实验2-6叶绿素a
叶绿素-a测定
叶绿素-a的测定方法原理（荧光分光光度法）用丙酮溶液提取浮游植物色素进行荧光测定，根据提取液酸化前后的荧光值，可分别计算叶绿素-a及脱镁色素的含量。
试剂及其配置1、丙酮溶液（9+1）：量取900ml丙酮与100ml水混合，保存在棕色试剂瓶中。
2、碳酸镁悬浮液（10g/L）:称取1g碳酸镁，加水至100ml，搅匀，盛试剂瓶中待用，用时需要再摇匀。
3、盐酸：=1.18g/ml4、盐酸溶液（5+95）：在搅拌下，将5ml盐酸缓慢的加到95ml水中，混匀，保存于滴定瓶中。
5、硅胶仪器及设备1、荧光计2、冰箱3、离心机4、电动吸引器5、过滤装置6、玻璃纤维滤膜：直径为25mm的WhatmanGF/C或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜7、具塞离心管：容量10ml8、干燥器9、棕色试剂瓶：容量100ml，1000ml10、量筒：容量100ml、200ml、1000ml11、定量加液器：容量10ml12、镊子一般实验室常用设备分析步骤1、样品制备量取一定体积海水（通常大洋水250ml-500ml，近岸或港湾水50-100ml），加2ml 碳酸镁悬浮液，混匀，用玻璃纤维滤膜或孔径为0.45um的纤维素脂微孔滤膜过滤，过滤负压不得2超过50KPa.2、样品提取将过滤了的样品的滤膜放入具塞离心管，加入10ml丙酮溶液，摇荡，放置冰箱冷藏室14-24h，提取叶绿素-a。
若虑得的样品不能及时提取，应该将滤膜抽干、对折，再套上一张滤纸置于含硅胶的干燥器内，贮存在低于1摄氏度的冰箱中。
3、样品离心离心速度：（3000-4000）r/min离心时间:10min4、样品测定荧光计激发波长为436nm,发射波长670nm零点调节：用丙酮溶液调节，使荧光计指针指零。
将提取的上层提取液注入测定池。
选择相应量程，测定样品的荧光值R b。
加2滴盐酸溶液至测定池，摇匀，经30s后再测其荧光值Ra。
5、仪器校正用标准叶绿素-a校正。
用分光光度计校正：取一定体积正处于指数增长期的单细胞藻类培养液，依上述方法提取其叶绿素-a，用分光光度法测定，计算该提取液的叶绿素-a浓度。
叶绿素测定的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素在植物光合作用中的作用。
2. 掌握叶绿素提取和测定的方法。
3. 通过实验，掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的光合作用效率。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，通过测定叶绿素a和叶绿素b的吸光度，计算出叶绿素的总含量。
分光光度法测定叶绿素含量的原理：叶绿素a和叶绿素b对光的吸收具有选择性，在一定波长范围内，其吸光度与叶绿素含量成正比。
通过测定特定波长下的吸光度，可以计算出叶绿素含量。
三、实验材料1. 新鲜植物叶片（如菠菜、生菜等）。
2. 95%乙醇溶液。
3. 0.1mol/L硫酸铜溶液。
4. 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
5. 分光光度计。
6. 移液器。
7. 烧杯。
8. 试管。
9. 移液管。
四、实验步骤1. 准备实验材料：取适量新鲜植物叶片，洗净、擦干，剪成小块备用。
2. 叶绿素提取：取10g植物叶片，加入50mL 95%乙醇溶液，用研钵研磨至匀浆。
将匀浆转移到50mL容量瓶中，用95%乙醇溶液定容至刻度。
3. 吸光度测定：取适量叶绿素提取液，分别加入0.1mol/L硫酸铜溶液和0.1mol/L氢氧化钠溶液，配制成叶绿素a和叶绿素b溶液。
4. 标准曲线绘制：取一系列已知浓度的叶绿素a和叶绿素b标准溶液，分别测定其在特定波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度对数值为横坐标，绘制标准曲线。
5. 样品测定：取适量叶绿素提取液，按照标准曲线绘制步骤，测定其吸光度。
6. 计算叶绿素含量：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的叶绿素a和叶绿素b浓度，计算叶绿素的总含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：绘制叶绿素a和叶绿素b的标准曲线，相关系数R²均大于0.99，表明标准曲线线性关系良好。
2. 样品测定：根据样品的吸光度，从标准曲线上查得叶绿素a和叶绿素b的浓度，计算叶绿素的总含量。
3. 结果分析：通过对不同植物叶片的叶绿素含量测定，可以发现不同植物叶片的叶绿素含量存在差异，这与植物的种类、生长环境等因素有关。
高考生物专题复习-专题六光合作用-高考真题练习题(附答案)
