蛋白质化学综合测试题

一．填空题：
1.组成蛋白质分子的碱性氨基酸有、、和。

酸性氨基酸有和。

是带有芳香族侧链的极性氨基酸。

和是带有芳香族侧链的非极性氨基酸。

是含硫的极性氨基酸。

2.氨基酸在等电点时，主要以离子形式存在，在pH＞pI的溶液中，大部分以离子形式存在。

在pH＜pI的溶液中，大部分以离子形式存在。

3.通常可用紫外分光光度计测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的、、和
三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。

4.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生色物质。

5.在一些天然肽中含有、和环状等特殊结构。

这些结构在蛋白质中是不存在的。

很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。

6.常用的拆开蛋白质分子中二硫键的方法有⑴还原法，常用的试剂为β-巯基乙醇。

⑵氧化法，常用的试剂为过甲酸或。

7.Pauling等人提出的蛋白质α-螺旋模型，每圈包含个氨基酸残基，高度为，每个氨基酸残基沿轴上升，并沿轴旋转度。

8.一般来说，球状蛋白质的疏水性氨基酸侧链位于分子内部，亲水性氨基酸侧链位于分子表面。

9.维持蛋白质构象的化学键有、、、、和。

10.血红蛋白（Hb）与氧结合的过程呈现正协同效应，是通过Hb的别构现象实现的。

11.当溶液中盐离子强度低时，可增加蛋白质的溶解度，这种现象叫盐溶。

当溶液中盐离子强度高时，可使蛋白质沉淀，这种现象叫盐析。

12.蛋白质受物理化学因素的影响级结构不变，改变，物化性质改变，降低或丧失。

13. α-螺旋结构，每个螺旋圈内包含个氨基酸残基，两个氨基酸残基轴向间距为埃，氢键是由每个残基上的N-H与后面个残基的C=O形成的，氢键近似地与长轴相。

14.维持蛋白质二级结构的主要作用力是；维持蛋白质三级结构的主要作用力是。

二．是非题：
1.只有在很高或很低pH时，氨基酸才主要以非离子化形式存在。

错
2.从某些微生物中分离得到的多肽抗菌素为环状肽链，并含有D-型氨基酸。

对
3.具备三级结构的蛋白质就具有生物活性。

错
4.两条以上具三级结构的多肽链通过共价键结合成四级结构的蛋白质。

错
5.变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的。

错
6.蛋白质中所有氨基酸都是左旋的。

错
7.除色氨酸因酸处理被破坏外，所有的氨基酸都能用氨基酸自动分析仪确切的加以鉴定。

错Asn、Gln
8.构象的改变必需打破共价键，构型的改变则不是。

错
9.血红蛋白的血红素辅基处在一个极性的裂隙中。

错？
10.用分子筛层析分离蛋白质，分子量最小的先下来，分子量大的后下来。

？
11.天然氨基酸都具有一个不对称α-碳原子。

错
12.血红蛋白的α-链、β-链和肌红蛋白的肽链在三级结构上很相似，所以它们都有结合氧的能力。

血红蛋白与氧的亲和力较肌红蛋白更强。

错？（为什么更弱）
13.自然界的蛋白质和多肽类物质均由L-型氨基酸组成。

错？
14.测定变构酶的分子量可以用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

错？（打开S-S）
15.一个化合物如能和茚三酮反应生成紫色，说明此化合物是氨基酸、肽或蛋白质。

错
16.双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。

错？
17.脯氨酸不能参与α-螺旋，有它时α-螺旋转弯，在肌红蛋白和血红蛋白的多肽链中，每一个转弯处并不一定有脯氨酸，但是每一个脯氨酸却产生一个转弯。

对？
18.变性蛋白质溶解度降低是因为蛋白质分子的电荷被中和以及除去了蛋白质外面的水化层所引起的。

错（氢键断裂、螺旋松散、疏水基团暴露）
三．问答题：
1.下列五种氨基酸：Ser、Arg、Ala、Glu、trp，在pH5.68的缓冲液中进行电泳，其结果如何？（其pI值依次为：5.68；10.75；6.02；3.22；5.89）
2.下列试剂常用于蛋白质化学：CNBr；丹磺酰氯；脲；6mol/L HCl；β-巯基乙醇；水合茚三酮；胰蛋白酶；异硫氰酸苯酯；过甲酸；糜蛋白酶。

