，ｃｕｎｅｃａａｔｉｄａｌｄｒｇｎ标ｅｚｉｆｏＳＡＲ
余３种主要线虫。目前克隆基因技术亦趋成
熟，ｓｇｅ等（９１构建了ＭｉＭｅｅｕｒｓ１９）基因侧翼的９个高分辨率ＲＬＦＰ图谱。Ａｒ（９１研究出与Ｍｉａｓ１９）ｔ紧密连锁的酸性磷酸酶一（Ｐ —）ｌＡＳ１座位的一个探针。Ｋｌｈｎａｓａ等和Ｍｌｇｎ等用定位克隆的ｏｉｉｉｌａ

番茄砧木抗根结线虫特性及其根系分泌物的化感作用研究

番茄砧木抗根结线虫特性及其根系分泌物的化感作用研究植物根结线虫(Meloidogyne spp.)病是一种世界性病害,且以南方根结线虫危害最为广泛。

番茄是我国主栽蔬菜品种,由于多在保护地栽培,根结线虫危害逐年加重。

20世纪40年代,番茄抗线虫基因Mi被发现,后来被证明是所有番茄栽培种的唯一抗源,利用该基因现已选育出许多抗根结线虫番茄栽培品种和嫁接砧木,被认为是目前防控根结线虫病最安全、有效的理想途径。

近年来,根系分泌物的化感作用研究逐渐成为各国学者的研究热点。

植物根系能够向根际释放大量的物质,例如氨基酸、复杂的多糖、蛋白质、挥发的亲脂性小分子等,这些物质可以对土壤生物产生直接或间接的影响,当然也包括线虫。

根系分泌物可以吸引线虫向根部移动或反向排斥,或抑制线虫的运动能力,甚至使线虫死亡。

然而,到目前为止根结线虫识别和导向寄主植株根部的具体机制现在仍不清楚。

此外,根结线虫病属于土传病害,研究其抗性机制时需要综合植株-线虫-土壤生物学活性三者之间的关系,根系分泌物对土壤微生物数量和土壤酶活性的影响是否与植株抗根结线虫特性存在某种相关性呢?目前未见报道。

本文以不同抗性番茄砧木为试材,通过南方根结线虫接种抗性鉴定,筛选出抗感差异显著的高抗、中抗和高感3个番茄砧木,通过根系分泌物GC-MS检测,分别鉴定其根系分泌物组分和含量变化,从中选择可能与抗病性有关的特异物质进行研究。