专题六光合作用高考真题篇A组1.(2022全国乙,2,6分)某同学将一株生长正常的小麦置于密闭容器中,在适宜且恒定的温度和光照条件下培养,发现容器内CO2含量初期逐渐降低,之后保持相对稳定。
关于这一实验现象,下列解释合理的是()A.初期光合速率逐渐升高,之后光合速率等于呼吸速率B.初期光合速率和呼吸速率均降低,之后呼吸速率保持稳定C.初期呼吸速率大于光合速率,之后呼吸速率等于光合速率D.初期光合速率大于呼吸速率,之后光合速率等于呼吸速率答案D2.(2022湖北,12,2分)某植物的2种黄叶突变体表现型相似,测定各类植株叶片的光合色素含量(单位:μg·g-1),结果如表。
下列有关叙述正确的是()植株类型叶绿素a叶绿素b类胡萝卜素叶绿素/类胡萝卜素野生型1235519419 4.19突变体151275370 1.59突变体2115203790.35A.两种突变体的出现增加了物种多样性B.突变体2比突变体1吸收红光的能力更强C.两种突变体的光合色素含量差异,是由不同基因的突变所致D.叶绿素与类胡萝卜素的比值大幅下降可导致突变体的叶片呈黄色答案D3.(2022海南,3,3分)某小组为了探究适宜温度下CO2对光合作用的影响,将四组等量菠菜叶圆片排气后,分别置于盛有等体积不同浓度NaHCO3溶液的烧杯中,从烧杯底部给予适宜光照,记录叶圆片上浮所需时长,结果如图。
下列有关叙述正确的是()A.本实验中,温度、NaHCO3浓度和光照都属于自变量B.叶圆片上浮所需时长主要取决于叶圆片光合作用释放氧气的速率C.四组实验中,0.5%NaHCO3溶液中叶圆片光合速率最高D.若在4℃条件下进行本实验,则各组叶圆片上浮所需时长均会缩短答案B4.(2022北京,2,2分)光合作用强度受环境因素的影响。
车前草的光合速率与叶片温度、CO2浓度的关系如图。
据图分析不能．．得出()A.低于最适温度时,光合速率随温度升高而升高B.在一定的范围内,CO2浓度升高可使光合作用最适温度升高C.CO2浓度为200μL·L-1时,温度对光合速率影响小D.10℃条件下,光合速率随CO2浓度的升高会持续提高答案D5.(2022全国甲,29,9分)根据光合作用中CO2的固定方式不同,可将植物分为C3植物和C4植物等类型。
实验六 叶绿素的提取、分离
叶绿素的提取、分离一、实验目的1.掌握从植物叶中提取叶绿素的方法。
2. 了解纸层层析的原理，掌握纸层析的一般操作和定性鉴定方法。
二、实验原理1. 叶绿素提取原理：叶绿素等是脂溶性的有机分子，根据相似相溶的原理，叶绿体中含有叶绿体色素（叶绿素a和b、胡萝卜素及叶黄素）等色素分子溶于有机溶剂而不溶于有极性的水。
故在研磨和收集叶绿色素时要用丙酮或乙醇等有机溶剂提取而不用水。
2. 色素分离的原理：纸层析是用滤纸作为载体的一种色层分析法，其原理主要是利用混合物中各组分在；流动相和固定相的分配比（溶解度）的不同而使之分离。
滤纸上吸附的水为固定相（滤纸纤维常能吸20%左右的水），有机溶剂如乙醇等为流动相，色素提取液为层析试样。
把试样点在滤纸的滤液细线位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管的作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过滤液细线时，试样中各组份便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续一次有一次的分配。
结果分配比比较大的物质移动速度较快，移动距离较远；分配比较小的物质移动较慢，移动距离较近，试样中各组分分别聚集在滤纸的不同的位置上，从而达到分离的目的。
毛细管点样薄层色谱展开三、仪器和药品研钵、毛细管、漏斗、纱布、小烧杯、试管、培养皿等剪纸形状滤液基线95%酒精、丙酮、石油醚碳酸钙，石英砂四、实验步骤（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片20g左右，洗净，用滤纸擦干，去掉叶柄和中脉剪碎，放入研钵。
（2）研钵中加入少量碳酸钙和石英砂，加4-5ml 无水乙醇，研磨至糊状，再加10ml 无水乙醇充分混匀以提取叶片匀浆中的色素，15-20分钟后，过滤入50ml锥形瓶中加塞待用。
分离：（1）取圆形定性滤纸一张（直径15cm），将其剪成滤纸条（15cm×2cm），将其2cm一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方用铅笔画一条直线，作为画滤液细线的基准线（注意：滤液线必须距底边1-1.5cm）。
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想
叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法测定富营养化湖泊中藻量的感想叶绿素a法是一种常用的方法，用于测定富营养化湖泊中的藻类数量。
藻类是湖泊生态系统中不可或缺的一部分，它们是湖泊中的初级生产者，对水体性质的改变和生态系统的稳定起着重要作用。
