细胞表型实验介绍ppt
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实验方案-细胞表型检测
细胞表型检测1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试品名称：人胎盘间充质干细胞、猴胎盘间充质干细胞的P4、P6、P8细胞1.1.2 主要试剂B液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司D液自配天津昂赛细胞基因工程有限公司血清新西兰胎牛血清(特级) 上海依科赛生物制品有限公司 IgG-FITC BD公司货号：555748CD19-FITC BD公司货号：555412CD34-FITC BD公司货号：555821CD44- FITC BD公司货号：CD31- FITC BD公司货号：IgG-PE BD公司货号：555749CD11b-PE BD公司货号：555483CD45-PE BD公司货号：555388CD73-PE BD公司货号：550257CD90-PE BD公司货号：555596CD105-PE Serotec公司货号：MCA1557PEHLA-DR-PE BD公司货号：555812CD29-PE BD公司货号：1.1.3 主要仪器CO2培养箱离心机超净工作台显微镜1.1.4 主要耗材50ml离心管、5ml/10ml移液管、1.5ml EP管。
1.1.5 实验设计依据通过传代培养，我们可以得到相对纯的间充质干细胞，参考国际细胞治疗协会提出的间充质干细胞表型方面的标准，CD73、CD90和CD105阳性率不低于95％；CD45、CD34、CD11b、CD19 和HLA-DR阳性率不高于2％[1]。
检测在传代过程中的细胞的表型是否会发生变化。
我们设计检测P4代、P6和P8代细胞表型。
1.2 实验方法1.2.1细胞消化1、将原培养液倒净,用移液管取D液10ml冲洗细胞，倒净,此操作重复洗2 次；2、用移液管吸取加入B液2ml,盖上培养瓶盖子,摇晃使B液均匀覆盖瓶底,待细胞从培养壁脱落下来；3、用移液管吸取加入C液0.5ml, 终止消化，再加D液10ml，吹打细胞制成细胞悬液，将细胞悬液收集至离心管中；1.2.2 流式检测方法1、收集细胞，1000rpm离心5min，用D液洗一次，过滤；2、用适量D液将细胞重悬，100μl每管分装到1.5mlEP管中，每管细胞不少于用1×105，在每管中加入4μl要检测表型的抗体,室温避光放置30min；加入1mlD液混匀，离心弃上清，再用1mlD液混匀，离心弃上清，每管加入350-500μl D液重悬，移入流式管待测即可；3、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数3000-10000个细胞；4、分析数据。
细胞生物学实验技术一 ppt课件
– 体内：神经和体液的调节、细胞间相互影响 – 体外：缺乏动态平衡的稳定环境 – 发生的变化
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
• 分化现象减弱 • 形态功能趋于单一化 • 一定时间后死亡或者转化获得不死性
细胞生物学实验技术一
• 体外培养的细胞仍具有研究的意义
– 许多性状仍与体内相同
• 如体外培养的心肌细胞仍可博动，
– 细胞在培养中的表现，存在相应基因关闭／ 开启引起的现象，在培养的细胞中某些特定 功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供 线索。
细胞生物学实验技术一
• 成纤维细胞型
– 梭型或不规则三角形，生长时呈放射状。 – 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，
如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 – 凡培养中形态与成纤维类似时皆可称为成纤维细胞。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
– 上皮型细胞： • 扁平不规则多角形，彼此紧密相连。生长时呈膜状移动， 细胞很少单独行动。 • 起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化 管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。
细胞生物学实验技术一
细胞生物学实验技术一
组织块接种：牛胎儿成纤维细胞
细胞生物学实验技术一
• 传代期：
– 原代培养细胞一经传代后便改称做细胞系 （Cell Line）。此期的持续时间最长。
– 在培养条件较好情况下，细胞增殖旺盛，并 能维持二倍体核型。