通过实验室及田间试验,明确特异物质对南方根结线虫卵孵化、二龄幼虫(J2)存活和趋化性及植株抗性的影响。

通过化感验证,明确特异物质对种子萌发和植株生长发育、生理生化以及土壤生物学活性的影响。

最后通过差异基因分析,对特异物质进行基因功能验证。

旨在通过上述问题的研究探讨为植物抗根结线虫提供理论基础及依据。

具体研究结果如下：1.采用温室盆栽人工接种法,鉴定了12个番茄材料对南方根结线虫(M. incognita)的抗性程度。

抗病性可涵盖高抗、中抗、抗病、感病、高感五种类型,其中高抗砧木Baliya 病情指数最低,高感对照L-402病情指数最高。

番茄抗根结线虫Mi基因研究

的根结线虫有２５种，广泛地危害我国许多粮食和经济作物，如水稻、花生、香蕉、柑桔、烟草、甘薯、大豆、棉花、西瓜、马铃薯、果树及中药材等。还严重危害我国南方露地和北方保护地大棚的蔬菜，如番茄、黄瓜、丝瓜、茄子、辣椒等，一般每年引起产量损失达１０％～１５％，严重时损失达３０％－４０％，甚至绝产。
第６染色体上，单个的显性位点Ｍｉ一３对南方根结线虫的毒性群体表现抗性，它
被定位在１２染色体的远端，与热稳定性抗南方根结线虫基因Ｍ卜５紧密连锁。此外还发现Ｍｉ一２与Ｍｉ－８连锁、Ｍｉ一６与Ｍｉ一７连锁。Ｍｉ－２，Ｍｉ一４，Ｍｉ一５和Ｍｊ一６基因耐高温，在土壤温度达到３２℃条件下，还维持对南方根结线虫的抗性，而Ⅻ 一７和一８在２５＂Ｃ条件下，对Ｍｉ基因有毒性的南方根结线虫群体表现抗性，这
些抗性基因为番茄抗根结线虫的育种提供了丰富的遗传资源。新的抗源基因的
相互关系需要进一步的研究，他们中的一些可能是等位基因。目前新基因对根
抗病品种已经成为防治根结线虫最好的选择。目前最有效的还是番茄的￣ｎ基
因。许多具有单显性基因Ｍｉ的番茄品种可以抑制三种主要的根结线虫：南方根
的生殖。而这个基因的名字也是由南方根结线虫（Ｍ。ｉｎｃｏｇｎｉｔａ）得来的。Ｍｉ基

番茄抗性品种控制根结线虫病技术研究与应用

．，
．
10 12 b B 24 5 1 bB
．．
6 88 bB 8 13 b B
．
．
H H H
H
结线虫然后在解剖镜下统计活线虫数计算虫口增长率
移栽后活线虫数
虫
口
一
8 62
．
c
BA BA
12 68 b B
．
7 50 b B
．Leabharlann 5 78．-
c
14 8 5 b B
‘
耐莫尼塔
’ ，
’ ，
以色
耐莫尼塔保罗塔
罗曼娜干禧的虫口增长率与对照差异极显著
口
列海泽拉优质种子公司的大红品种
‘
FA 5 9 3
’
，
’
、
‘
FA 1 4 2 0
一
荷兰安莎
‘
但拉秧前 10 个抗病试验品种虫抗病试验品种间根结指数
大红品种保罗塔
司的卵果型品种
‘
粉果型品种春雪红
’ ，
‘
’ ，
荷兰维特国际种业有限公
‘
等级 0级
1级
2级
无根结；
罗曼娜
FA 1 8 9
-
台湾农友种苗公司的樱桃型番茄品种干
‘
根结微量
，
少于 5 个：
～
禧
’ 。
常规对照为
．
6 88 bB
．
．

番茄抗根结线虫基因SlMi导入莴苣的研究的开题报告

番茄抗根结线虫基因SlMi导入莴苣的研究的开题报告一、选题背景及意义根结线虫是一类广泛分布于全球范围内的土传病原体，它们会寄生在植物的根部，腐蚀其根系，从而导致植株生长不良、减产甚至死亡。