通过测量叶绿素a的含量，我们可以快速、准确地评估湖泊中的藻量，为湖泊生态环境的恢复和管理提供科学依据。
在实际操作中，叶绿素a法主要是通过光谱测量的原理来确定叶绿素a 的浓度。
叶绿素a是藻类中最常见的一种叶绿素，其含量与藻类生物量呈正相关关系。
通过测定叶绿素a的浓度可以间接反映湖泊中藻类的数量。
叶绿素a法的测量过程相对简单，操作方便。
需要从湖水中取样，然后将样品过滤，提取出其中的叶绿素a。
接下来，使用光谱仪或叶绿素荧光仪对提取液的吸光度进行测量，并根据已有的标准曲线，计算出叶绿素a的浓度。
根据叶绿素a的浓度，结合湖泊的水量，可以计算出湖泊中的藻类数量。
通过叶绿素a法测定富营养化湖泊中的藻量，我们可以对湖泊生态系统的变化进行准确监测和评估。
在富营养化的湖泊中，藻类数量往往过多，导致水体浑浊，水质恶化，甚至引起水华等严重问题。
通过及时测定藻类数量，我们可以对湖泊中的富营养化程度进行评估，并针对性地采取相应的措施来改善湖泊生态环境。
然而，在使用叶绿素a法进行藻量测定时，也存在一些问题和限制。
叶绿素a法只能测定叶绿素a的浓度，而不能提供其他藻类的信息。
不同种类的藻类在湖泊中有不同的生态功能和生态作用，因此仅仅通过叶绿素a的浓度无法全面了解湖泊中藻类的组成和结构。
叶绿素a 法只能在湖泊表层水体中进行测定，无法对湖泊底泥和深层水体中的藻类进行评估。
在一些深水湖泊中，底泥中的藻类可能对湖泊生态系统的健康产生重要影响，但使用叶绿素a法无法直接获取这些信息。
叶绿素a法是一种快速、准确测定富营养化湖泊中藻量的有效方法。
它为湖泊生态环境的管理和恢复提供了重要的技术支持。
然而，我们也需要意识到叶绿素a法的局限性，进一步研究和探索其他方法，以便更全面地了解湖泊中藻类的数量和组成。
6叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量测定 浙江大学植物生理学实验课件
• 鲜叶5g+95%30ml（逐步加入）,磨成匀浆
•
过滤入三角瓶中
观察荧光现象 透射光 色，反射
光 光。
皂化反应(3ml)
加KOH数片剧烈 摇均，加石油醚
5ml和H2O 1ml 分层后观察
上层呈 ，吸收 。 下层呈 为 光。
色，为 光
色。 。吸收
取代反应（1）
加醋酸约2ml，变 褐（ 叶绿素） 取1/2加醋酸铜粉 加热变 色， 为 叶绿素。
在400-700nm处扫描光谱，分别测定类胡萝 卜素和叶绿素的吸收峰
• 3．叶绿素定量分析： • 鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，各取0.2ml
加80%丙酮4.8ml,摇匀，4000转离心3min,上清 液在645，652，663测定OD，计算Chla,Chlb 和 Chl总量的值。
• 五、实验数据记录和处理
• 实验6 叶绿体色素的提取、分离、 理化性质和叶绿素含量的测定
• 一、实验目的和要求：掌握植物中叶绿体 色素的分离和性质鉴定、定量分析的原理 和方法。
• 二、实验内容和原理：以青菜为材料，提 取和分离叶绿体色素并进行理化性质测定 和叶绿素含量分析。原理如下：
1、叶绿素和类胡 萝卜素均不溶于
水而溶于有机溶
剂，常用95%的 乙醇或80%的丙 酮提取。
2、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，
形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中
的类胡萝卜素分开。
C32H30ON4Mg
COOCH3
COOC20H39 COO—
+ 2KOH
C32H30ON4Mg
+ 2KOH +CH3OH +C20H39OH COO—
叶绿素含量_实验报告
一、实验目的1. 掌握叶绿素提取和含量测定的基本原理和方法。
2. 了解叶绿素在植物生理和生态研究中的应用。
3. 培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理叶绿素是植物体内的一种绿色色素，主要存在于叶绿体中，是光合作用的关键物质。
叶绿素含量可以反映植物的生长状况和光合能力。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，通过测定叶绿素在特定波长下的吸光度，计算出叶绿素的浓度。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片、95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉、蒸馏水、比色皿、分光光度计、电子天平、研钵、试管、漏斗、滤纸、剪刀等。
2. 试剂：95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉、蒸馏水。
四、实验步骤1. 准备实验材料：取新鲜菠菜叶片，用剪刀剪成小块，称取0.1g左右放入研钵中。
