病毒滴度测定

10 -6
0
8
0
21
0（0/21）
CPE(阳性)孔累计数由下向上累积 无CPE(阴性)孔累计数由上向下累积
CCID50
(难点、重点)
Calculation of TCID50
• Use of Reed & Muench method (if 50 ul of virus dilution is added to each well)
病毒滴度的测定
空斑形成单位法测定病毒滴度
原理(重点)：适当稀释的病毒悬液与长成单 层的宿主Байду номын сангаас胞混合，在细胞上覆以营养琼脂培 养基等固体或半固体介质，由于琼脂的限制，
病毒只能感染并破坏临近的细胞，造成细胞溶
解而形成空斑，每个空斑由一个病毒颗粒造成，
计算空斑数量再乘以稀释倍数即可得知原来的
病毒感染单位的浓度。 空斑形成单位（Plaque Forming Units, PFUs)
中性红
(熟悉)
(了解)
(了解)
空斑形成单位试验技术举例 p51-52 防止琼脂凝固； Hanks液？ 双抗？ 5% CO2
空斑形成单位的计算 (重点)
(掌握)
(熟悉)
(重点)
LD50
ID50
CCID50
(熟悉)
(熟悉)
5% CO2培养箱
(熟悉)
CCID50 TCID50
Reed-Muench法计算CCID50
d：稀释系数，即组距
S：CPE(阳性)孔比率总和
d=lg10-1 = -1
lgCCID50=(-1) + (-1)×(3.375-0.5)
=-3.875
CCID50=10-3.875/0.1ml
ID50 和 LD50 的计算与CCID50完全相同(掌握)
lgCCID50=L+d(s-0.5)
ID50 LD50
计算，S：感染比率总和； 计算，S：死亡比率总和；
(掌握)
血凝试验测定病毒滴度
血凝试验的基本原理(掌握)
红细胞凝集现象(血凝现象)
红细胞凝集抑制
(红细胞与抗体结合，失去血凝)
血凝滴度/血凝单位
干扰滴定测定病毒滴度
小结
主要介绍空斑形成单位法、50%终点法、血凝试 验和干扰滴定法测定病毒滴度的原理及其方法； 重点要掌握空斑形成单位法、50%终点法测定病 毒滴度的原理及其滴度的计算； 熟悉：空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验 和干扰滴定法测定病毒滴度的具体方法；
Karber法计算CCID50
病毒液稀释度
10-1
(难点、重点)
出现CPE孔的比率
8/8=1
10-2
10-3
8/8=1
7/8=0.875
10-4
10-5
3/8=0.375
1/8=0.125
10-6
0/8=0
lgCCID50=L+d(s-0.5) L: 病毒的最低稀释倍数的对数 L=lg10-1 = -1
空斑形成单位法测定病毒滴度
空斑显现原理(掌握)：空斑形成后，经中性红 活细胞染色，活细胞显示红色，而空斑区细胞 不着色，形成不染色区域。
Procedures
空斑形成单位法测定病毒滴度
适用条件 (熟悉)：凡是能在细胞中产生细胞病 变效应 (CPE) 的病毒都可以采用空斑形成法测 定病毒滴度。
(掌握)
病毒液 稀释度 CPE孔数 无CPE 孔数 累
(难点、重点)
计 出现CPE孔 所占的%
CPE孔数 无CPE孔数
10-1
10 -2 10 -3 10 -4 10 -5
8
8 7 3 1
0
0 1 5 7
27
19 11 4 1
0
0 1 6 13
100（27/27）
100（19/19） 91.6 （11/12） 40（4/10） 0.7（1/14）