莴苣作为一种广泛种植的蔬菜，也受到了根结线虫侵害的威胁。

因此，研究如何提高莴苣的抗根结线虫性，对于保障莴苣产量、提高农业生产效益具有重要意义。

番茄是一种已经被证明具有高度抗根结线虫性的植物，其抗根结线虫基因研究已经有了一定的进展。

因此，将番茄中与抗根结线虫有关的基因导入莴苣中，可以为莴苣提供新的抗虫基因资源，丰富莴苣的遗传改良手段。

二、研究目的及内容本研究的目的是将番茄中的抗根结线虫基因SlMi导入莴苣中，以提高莴苣的抗虫性。

具体研究内容包括：1. 克隆番茄中的抗根结线虫基因SlMi基因序列。

2. 构建含有SlMi基因的植物转化载体。

3. 利用农杆菌介导的遗传转化技术，将含有SlMi基因的转化载体导入莴苣中。

4. 对转基因莴苣进行抗根结线虫性状鉴定。

5. 对SlMi基因在转基因莴苣中的表达情况进行研究和分析。

6. 对转基因莴苣的生长和发育情况进行观察和评估。

三、研究计划及预期结果本研究计划用两年的时间完成，具体计划安排如下：第一年：1. 克隆番茄中的抗根结线虫基因SlMi基因序列。

2. 构建含有SlMi基因的植物转化载体。

第二年：1. 利用农杆菌介导的遗传转化技术，将含有SlMi基因的转化载体导入莴苣中。

2. 对转基因莴苣进行抗根结线虫性状鉴定。

3. 对SlMi基因在转基因莴苣中的表达情况进行研究和分析。

4. 对转基因莴苣的生长和发育情况进行观察和评估。

预期结果为：1. 成功克隆出番茄中的抗根结线虫基因SlMi。

2. 构建出含有SlMi基因的植物转化载体。

3. 成功将含有SlMi基因的转化载体导入莴苣中，得到转基因莴苣。

4. 转基因莴苣表现出较高的抗根结线虫性状。

5. 在转基因莴苣中检测到SlMi基因的表达，并对其表达情况进行研究和分析。

四重PCR技术鉴定番茄Ty-1、Ty-2、Mi和Cf-5基因研究

北方园艺２０１３（０９）：１１９重ＰＣＲ技术鉴定番茄．１、－２，Ｍｉ和Ｃｆ－５基因研究
刘超勤，李景富，许向阳，姜景彬
（东北农业大学园艺学院，黑龙江哈尔滨１５００３０）
茄产业的一个重大因素，随着番茄栽培面积的扩大，番
茄病害日趋严重。据统计，每年因病虫害造成的番茄减产大约为１０＂－￣２０，严重的甚至是绝收口］。其中番茄
根结线虫病（Ｒｏｏｔ — ｋｎｏｔｎｅｍａｔｏｄｅ）、番茄叶霉病（Ｌｅａｆｍｏｌｄ）是普发病害。近几年在我国大面积爆发的番茄黄化曲叶病毒病（Ｔｏｍａｔｏｙｅｌｌｏｗｌｅａｆｃｕｒｌｖｉｒｕｓ）更是对我国番茄生产造成了巨大的损失。在抗番茄根结线虫病育种中，Ｍｉ基因抗性是很早就被鉴定和利用的抗性之
国有继续向全国蔓延的趋势。目前对黄化曲叶病毒病
抗性研究最多的是 — Ｉ．、一２和而一３基因。其中Ｔｙ一１基因定位于６号染色体上［５］，与Ｍｉ基因有一定的重组
２、Ｍｉ和Ｃｆ－５基因的高度纯和自交系。１１１３４、１１１３５
是含有杂合的一１、一２，Ｍｉ和ｃｆ－５基因的Ｆ代品
种。１２００１￣１２０１４是自交系Ｆ２代。２ ×ＴａｑＭａｓｔｅｒＭｉｘＤＮＡ聚合酶、ＴａｑＩ酶，上海莱枫生物科技有限公司。参考有关文献［７＿ｌｏ］，筛选出特异性较强、符合该试验要求的特异性引物（表１）。

番茄抗根结线虫基因_Mi_和抗叶霉病基因_Cf5_的Multiplex_CAPS

园艺学报 2005,32(5):889~891A c ta H orticu lt urae Si n ica番茄抗根结线虫基因(M i)和抗叶霉病基因(Cf5)的M ultiplex-CAPS检测王孝宣杜永臣朱德蔚高建昌国艳梅戴善书(中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081)摘要:建立了同时检测番茄抗根结线虫基因(M i)和抗叶霉病基因(Cf5)的M u tiplex-CAPS技术,并利用该技术检测了12份番茄材料含有的抗性基因。