2. 加入试剂：向研钵中加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入3-5mL 95%乙醇，研成均浆。
3. 提取叶绿素：将研钵中的叶绿素提取液倒入漏斗中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
4. 滤过提取液：取滤纸一张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10mL试管中。
5. 定容：用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。
直至滤纸和残渣中无绿色为止。
最后用乙醇定容至10mL，摇匀。
6. 测定吸光度：取比色皿，加入提取液，以95%乙醇为空白，在波长663nm、645nm下测定吸光度。
7. 计算叶绿素含量：根据朗伯-比尔定律，叶绿素的浓度与吸光度成正比。
根据实验测得的吸光度，计算出叶绿素的浓度。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：实验过程中，叶绿素提取效果良好，提取液呈现绿色。
2. 叶绿素含量测定：实验测得菠菜叶片中叶绿素a和叶绿素b的浓度分别为0.5mg/g和0.3mg/g。
3. 结果分析：菠菜叶片中的叶绿素含量较高，说明菠菜具有较强的光合能力。
六、实验讨论1. 影响叶绿素提取的因素：实验过程中，叶绿素的提取效果受到多种因素的影响，如提取液的选择、提取时间、研磨程度等。
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量的测定(分光光度法)
实验步骤
4. 称重比较：将叶片对应部位重叠在一起，用 打孔器均匀打相同数目的孔（50），分别置 于光照及黑暗的两个称量皿中，80-90℃下 烘干至恒重，在分析天平上称重比较。
实验原理
改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取 下置于暗处，另一部分则留在光下进行光合作用， 过一定时间后，在这两部分叶片的对应部位取同 等面积，分别烘干称重。因为对称叶片的两对应 部位的等面积的干重，开始时被视为相等，照光 后叶片重量超过暗中的叶重，超过部分即为光合 作用产物的量，并通过一定的计算可得到光合作 用强度。
结果分析
1. 仔细观察和记录实验结果。 2. 计算出Ca、Cb及总Ct的质量浓度。 3. 计算今天菠菜中Ca、Cb及总Ct的含量。 叶绿素a的含量（mg/g鲜重）= 叶绿素b含量（mg/g鲜重）= 叶绿素c含量（mg/g鲜重）=
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验六 植物光合强度的测定 （改良半叶法）
叶绿素叶绿素aa的含量的含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素bb含量含量mggmgg鲜重鲜重叶绿素叶绿素cc含量含量mggmgg鲜重鲜重韩山师范学院生物系韩山师范学院生物系植物生理学实验植物生理学实验改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取改良半叶法是将植物对称叶片的一部分遮光或取下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用下置于暗处另一部分则留在光下进行光合作用过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同过一定时间后在这两部分叶片的对应部位取同等面积分别烘干称重
植物生理学实验五叶绿素a 、b 含量 的测定（分光光度法）
测植物叶绿素实验报告
1. 学习植物叶绿素提取和测定的方法。
2. 掌握分光光度计的使用技巧。
3. 了解叶绿素在植物生长过程中的重要作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。
叶绿素对光的吸收具有选择性，在特定波长下（如665nm、649nm、470nm）具有最大吸收峰。
根据朗伯-比尔定律，吸光度A与溶液中叶绿素的浓度C和液层厚度L成正比。
通过测定溶液的吸光度，可以计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、女贞、海桐等植物叶片。
2. 实验仪器：分光光度计、电子天平、研钵、试管、漏斗、滤纸、吸水纸、移液管、量筒、剪刀、石英砂、碳酸钙粉、95%乙醇（或80%丙酮）。
四、实验步骤1. 称取新鲜植物叶片0.1g左右，放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙粉，用95%乙醇（或80%丙酮）研磨至组织变白。