– 为保持二倍体细胞性质，细胞应在原代培养 期或传代后早期冻存。
• 特点
– 细胞群是异质的（Heterogeneous） – 细胞克隆形成率（Cloning Efficiency）低，即细胞独立生
存性差。 – 由于原代培养细胞和体内细胞性状相似性大，是检测药物很
细胞生物学实验PPT课件
细胞生物学实验ppt课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
细胞实验技术课堂PPT第九讲细胞培养总结
D 0.051 2.632 2.681 2.681 2.611 2.484 2.438 2.545 2.502 0.061 0.052 0.057 450
E 0.051 2.652 2.661 2.617 2.448 2.579 2.641 2.665 2.62 0.05 0.051 0.049 450
（二）细胞培养常用试剂
1：水
细胞培养用水必须非常纯净，不含有离子和其他的杂质。 需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或超纯水
2：细胞培养基
• 市场上可提供干粉培养基和液体培养基 • 常用的培养基种类
– RPMI-1640、高糖DMEM、低糖DMEM、F12 等
细胞培养基应用选择
• 选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考： •
储存温度 杀灭细菌
-20℃
G(+)
-20℃
G(+) , G(-)
-20℃ G(+) , G(-), 支原体
-20℃
真菌
-20℃
真菌
（三）、器材和液体的准备
• 细胞培养用的玻璃器材
– 培养瓶、吸管等在清洗干净以后，装在铝盒和铁筒 中，160℃，2小时干烤灭菌后备用
• 手术器材、瓶塞、配制好的PBS液
21 A 0.215 B 0.042 C 0.042 D 0.045 E 0.07 F 0.041 G 0.045 H 0.042
2 0.042 1.979 2.085 2.096 2.26 2.22 2.323 0.044
3
4
G
0.2573 0.1023 0.2913 0.0693 0.2773 0.1063 0.2643 0.1123 0.0013 0.0013
H
观察动植物细胞的结构实验(共24张PPT)
观察动植物细胞
能否将一个洋葱或黄瓜直接放到显微镜下观察呢?
要看得清楚被观察的物体,应该要让被观察的材料具备什么样 的条件?
薄而透明
玻片标本类型
玻片标本
切片
涂片
装片
用从生物体上切取的薄片制成
用液体的生物材料经过涂抹制成 用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成 （非常微小的生物可直接做成装片）
按存放的时间
临时的 不可长期保存 永久的 可长期保存
观察植物细胞
实验:制作并观察植物细胞临时装片（洋葱）
（一）目的要求
（二）材料用具
（三）方法步骤
（一）目的要求:
☆制作植物细胞临时装片，学习制作临时装片的基本方法。 ☆认识植物细胞的基本结构。 ☆练习画细胞结构简图。
（二）材料用具:
洋葱鳞片叶，清水，碘液，镊子，滴管，纱布，吸水纸，载 玻片，盖玻片，显微镜。
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
① 把一滴碘液滴在盖玻片的一侧进行染色。
生理盐水与人体内细胞液浓度差不多,可以保持人体细胞的生活状态，由于无细胞壁，若使用清水会使细胞由于吸水而破裂。
为什么要染色？所有细胞都需要染色吗？
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
动植物细胞结构的异同点
不是所有的植物细胞都有叶绿体
擦 滴 刮 涂盖
染吸
染吸
植物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体 细胞壁 叶绿体 液泡 动物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
显微镜视野中的洋葱内表皮细胞
用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成
① 用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜──内表皮。
边缘较黑较宽，圆形或椭圆形,大小不一
制作人的口腔上皮细胞临时装片 用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
能否将一个洋葱或黄瓜直接放到显微镜下观察呢?
要看得清楚被观察的物体,应该要让被观察的材料具备什么样 的条件?
