体外分析技术培训课件
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核医学课件第五章体外分析技术课件
固相分离法(测量B)：
将抗体或抗原通过特殊技术联结在固相载体上，免疫反 应在固相载体上完成，达到平衡后形成固相的Ag-Ab 复合 物，可与游离部分分离。 优点：操作简便，迅速，分离效果好，非特异性结合低。
（五）放射性测量仪器
γ井型计数器：测γ射线，125I标记 液体闪烁计数器：测β射线，3H、14C等标记 配计算机系统，自动测量、数据处理、打印结果。
双抗体＋沉淀法(测量B)： 将双抗体和沉淀法两者结合进行分离。 本法具有两种方法的优点，并克服了双抗体分离时间长 和沉淀法非特异性结合高的缺点。
活性炭吸附法(测量F)： 活性炭吸附小分子游离抗原，离心分离后，复合物留 在上清液中，游离抗原在沉淀物中，测量沉淀物中的放射 性 F。 优点：本法操作简便，分离速度快，价格低廉。 缺点：易于解离，分离效果时间和温度的影响较大，非特 异性结合较高。
一、基本原理：
放射性标记的抗原和非标记抗原(标准抗原或被测抗原) 同时与限量的特异性抗体进行竞争性免疫结合反应，这种竞 争关系可用以下反应来表示：
*Ag：标记抗原 Ab：特异性抗体 Ag-Ab：非标记抗原抗体复合物
Ag：非标记抗原 *Ag-Ab：标记抗原抗体复合物
*Ag与Ag的免疫活性完全相同，对Ab具有同样的亲和力；
（3）分离方法主要是使大分子和小分子物质分离。
双抗体法(测量B)： 用抗原免疫动物而产生的抗体称为第一抗体，用第一抗 体再免疫另一种动物所产生的抗体称为第二抗体。
当RIA反应完成后，于反应液中加入第二抗体，第二抗 体则与含有第一抗体的免疫复合物B相结合形成第二抗体复 合物，其分子量比第一抗体复合物大，可用离心方法分离 出来，称为双抗体法（double antibody method）。
核医学体外放射分析技术课件
有效地排除非特异性物质对结合反应的干 扰。
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
二、结合反应动力学规律
• 遵守质量作用定律 • [L]+[B] 适当的实验条件 [LB]
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（competitive binding) • 过量的配体与有限量的结合剂发生竞争性
结合反应。 • 2、非竞争结合（non-competitive binding) • 过量的结合剂与有限量的配体，在非竞争
的条件下发生结合反应。
衍生设计出两种方法学
• 1、竞争结合（主要应用：放射免疫分析）
• [L]+ [L*]+[B] [LB] +[L*B]
• 2、非竞争结合
•结合在试管 或包被珠上
• Sp.Ab1+Ag Sp.Ab1.Ag
• Sp.Ab1.Ag +Ab2* Sp.Ab1.Ag.Ab2*+Ab2*
优点
• 慢性淋巴细胞性甲状腺炎： • 早期：T3,T4升高，然后降低，
TSH,TGAB,TPOAB升高。 • 甲状腺肿瘤：TG升高。 • 全身性疾病：心血管疾病、肿瘤等： • T3下降，rT3、TSH升高。
（二）肾上腺疾病
• 皮质醇增多症： • ACTH\COR正常情况下有节律分泌，检测
可以与单纯性肥胖区分。 • 原发性醛固酮增多症：尿游离皮质醇
• 反应误差关系 • 精密度图
• 2、准确度：测的值与其标称值之间的 相符程度。
• 3、灵敏度（sensitivity): • 4、特异性(specificity) • 5、稳定性(stability)
（三）质量评价
• 内部质量控制 • 外部质量控制
三、以配体与受体间结合反应 为基础的分析系统
体外分析PPT精品课件
● 简单单位点系统：受体与配基结合的 系统中只存在一种结合位点，即各个 受体分子表现出完全相同的结合特性 和生物效应，而且配基和受体分子以 １：１的关系结合，各受体分子间不表 现明显的正或负合作
● 受体与配基结合反应的主要特点 可饱和性(Saturability) 可逆性(Reversibility) 特异性(Specifity) 与生理效应一致性
实验室内质控 质
控
实验室间质控
批内质控 批间质控
整批分析质量的评估 坏点的识别与剔除
批间质量的比较
方法、试剂盒的综合评因 改进质量
提供信息 促进内质控
常见肿瘤标志物及其应用范围
分类及名称
应
用
肿瘤产物标志物
癌胚抗原
CEA
多种肿瘤(结、直肠癌、乳腺癌、肺癌)
AFP
受体的放射配基结合分析法
