病原性球菌的检验

医学微生物实验实验四病原性球菌

维持实验环境的清洁和稳定，避免外部因素对实验结果的影响。
相关研究和应用前景
研究方向
• 球菌的耐药性研究 • 球菌的毒力机制研究
应用前景
• 新型抗菌药物的开发 • 快速检测方法的改进
实验的意义和价值
促进健康
通过研究病原性球菌，能够更好地了解和应对与之相关的疾病，促进人们的健康。
拓展科学知识
通过实验，可以进一步了解微生物领域的知识，为科学研究的发展做出贡献。
3 柯氏试验
通过培养基的反应性来鉴别链球菌。
2 大肠杆菌鉴别试验
利用培养基鉴别肺炎球菌。
病原性球菌的检测方法
1
涂片法
将样品涂在玻璃片上，使用显微镜观察病原性球菌的形态特征。
2
H2 S产生试验
利用培养基观察球菌对H2S的产生情况。
3
SIM管法

通过尿素和铁盐培养基观察球菌的反应。
病原性球菌实验结果分析
形态观察
观察菌落的形态特征，如颜色、形状和质地。
病原性球菌的特征和疾病
球菌种类金黄色葡萄球菌肺炎球菌链球菌
特征黄色菌落，产生金黄色素多形态，革兰阴性成链状排列
相关疾病皮肤感染、食物中毒等肺炎、脑膜炎等咽炎、扁桃体炎等
病原性球菌的实验判断
1 甘露醇耐性试验
用甘露醇培养基判断金黄色葡萄球菌。
医学微生物实验实验四病原性球菌
这个介绍病原性球菌的医学微生物实验将带您了解球菌的分类和特征，病原性球菌对人类健康的影响，以及与常见球菌相关的疾病。
病原性球菌的分离与鉴定
样本采集
收集可能含有病原性球菌的样本，如血液、尿液或分泌物。
培养与分离
将样本在含有适宜培养基的培养皿中培养，分离出病原性球菌。

病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。

⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。

分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。

（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。

（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。

（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。

（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。

金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。

⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。

⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。

⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。

金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。

因而，食品受其污染的机会很多。

金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。

无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。

致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。

培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。

），在麦康凯琼脂平板不生长。

2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。

5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。

6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。

4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。

微生物实验设计-病原性球菌的鉴定

医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。

本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。

对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。

一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。

然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。

（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。

葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。

链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。

肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。

奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。

脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。

通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。

在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。

（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。

观察菌落的形态。

葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。

形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。

链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。

微生物检验学实验七病原性球菌的检验

A群溶血性链球菌 S
-
无乳链球菌
R
+
肺炎链球菌和草绿色链球菌的鉴别
菌种
镜下形态
菌落形态
Optochin
肺炎链球菌
矛头状、成对、有荚膜
稍大、扁平、湿润、脐状
S
草绿色链球菌
圆形、成链、无荚膜
较小、凸起、稍干、圆形
R
【注意事项】
触酶试验中3％H2O2溶液要新鲜配制，并且不宜用血琼脂平板上生长的菌落。凝固酶试验通常用玻片法为筛选试验、如遇凝固酶试验结果不典型可以用试管法鉴定。观察胆汁-七叶苷试验结果时，要求至少1/2斜面变黑才能判断为阳性。
【实验方法】 1、染色镜检 2、分离培养 3、生化反应葡萄球菌属
触酶试验凝固酶试验新生霉素敏感试验
4
链球菌属和肠球菌属
触酶试验链球菌属
杆菌肽敏感试验 CAMP试验 Optochin敏感试验肠球菌属胆汁-七叶苷试验 65g/L NaCl耐受生长试验
胆汁七生化反应
CAMP试验
主要性状
菌落色素溶血血浆凝固酶触酶甘露醇发酵新生霉素
3种葡萄球菌的生化反应结果
金黄色葡萄球菌
金黄色＋（β溶血）
＋＋＋ S
表皮葡萄球菌
白色－－＋－ S
腐生葡萄球菌
白色或柠檬色－－＋－ R
链球菌属和肠球菌属
A群溶血性链球菌和无乳链球菌的鉴别
菌种
杆菌肽
CAMP
10
实验7 病原性球菌的检验
临床微生物学及检验
医学检验学院病原生物学教研室
【实验目的】
1.掌握葡萄球菌属、链球菌属和肠球菌属的菌落形态、染色特点和基本生化反应。