薄而透明
玻片标本类型
玻片标本
切片
涂片
装片
用从生物体上切取的薄片制成
用液体的生物材料经过涂抹制成 用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成 （非常微小的生物可直接做成装片）
按存放的时间
临时的 不可长期保存 永久的 可长期保存
观察植物细胞
实验:制作并观察植物细胞临时装片（洋葱）
（一）目的要求
（二）材料用具
（三）方法步骤
（一）目的要求:
☆制作植物细胞临时装片，学习制作临时装片的基本方法。 ☆认识植物细胞的基本结构。 ☆练习画细胞结构简图。
（二）材料用具:
洋葱鳞片叶，清水，碘液，镊子，滴管，纱布，吸水纸，载 玻片，盖玻片，显微镜。
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
① 把一滴碘液滴在盖玻片的一侧进行染色。
生理盐水与人体内细胞液浓度差不多,可以保持人体细胞的生活状态，由于无细胞壁，若使用清水会使细胞由于吸水而破裂。
为什么要染色？所有细胞都需要染色吗？
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
动植物细胞结构的异同点
不是所有的植物细胞都有叶绿体
擦 滴 刮 涂盖
染吸
染吸
植物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体 细胞壁 叶绿体 液泡 动物: 细胞膜 细胞核 细胞质 线粒体
制作洋葱鳞片叶内表皮细胞临时装片
显微镜视野中的洋葱内表皮细胞
用从生物体上撕下或挑取的少量材料制成
① 用镊子从洋葱鳞片叶内侧撕取一小块透明薄膜──内表皮。
边缘较黑较宽，圆形或椭圆形,大小不一
制作人的口腔上皮细胞临时装片 用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段主要包括细胞免疫表型分析、蛋白质表达诸分析和基因表达诸分析等。
1.细胞免疫表型分析:通过检测肿瘤细胞表面的抗原标记物，可以确定肿瘤细胞的免疫表型，从而了解肿瘤细胞的免疫应答和免疫逃逸机制。
2.蛋白质表达诸分析:通过比较肿瘤细胞和正常细胞之间的蛋白质表达谱，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达蛋白质，进-步揭示肿瘤细胞的生物学特征。
3.基因表达诸分析:通过检测肿瘤细胞和正常细胞之间的基因表达诸，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达基因，从而了解肿瘤细胞的基因组特征。
这些实验手段的原理主要是基于分子生物学和生物信息学的方法，通过对肿瘤细胞表面或内部的分子进行检测和分析。
从而获得肿瘤细胞的表型信息。
这些信息对于理解肿瘤细胞的生物学特征、寻找新的治疗靶点以及评估治疗效果具有重要意义。
细胞表型实验介绍PPT课件
6
第6页/共23页
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱） 一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
12
第12页/共23页
2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。 在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条 件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。
• 细胞侵袭
实验实例：孵育24h
17
第17页/共23页
4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
1
第1页/共23页
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生
长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关
基因、蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
2
第2页/共23页
1.细胞凋亡、周期
第6页/共23页
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。 有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱） 一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
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2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。 在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条 件下观察其对肿瘤细胞迁移的影响。
• 细胞侵袭
实验实例：孵育24h
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4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
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第1页/共23页
