黄芩苷的研究概况

综述
黄芩中黄芩苷的研究概况
一前言
黄芩苷(baicalin)是由唇形科植物黄芩Scutellariabaicalensis Georgi 的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。

其原植物主要产于东北、河北、山西、河南、陕西、内蒙古等地,以山西产量最大,河北承德产的质量最好。

黄芩味苦,性寒。

归肺、肝、胆、大肠、小肠经。

功能清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎[1]。

黄芩苷是黄芩的主要有效成分之一,是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分,据药理学研究报道,黄芩苷具有抗微生物、抗变态反应、降压和镇静、利胆、保肝和解痉等作用[2]。

本文对黄芩苷的最新研究现状作一综述。

二药理作用研究概况
黄芩苷(baicalin)是唇形科植物黄芩(scutellaria baicalensisgeorgi)的有效成分之一,属葡萄糖醛酸苷类,水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸,具有清热解毒、抗炎、利胆、降压、利尿、螯合金属离子、抗变态反应等多方面的作用[3]。

近年来随着国际上对黄芩苷研究的持续升温以及认识的逐步深入,认为黄芩苷在清除氧自由基、减轻组织的缺血再灌注损伤、调节免疫、促进细胞凋亡以及抗肿瘤和HIV等多方面均有作用。

1 解热作用
发热是一个多环节多因素参与的复杂过程，若其中某些因素、环节被抑制或阻断，则可防止体温升高，从而产生解热效应。

目前。

对
于黄芩苷解热机制方面的研究报道甚少。

综合近几年研究发现，黄芩总提物及单一活性成分(黄芩苷野黄芩苷)在整体动物实验、方面表现出显著的解热作用，且在一定剂量下其作用强度可高于以临床剂量折算的阿司匹林[4]。

2 抗炎作用
张罗修等[5]报道了黄芩苷对刺激剂Ca2+载体A23187诱导大鼠腹腔巨噬细胞PGE2的合成有抑制作用，这可能提示了黄芩苷抗炎作用的部分机理。

陈先福等[6]应用兔感染性脑水肿模型，测定了黄芩苷、川芎嗪、甘露醇对血清和脑脊液(CSF)中磷脂酶A2 活性的抑制作用及改善脑水肿关系，结果显示黄芩苷与川芎嗪均可抑制磷脂酶A2 活性和脂质过氧化，从而减轻脑水肿、降低颅内压。

3对肝损伤的保护作用
采用D-氨基半乳糖及D-氨基半乳糖与内毒素合用建立的小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)的含量。

结果，腹腔注射200mg•kg-1或500mg•kg-1黄芩苷可以明显降低因D-氨基半乳糖及D-氨基半乳糖与内毒素合用所致肝损伤小鼠血清中已升高的GOT及GPT含量。

提示黄芩苷对于受损的小鼠肝脏有一定的保护作用[7]。

静脉注射黄芩苷(90、10mg•kg-1)能显著增加肝组织、血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性及谷胱苷肽(GSH)水平,进一步提高组织的抗氧化能力,通过抑制自由基的产生,降低四氯化碳(CCL)、D-氨基半乳糖对小鼠肝组织的损伤作用,降低生物膜脂质过氧化的产生,增强生物膜的稳定性,从而降低小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、
天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及丙二醛(MDA)水平,并使血清、组织中SOD活性及GSH水平升高,提示黄芩苷对CCL、D-氨基半乳糖所致小鼠实验性急性肝损伤具有一定的防治作用,其作用机制与其降酶、抗脂质过氧化反应有关[8]。

4 对缺血再灌注损伤的保护作用
缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusioninjury)发病机制中,自由基的作用和细胞内钙超载是其发病学的两个重要环节。

再灌注损伤后机体通过多种途径产生的自由基对细胞的各种成分(膜磷脂、蛋白、核酸)造成损伤。

经股静脉注射黄芩苷(20mg•kg-1)能显著降低缺血再灌注模型大鼠心肌的脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量,升高组织内的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性,提示黄芩苷对再灌注损伤的心肌有保护作用,其机制可能与抗氧自由基引起的脂质过氧化反应有关[9]。

对糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的保护研究结果还证实,黄芩苷能缩小糖尿病大鼠脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积,减轻白细胞浸润程度,缺血区的髓过氧化物酶(MPO)活性和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的表达均显著降低,并推测其保护作用可能与抑制ICAM-1的表达降低微血管通透性等有关[10]。

另一方面缺血再灌注损伤时细胞内的钙离子超载既是损害的结果,又是造成细胞进一步损害的重要原因。

在神经胶质瘤大鼠模型的研究中发现,黄芩苷能明显降低由去甲肾上腺素(NE)诱导的神经胶质瘤细胞内高钙离子浓度水平,且作用的强弱存在效应剂量关系,进一步研究还发现黄芩苷的降钙机制可能与降低细胞膜磷脂酶C的活性有关。

