临床微生物标本采集、运送及处理

标本的采集和选择的基本要求：

1.选择准确的解剖部位、合适的时间、适当的设备采集标本； 2.采集足够量的标本，以保证检测的阳性率；
标本运送的基本要求：


1.所有常规性细菌学检验的标本需在采集后2h内送至微生物室，若延 迟送检，应放于安全防护盒内；脑脊液应在15分钟内送到； 2.尿液标本置于2-4℃冰箱保存不能超过24h； 3.疑似苛养菌感染的标本立即保温送检。
为什么要求多次采血？

（1）菌血症有“持续性”和“暂时性”之分，多次采血


可提高阳性检出率，减少漏检； 多次培养出“共生菌”，则可以确定为感染的病原菌； 出现多种细菌在排除污染可能后，可考虑“复数菌”败血 症的诊断。 （2）血液感染有原发性和继发性之分，多次采血培养有 助于循环外感染部位的诊断； （3）菌血症患者多数为间歇性，病原菌周期性出现在血 液中，在无菌时期不管临床症状经历的严重程度，患者血 液中的病原菌浓度水平相当低，因此要求多次采血，但 24h内一般不超过3次。
（三）血培养标本采集和运送
1.采集时间
患者出现寒战、体温升高前； 使用抗菌药物前； 患者已使用抗菌药物的情况下，若出现明显的发热前期症状，可在 寒战前或寒战后1h内采血；若无明显的寒战阶段，应在第二次服抗菌药 物前采血； 对于无明显感染病灶或未找到发热原因的发热患者，先在不同部位 采集2-3份血标本，间隔大于或等于1h，24h-36h后再次采集2份以上； 疑似沙门菌感染的患者在病程第1-2周采集静脉血；
正确的微生物学检验 始自正确的标本采取
失误的不同分布
分析后阶段 分析前阶段
41%
55%
4%
分析阶段
标本规范化采集的重要性



正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到 致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌 检验成功的关键。 标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当的 标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本 采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重 要的临床感染信息的基础。 好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患 照顾质量，降低医疗成本。




皮肤凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管

怀疑导管相关性血流感染的患者，可采用培养方法（建议同时进行）：
1.用Maki半定量培养法对血管内导管尖端片段进行培养： 采集： 用75%酒精消毒导管周围皮肤；移动导管，无菌剪刀剪取 尖端末端5cm，直接置入无菌试管中；立即送检，防止干燥，常规培 养不超过15min，4℃保存不超过2h。 接种： 用无菌镊子将5cm导管在血琼脂平皿上交叉滚动4次，然后 弃之，放入5%二氧化碳35 ℃温箱。 处理：若24h后血琼脂平皿生长＞15个菌落，提示有潜在导管相关 性血流感染。 不推荐使用增菌肉汤培养，因为增菌扩大了污染的几率，导致结果 不可靠。
标本类型
烧伤或伤口拭子 牙周损伤拭子或直肠周围拭子 溃疡拭子或坏疽损伤拭子 压疮拭子 新生儿的胃抽取物 呕吐物或恶露 结肠造口术排出物
一、血、骨髓、静脉导管标本
（Fra Baidu bibliotek）血培养检测采血指征 临床上疑为败血症、脓毒血症或其他血液感染的 患者
1. 发热（≥38℃）或低温（≤36℃） 2. 寒战 3. 白细胞增多（>10×109/L，特别有“核左移”未成熟的或 杆状核白细胞增多） 4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×109/L） 5. 血小板减少 6．皮肤粘膜出血 7．昏迷，休克、多器官衰竭 8 CRP升高
在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外， 很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。 对入院危重感染患者未进行系统性抗菌药物治疗之 前，应及时采集血培养。 骨髓炎或长期使用抗菌药物者骨髓培养阳性率高于 血培养。
（二）血培养检测消毒程序
1.皮肤消毒程序：严格执行三步法（防止皮肤寄生菌污染） （1）用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上； （2）然后用1%-2%碘酊作用30秒或10%碘伏作用60秒， 从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径达3cm以上； （3）最后用75%酒精脱碘，待酒精挥发干燥后采血。 新生儿及对碘过敏的患者，只能用75%酒精消毒60s， 待穿刺部位酒精挥发干燥后穿刺采血。 2.培养瓶消毒程序： （1）用75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞，作用60秒。 （2）用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面剩余的酒 精，然后注入血液。
微生物样本采样基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检甚至床旁接种尤其是厌氧培养 5.棉拭子标本宜用运送培养基 6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂 8.送检标本应注明来源和检验目的