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生
长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关
基因、蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
2
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1.细胞凋亡、周期
细胞培养实验课件(共16张PPT)
用柱形图预测A、B、C三组细胞增殖情况（至 少表示3次检测结果）。
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
细胞数
A组 B组 C组
0
时间
物质P对细菌X增殖影响示意图
• 若物质P能极大缩短分裂间期，从而促进动
物细胞增殖，请画出实验组与对照组细胞数
量与分裂指数曲线示意图（*17年11月改）
细胞数
③
①
分裂指数
④
② ①实验组细胞数
②对照组细胞数
细胞数量与细胞总数
2、同位素示踪法：通常在培养液中加入同位 素标记的物质是_胸__腺__嘧__啶_脱__氧__核_苷__，原因是 _胸__腺_嘧__啶__脱_氧__核__苷__是_D__N_A_合_成__的__原__料_，__其__进__入_细__胞_
的量可反映细胞的增殖情况
（*11年高考、17年11月）
细菌增殖的检测方法？
1、血细胞计数板计数法 2、利用浑浊度估测法 3、平板菌落计数法 （详见课后思考）
亚硝酸盐的检测方法：
• 应先对培养后细菌进行___破__碎___处理， ___离__心____或__过__滤______，取上清液或滤液， 加入对氨基苯磺酸和__N_-1_-_萘__基_乙__二__胺__并进行
（2）溶液中物质或结构分离纯化的常用方法 有哪些？ 离心、过滤、沉淀、虹吸、层析等
（详见课后思考）
• 请简要说出2种检测荚膜的方法（具体操作 不要求）
法一：将细菌X悬液制成临时装片，用显微镜 观察
法二：将细菌X悬液接种到固体平板上，观察 单菌落的特征
实验分组？（*12年高考、16年4月）
• A组：细菌X悬液+培养液 • B组：细菌X悬液+培养液+物质P
甲状腺功能 脊蛙反射分析 细菌M培养过程中细胞数、酶浓度变化 不同浓度NaCl对肝细胞体积与数量的影响 生物制剂W对细菌B增殖的影响 甲状腺与甲状腺激素的功能 利用染色剂鉴定细胞种数 药物甲、药物乙对海拉细胞增殖的影响 海拉细胞增殖研究（多种检测技术） 细胞计数、血糖调节、甲状腺功能、二次免疫 脊蛙反射分析
造血干细胞表型及分离纯化方法ppt演示课件
12
不同部位AA的长度为： N端为20aa的信号肽，含有
大量的 serine / threonine；胞外 区258aa；跨膜区22aa；胞内区 73aa。
13
• CD34分子的epitopes 所谓表位是指同一抗原分子上
有不同的抗原识别位点。目前有My10, BI-3c5, 12.8, ICH-3, TUK , 115.2 等单抗识别的位点。前四株识 别的表位取决于 sialic acid residues, 后二者却不 一样。
38
• Expression
• hematopoietic stem and progenitor cells.
• neural and embryonic stem cells. • some leukemias and brain tumours
that may be derived from stem cells. • Low level expression could also be
8
（一）CD34
1.CD34的生物学特性 • 基因定位
Chromosome 1, (1q32)(human)也 有报道位于1q12 q ter 与CD45 及一些其它膜蛋白家族毗邻。
9
• 基因长度
全长(spans)26~28kb (human), 编码序列含8个exons ， 第1和8个 exon 编码翻译区和部分非翻译区； 2~7个exons仅编码翻译区。也有报 道人CD34基因全长38kb 。
36
5. CD133(AC133)
97kDa的糖蛋白，包括5个跨膜结 构域， 糖基化后在蛋白胶上显示120 kDa的蛋白带。最初是通过AC133单抗 鉴定的，它能识别人HSCs的CD34+亚 类29,30。一种CD133异构体AC133-2, 最近已经被克隆并鉴定为可被AC133抗 体识别的原始表面抗原。
不同部位AA的长度为： N端为20aa的信号肽，含有
大量的 serine / threonine；胞外 区258aa；跨膜区22aa；胞内区 73aa。
13
• CD34分子的epitopes 所谓表位是指同一抗原分子上
有不同的抗原识别位点。目前有My10, BI-3c5, 12.8, ICH-3, TUK , 115.2 等单抗识别的位点。前四株识 别的表位取决于 sialic acid residues, 后二者却不 一样。
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• Expression
• hematopoietic stem and progenitor cells.
• neural and embryonic stem cells. • some leukemias and brain tumours
that may be derived from stem cells. • Low level expression could also be