其中哪一个最适合于完成下列任务？
⑴测定小肽的氨基酸顺序。

Edman PITC
⑵鉴定肽的氨基末端残基（你拿到的那个肽的量不到10-7g）丹磺酰氯
⑶不含二硫键蛋白质的可逆变性。

若有二硫键存在时还需加什么试剂？脲β-巯基乙醇
⑷在芳香残基、甲硫氨酸的残基及Lys、Arg的羧基一侧水解肽键。

糜蛋白酶CNBr 胰蛋白酶
3.指出下列氨基酸残基中哪一些可以在生理条件下的典型球蛋白的分子外部找到？为什么？（Glu、Arg、Val、Phe、Ile、Met、Asn、Lys、Ser、Thr）（极性在外）
4.现有一蛋白质混合液含有A、B、C三种蛋白。

A：pI=6.5、分子量=50000；B：pI=7.0、分子量=80000；C：pI=7.5、分子量=100000。

请用三种不同方法分离，并简要说明分离原理。

（电泳、pI、盐析等）
5.列举三种常用的蛋白质定量法，并简要说明其原理。

（凯氏定氮、双缩脲、Folin、紫外吸收）
6.用酸水解一种六肽，定量回收得到Gly及另一种氨基酸。

此氨基酸具坂口反应。

用胰蛋白酶处理该肽生成的产物，在不同的层析和电泳系统中均只有一个单一的斑点，但是迁移率与未经处理的六肽不同。

用胰凝乳蛋白酶水解原来的六肽，生成的产物中有一游离氨基酸并具紫外吸收，试从上述实验结果写出该氨基酸的顺序。

（Trp-Gly-Arg-Trp-Gly-Arg）？
7.分析四肽Lys-Gly-Ala-Gly在pH=1.9 ，pH=3.0，pH=6.5，pH=10.0下进行纸电泳时的移
动方向。

（pK
α-NH2=8.5；Pk
α-COOH
=3；Pk Lys-R=10.53）pI= 9.51 ？
8.胃液（PH 约为1.5）中的胃蛋白酶的等电点约为1，比其他的蛋白质低得多。

什么功能基团必须相对大量存在时才能使胃蛋白酶具有这么低的pI ？哪些氨基酸可作为有这样功能基团的氨基酸？（37个酸性基团，6个碱性基团，Asp、Glu）
9.人的头发每年约长20cm，计算人头发生长时的肽键合成速度（以每秒合成的肽键数计算）。

（4.2）
10.已知某蛋白质含Zn为1.168%，分析后确定每分子蛋白含2个Zn原子（M Zn=65），假设分子中72%的氨基酸残基形成α-螺旋，其余的均为β-折叠，试计算一分子中它的二级结构的总长度。

（一个氨基酸残基的平均分子量为110道尔顿）（20.8nm）？
11.一系列突变种HbA分子在pH=8.6下的电泳迁移率图示如下：
－＋
在下列突变种血红蛋白中找出位置abcd的对应物：（bcda）？
HbD（α68）Lys取代Asn
HbJ（β69）Asp取代Gly
HbN（β95）Glu取代Lys
HbC（β6）Lys取代Glu
12.用阳离子交换树脂分离下列氨基酸时，用pH=7.0缓冲液洗脱时，哪种氨基酸先被洗脱下来？（电荷量、极性，正电荷越多越慢）
⑴Asp和Lys ⑵Gly和Leu ⑶Ser和Ala （pI一样，但Ser极性，树脂非极性）
13.比较下列两个多肽之间溶解度的大小：
⑴[Gly]20和[Glu]20在pH=7.0时；
⑵[Ala-Asp-Gly]5和[Asn-Ser-His]5在pH=3.0时。

（极性氨基酸多）
14．为什么在球蛋白内部和外部都可发现Gly和Ala？另外，在球蛋白质内部还是外部能找到Cys？说明理由。

（侧链小，疏水性弱，不影响溶解）（极性，但-S-S-无极性，故内部）
15．请你设计一个电泳实验，用以确定蛋白质分子链间或链内的二硫键位置。

（工具酶为胃蛋白酶，其特点（1）为专一性较低切点多；（2）作用的pH=1.5，有利于防止二硫键发生交换反应。

）（对角线电泳）
16. A 、B、C三种不同蛋白质，在pH=7进行电泳，结果如图所示。

－+
若在pH 7用中性盐沉淀这三种蛋白质，哪种蛋白质首先沉淀？哪种次之？哪种最后？（CBA）
17.凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法均建筑在分子大小的基础上，而且两种方法均采用交连的多聚物作为支持介质。

为什么在凝胶过滤时，分子量小的蛋白质有较长的保留时间，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它又“跑”得最快？（分子量小的蛋白质会进入凝胶分子，被阻）。