实验四病原性球菌

不能干。 3. 涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂
凝集物可被涂散，变阴性。
阳性对照阴性对照待测血清各加溶血素“O” 1滴轻摇1min 再加SLO胶乳1滴轻摇3min 观察成果
成果鉴定：
稀释度
ASO （IU/ml）
1：15 1：30 1：60
400 800 1600
ASO≤250 IU/ml 阴性
注意事项：
1. 液体量要一样，菌量一样。 2. 血浆多挑几环（一滴旳量），菌少挑点，
表3
甲型链球菌乙型链球菌
血平板针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环针尖小菌落、透明宽敞溶血环
3. 血浆凝固酶试验--玻片法（操作，1人/组）
原理：
措施：
1
2
3
兔血浆
+ 金葡
兔血浆
+ 白葡
生理盐水
+ 金葡
凝集（+）不凝集（-）不凝集（-）
4、血浆凝固酶试验（试管法）示教
凝集为阳性
金葡菌
Байду номын сангаас
白葡菌
+
+
兔血浆
兔血浆
37℃30′水浴观察
不凝集为阴性
凝固酶试验（试管法）
五、抗链球菌溶血素“O”（ASO）迅速胶乳法（操作，1人/组）
原理：高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平
旳抗体后，还有多出ASO，这些多出抗体即与SLO胶乳试剂反应，出现清楚、均匀旳凝集颗粒。
措施：
实验四病原性球菌
1. 五类病原性球菌旳形态、排列及染色性示教
G+球菌：
金葡菌
链球菌
肺炎双球菌
G-球菌：

实验四病原性球菌的检验

1、标本采集：脓液
2、检验程序：
脓液
↓
↓
直接涂片
分离培养
革兰染色镜检（操作）（血琼脂平板）
↓
↓ 37℃ 18～24h
初报挑取可疑菌落（性状、色素、溶血）
↓
鉴定试验及药敏试验
↓
↓
↓
↓
革兰染色镜检生化反应鉴定其他鉴定药敏试验
↓
↓
↓
↓
↓37℃ 18～24h
报告
三、葡萄球菌属生物化学反应：
（一）触酶试验（操作）
规定时间内出现清晰凝集者为阳性，不出现凝集者为阴性。
主要用于风湿热的辅助诊断：
风湿热患者ASO大多在250单位；
活动性风湿热患者ASO一般≥400单位。
『实验报告』
绘出化脓性球菌镜下形态图。记录脓液标本的分离培养与鉴定程序。
实验四病原性球菌的检验
病原性球菌，又称化脓性球菌，根据革兰染色性的不同，分为两类： G＋球菌：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌等。 G- 球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等。
『目的要求』
掌握：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的形态及染色特点；葡萄球菌、链球菌的菌落特点及链球菌在血琼脂平板上的溶血性；血浆凝固酶试验、触酶试验的试验方法、结果及意义。
四、抗链球菌溶血素“O”的测定（乳胶法，示教）
1、原理：ASO高滴度的血清被适量溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余的抗“O” 抗体与ASO乳胶试剂反应，出现肉眼可见的，清晰均匀的凝集颗粒（ASO乳胶试剂系羧化聚苯乙烯乳胶与溶血素“O”共价交联的产物）。
2、方法：（略）3、结Fra bibliotek及意义：1、原理：

微生物实验设计-病原性球菌的鉴定

医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。

本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。

对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。

一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。

然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。

（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。

葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。

链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。

肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。

奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。

脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。

通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。

在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。

（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。

观察菌落的形态。

葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。

形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。

链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。

病原性球菌及检验

病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。

G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。

G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。

对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。

常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。

一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。

为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。

(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。

1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。

2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。

(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。

1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。

存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。

有型特异性，分A、B、C三型。

(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。

2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。

(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。

在20%CO2环境中，有利于毒力产生。

最适温度37℃，最适PH7.4。

DNA中G+C含量：30-39%。

1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。

病原性球菌的分离鉴定

阳性反应为：细菌成团聚集不易分开。阴性反应为：血浆呈均匀混浊。
五、透明质酸酶试验
试验目的
通过观察透明质酸酶对组织的破坏作用，了解细菌的侵袭性。
试验原理
致病性链球菌可产生多种侵袭酶，其中透明质酸酶可水解组织间质的透明质酸，使结缔组织疏松，通透性增高，利于细菌和病毒的扩散及增强细菌的侵袭力，又称为扩散因子。
0.25 0.25
0.25
0.00
0.25
0.00
保温
将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内5min
2％红细胞
0.25 0.25
0.25
0.25
0.25
0.25
保温
将各管内溶液混匀，置37℃水浴箱内10min后观察结果
血清稀释度及对照 1:500 1:833
1:1250
血清对照抗原对照血球对照
a1:50待检血清加入到1号试管后，被PBS稀释为1:500倍稀释的待检血清。 b每管总体积为1ml。
试验原理
乙链A族球菌可产生溶血素“O”(streptolysin O, SLO)具有溶血作用和较强的抗原性，可刺激机体产生抗溶血素“O”抗体。该抗体在病愈后数月至数年才消失，可做为诊断链球菌感染的辅助手段。
试验材料
1：50待检血清、2％红细胞悬液等
ASO溶血试验操作
单位：ml
试管号
操作步骤
12
淋病病灶分泌物、脑脊液、末梢血、痰斑
肉汤増菌
血平板培养
厌氧培养（5% CO2, Sp）需氧培养（Sa）
菌落观察（色素、溶血性）
涂片染色
分离单菌落纯培养
巧克力平板培养（N.m, N.g)
烛缸法培养
菌落观察