8
（一）CD34
1.CD34的生物学特性 • 基因定位
Chromosome 1, (1q32)(human)也 有报道位于1q12 q ter 与CD45 及一些其它膜蛋白家族毗邻。
9
• 基因长度
全长(spans)26~28kb (human), 编码序列含8个exons ， 第1和8个 exon 编码翻译区和部分非翻译区； 2~7个exons仅编码翻译区。也有报 道人CD34基因全长38kb 。
36
5. CD133(AC133)
97kDa的糖蛋白，包括5个跨膜结 构域， 糖基化后在蛋白胶上显示120 kDa的蛋白带。最初是通过AC133单抗 鉴定的，它能识别人HSCs的CD34+亚 类29,30。一种CD133异构体AC133-2, 最近已经被克隆并鉴定为可被AC133抗 体识别的原始表面抗原。
细胞生物学实验课件pptPowerPointPres(1)
二、实验原理
n 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血 液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可对 血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
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三、实验用品
1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经 脱脂洗净的载玻片 、双凹片（推片） 。
再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前 缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片 端展开成线状。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
两玻片的角度以30~45°为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。
30~45°
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实验作业
将观察到的现象列入下表，对实验结 果进行比较和分析。
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实验作业
试管编号
1.10ml氯化钠+1ml稀释羊血 2.10ml氯化铵+1ml稀释羊血 3.10ml醋酸铵+1ml稀释羊血
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实验三 细胞膜的渗透性
一、实验目的：
了解细胞膜的渗透性及各类物质进 入细胞的速度。
细胞生物学实验课件 pptPowerPointPres(1)
二、 实验原理
细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性。
当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶
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采血
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《细胞生物学实验》课件
05
结论与讨论
实验结论
01 02
实验结论总结
通过本次实验，我们成功地观察到了细胞分裂的各个阶段，验证了细胞 周期的存在和细胞分裂的机制。实验结果与预期一致，进一步证实了细 胞生物学理论的正确性。
实验结果的意义
本实验结果对于深入理解细胞分裂和增殖的机制具有重要意义，为后续 的细胞生物学研究和应用提供了有力支持。
《细胞生物学实验》 ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验概述 • 实验材料 • 实验操作 • 实验结果 • 结论与讨论
01
实验概述
实验目的
掌握细胞培养技术
通过本实验，学生将熟悉并掌握细胞培养的基本技术和方法，了 解细胞在体外生长和繁殖的条件和要求。
理解细胞形态与功能的关系
通过观察不同类型细胞的形态和生长特点，学生将进一步理解细胞 形态与其功能之间的关系。
培养实践操作能力
本实验将提供实际操作的机会，培养学生的实验技能和动手能力， 提高其解决实际问题的能力。
实验原理
细胞培养的生物学基础
细胞生长与增殖的过程
介绍细胞培养的基本概念、发展历程 和应用领域，为学生提供相关的生物 学基础知识。
解释细胞在体外生长和增殖的过程， 包括细胞周期、分裂方式、接触抑制 等基本概念。
03
实验结论的应用
实验结论可应用于教学、科研和实际生产中，有助于提高人们对细胞生
物学领域的认识和理解。
结果分析
数据分析方法
在实验过程中，我们采用了显微 观察、图像处理和统计分析等多 种方法，确保实验结果的准确性
和可靠性。
实验误差分析
在实验过程中，可能存在一些误 差，如观察角度、显微镜倍数等 因素可能影响实验结果。我们通 过多次重复实验和交叉验证等方
细胞表型实验
细胞表型实验前提：设计实验组和对照组目的：研究肿瘤细胞表型特征或在特定情况下（相关基因或蛋白改变）肿瘤细胞的表型变化。