5 降压和镇静作用
黄芩苷的降压原理一般认为是直接扩张血管，研究表明黄芩苷对离体兔耳、离体兔肾、蟾蜍与兔后肢血管皆有扩张作用。

在肠鼠离体主动脉、肺动脉、气管及右心房实验中，黄芩苷可竞争性拮抗肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺收缩主动脉条和肺动脉条的作用，拮抗异丙肾上腺素舒张血管、增加右心房自发频率的作用，这与其降压、减慢心率、镇静等作用有关。

另外，黄芩苷可抑制小鼠的自发活动，有明显的镇静作用; 可通过抑制前列腺素E2(PGE2)的释放，降低花生四烯酸的浓度，对防治高血压和糖尿病等有重要的临床意义。

黄芩苷静脉注射具有降压作用，多数学者认为其机制可能与阻滞Ca2+通道有关。

黄芩苷可剂量依赖性地降低静息状态下平滑肌细胞内Ca2+的浓度，显著抑制去甲肾上腺素和高K+所致细胞内Ca2+浓度的升高，因而推断黄芩苷可通过阻断平滑肌细胞膜上的电压依赖型钙通道和受体操纵型钙通道抑制细胞内Ca2+浓度的增高，舒血管机制类似维拉帕米阻滞Ca2+通道的作用，从而扩张血管，降低血压。

另有研究显示，黄芩苷具有明显的排钠利尿作用，可减少外周血容量及心输出量，导致血管阻力降低，血压下降[11]。

6 抗变态反应
T淋巴细胞激活后产生的细胞因子是各种炎症细胞间信息传递的重要信使之一，其中辅助性T淋巴细胞所产生的白细胞介素－4(IL－4)具有促进淋巴细胞成熟和分化的功能，同时又是诱导淋巴细胞合成分泌型IgE的关键因子。

姜斌等[12]探讨了黄芩苷对哮喘的保护机制，发
现黄芩苷保护组气道周围炎性细胞，尤其是嗜酸性粒细胞的浸润明显减轻，IL－4水平明显低于哮喘组，提示黄芩苷对过敏性哮喘具有保护作用。

顾红缨等[13]研究了黄芩苷对Ⅰ型变态反应豚鼠超微结构的影响，电镜结果显示，黄芩苷给药组与未给药致敏组豚鼠超微结构在发生变态反应后有较大的差异，而给药组与正常对照组的差异则很小，表明黄芩苷可显著抑制Ⅰ型变态反应豚鼠超微结构的改变。

郑红等[14]应用微分干涉差显微镜观察未经染色的活的肥大细胞，记录肥大细胞释放脱颗粒的全过程，发现加入黄芩苷后可明显阻止和延缓这一过程。

黄芩苷对肥大细胞的细胞膜有保护作用，增加膜的稳定性，从而阻止其脱颗粒，这可能是黄芩苷治疗过敏性疾病的机理之一。

致炎(炎症前)细胞因子的过度释放介导超抗原葡萄球菌素的毒性作用，黄芩苷能够抑制葡萄球菌素激发T细胞增殖和外周血单核细胞产生白细胞介素－1β、白细胞介素－6、TNF、IFN－γ、单核细胞趋化蛋白－1、巨噬细胞炎症蛋白－1α、巨噬细胞炎症蛋白－1β，对减轻葡萄球菌素的致病性具有治疗作用。

7 其他作用
(1)抗癌作用,黄芩苷不仅能调节细胞周期，而且能通过上调促凋亡基因p53和bax，下调凋亡抑制基因bcl－2和bcl－6的表达，同时抑制肿瘤细胞的增殖而表现为抑制肿瘤的生长。

（2）清除氧自由基及抗氧化作用，目前研究表明,黄酮类的自由基清除活性与其所含有的酚羟基数量和结构密切相关,黄芩苷的酚羟基数量较黄芩中其它的有效成分为多,且A环中含有邻二酚结构,因而具有较强的自由基清除活性。

三提取方法研究概况
1 采用水提酸沉法[15]。

称取适量黄芩粉末,用一定量的水先浸泡一段时间,然后加热煎沸,维持微沸一定时间,纱布滤过,药渣重提2次,合并滤液,浓缩一半,用2mol/LHCl调pH1～2,70℃保温一段时间,黄芩苷沉淀析出,离心,沉淀物加8倍量水,用14.4mol/LNaOH调pH值至7,并加等量乙醇,搅拌溶解,滤过,滤液用2mol/LHCI溶液调pHl～2,于70℃保温30min,静置6h,滤过,沉淀用乙醇洗涤、干燥得粗品,其收率为7.6%。

