大学仪器分析实验高效液相色谱法

三、实验内容与主要步骤
1 更换流动相。 2 开动仪器，让色谱柱平衡。 3 设置色谱工作站参数。 4 进样、采集色谱图。 1）五组分混标液 2）标准溶液系列 3）未知样品 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。 7 关闭仪器。
? 什么是正相色谱？什么是反相色谱？ ? 什么是键合固定相？ ? 预测一下苯和甲苯在 C18 反相柱上的保留 顺序？ ? 什么是反相色谱疏水机理？ ? 本实验的主要色谱分析条件有那些？ ? 流动相组成对保留时间有何影响？举例说 明？ ? 改变检测波长对色谱图有何影响？
HPLC的溶剂选择
? 本实验采用什么流动相？ ? 什么是HPLC 级甲醇、乙腈溶剂？ ? 如何获得超纯水？ ? 本实验所用的流动相如何配制？ ? 流动相为什么要除气？如何除气？
建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进 一步巩固和提高所学知识和实验技能。
一、色谱分离原理
色谱法是一类高效分离方法。 ? 色谱分离原理是什么？ ? HPLC 和GC仪器的分离部件是什么？ 它们有什么不同？ ? HPLC 和GC的主要差别？
二、色谱分析技术
色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特 点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样 品或多组分样品分析。 ? 常见的色谱定性方法？ ? 色谱定量分析的依据？ ? 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有 何特点？ ? HPLC 和GC的应用特点
高压泵工作原理？ GC是如何进样的？ 记录系统和 GC一样 吗？
高压泵工作原理（单向阀）
? 高压液体有危险吗？ ? 高压泵如何改变流速？
高压泵工作原理（单向阀） 六通阀工作原理（流路切换）
? HPLC 进样针与GC有何不同？ ? 为什么HPLC 与GC进样要求不同？
五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理
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六、实验部分
一、溶液配制 1 配制标准系列溶液
三组分混标液：每 mL 溶液分别含 1.00mg 苯、甲苯 和乙苯。 分别准确移取 0.40 、0.80 、1.20 、1.60 和2.00mL 三组分混标液于 10mL 容量瓶中，用流动相溶剂定容。
2 流动相的配制、过滤和除气。
五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 标准苯测试液。 未知样品 1号、 2 号和3 号。
三、 HPLC仪器和实验技术
? HPLC 仪器的基本组分？ ? 主要部件的工作原理？ ? HPLC 和GC仪器的比较 ? HPLC 和GC实验技术的比较 ? 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一 针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病 人打过针？为什么没有？
四、高效液相色谱仪的基本组成
分几个系统？ 和GC有何不同？
二、色谱实验条件
A组：Waters HPLC 仪
色谱柱：Nova Pak C18 (3.9 ×150mm, 4μm) 流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v) 流速：0.8 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：20μL
B组：TSP HPLC 仪
色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0 ×200mm, 5μm) 流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v) 流速：0.8 mL/min 检测波长：254nm 进样体积：20μL
实验目的
? 了解HPLC 仪器基本结构 ,掌握实验仪器的一般使 用方法；
? 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件 的选择；
? 掌握液相色谱定性定量分析技术。
实验内容
反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物
实验讲解要点
一、色谱分离原理 二、色谱分析技术 三、 HPLC 仪器和使用方法 四、 HPLC 和GC 的比较 五、 RP-HPLC 测定烷基苯化合物原理