内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、迁移、趋化、增殖、生长等。
1.细胞凋亡➢概念：是指细胞在一定的生理或病理条件下，受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程。
➢实验方法：检测试剂盒和细胞流式。
➢注意点：进行细胞凋亡实验时，要用不含EDTA的胰酶进行消化。
磷脂酰丝氨酸（PS）正常位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡早期，PS可以从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境。
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。
将Annexin V进行荧光素FITC标记可以用流式细胞仪进行检测。
胰酶中的EDTA能够螯合钙离子，从而削弱Annexin V结合效率，对凋亡实验造成不可控影响。
因此实验时，需要另外购买不含EDTA的胰酶，不能直接使用实验室现有的胰酶。
2.细胞迁移➢目的：测定肿瘤细胞的运动特性方法之一。
➢原理：体外培养单层细胞，人为制造空白区域——“划痕”，细胞逐渐进入空白区使划痕愈合。
➢实验方法：1）培养板接种细胞之前先用marker笔在培养板背面画横线标记（方便定位同一个视野）。
2）Day1, 种板，数量以贴壁后铺满板底为宜（也可在划痕前做其它处理如转染、感染）。
3）Day2，细胞铺满板底后，用10ul枪头比着直尺，垂直于孔板制造细胞划痕，尽量保证各个划痕宽度一致。
4）用PBS冲洗孔板三次，去除划痕产生的细胞碎片，加入有血清/无血清培养基。
注意点：✧根据不同细胞系的贴壁情况，选择是否立刻用PBS清洗。
例如转染后的huh7细胞系划痕后易飘起。
✧关于有血清/无血清培养基的选择：当划痕实验周期比较短的时候（小于48h），或者不考虑增殖对实验造成的影响，可以用有血清培养基培养。
当划痕实验周期比较长的时候，用无血清或者低血清或者用放线菌酮抑制细胞增殖。
5）将培养板放入培养箱培养，每隔8-12小时（至少一天2次）取出拍照。
《细胞表面及特化》课件
03
脂质的异常代谢或组成可以导致多种疾病，如肥胖 、心血管疾病、神经系统疾病等。
03
细胞表面特化的功能
细胞识别与黏附
细胞识别
细胞表面特化结构可以识别其他细胞 或分子，如受体和配体，通过这种识 别，细胞能够感知外部环境并作出反 应。
黏附作用
细胞表面的糖蛋白等特化结构可以与 其他细胞或基质进行黏附，维持细胞 的形态和位置。
细胞生长与分化
生长调控
细胞表面的生长因子受体等特化结构 可以感知生长因子的信号，调控细胞 的生长和分裂。
细胞分化
在发育过程中，细胞表面的特化结构 可以诱导细胞向特定方向分化，形成 不同类型的组织和器官。
细胞信息传递
信号转导
细胞表面的受体可以接收来自激素、神经递质等物质的信号，通过信号转导途径将信号传递到细胞内 部，影响细胞的生理功能。
THANKS
感谢观看
细胞表面组分的分离与鉴定
细胞表面组分的分
离
利用细胞表面标记、亲和吸附等 技术，将细胞表面的蛋白质、糖 类等组分分离出来。
蛋白质组学技术
利用质谱、色谱等技术对分离的 蛋白质进行鉴定，确定其氨基酸 序列和修饰情况。
糖类组学技术
利用糖链分离、糖谱分析等技术 对细胞表面的糖类进行鉴定，确 定其糖型和连接方式。
细胞表面分子相互作用的研究
免疫共沉淀技术
01
利用特异性抗体与细胞表面分子结合，通过洗脱和分离，研究
分子间的相互作用。
荧光共振能量转移技术
02
通过标记细胞表面分子，利用荧光信号的变化，实时监测分子
间的相互作用。
蛋白质芯片技术
03
将细胞表面分子固定在芯片上，与性。
细胞表面特化与疾病关联的研究
脂质的异常代谢或组成可以导致多种疾病，如肥胖 、心血管疾病、神经系统疾病等。
03
细胞表面特化的功能
细胞识别与黏附
细胞识别
细胞表面特化结构可以识别其他细胞 或分子，如受体和配体，通过这种识 别，细胞能够感知外部环境并作出反 应。
黏附作用
细胞表面的糖蛋白等特化结构可以与 其他细胞或基质进行黏附，维持细胞 的形态和位置。
细胞生长与分化
生长调控
细胞表面的生长因子受体等特化结构 可以感知生长因子的信号，调控细胞 的生长和分裂。
细胞分化
在发育过程中，细胞表面的特化结构 可以诱导细胞向特定方向分化，形成 不同类型的组织和器官。
细胞信息传递
信号转导
细胞表面的受体可以接收来自激素、神经递质等物质的信号，通过信号转导途径将信号传递到细胞内 部，影响细胞的生理功能。
THANKS
感谢观看
细胞表面组分的分离与鉴定
细胞表面组分的分
离
利用细胞表面标记、亲和吸附等 技术，将细胞表面的蛋白质、糖 类等组分分离出来。
蛋白质组学技术
利用质谱、色谱等技术对分离的 蛋白质进行鉴定，确定其氨基酸 序列和修饰情况。
糖类组学技术
利用糖链分离、糖谱分析等技术 对细胞表面的糖类进行鉴定，确 定其糖型和连接方式。
细胞表面分子相互作用的研究
免疫共沉淀技术
01
利用特异性抗体与细胞表面分子结合，通过洗脱和分离，研究
分子间的相互作用。
荧光共振能量转移技术
02
通过标记细胞表面分子，利用荧光信号的变化，实时监测分子
间的相互作用。
蛋白质芯片技术
03
将细胞表面分子固定在芯片上，与性。
细胞表面特化与疾病关联的研究
胰腺癌细胞系的表型及基因型介绍PPT课件
血管生成因子，其中的促因子如血管内皮生长因子和胰腺癌的TMAD密切相关。促血管生成因子的高表
达不仅促进中肿瘤血管生成，而且能够促进肿瘤细胞有丝分裂的进行。