（一）采集指征

凡是发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性， 并伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音，外周白细 胞总数及中性粒细胞比例明显增高，X线检查提 示肺部有炎性浸润或胸腔积液，甚至出现感染性 休克和呼吸衰竭等患者，应采集痰液或下呼吸道 标本。 对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺 鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全 防护。
建议 ：
同时采集2-3瓶； 需氧菌、厌氧菌各一份，采集后同时送检； 在采血后的2-5天无需重复采血培养；
2.采集部位 要求：从两侧上肢静脉采血，“双瓶双侧”采血 培养。至少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静 脉采血做第三套血培养。
不建议采集
（1）动脉血，因其诊断价值没有比静脉血更大； （2）静脉留置导管，因其常伴有高污染率。
。
无论采用何种采血方法，血培养可接受的 污染率通常是≤3%。
1.严格无菌操作，避免被体表或腔道正常菌群污染； 2.不要和血气、血沉的取血同时进行； 3.穿刺点消毒不使用低效消毒剂，切勿在静滴的静脉 处取血； 4.不宜从静脉导管或静脉留置口取血，若从该部位取 血，应在申请单上注明；最好同时静脉取血，以求 进行比对； 5.不推荐静脉血直接入瓶，以免血量控制不好或对患 者不利； 6.不主张换针头入瓶，以免增加污染的机会。 7.采血前把血培养瓶从冰箱拿出后，待恢复至室温后 采集，采集后切勿放回冰箱。

（二）采集时间




在抗生素应用前采集痰标本; 标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理； 咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本 ; 取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口; 深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导; 对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天； 不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状改变； 怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。

经胸壁针刺吸引物
偶尔用于原因不明的肺炎或贴近胸壁的病灶。
胃内采痰法
用于结核杆菌感染的婴幼儿患者
小儿取痰法
用压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿受刺激后咳出分泌物。


雾化取痰法
无痰或痰量极少时可用，使用5%NaCl雾化导痰。哮喘患者不能用该法。
痰标本的运送、保存




1.标本采集后2小时内送至实验室；否则可导致肺炎链球 菌、流感嗜血杆菌等苛养菌死亡； 2.延迟送检或待处理标本应置于4 ℃冰箱保存（疑似肺炎 链球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌的例外），但应在24小时 内处理； 3.对可疑烈性呼吸道传染病（SARS、炭疽、鼠疫等）的 标本，必须全过程注意生物安全； 4.经口腔部污染的标本均不可以做厌氧菌培养。
微生物标本采集、运送及处理



1.前言 2.标本采集的要求及原则 3.标本的正确采集
①血、骨髓、静脉导管 ②呼吸道标本 ③泌尿道标本 ④消化道标本 ⑤生殖道标本 ⑥化脓和创伤标本 ⑦穿刺液标本 ⑧眼、耳、鼻、咽拭子标本 ⑨组织标本 ⑩结核菌培养
主要内容



4.厌氧菌培养的采集及处理 5.支原体培养
无临床意义的标本

在有正常菌群出现的感染部位（皮肤、粘膜、消化道和上呼吸 道），可能会出现正常菌群过杂、过度生长，掩盖真正的病原菌， 这类标本建议临床重取替代标本或说明不处理的原因。
替代标本及建议
可重取组织或抽取物 可重取组织或抽取物 可重取组织或抽取物 可重取组织或抽取物 不处理 不处理 不处理
微生物标本的保存