2. 将研磨好的叶片转移到10ml试管中，用少量95%乙醇（或80%丙酮）冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入试管中。
3. 用移液管吸取适量提取液，以95%乙醇（或80%丙酮）为空白，在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度。
4. 根据吸光度计算叶绿素的含量。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：实验中，菠菜叶片的叶绿素提取效果较好，叶绿素含量较高。
其他植物叶片的叶绿素含量相对较低。
2. 叶绿素测定：通过分光光度计测定，菠菜叶片在665nm、649nm、470nm波长下的吸光度分别为0.85、0.75、0.65。
根据吸光度计算，菠菜叶片的叶绿素含量约为0.5mg/g。
1. 叶绿素提取：在提取过程中，加入石英砂和碳酸钙粉有助于研磨叶片，提高叶绿素的提取效率。
同时，使用95%乙醇（或80%丙酮）作为提取溶剂，可以有效地将叶绿素从叶片中提取出来。
2. 叶绿素测定：实验结果表明，菠菜叶片在665nm、649nm、470nm波长下的吸光度与叶绿素含量呈正相关。
植物科学叶绿素实验报告
一、实验目的1. 掌握叶绿素提取的方法。
2. 学习叶绿素含量测定的原理及方法。
3. 了解叶绿素在植物生长过程中的作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其主要成分包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。
叶绿素具有吸收光能、传递电子、参与光合作用等生理功能。
本实验通过提取叶绿素，测定其含量，了解叶绿素在植物生长过程中的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶、乙醇、丙酮、石英砂、碳酸钙粉、碳酸镁悬浮液、微孔滤膜等。
2. 实验仪器：研钵、剪刀、电子天平、分光光度计、比色杯、移液管、量筒、烧杯、漏斗、滤纸等。
四、实验步骤1. 叶绿素提取（1）称取新鲜菠菜叶1克，洗净，擦干，去掉中脉，剪碎。
（2）将剪碎的菠菜叶放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状。
（3）将研磨好的菠菜叶转入小烧杯中，加入2-3 mL 95%乙醇，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
（4）将烧杯中的菠菜叶浸泡在乙醇中，浸泡时间分别为10、15、20、25、30、35、40、45、50、55分钟。
（5）浸泡结束后，将菠菜叶连同乙醇一起用纱布挤入漏斗中，过滤得到叶绿素提取液。
2. 叶绿素含量测定（1）取3 mL叶绿素提取液，加入碳酸镁悬浮液1 mL，充分混合。
（2）用微孔滤膜过滤混合液，收集滤液。
（3）将滤液转移到比色杯中，以95%乙醇为空白，在波长665nm、663nm、645nm处测定吸光度。
（4）根据吸光度值，计算叶绿素含量。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取根据实验结果，菠菜叶绿素提取液呈现绿色，说明叶绿素已成功提取。
2. 叶绿素含量测定通过测定不同波长处的吸光度，可以计算出叶绿素含量。
根据实验结果，菠菜叶绿素含量为0.5 mg/g。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了叶绿素提取的方法。
2. 通过叶绿素含量测定，了解了叶绿素在植物生长过程中的作用。
3. 本实验结果说明，菠菜叶绿素含量较高，有利于植物进行光合作用。
叶绿素a和b含量的测定
实验14叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）一、目的学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。
二、材料用具及仪器药品菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）三、原理叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm,同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：D665=83.31Ca+18.60C b ........................................................................... .(1)Du9=24.54Ca+44.24 C b .......................................................................... .(2)⑴（2）式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。
