放线菌的形态观察

(5) 镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将 有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。观察时，宜用 略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。 如果用 0.1% 美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效 果会更好。
四、操作步骤 ——关键步骤及注意事项
• 1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。 • 2.插片时要有一定角度并与划线垂直。 • 3.观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到
二、基本原理 ——放线菌
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细 菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入 培养基内生长的叫基内菌丝 ( 简称“基丝” ) ，基丝生长到一 定阶段还能向空气中生长出气生菌丝 ( 简称“气丝” ) ，并进 一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气 丝。
适当视野，更换高倍镜观察。 • 4.如果用0.1%美蓝对培养后的盖玻片进行染
色后观察，效果会更好。
五、实验报告
1 结果 绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。 2 思考题 (1) 试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。 (2) 玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物
的培养和观察，为什么 ？ (3) 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝
在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色 暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种 螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、 杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形 态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
为了观察放线菌的形态特征，入们设计了各种培养和观察方 法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长 状态下的形态特征。本实验介绍扦片法。
pH 7.4~7.6
1. 称量和溶化
按配方先称取可溶性溶粉、放入小烧
杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，
再加入少于所需水量的沸水中，继续
加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后
再称取其他各成分依次逐一溶化。对
微度量的成贮分备液Fe按SO比4·例7H换2O算可后先再配加成入高，浓方
法是先在 100ml 水中加入 lg 的
(2) 接种 用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平源自文库 上划线接种。
(3) 扦片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约 45 o 角扦 入琼脂内 ( 扦在接种线上 )( 图 IV — 7) ，扦片数量可根据 需要而定。
(4) 培养 将扦片平板倒置， 28 o C 培养，培养时间根据观察 的目的而定，通常 3~5d 。
2 培养基：高氏 1 号琼脂。 3 仪器或其他用具：平皿、玻璃纸、盖玻片、
玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲， 镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。
四、操作步骤 ——培养基制备
高氏 I 号培养基配方如下： 可溶性淀粉 20g
NaCl 0.5g
KNO 3 1g
K2HPO4·3H2O 0.5g MgSO4 ·7H2O 0.5g FeSO4·7H2O 0.01g 琼脂 15~ 25g 水 1000ml
实验
放线菌的形态观察
一、目的要求
1. 掌握配制合成培养基的一般方法。 2.学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 3 .初步了解放线菌的形态特征。
二、基本原理——培养基
高氏 I 号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征 的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多 种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作 用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般 是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要 将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。 此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏 I 号培养基中的FeSO4·7H2O的量只有0.00l ％，因此 在配制培养基时需预先配成高浓度的 FeSO4·H2O贮 备液，然后再按需加入一定的量到培养基中。
二、基本原理——扦片法
• 扦片法：将放线菌接种在琼脂平板上，扦 上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着 培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着 在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置 于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到 放线菌自然生长状态下的特征，而且便于 观察不同生长期的形态。
三、实验器材
1 菌种： 青色链霉菌 ( S glaucus ) ，弗氏链霉 菌 ( S. fradiae ) 。
F00e0SmOl4培·7H养2基O配中成加01.0m11g
/ml ，再在 的 0.01 g ／
1 ml
的贮备液即可。待所有药品完全溶解
后，补充水分到所需的总体积。
2. pH 调节、分装、包扎、灭菌及无菌检 验
四、操作步骤 ——扦片法
(1) 倒平板 取融化并冷至大约 50 ℃ 的高氏 1 号琼脂约 20ml 倒平板，凝固待用。