临床常见病原菌检验—需氧G+球菌检验(微生物检验课件)

（1）菌属鉴定试验：触酶试验：PYR试验：肠球菌、A群链球菌、某些凝固酶阴性葡萄球菌为（+）胆汁七叶苷试验：+ 盐耐受试验：+（ 6.5%NaCl 生长试验）
3、鉴定试验
（2）菌属内种鉴定试验：表3-8、表3-9 临床主要鉴定粪肠球菌、屎肠球菌。
第一节葡萄球菌属
(Staphylococcus)
45种，21个亚种，最常见、最重要的致病菌是金黄色葡萄球菌
一、生物学性状
（一）形态与染色
G+，球形，无鞭毛、无芽孢，固体培养基：呈葡萄串状排列液体培养基：成单、成双或
短链状排列（链球菌）
（二）培养特性
金黄色葡萄球菌金黄色脂溶性色素
表皮葡萄球菌在普通琼脂平皿上的白色色素
其他鉴定试验
报告
（三）检验方法
1、直接涂片
适用于：正常情况下无菌的标本（如脑脊液）伴有炎症细胞的其他体液标本、脓液等
初步报告： “查见革兰阳性球菌,葡萄状排列，疑为
葡萄球菌”
2、分离培养
血液标本5ml
脑脊液、脓液、
穿刺液、咽拭、
50ml葡萄糖肉汤（增菌）
尿液
粪便、呕吐物
无菌（7天）
浑浊
血平板
表皮葡萄球菌在血平板上的白色色素
中等大小，圆形凸起，
不透明、有色、S型菌落。
葡萄球菌菌落形态（普通琼脂平板）
液体：均匀浑浊生长
表皮葡萄球菌无溶血环。
金黄色葡萄球菌有透明溶血环。
耐盐：
10-15% g/L NaCl培养基中生长
选择性平板：
高盐甘露醇平板，致病菌可
分解甘露醇产酸使指示剂
呈淡黄色。
G-菌在此平板上不生长。

病原性球菌的鉴定-精品医学课件

（此次触酶实验只做玻片法）
注意事项：1.溶液新鲜配制 2.不宜用血琼脂平板上的细菌。 3.做对照。
2.血浆凝固酶试验
原理：葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是结合凝固
酶，结合在细胞壁上，使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而附着于细菌表面，发生凝集，可用玻片法测出。另一种是分泌至菌体外的游离凝固酶，作用类似凝血酶原物质，可被血浆中的协同因子激活变为凝血酶原物质，从而使血浆凝固，可用试管法测出。应用：作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是鉴别葡萄球菌时常用的一个试验。
2.试管法：取3支10ml试管，各加0.5ml 4倍稀释的新鲜血浆，在其中一支试管中加3-5个待检菌落，另两只试管中分别加凝固酶阳性菌株和阴性菌株作对照，置37℃ 水浴中过夜，观察结果。此法用于检测游离型血浆凝固酶。
凝固酶试验结果
3.甘露醇发酵试验
• 原理：致病性葡萄球菌多能发酵甘露醇产酸，使培养基由紫色变为黄色。
（一）菌落特点、菌体形态及染色性 1.金黄色葡萄球菌
三、步骤和方法
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
2.草链、乙链
3.肺炎链球菌
肺炎链球菌在血琼脂平板上菌落特征
4.肠球菌
（一）菌落特点、菌体形态及染色性
1.金黄色葡萄球菌
2.乙型链球菌
3.肠球菌
4.肺炎链球菌
• 革兰氏阳性球菌鉴定思路
18-24h。结果：细菌生长，培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。应用：主要用于将肠球菌和D群链球菌与其它链球菌区别
开来。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。
6. Optochin敏感试验（示教）
• 原理： Optochin可抑制肺炎链球菌的生长。 • 结果判定：抑菌圈直径≥14mm为阳性，反之阴性。

病原性球菌的检验

医学微生物实验实验四病原性球菌