储存环境
4℃冰箱
标本来源
尿液、痰液、粪便


35℃温箱
室温
脑脊液细菌培养标本
眼、耳、鼻、咽、血管导管、 组织、体液、生殖道、 厌氧菌培养标本、 血液培养瓶 指甲，头发，皮肤刮取物培养标本


标本收集部位
非无菌部位 眼 耳 呼吸道 消化道 泌尿道 皮肤 毛发 无菌部位 血液 脊髓液 胸膜液 腹膜液 关节液
5.血培养标本的运送 要求：（1）采集后的血培养瓶应在1小时之内 送往实验室。 （2）血培养瓶在接种前和接种后均不 得冷藏和冷冻。
血液标本的处理



1.自动化血培养系统： 立即放入仪器内，直到仪器报警提示阳性瓶后进行下一步操作。 2.传统血培养瓶： 放入35 ℃温箱孵育，每日观察，若有生长情况立即转种，若第7天仍 无菌生长，需要进行末次接种。
（三）采集方法 1. 自然咳痰法
以晨痰为佳。用清水反复漱口，用力 咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌 容器中，尽快送检。否则有的细菌（如肺 炎链球菌、流感嗜血杆菌）在外界可能死 亡。不能及时送检的标本，室温保存≤2h。 要求采到肺深部的痰液，不要唾液。



2.创伤性取痰方法（均由医生操作）：
4.采血量 要求： 成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每 瓶不少于5ml。 婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于2ml。
说明：血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人
血培养采血量在2~30ml之间，病原菌检出率与采血量成正 比例增长。每增加1ml的血液，病原菌的检出率增加3.2%。 儿童患者因为血液中病原菌浓度较高，血培养量无需等同于 成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿 童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。
双相培养瓶
二.导管相关性血流感染的标本培养

导管相关性血流感染： 最常见的为血管内导管相关性血流感染（CRBSI），发生率与导管种 类、导管相关医疗操作的频率、患者病情等因素有关。 短期留置的血管内导管，皮肤定值菌通过皮下隧道移植到导管尖端， 随后引发感染； 长期留置的血管内导管，导管头被细菌污染，导管腔发生细菌定植， 引发感染； 血行传播的细菌可定值在血管内导管中，引发新的病灶。
所谓“双瓶双侧”，是指从一个部位采血 接种一套培养瓶，再从另一部位采血接种另 一套培养瓶。（通常是双臂） 所谓“双侧双瓶”，是指从一个部位采血 接种一个需氧瓶，再从另一部位采血接种另 一个厌氧瓶。 一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为 单个血培养。

3.采集次数 要求： 对怀疑菌血症、真菌血症的成人患者，推荐 同时采集2~3套（不同部位）血培养标本。（即 双瓶双臂同时采集血培养标本。） 婴幼儿患者，推荐同时采集2次（不同部位） 血培养标本。
经支气管镜抽吸法（支气管肺泡灌洗液、防污染样本毛刷等）
直接从肺部感染病灶采集高浓度的病原菌，较为安全，但不能避免咽喉部正 常菌群污染。

经人工气道吸引分泌物（导管吸痰、防污染灌洗等）
较为采用，但人工气道常有致病菌或定值菌存在，建议采集前先做细胞血筛 查。


经气管穿刺吸引物
采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道污染，常用于厌氧菌培养，但患者不易 接受。

2.采集外周静脉血培养： 采集至少2份血培养，至少1份经外周静脉血穿刺采血，至少1份从 导管中心或静脉留置口隔膜取血，两者之间采血时间应≤5min。
Maki 滚动法
二 、 呼吸道标本
咳痰途经口咽部 不可避免地受到污染
唾液中口咽部定植菌的浓度可达108 ～ 109/ml。 研究显示，国内常规痰标本中约半数存在 唾液严重污染现象。


标本管理安全：
1.所有标本采集和处理过程应无菌操作，防止污染原则下认真进行； 工作人员应做好个人防护如戴手套、口罩，穿防护服，如有需要则要 求戴防护眼罩。 2.所有标本都应置于防漏、密封、不易破损的无菌容器中运送，条码 上应清晰注明标本的所有资料，并在规定时间内安全送至微生物室。 3.不能以带针头的注射器直接运送标本送至实验室，应将标本移至无 菌容器中，密封后送检。 4.已渗漏的标本拒绝接收。