为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。
82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。
16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。
解方程式⑴(2)，则得：C A=13.7 D 665—5.76 D 649 (3)C B=25.8 D 649——7.6 D 665 (4)G=C+C B=6.10 D 665+20.04 D 649 (5)此时，G为总叶绿素浓度，C A、C B为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。
四、方法步骤1. 称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml。
2. 取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。
《植物生理学实验》实验03 叶绿素含量的测定
类胡萝卜素→吸收兰紫 光，不吸收红光等长波 长的光 叶绿素→吸收红光、兰 紫光
645nm
在测定叶绿素a、叶绿素 b时，为了排除类胡萝卜 素的干扰，所用单色光 的波长选择叶绿素在红 光区的最大吸收峰。
• 如果我们在645nm或663处用分光光度计检测得到溶液OD值（测量 数据，已知数据），根据吸光度的加和性，我们可得到 OD663= OD663叶绿素a + OD663叶绿素b OD645= OD645叶绿素a + OD645叶绿素b
• 代入公式OD = K × L × C OD663= K663叶绿素a × L×C叶绿素a + K663叶绿素b × L × C叶绿素b OD645= K645叶绿素a × L×C叶绿素a + K645叶绿素b × L × C叶绿素b
叶绿素a和叶绿素b的
波长 （nm）
80%丙酮溶液，当浓度在
663
色素的提取
取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块→ →称取0.5g放入研钵中→ →加纯 丙酮5mL，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆→ →再加80％丙酮5mL → →将 匀浆转入离心管→ →用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管→ →离心后 弃沉淀→ →上清液用80％丙酮定容至20mL
测定吸光值
• 代入K值， 1g/L时，比吸收系数k值
645
叶绿素a 82.04 16.75
OD663= 82.04 × L×C叶绿素a + 9.27× L × C叶绿素b OD645= 16.75× L×C叶绿素a + 45.6× L × C叶绿素b
K值 叶绿素b 9.27 45.60
• 代入L值，比色杯的厚度为1cm OD663= 82.04×C叶绿素a + 9.27 × C叶绿素b OD645= 16.75×C叶绿素a + 45.6 × C叶绿素b
富营养化水体中藻类的测定叶绿素a法
（7）
CT为叶绿素的总浓度
（5） （6）
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实验仪器及材料
• 实验材料： • 富营养化水体中的藻类
• 实验仪器及试剂： • UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤纸；丙酮；石 英砂；CaCO3；
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实验步骤
1. 提取叶绿素
于天平上称取0.5g藻体，（也可用打孔器打取一定数量的 叶圆片，计算总的叶面积），剪碎后置于研体中，加入 5ml 80%丙酮，少许CaCO3和石英砂。仔细研磨成匀 浆，用滤斗过滤到10ml量筒中，注意在研钵中加入少量 80%丙酮将研钵洗净，一并转入研钵中过滤到量筒内， 并定容至10ml。将量筒内的提取液混匀，用移液管小心 抽取5ml转入25ml量筒中，再加入80%丙酮定容至 25ml（最终植物材料与提取液的比例为W：V＝0.5： 50＝1：100，叶色深的植物材料比例要稀释到1： 200）。
在海岸或海湾中，引起“赤潮”的藻类主要是甲 Ceratium ）、环沟藻属
（Gymnodinium）、膝沟藻属（Gonyaulax
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水体富营养化
•评价水体富营养化的指标
❖ 测定水域中光合作用强度与呼吸作用强度之比
❖测定藻类生产潜在能力（AGP） ❖黑❖其它评价富营养化的方法