促血管生成因子： Ø 细胞因子，如IL-1α、IL-8 Ø 趋化因子， Ø 酶类 Ø 其他肿瘤产物
COX-2在促进肿瘤血管生成中的作用： Ø 促进AA转化为PGE2，PGE2为一种血管生成因子 Ø PGE可激活NF-kB Ø NF-kB可以促进COX-2的转录和翻译
周，mima-paca-2成瘤潜伏期需3周 腹膜内注射相关研究： Ø 在严重联合免疫缺陷小鼠体内注射癌细胞后，成瘤概率为capan-1-100%、panc-1-86%、mia-
66% Ø 在肿瘤体积大小研究中：mia>capan-1>panc-1
总结： • Bxpc-3和panc-1细胞在开始生长成瘤前有更长的潜伏期
学习总结
经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量 Study Constantly, And You Will Know Everything. The More
You Know, The More Powe最大努力时，失败也是伟大的 ，所以不要放弃，坚持就是正确的。
细胞的粘附性
细胞的粘附性是通过细胞外基质和细胞表面分子接触介导的： Ø 纤连蛋白，一种发现于基底膜和结缔组织的糖蛋白 Ø I型和IV型胶原蛋白，发现于组织间质和基底膜 Ø 层粘连蛋白，基底膜中主要的非胶原蛋白
相关研究： Ø Capan-1比Mia-paca-2更易连接到I型胶原蛋白 Ø Capan-1和Mia-paca-2对层粘连蛋白的粘附性无明显差异，有研究也表明Capan-1稍逊 Ø Bxpc-3和panc-1对I型胶原蛋白粘连性近似 Ø Bxpc-3和panc-1对层粘连蛋白粘附性近似，有研究也表明，Bxpc-3更强
细胞实验技术-课堂PPT-第三讲讲解
DF= 200 µL / 100 µL = 2
To prepare the counting chamber
The mirror-like polished surface is carefully cleaned with lens paper. The cover slip is also cleaned.
One entire grid on standard hemocytometer can be seen at 40x Clean the cover slip and the mirror like surface after use.
Never scratch the mirror like surface of hemocytometer while cleaning.
4 6、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。细胞活力按下式计算：
细胞活力 = 没染色的细胞数×100 （活力细胞的百分数） 细胞总数
注意：死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。 活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
Cell viability
• Dilute 10 μl of the cell suspension (1:5)
Hale Waihona Puke • Place 10 μl on a hemocytometer (between the counting slide and the glass cover slip).
•Count the cells under a microscope.
Hence trypan blue is used in cell viability test.
To prepare the counting chamber
The mirror-like polished surface is carefully cleaned with lens paper. The cover slip is also cleaned.
One entire grid on standard hemocytometer can be seen at 40x Clean the cover slip and the mirror like surface after use.
Never scratch the mirror like surface of hemocytometer while cleaning.
4 6、镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数，计细胞活力。细胞活力按下式计算：
细胞活力 = 没染色的细胞数×100 （活力细胞的百分数） 细胞总数
注意：死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。 活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。
Cell viability
• Dilute 10 μl of the cell suspension (1:5)
Hale Waihona Puke • Place 10 μl on a hemocytometer (between the counting slide and the glass cover slip).
•Count the cells under a microscope.
Hence trypan blue is used in cell viability test.