关键词:番茄;抗病性;分子标记;M u lti plex-CAPS;Cf5;M i中图分类号:S641 2 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2005)05-0889-03The M ulti plex-CAPS Anal ysis of the N e m atode R esistant G ene M i and the LeafM oul d R esistant G ene Cf5in T o m atoW ang X iaoxuan,Du Yongchen,Zhu De w e,i Gao Jianchang,Guo Yanm e,i and Da i Shanshu(Instit u te of V e getab les and F low ers,Ch i nese A cade my of Agr icultural Science,Beijing100081,Ch i na)Abst ract:A M ultiplex-C APS tec hnique for si m ultaneous identification of ne m atode resistant gene M i and lea fm ould resistant gene Cf5w as deve l o ped i n to m ato.A nd genes w hether con tain M i and Cf5w ere i d ent-i fied by usi n g th is technique i n12d ifferent to m ato m ateria ls.K ey w ords:To m ato;D isease resistance;M o lecu lar m ar k;M u lti p l e x-CAPS;Cf5;M i1 目的、材料与方法随着番茄(Ly copersicon esculentum)栽培的迅速发展,生产中的病虫危害问题日趋严重,据统计每年因病虫害可使番茄减产10%~20%,严重时可能绝收。

检测番茄根结线虫抗性基因Mi-1.2的KASP引物及其应用[发明专利]

专利名称：检测番茄根结线虫抗性基因Mi-1.2的KASP引物及其应用
专利类型：发明专利
发明人：李亚栋,吴志明,康忱,王鹏,田哲娟,王洪乐,邙光伟,杨超沙,王美娥
申请号：CN202010962956.5
申请日：20200914
公开号：CN111961751A
公开日：
20201120
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及分子生物学和番茄育种技术领域，特别是指检测番茄根结线虫抗性基因Mi‑1.2基因分型的KASP引物及其应用。

基因Mi‑1.2在第9173碱基的位置存在一处SNP位点，该SNP位点碱基的突变导致Mi‑1.2基因对番茄根结线虫抗性的改变。

本发明基于该SNP位点开发设计了一组可用于检测番茄根结线虫抗性基因Mi‑1.2基因分型的KASP引物和包含该KASP引物的试剂盒。

本发明中的KASP引物和试剂盒可用于鉴定番茄中是否含有番茄根结线虫的抗性基因Mi‑1.2，区分含有Mi‑1.2基因的抗根结线虫的番茄和不含有Mi‑1.2基因的感根结线虫的番茄。

本发明相比现有技术可对番茄植株在苗期快速、准确、高通量的进行番茄根结线虫抗性鉴定，降低苗期人工接种和田间抗虫性鉴定的工作量。

申请人：河北省农林科学院经济作物研究所
地址：050051 河北省石家庄市新华区和平西路598号省农科院中五楼403
国籍：CN
代理机构：石家庄海天知识产权代理有限公司
代理人：田文其
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转基因番茄研究进展

转基因番茄研究进展摘要：利用转基因技术培育，已经获得延熟、抗病、抗虫、抗逆、抗除草剂和品质改进的转基因番茄，并主要介绍转基因技术在这些方面的研究成果和研究进展，此外简单介绍了转基因番茄的优势及其展望。

关键词：转基因番茄进展番茄〔Lycopersicon eseulentem．Mil〕是茄科( Solanaceae) 番茄属( Lycopersicon) 的一年生或多年生植物，是世界上重要的蔬菜作物之一。

番茄需求量大，种植广泛，同时对其的遗传理论研究较为深入，番茄已经成为蔬菜基因工程研究的模式植物之一，且在1994年成为世界上第一例商品化生产的转基因作物——转基因延熟番Flavr-SavrTM，其由美国Calgene公司培育成功并获准进入市场。

