抗菌性能的测定

• 2.最小抑菌浓度(MIC)测定： • 配制1000.0 μg·mL-1 PVP修饰Ag纳米颗水溶液10 mL, 以细 菌过滤器过滤除菌备用. 排列具透气胶塞的无菌试管, 一 列10 管. 量取2.0 mLAg纳米颗粒水溶液加到第1 支试管中, 接着加入2.0 mL灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基, 混合均匀, 配制成Ag 纳米颗粒浓度为500.0 μg·mL-1的样品. 从第1 支试管中取出2.0 mL溶液, 滴加到第2 支试管中, 接着加 入2.0 mL 灭菌牛肉膏蛋白胨培养基, 混合均匀后配成浓 度为250.0 μg·mL-1的样品.依此类推, 浓度依次减半一直 稀释到第9 管, 并从第9 支试管中吸取混合后的溶液2.0 mL弃去. 第10 支试管为仅含2.0 mL灭菌牛肉膏蛋白胨培 养基的无样品对照管. • 样品浓度分别为： Baidu Nhomakorabea00.0、250.0、125.0、62.5、31.3、 15.6、7.8、3.9、2.0、0 μg·mL-1
抗菌性能的测定
• 通过检测最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC) 评价所制备PVP 修饰Ag 纳米颗粒的抗菌性能。 • 1.制备菌悬液： • 取4 °C 保存的菌种（菌株大肠杆菌(E. coli)、金黄色 aureus) 葡萄球菌(S. aureus)）接种于牛肉膏蛋白胨培养 • 基, 放入37 °C孵箱中培养18 h; 然后取该增菌培养 • 物, 再接种于牛肉膏蛋白胨培养基中, 仍置于37 °C • 孵箱中培养6 h, 即制成含有一定菌落浓度的培养 • 物. 将一定量培养物加到无菌试管中, 用无菌生理盐 • 水调配成含菌量约为107 colony-forming units (cfu)/ • mL的菌悬液, 菌落计数采用显微镜直接计数法.
• 采用微量加样器向各试管均加入制备好的 菌悬液0.2 μL, 摇匀后放入孵箱中37 °C 培 养24 h. 取出观察细菌生长情况. • 3.最小杀菌浓度(MBC)测定： • 从样品浓度高于MIC值(包括MIC浓度)的试管 中各吸取100 μL分别滴到灭菌的琼脂平板上, 涂布均匀, 在孵箱中37 °C培养24 h. 肉眼观 察实验结果。
• 4.实验结果： • (1).在对照管中细菌呈混浊状生长; 然后观察 含有不同浓度Ag纳米颗粒的各试管中溶液 的混浊度, 溶液开始出现澄清的最低浓度确 定为样品的MIC值. • (2).菌落数小于5 个或无菌落生长的最低样 品浓度确定为MBC值.
• (3). 实验表明PVP 修饰Ag 纳米颗粒最小抑菌浓度分 别只有3.9 和7.8 μg·mL-1, 与商品抗菌剂的值(约800 μg·mL-1)相比均要低得多,这表明PVP 修饰Ag纳米颗 粒在很低浓度下就表现出抑菌性能. • (4).最低杀菌浓度也比文献报道的水溶性Ag 纳米颗 粒的MBC值(120 μg·mL-1)小,表明其杀菌性能较好. • (5). S.aureus 和E. coli 分属于革兰氏阳性菌和革兰氏 阴性菌, 所制备的PVP 修饰Ag 纳米颗粒对它们均有 较好的抑菌和杀菌性能, 这说明样品具有一定的广 谱抗菌性.
• (6).随着纳米银浓度降低，抑菌作用逐渐降 低。但是在最大的稀释度下，其抑菌率都 能达到90%以上。（如图）
• (7).另有实验表明，PVP修饰的Ag纳米颗粒 对于牛奶、馒头、西瓜等食物在适当的时 间内均有较好的抗菌性能。