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水体富营养化
水体形成富营养化的指标是：水体中含氮量大于0.2-0.3 mg/L ，含磷 量大于0.01~0.02mg/L ，生化需氧量（BOD5 ）大于10mg/L。在pH值7~9 的淡水中细菌总数达到105个／ml，标志藻类生长的叶绿素a大于10g／L。
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叶绿素a的测定
叶绿素a的测定
叶绿素a是植物细胞中的主要叶绿素类型之一，它在光合作用中起着关键作用。
测定叶绿素a的含量可以揭示植物的光合作用活性和叶片的健康状态。
以下是一种常用的测定叶绿素a的方法：
1. 取少量新鲜的叶片样品。
2. 将叶片样品置于琼脂杯中，加入适量的乙醇。
3. 使用玻璃棒或研钵对叶片进行研磨，使叶绿素a溶解在乙醇中。
4. 将溶液转移到离心管中，使用超高速离心将样品离心，以去除残留的植物细胞。
5. 将上清液取出，加入一定体积的乙醇使溶液体积为10mL。
6. 使用光度计将溶液的吸光度测量在多个波长下，包括
663nm和645nm。
7. 使用下列公式计算叶绿素a的浓度：叶绿素a (mg/L) = (12.25 * A663 - 2.79 * A645) * V/M
其中，A663和A645分别为溶液在663nm和645nm处的吸光度，V为体积（mL），M为叶片的质量（g）。
8. 根据测定结果，可以计算叶绿素a的浓度或相对含量。
需要注意的是，以上方法是一种常见的叶绿素a测定方法，具体测定步骤和浓度计算公式可能会有所不同。
因此，在具体操作时，建议参考实验方法或使用商业化的叶绿素测定试剂盒，以确保准确性和可重复性。
新方法能力验证确认报告(水质 叶绿素a的测定 分光光度法 HJ 897-2017)
XXXX有限公司新项目方法验证能力确认报告项目名称：水质叶绿素a的测定分光光度法HJ 897-2017项目负责人：项目审核人：项目批准人：批准日期：年月日水质叶绿素a的测定分光光度法HJ 897-2017方法验证能力确认报告1.方法依据及适用范围本方法依据《水质叶绿素a的测定分光光度法》（HJ 897-2017）。
本方法适用于适用于地表水中叶绿素a 的测定。
本方法测定丙酮提取液中叶绿素 a 的检出限为0.04 mg/L。
当取样体积为200 ml，丙酮提取液体积为10 ml 时，本方法的检出限为 2 μg/L，测定下限为8 μg/L。
警告：丙酮对人体健康有一定危害，操作时应在通风橱中进行，佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。
2.方法原理及干扰将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750 nm、664 nm、647 nm 和630 nm 波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素 a 的浓度。
3.主要仪器、设备及试剂除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水。
3.1试剂和材料3.1.1丙酮（CH3COCH3）。
3.1.2碳酸镁（MgCO3）。
3.1.3丙酮溶液：9+1。
在900 ml 丙酮中加入100 ml 实验用水。
3.1.4碳酸镁悬浊液。
称取1.0 g 碳酸镁，加入100 ml 实验用水，搅拌成悬浊液（使用前充分摇匀）。
3.1.5玻璃纤维滤膜：直径47 mm，孔径为0.45 μm～0.7 μm。
3.2主要仪器和设备3.2.1分光光度计，配备10mm比色皿，1台，型号：XXXX，编号：XXX XXXXX，检定证书编号：XXXX，检定有效期限：XXXX年XX月XX日。
3.2.2采样瓶：500 ml 具磨口塞的棕色玻璃瓶。
3.2.3玻璃研钵。
3.2.4离心机，型号：XXXX，编号：XXXXXXXX。
3.2.5玻璃刻度离心管：15 ml。
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3、Chl-a 含量的测定
用含 90%的乙醇溶液座位空白对分光光度计调零。分别记录在 750 nm 与 665 nm 处各 自的吸光度（分别记为 750 a 和 665 a） ，750 nm 处的测定是用来进行浊度校正的，吸光度应 很低。665 nm 处的吸光度应在 0.1-0.8 单位之间。在比色皿内加入 1 滴 1 mol/L 盐酸使酸化， 混匀 1 min。再记录 750 nm 和 665 nm 处的吸光度（记为 750 b 和 665 b） 。
恒温作用 破碎细胞使叶绿 素释放出来
七、主要器皿规格及用量
名称 离心分离试管 醋酸纤维滤膜 比色皿 表面皿
规格 10mL 直径 47mm 10*10mm
用量 6个 4个 2个 2个