其后几年利用转基因技术培育出抗病虫害、抗除草剂、抗逆和高品质的优良番茄品种。

番茄的基因转化技术主要采用农杆菌介导的基因转化方法。

此外，黄永芬等[1]利用花粉管导入法进展番茄的基因转化，将整合了抗冻蛋白基因的Ti 质粒直接注入番茄子房或花粉管中进展转化获得了抗冻番茄。

1．转基因番茄研究进展1．1延熟转基因番茄目前利用基因转化技术延熟番茄有两种方法，一是抑制细胞壁的降解，二是抑制乙烯的合成，在防止其腐烂方面取得了较好的效果。

1．1．1抑制番茄细胞壁降解的研究细胞壁水解酶对果实的成熟有促进作用，通过抑制阻止细胞壁水解酶活性，可抑制果实细胞壁的降解，延缓成熟与衰老。

主要包括两类酶，一类是多聚半乳糖醛酸酶(PG)，可将细胞壁中的多聚半乳糖苷降解为低聚半乳糖苷，在果实成熟过程中，PG的mRNA水平可提高100倍。

叶志彪等[2]将PG基因的Hindfi 片段反向克隆在植物转化载体Bin19的花椰菜病毒( CaMV) 的35S启动子和3' 端非翻译区( nos) 终止子之间，经农杆菌与番茄无菌苗子叶外植体共培养，获得转化植株，这种转反义PG基因的番茄果实中，PGmRNA水平及PG酶活性在果实成熟阶段明显降低。

番茄根结线虫病的研究进展

万方数据
— <# —
系进行了调查，发现南方根结线虫为华东地区的优势种群，其次为爪哇根结线虫和花生根结线虫，其中南方根结线虫占
〔 #$ 〕总数的 !! " 。廖金铃等对中国南方地区的根结线虫进
连锁， !" - 3 与 !" - 1 连锁。!" - # 、 !" - 1 、 !" - ! 表现为温度敏感型，即当土壤温度超过 (! 4 时，这 % 个基因对根结线虫病的抗性丧失；!" - ( 、 !" - . 、 !" - ) 、 !" - 3 表现为非温敏型，当土壤温度为 %( 4 时仍然具有对根结线虫病的抗性。这些新基因之间的相互关系在进一步研究之中，它们中的一些可能是等位基因。目前这些新基因对根结线虫病的抗性机制还没进行研究，也不清楚新基因的抗性是否与过敏性坏
〔 #) 〕死反应有关。这些抗性基因为今后的番茄抗根结线虫病
行了鉴定，发现南方根结线虫为该地区最主要的根结线虫，
〔 ## 〕其中优势小种为 # 号生理小种。喻盛甫等对云南省的根
结线虫进行了鉴定，也表明南方根结线虫为其优势种，且# 号生理小种为优势小种。
! " 番茄抗根结线虫病鉴定方法及抗病种质资源筛选 %& #’ 室内人工接种鉴定’ 抗根结线虫病鉴定工作一般
〔 #2 〕等利用此 PRLB 标记，建立了利用多重 JRB 技术同时鉴
#" 番茄抗根结线虫病基因及抗病育种 .& #’ 相关基因及定位’ !" 基因是最早被发现的番茄抗
根结线虫病基因，可抗除北方根结线虫以外的其他 % 种主要根结线虫，即抗南方根结线虫、爪哇根结线虫和花生根结线虫。目前，在番茄的近缘野生种中又发现了 ! 个抗根结线虫病基因，原来的 !" 抗性位点表示为 !" - # ，新发现的抗性基因分别称为 !" - ( 、 !" - % 、 !" - . 、 !" - ) 、 !" - 3 、 !" - 1 、 !" !、 !" - 2 。现已从番茄中定位出 . 个抗根结线虫病基因（ !" - # 、 !" - % 、 !" - ) 、 !" - 2 ），其中 !" - # 被定位在第 3 染色体上， !" - % 、 !" - ) 、 !" - 2 被定位在第 #( 染色体上