2 乙醇回流法[16]。

称取一定量的黄芩,将其粉碎,以不同浓度、不同体积的乙醇溶液为提取剂,置于微波炉中进行常压提取,接受微波辐射一定时间,待挥发出的溶剂被冷凝回流后,取出用冷却至室温,重新置于微波炉中,重复以上步骤直至总辐射时间累计达设计值。

然后减压抽滤,提取滤液,将滤液于一定温度进行水浴加热,蒸干后放入烘干箱中干燥,即得到黄芩苷粗品。

黄芩苷粗品用少量丙酮分次洗涤,至洗液无色,合并丙酮洗液,沉淀干燥至恒重,得精制黄芩苷。

3 超声提取法。

称取黄芩样品约10g置于500mL烧杯中,加入60%乙醇溶液250mL,超声波提取30min后过滤,得提取液。

4微波辅助提取。

称取黄芩样品约10g置于三口烧瓶中,加入溶剂150mL,放入微波萃取器中进行常压提取,在空气鼓泡搅拌状态下,接受微波辐射2min,待挥发出的溶剂被冷凝回流后,取出用冷却水冷至室温,重新置于微波萃取器中,重复以上步骤直至总辐射时间累计达设计值。

5 超滤法。

该法是一种分离精制的新方法,其原理是根据体系中分子
的大小和性状,通过膜的筛分作用在分子水平上进行分离。

该技术可起到分离、纯化、浓缩或脱盐作用,而在中药制剂中的应用主要是滤除细菌、微粒、大分子杂质(胶质、鞣质、蛋白质、多糖等)。

超滤法制备中药注射液工艺简单,具有提高中药注射剂澄明度,去除杂质和热原,保留更多有效成分及部分脱色的特点。

四含量测定方法研究概况
1 高效液相色谱法
高效液相色谱法是一种十分成熟的检测手段,对于黄芩苷来说,人们通常用C18柱或ODS柱作为固定相,普遍采用甲醇-水-磷酸作为流动相,用紫外检测器(276nm~280nm)检测血清或药物当中的黄芩苷含量。

李宁等[17]在前人文献基础上,进行优化,采用RP-HPLC法,以苯甲酸为内标物测定家兔血浆中黄芩苷的含量。

实验结果显示,苯甲酸与供试品的分离度在 1.5~2.0,符合要求,且在室温(15~30℃)柱效及分离度不受干扰,空白血浆中的内源性物质不干扰待测物黄芩苷及内标物的测定。

2紫外分光光度法
渠莉等[18]用HP-8453紫外分光光度计于220~400nm测定复方黄芩凝胶剂中黄芩苷的含量。

采用零阶导数光谱及一阶导数光谱测定供试品溶液(复方黄芩凝胶剂的甲醇提取液)。

由一阶导数光谱看出,样品和黄芩苷在262nm及291nm处有最大及最小吸收。

空白液在240~ 400nm范围内与基线重合,对测定无干扰,所以选择262nm处的振幅作为定量信息。

三波长-紫外分光光度法是计算机辅助含量测定方法。

其在干扰组分的吸收光谱上具有线性吸收的三个波长处对被测组分的吸光度进行测量,然后通过计算而求得被测组分的含量。

此法能消除某些干扰组分的影响、溶液混浊、吸收池不洁净或不完全配对所引起的误差,并且解决随浓度不同使本底值漂移、吸收峰不对称等给定量分析带来的困难。

3薄层扫描法
李梦等[19]使用硅胶GF254薄层板测定清喉咽合剂中黄芩苷的含量。

分别吸取供试品溶液(清喉咽合剂的甲醇溶液)及黄芩苷对照品溶液各3 µL,交叉点于同一GF254薄层板上,以正戊醇-甲醇-甲酸-水(7:1:1: 1)展开,取出,晾干,置254nm荧光灯下观察色点。

在薄层板上覆盖一同样大小的玻璃板,周围用胶布固定。

双波长反射法锯齿扫描,测定波长290nm,参比波长350nm,狭缝1 25mm 1 25mm,线性化系数Sx=3。

根据峰面积积分值计算黄芩苷的含量。

实验结果为:平均回收率为98 .36%,RSD= 1. 24% (n=6)。

采用薄层扫描法测定黄芩苷的含量具有直接点样,简便、灵敏、快速等优点,且重现性好,结果准确。

4高效毛细管电泳法(HPCE)
潘细贵等[20]采用高效毛细管电泳法,以苯甲酸钠为内标,建立了消炎抗菌胶囊中黄芩苷的含量测定法。

毛细管规格为60cm(有效长度为45cm) ×75 µm,检测波长为215nm, 电压为21kV, 电解缓冲液为10mmol L 硼砂且PH值为9. 0,柱温为20℃。

黄芩苷在96~768µg ·mL-1范围内线性关系良好,加样回收率为98.82%,RSD为2.32%。

该法快捷、灵敏、准确,适用于该制剂的快速含量分析。

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