(Radioligand Binding Assay of Receptor ,RBA)
定性RBA
通过配基与受体反应的量效关系及某些 参数的变化等来判断受体的类型，单位 点或多位点系统,受体与配基相互作用的 特点 (可逆或不可逆，合作作用)。
定量 RBA
在已知配基与受体反应性质的基础上，通 过结合反应给出一定组织或细胞中能与该 放射配基结合的受体数称结合位点数 (number of binding sites)
体外放射分析
竞争放射分析
*放射免疫分析 *放射受体分析 竞争性蛋白结合分析
非竞争放射分析
免疫放射分析 酶放射分析 放射酶促分析 非标记免疫分析技术
思考题1
放射免疫分析与放射配基结合分 析的原理有何异同？
思考题2
根据您所了解，列举超微量生 物活性物质定量分析的常用方 法。
● 受体与配基结合反应的主要特点 可饱和性(Saturability) 可逆性(Reversibility) 特异性(Specifity) 与生理效应一致性
实验室内质控 质
控
实验室间质控
批内质控 批间质控
整批分析质量的评估 坏点的识别与剔除
批间质量的比较
方法、试剂盒的综合评因 改进质量
提供信息 促进内质控
常见肿瘤标志物及其应用范围
分类及名称
应
用
肿瘤产物标志物
癌胚抗原
CEA
多种肿瘤(结、直肠癌、乳腺癌、肺癌)
AFP
受体的放射配基结合分析法
(Radioligand Binding Assay of Receptor ,RBA)
定性RBA
通过配基与受体反应的量效关系及某些 参数的变化等来判断受体的类型，单位 点或多位点系统,受体与配基相互作用的 特点 (可逆或不可逆，合作作用)。
定量 RBA
在已知配基与受体反应性质的基础上，通 过结合反应给出一定组织或细胞中能与该 放射配基结合的受体数称结合位点数 (number of binding sites)
体外放射分析
竞争放射分析
*放射免疫分析 *放射受体分析 竞争性蛋白结合分析
非竞争放射分析
免疫放射分析 酶放射分析 放射酶促分析 非标记免疫分析技术
思考题1
放射免疫分析与放射配基结合分 析的原理有何异同？
思考题2
根据您所了解，列举超微量生 物活性物质定量分析的常用方 法。
体外分析技术PPT
缺点
至少两株抗体：主要限于肽类和蛋白质，很多 小分子半抗原不能应用。
缓冲液PH及离子强度要求严格。
应用
CEA、AFP、铁蛋白、HbsAg、ACTH、PHA、 胰岛素、FSH，TSH、降钙素、血管紧张素I& II 、抗血友病因子、凝血VIII因子等 。
IRA与IRMA的区别
反应类型 结合类型 标记物 待测物 RIA 免疫反应 竞争结合 抗原 抗原 IRMA 免疫反应 非竞争 抗体 抗原
结合与游离部分的分离
快速而完全分离。 操作简便，来源容易，价格便宜。 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰。 适用于任何容积的反应液。 非特异结合率小。
常用液相分离技术: 收集抗原抗体复合物（B）
双抗体沉淀法:
分离完全，非特异结合小，环境影响小，效 价高，但 成本高.
聚乙二醇(PEG)沉淀法:
标记物 抗原 抗体
待测物 抗原 抗原
RBA 受体配体
非竞争
配基 受体 数量和性质
非放射性标记免疫分析
提高灵敏度 减少放射性废物 原理相同 探测信号不同 探测仪器不同
一、酶标记免疫分析
(enzyme immunoassay, EIA)
EIA和 IEMA（酶免疫分析法）的测定原理与 RIA和IRMA相同，竞争结合和非竞争结合。 IEMA应用最多-酶联免疫吸附分析(ELISA)。
只是用酶替代标记抗原或抗体的放射性核素 常用的酶辣根过氧化酶(HRP),底物四甲基联苯
胺(TMB) 分光光度计检测
二、化学发光免疫分析
化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay CLIA） 标记物为能产生化学发光的化合物，如异鲁米娜、甲基 氮蒽。碱性条件下遇过氧化物有单光子发射。缺点:发 光时间短。
核医学课件：体外分析技术
标准曲线
目前已普遍采用计算机进行数据处 理，自动绘制标准曲线，自动换算 样品中被测物质的浓度
实验操作基本步骤
1.加样：加样总体积要保持一致，所处的介质环境 也要一致。
2.孵育：根据不同的分析对象孵育的温度和时间 不同，一般是37℃。
3.分离：选择好的分离方法分离游离抗原和 抗原－抗体复合物。 4.测量：测量游离或结合物部分的放射性。 5.数据处理：绘制标准曲线和待测物浓度的计算
* Ag
基本反应式
Ag-Ab