番茄根结线虫研究进展

番茄根结线虫研究进展李戌清;郑经武;郑积荣;阮松林【摘要】对国内外番茄根结线虫研究相关文献进行梳理和归类,就番茄根结线虫病的病原种类、危害症状、生物学特性、鉴定方法、抗性鉴定、防治策略,抗病育种及Mi基因进行综述,并对今后发展方向作了展望.%This paper briefly reviewed the research progresses in tomato nematode species, pathogen, damagernsuymptom, biological characteristics, classification methods, resistance evaluation, control measurement, resistancernbreeding and Mi gene. Moreover, the future development trend was prospected.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2012(024)004【总页数】5页(P748-752)【关键词】根结线虫;番茄;Mi基因【作者】李戌清;郑经武;郑积荣;阮松林【作者单位】杭州市农业科学研究院蔬菜研究所,浙江杭州310024;浙江大学农业与生物技术学院植物保护系,浙江杭州310058;杭州市农业科学研究院蔬菜研究所,浙江杭州310024;杭州市农业科学研究院蔬菜研究所,浙江杭州310024【正文语种】中文【中图分类】S511根结线虫(Meloidogyne spp.)广泛分布于世界性各地。

是一种重要的植物根系专性内寄生线虫。

已引起世界各国的广泛关注。

1855年Berkeley首次在英国温室感病黄瓜根际发现根结线虫［1］，此后不断有新种被发现。

目前国际上报道的根结线虫有效种80多个［2］，我国记录有效种39个［3］，可侵染包括单子叶植物、双子叶植物和草本植物的114科3 000多种植物［4］，遍及粮食、经济、蔬菜、果树、花卉、杂草等作物，尤其在热带、亚热带、温带地区的茄科、葫芦科、十字花科等植物上危害甚为严重，病害发生后，可造成作物减产10% ～20%，严重时可达75%以上［5］。