在实验中的大致作用 盛装溶液 过滤液体提取浮游植物 细胞 用来装参比液，样品液 放置滤膜
八、实验步骤 1、水样前处理
实验水样由实验室培养的铜绿微囊藻稀释而得，分别取三组浓度水样 50 mL，每组两个 平行样。将水样通过醋酸纤维滤膜抽滤，抽滤时负压不应大于 0.5 个大气压（50 kPa） 。抽滤 完毕后，用镊子小心的取下滤膜，将其对着（有浮游植物样品的一面向里） ，再用普通滤纸 吸压，尽量去除滤膜上的水分；滤膜放置表面皿上冷冻 12 h 以上。
抽滤装置（型号：SD）
抽滤时负压不应大于 0.5 个大气压（50kPa） 通过抽滤得到浮 游植物细胞 离心作用
4000r/min 离心机（型号：TG16） 打开门盖→装好转子→加样→关门盖开电 源→按功能键、转子号、转速、时间窗分别 输入设定值→按停止键或时间到时即时停 机→开门盖取样→关电源 恒温水浴锅（型号：HH-S6） 超声细胞破碎仪（型号： BILON88-II） 不要把水浴锅烧干 不要超过破碎容量
广西大学环境工程基础实验小组预习报告
实验项目名称： 湖塘水体叶绿素 a 测定
一、实验目的
（1） 初步了解叶绿素 a 测定的原理和常规测定方法。 （2） 通过实验，掌握叶绿素 a 的测定方法及富营养化水样的前处理方法。 （3） 熟练掌握抽滤装置及分光光度计的使用。
二、实验原理
浮游植物的主要光合色素是叶绿素（Chlorophyll） ，常见的有叶绿素 a、b 和 c。叶绿素 a（chl-a）存在 于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的 1-2％，是估算浮游植物生物量的重要指标，因此浮游植物叶绿 素 a 含量的测定成为浮游植物生物量的重要指标而被广泛运用。 浮游植物叶绿素 a 的测定方法有许多种，根据所使用的仪器可以分为高效液相色谱法（HPLC 法） 、荧光 光度计法和分光光度计法等。其中，分光光度计法成为最常用的浮游植物叶绿素 a 含量的测定方法。 根据所用的色素萃取液分为丙酮法、甲醇法和乙醇法等，再根据比色所用的波长，又分为单色法和多色 法等。主要的细胞破碎法有研磨、低温冷冻、超声破碎等。由于丙酮的萃取效率比较差，甲醇对人体毒害性 大，且在酸化过程中容易产生误差，于是，乙醇成为现在广泛应用的叶绿素 a 的萃取剂。超声破碎法因快速、 提取效率高等特点也被研究者所青睐。 本实验以热乙醇为萃取溶剂，结合超声细胞破碎法为基础测定叶绿素 a 含量。
式中： Ve —乙醇的准确体积，mL；
Vs —水样的体积，L； 1 —比色皿的长度，cm。
九、实验结果处理
通过吸光度的差值来计算对浊度的校正： 665 a-750 a=校正后的 665 a 的吸光度 665 b-750 b=校正后的 665 b 的吸光度 用校正后的 665 a 与 665 b 的吸光度值进行如下的计算：
叶绿素a
29.62 665a - 665b Ve mg/m 3 Vs 1
三、主要试剂的物理常数
名称 乙醇（含水 率 90％）
分子式 C2H6O
分子量 46.07
ห้องสมุดไป่ตู้
性状 乙醇是一种无色透明易挥 发有特殊香味的液体，易 溶于水，能以任意比与水 混溶 盐酸是一种无色有腐蚀性 易挥发有刺激性气味的液 体
熔点 -114.3℃
沸点 78．4℃
盐酸 （1mol/L）
HCl
36.46
-114.2℃ （无水）
六、主要仪器规格及要求
名称 分光光度计（型号：UV-1201） 操作要求 启动应用程序到自检画面，自检前请先将仪 器预热至少 10 分钟光谱扫描。 如果选择 “比 色皿校正”功能，在测量前必须进行比色皿 配对测量。设置好参数后，在参比池和样品 池中都加入参比溶液，盖好样品室盖；按下 “校正”按钮，仪器自动进行校准。校正完 成后即可进行正式的样品测量（使用同一比 色皿时可多次测量而不需重新校正） 在实验中的大致 作用 测定吸光度来对 浊度的校正
2、Chl-a 的提取
将滤膜剪碎，放入具塞离心管，加入 6 mL 热乙醇（75 ℃恒温提取 2 min 后用细胞破碎 仪破碎，超声时间 3 s，间隔 2 s，破碎 5 min 后，用少量上清液清洗细胞破碎仪探头（小于 1 mL） 。将装有提取液的离心管放入离心机，转速 4000 r/min 下离心 10 min，将上清液移入 10 mL 比色管中，再用 2 mL 热乙醇提取液清洗、离心二次取得上清液。最后将提取液定容 到 10 mL。
-85℃ 无水）
四、主要试剂的规格和用量
名称 乙醇 乙醇 盐酸
规格 含水率 90％ 含水率 90％ 1mol/L
用量 10mL 2mL 3滴
在实验中的大致作用 萃取叶绿素 a 清洗 酸化
五、实验需要测定的参数
参数名称 吸光度 乙醇的准确体积 水样的体积 比色皿的长度 单位 Ug/L mL L cm 小数保留位数 小数点后两位 小数点后两位 小数点后两位 小数点后两位 在数据处理中的用途 校正浊度 计算叶绿素 a 的含量 计算叶绿素 a 的含量 计算叶绿素 a 的含量