*Ag:标记抗原，Ag 非标记抗原 Ab：抗体 *Ag- Ab 标记抗原抗体复合物 Ag- Ab 非标记抗原抗体复合物
Ag-Ab+Ag
条件：1.*Ag与Ag 免疫活性相同
2. *Ag与Ab 恒量
*Ag-Ab+*Ag
理
*Ag与Ag由于免疫化学性质一致，共同竞争 性与Ab结合，当*Ag和Ab的量保持恒定， *Ag与Ag之和大于Ab时，则*Ag-Ab复合物的 形成受Ag含量的制约，二者之间存在函数关 系 ， 即 Ag 量 越 大 ， *Ag-Ab 量 越 小 ； Ag 量 越 小，*Ag-Ab量越大；测定*Ag-Ab或*Ag量即 可推算出被测Ag量
量B、F的cpm
*Ag
B%=B/(B+F)
Ag 1
2
3
4
5 6？
25 50 100 200 400 800
B%
B% 标准曲线
常 用 的 反 应 参 数 有 B%，B/F，F/B、 F%等这些反应变量都可以用作纵坐标来对 应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应 变量不同，标准曲线的形状也不同。但是这 些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗 原浓度变化而变化的函数关系。
《体外放射分析技术》课件
发展前景
面对技术的发展和应用需求，体外放射分析技术也在不断创新与改进。
未来趋势
技术将继续发展，提高分析速度、准确度和精度。
新技术发展
以中子法为代表的新技术将推动放射性物质分析方 法的更新。
结语
体外放射分析技术以其独特的优势在不同领域得到广泛应用。相信在技术的不断发展下，它将不断展现出新的 魅力。
体外放射分析技术
本文将讨论体外放射分析技术，介绍其分类，仪器设备，样品制备、检测与 应用领域等。
引言
体外放射分析技术是研究放射性物质及其运动规律的重要手段。本节将介绍体外放射分析技术的定义、分 类，为后续内容做好铺垫。
定义
体外放射分析技术是指使用 放射性示踪剂或标记试剂结 合物理、化学方法对样品进 行定量、定性分析的技术。
分类
按样品状态分为气体、液体、 固体放射性分析技术；按测 量原理分为计数测量和谱学 测量。
历史
放射性元素的存在和衰变引 起了人们的注意，早在20世 纪初就在放射性分析技术上 做出了卓越的贡献。
仪器设备
放射性计数器
最常用于三种分析技术中，是一种可以测量放射性 粒子数量的仪器。
液体闪烁计数器
一种利用荧光来检测放射性样品的方法。具有良好 的灵敏度和分辨率。
Gamma 探测器
可以准确测量放射性样品的γ射线能量和数量，广 泛应用于污染物检测、医疗影像等领域。
PET扫描仪
综合了放射性同位素和计算机图像处理技术，可以 非侵入性地检测出人体异动代谢和对应的功能异常
样品制备与检测
样品制备是体外放射分析技术中很重要的环节，可以直接影响到样品分析的结果。检测结果的准 确性和精度也需要得到保证。
2
医学检测
用于核医学影像检测，如核素扫描、颅脑计算机断层的氡气等放射性物质浓度，进行煤矿安全评估。
(核医学课件)02.RIA体外分析技术
RIA体外分析技术的优势与局限
1 优势
高灵敏度：能够检测极低浓度的物质
2
高特异性：能够准确区分类似结构的分 子
3
4 局限
广泛应用：适用于多种生物样品和分析 物质
放射性污染风险，需要严格的实验室操 作控制
常见的RIA体外分析技术方法
RIA技术在医学诊断和研究中有多种变种：
• 双抗体RIA • 竞争性RIA • 免疫放射分析（IRMA） • 固相RIA • 辐射免疫沉淀法（RIP）
放射性示踪技术
免疫学
RIA利用放射性示踪技术标记 分析物质，使其具备辨识性， 进而实现可靠的浓度测定。
RIA基于抗原抗体反应原理， 利用特异性抗体对待测物质 进行检测，确保高特异性和 高敏感性。
实验室应用
RIA广泛应用于医学诊断、生 物医学研究和临床实验，可 检测和分析激素、肿瘤标志 物、免疫功能指标等生物分 子的含量。
激素诊断
RIA可用于测定病。
肿瘤标志物检测
RIA可以精确测定血液或组织中的肿瘤标 志物，用于早期诊断、治疗监测和预后评 估。
免疫功能检测
RIA在评估免疫功能指标，如免疫球蛋白、 细胞因子等方面发挥重要作用。
药物浓度测定
RIA可测定药物在体内的浓度，用于调整 和监测药物治疗的效果。
(核医学课件)02.RIA体外 分析技术
为了有效地进行医学诊断，了解RIA体外分析技术的原理和应用至关重要。本 节将介绍RIA体外分析技术的基本知识和发展前景。
RIA体外分析技术的概述
RIA体外分析技术是一种高灵敏度、高特异性的实验室分析方法，用于测量微量物质在体内或体外 的浓度。通过结合放射性示踪技术和免疫学，RIA可以检测和定量分析各种生物分子。