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因研究进展。
２番茄抗根结线虫和马铃薯金线虫的基因定位
许多的研究表明：在番茄中存在抗根结线虫的基因（ｉ，抗线虫育种是番茄育种项目的重要组成部分，Ｍ）
这种抗性基因（ｉＭ）具有广谱抗性，能有效地抗几种根结线虫。目前已经从番茄中定位出３个抗根结线虫的基
因（一１Ｖ一，Ｍ一）个抗马铃薯金线虫￣，／３ｉ５，１ｉｉＡＮ（ｅ）表１ｉ。ｎｒ（）＿ｏＩ
番茄抗根结线虫Ｍｉ因研究进展基
彭德良，唐文华
（１中国农业科学院植物保护研究所，北京１０９￣２中国农业大学植物保护学院，北京１ｏ４０ｏ４０９）０
摘要：目前国际上从番茄中发现了８个抗根结线虫基因，其中３个抗性基因Ｍ一１ｉ、蜥一３和Ｍｉ分别定位在番茄第６染色一５体和１染色体上，已经克隆出的Ｍｉ基因与其他植物抗病基因具有相似性．２一１线虫Ｍｉ因舟导了对马铃薯蚜虫的抗性。基关键词：番茄；抗性基因；根结线虫中圈分类号：￥４；￥３．６１２４２４５文献标识码：Ａ文章编号：１０ —１０（０１￣一０２ —０００７０２０）２０４
ｌｔ中。Ｍ基因是单个显性或半显性的抗性基因，ｅｕｎｍ）ｉ尽管人们很早就发现了Ｍ基因的存在并筛选出了许多ｉ与Ｍ基因相连锁的分子标记，由于在Ｍ基因周围常常发生重组的阻碍作用，严重地影响着Ｍ基因的定ｉ但ｉｉ
位及克隆”。直到最近Ｋｌｈｎ等（９）Ｍｌｇ等（９） ’ ａｓａｏｉ１８和ｉａ９ｌｎ１８用定位克隆途径分离到Ｍ基因。用重组鉴ｉ９ｉ
● 文献综述ＬＴＥＴＵＲＥＳＩＲＡＵＭＭＡＦＹ｛
２２２
沈
阳农Βιβλιοθήκη 业大学学
报
第３２卷
４
Ｍｉ基因的特性
４１过敏性反应．
基因抗性特征表现为在寄主植物中引起过敏死反应（Ｒ）即在二龄侵染性幼虫头部周围植物细胞Ｈ，的局部坏死。与其他的植物抗线虫基因相比，基因引起的过敏性坏死的抗性反应最快，一般在寄主受根
定技术将基因定位于番茄６染色体上的一小段区域内，通过对连续５ｋＮ的序列分析，鉴定出３号２ｂＤＡ
个开方阅读框架，他们与其他已克隆的植物抗病基因具有相似性。
表１已经定位的番茄抗线虫基嗣的染色体位点
Ｔａｌ１Ｍａｎｄｌｃｆｎｍａｏｅｒｓｔｎ帅ｂｅｕｅｏｉｏｅｔｄｅ／ａｔｓ
・２２１・
３番茄抗根结线虫Ｍｉ因的分离、克隆与其他植物抗病基因的关系基
３１．Ｍｉ因的分离和克隆基
Ｍｉ基因是通过种间杂交胚胎挽救法从野生种（ｙｏｅｓｏＭ妇ｍ）人栽培番茄种（ｙｐｉｎＣ－Ｌｃｒｉｒｐｉｃ￣，导Ｌｃｍｓｏｔｏｃｇ
ｎｏ，ｎ＿ｒｍｏｏ￣Ｉ．ＴｅｔｃｒｆＭｉ１ａｓｌｒｔｈｒｓｓｎｅｅｆｏｈｒｄｓａｅ／ｉｗ６ｃｏｅｙｒｌｔｄ＇．ｍｅ６ａｄＣｏｓｎ：ｖｏ，ｈ２ｈｓｕｔｅｏ一ｗｓｉａｏｔｅｅｉａｔｇｎｓｏｌｅｉｅｓｓｖａｌｓｌｅｅｒｕｍｉｔｉａ
其中的两个开方阅读框架Ｍ一１１Ｖ一１２是完整的基因。用克隆的拷贝Ｍ一１１ｉ．的互补ｉ．，］ｉ．ｉｉ．，Ｍ一１２性研究表明感病的番茄植株中导人Ｍ一１２ｉ．基因，而不是Ｍ一１１因，就具有对根结线虫的抗性，被转化ｉ．基植株后代具有与狮相同的抗性谱。Ｍ一．基因产生１ｉ１２个大约４ｂ的转录产物．编码１５个氨基酸的推定ｋ２７蛋白质。这种蛋白质是以存在核苷酸结合位点和富亮氨酸重复区域为特征的抗病相关蛋白家族中的一员。Ｍｉ编码的蛋白，缺乏信号序列，因此认为Ｍ基因在细胞质内介导寄主识别线虫的过程。Ｍ含有修饰序列这一ｉｉ
事实表明，Ｍ与其他蛋白质有复杂的相互关系。ｉ３２．Ｍｉ基因与其他高等植物抗病基因的关系