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2020/2/8
18Байду номын сангаас
4.细胞增殖（克隆形成）
单个细胞在体外增殖6代以上（时间约1周以上），其后代所组 成的细胞群体，成为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞， 大小在0.3-1.0mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力强弱。 细胞培养环境的改变或药物、基因等外源性因素的作用能导致细胞 克隆形成能力以及细胞集落的大小发生改变。
细胞感染
克隆形成
细胞固定
克隆计数
细胞染色
2020/2/8
19
5.细胞生长（MTT法）
MTT法原理
MTT比色法：是一种检测细胞存活和生长的方法。 原理：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的 蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪490nm波 长处测定其吸光值，可间接反映活细胞数量。
2020/2/8
8
荧光信号与细胞特性
荧光染料被激发而发射的光信号。
定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量
多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量
2020/2/8
9
激光束 侧向散射光， 荧光
细胞
前向散 射光
收集透镜
二色镜
1
2
3
带通滤波片 光电倍增管
2020/2/8
10
流式结果分析
散点图
密度图
细胞表型实验介绍
2018
2018年8月30日
目录
1. 研究内容目的与意义 2. 实验原理 3. 实验过程 4. 结果分析
2020/2/8
2
细胞表型实验
• 定义：由基因型所产生的细胞的物理表观和可观察到的性质。 • 研究主要内容：细胞凋亡、周期、迁移、侵袭、趋化、增殖、生长等。 • 细胞表型分析目的意义： 检测细胞的表型，可以帮助了解相关基因、
BD-Calibur
BD FACSVantage
2020/2/8
5
流式细胞作用机制
鞘液
液
流
Fluorescence signals
系 统
Focused laser beam
喷嘴
2020/2/8
分 析 系 统 光 学 系 统
6
流式细胞仪可检测到的细胞参数
非荧光信号
颗粒度 细胞大小
前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积。 侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性
ps:磷脂酰丝氨酸 Annexin-V:Ca2+依赖性磷脂 结合蛋白
UL：上左区；一般认为是死亡细胞, UR：上右区；认为是晚期凋亡细胞, LL：下左区； 正常阴性细胞, LR：下右区; 早期凋亡细胞,
2020/2/8
13
2.细胞迁移
• 划痕实验:细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。在 体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后在加入药物等实验条件下观 察其对肿瘤细胞迁移的影响。
SDH
MTT
甲
瓒
DMSO
490nm测定OD值
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
2020/2/8
20
• MTT实验 比较转入miR-29c的细胞和空载细胞6d中的增殖能力，各做5个重复。
边缘各孔加200uL PBS液，防止蒸发。
2020/2/8
21
结果记录 结果处理
2020/2/8
22
2020/2/8
16
Transwell
这是一类有通透性的杯状的装置，杯子底层的一张有通透性的膜， 这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料， 一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
Transwell 小室
2020/2/8
17
• 细胞侵袭 实验实例：孵育24h
2020/2/8
7
荧光信号
荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光 染料其发射波长不同。
有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳） 高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）
一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、 FL2、FL3。
①
2020/2/8
14
②
③
④
2020/2/8
15
3.细胞侵袭
细胞侵袭:研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭 能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，上室种肿瘤 细胞，下室加入FBS或实验设定的药物或者影响因子，肿瘤细胞在侵袭 能力较强的情况下，会分泌相关酶类消化基质胶，从而从上室迁移到下 室，通过计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。
二维等高图
直方图
报告中常见的几种流式细胞图
2020/2/8
11
细胞周期
流式细胞仪PI染色法检测细胞周期
PI：碘化丙啶
细胞内的DNA和RNA都可以和PI结合,实验前需用RNase将RNA消化后进行检测。
细胞培养
细胞周 期同步
细胞加药
细胞固定
数据分析
流式上机
PI染色
2020/2/8
12
细胞凋亡
Annexin V/PI双染法检测 细胞凋亡
•细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的 死亡。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型，而且具有重要的生 物学意义及复杂的分子生物学机制。
2020/2/8
4
流式细胞术
1定义：是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性 进行多参数定量分析和分选的新技术。 2.特点 测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞 可进行多参数测量 在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。
蛋白、药物的机理，是科学研究不可或缺的手段。
2020/2/8
3
1.细胞凋亡、周期
•细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结 束所经历的全过程，分为间期与分裂期两个阶段。依次经过G1-SG2/M，不同时期的细胞内部经历精确的调控，反应相应的机理。研 究细胞周期的变化，有利于了解基因、蛋白、药物对细胞周期产生的 影响，进而指导科研工作。