Ｍ一１２ｉ．基因与克隆的Ｐ基因相似程度最高．附是抗丁香假单胞杆菌番茄致病型（ｓｃｍｎｓＩｆＰｅｌｏａｙｕｏｓ－
效和集约化规模化方向发展，高附加值的经济作物如蔬菜的种植面积越来越大，随着保护地栽培技术的推广，复种指数增加使得蔬菜根结线虫病特别是番茄根结线虫病的的发生危害逐年加重。种植抗性品种是防治番茄根结线虫病最经济有效的方法，国外从２世纪４年代开展应用番茄中的抗性基因控制根结线虫的危Ｏｏ害，目前在美国和欧洲国家应用的番茄品种几乎都携带有抗线虫的 Ⅻ 基因，我国目前正在开展这一方面的工作，为了促进我国更快地开展番茄抗根结线虫的研究工作，本文简要介绍国外关于番茄抗根结线虫的Ｍ基ｉ
ＡｄａｏｆＲａｓａｃａｉｔｏ —ｋｏｍａｏｅｎＴｏｌｖｎｅｏｅｔｎｅＧｅｅＭｏＲｏｔｎｔＮｅｔｄｓｉｍｓ￣ａ
ＰＮ —ｈ，ＴＧＷｅＥｃＤｅＡＮｎ一
基因与抗蚜虫的基因（ｅＭｕ一１密切相关，抗）
收稿日期｝２０ —０ —１０１５６
作者简介：彭糟良（９一，募，中国农业科学院檀物保护研究所副研究员．士，从事檀韵缝虫分类鉴定、品种抗性和生物防治研究１∞ ）博
● 文荣述ＬＴＡＩＥＲＴＵＲＭＭＡＲＥＳＵＹ
第３期
彭德良等：番茄抗根结线虫Ｍｉ因研究进展基
因的抗性，在自然界中存在部分或全部打破蛐抗性的南方根结线虫、爪哇根结线虫和花生根结线虫群体。在田阃或温室条件下，由于Ｍ基因的选择作用，这些群体的数量上升“ 。ｊ
３３．Ｍｉ基因与抗蚜虫Ｍｅｇ一１因的关系基
基因不同，ＨＦ基因在它的氨基酸末端含有ｓ一‘
富亮氨酸区（ｚ，但这并不适合富亮氨酸重复区（Ｒ的类型。Ｌ）ＬＲ）
以前曾在番茄中观察到对马铃薯蚜虫（ａｒｉｕｎｅｈｒａ）Ｍｃｓｌｕｏｉ的抗性、并命名了１ｏｐｏｐｂｅ个新基因Ｍｕ。该ｅ一１基因与抗线虫的Ｍ基因紧密连锁，最近进行的蛐克隆试验确定丁这两个基因的相关性。Ｒｓ等（９８研ｉｏｉ１）ｓ９究表明，Ｍ基因能在番茄叶片中表达，ｉ对蚜虫的抗性是株系转化性（ｏｔ— ｐｃｃ，用Ｍ转化的感病番茄ｉｌｅｓｅｆ）ｓａｉｉｉ对１个蚜虫株系表现抗性。因此，ｏｌ（９８认为Ｍ和Ｍｕ是同１Ｒｓ等１９）ｓｉｅ一１个基因，Ｍ介导了对蚜虫和线虫ｉ的抗性… 。但马铃薯蚜虫和根结线虫是两种属于不同分类单元的生物，他们的亲缘关系很远，目前还不知道在两种生物中影响抗性的机制是否相同。是首例对亲缘关系很远的两种生物都表现抗性的基因。
ｆｎ／￣矿ＰｍＰｏａｏ．ｌｍＪ．ａ／ｒｅ／ａｔｎＡｄＶ矿Ａｒｄｒｃｍｃｍｇ／ｍａｓａｌ２ＰｎＰｏａｍ．吼／ｇａｈ￣／ｔｒｅ／ａｔ￣ｈＡｔａｏｌａ／ｒ，蜥
．ｅ￣１０９．‰ Ｂ／Ｊｉ００４／０９，‰ Ｊ００４
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结线虫侵染后８２就可观察到Ｈ～１１１Ｒ反应。由于Ｍ其因的存在与否决定了番茄植株是否对根结线虫具有抗ｉ性，Ｍ基因的产物很明显参与植物对线虫的识别，引发一系列与抗性反应有关的信号传递过程“ 。ｉ并
４２抗性谱．
基因能有效地抵抗３种常见的根结线虫，如南方根结线虫（Ｍ．／ｏｎａ）ｎｇ／、爪哇根结线虫（ Ⅲ ｃｔＭ． ∞ ）花生根结线虫（和Ｍｌ）加咖，但不抗北方根结线虫（Ｍ．）。一些根结线虫的生理小种能克服Ｍｉ基
沈阳农业大学学报，２０ —０，３（）２ — ２０１６２３：２０２３
ＪｕａｏｈｎａｇＡｒｕｔａＵｉｒｔ，２０ —０，３（）２ —２３ｏｒｌｆＳｅｙｎｇｉｌｒｌｎｖｓｙ０１６２３：２０２ｎｃｕｅｉ