体外分析技术 PPT课件
基本原理
用过量的标记抗体与非标记抗原形 成复合物，用免疫吸附剂除去多余的游 离抗体，复合物的放射性与非标记抗原 的量成正比。
IRMA的主要特点
• 属于非竞争性抗原抗体结合反应 • 抗原抗体复合物的量与所加非标记抗原的量呈 正相关 • 在低剂量下不会有不确定因素 • IRMA的非特异性结合对低剂量区影响大，对 分离条件的要求严格。对于RIA来讲，低剂量 区放射性高，非特异结合主要影响高剂量区。
体外分析技术
体外分析技术分类
• 放射免疫分析法 • 免疫放射分析法 • 非放射性标记免unoassay， RIA
• 基本原理 • 基本方法 • 质量控制
基本原理
利用特异抗体与标记抗原和非标记 抗原的竞争结合反应，通过测定放射性 复合物量来计算出非标记抗原量的一种 超微量分析技术。
三种标准曲线 F=游离*Ag, B=*AgAb, F+B=总*Ag
B/(B+F)
F/ (B+F)
B/F
基本试剂
• 抗体：高亲和力、高特异性、高滴度 • 标记抗原 （1）比活度和放化纯度必须足够高，以保证 分析的灵敏度 （2）半衰期不能太短，使之有足够长的寿命 以完成整个分析过程 （3）不改变原有抗原的特性（特异性、亲和 力、免疫活性等） • 标准品
RIA操作的基本步骤
• • • • • • 加样 孵育 分离结合与游离部分 测定放射性 数据处理，打印报告 废物处理
复合物和游离抗原的分离
• 抗原抗体在液相环境中起反应，终止反应时用 一定方法收集复合物测量放射性 ：双抗体沉淀 法，聚乙二醇沉淀法、葡萄球菌A蛋白沉淀法、 活性炭吸附法、微孔滤膜过滤法等。 • 预先将抗体吸附在某种固体支持物上，抗原抗 体反应就在支持物上进行，反应结束后只需将 周围未结合的游离抗原洗去，测定固体支持物 上的放射性。
核医学体外分析技术培训课件
❖ RIA法是一种高特异性、
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology
核医学体外分o析r m技e术dicine, "for the development of radioim3munoassays
+ +
+ +
+ +
+
+
核医学体外分析技术
6
放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力 2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总
量大于Ab上的有效结合位点。 3. Ag的量与*AgAb 的量成反比，
而与游离的*Ag成正比。
核医学体外分析技术
7
建立标准曲线
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。 ❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
质量控制的目的： ⑴保证实验分析误差控制在可接受的范围。 ⑵判断试剂盒质量和方法学的稳定性。
核医学体外分析技术
32
1.实验室内部质量控制：
• 零标准管结合率（ Bo %） • 非特异结合率（NSB%） • 最低和最高浓度管之差 • 标准曲线直线回归参数 • ED25、ED50、ED75 • 质控图
1.反应动力学：非竞争性抗原抗体结合反应。Ag-*Ab 复合物的量与非标记抗原的量呈正相关。
2.灵敏度：灵敏度高出RIA10倍。特别在低剂量区。 3.特异性 4.稳定性 5.标准曲线的工作范围 6.缺点：抗原必须有两个以上的抗原决定簇。
❖ 高灵敏度的微量检测技术。
American physicist and medical researcher Rosalyn Yalow, corecipient of the 1977 Nobel Prize in physiology
核医学体外分o析r m技e术dicine, "for the development of radioim3munoassays
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核医学体外分析技术
6
放射免疫分析（RIA）的特点：
1.*Ag和Ag与Ab有相同的亲和力 2. *Ag和Ab为恒量时，*Ag和Ag的总
量大于Ab上的有效结合位点。 3. Ag的量与*AgAb 的量成反比，
而与游离的*Ag成正比。
核医学体外分析技术
7
建立标准曲线
❖ 目的：利用标准曲线来推算出病人样品（Ag）的含量。 ❖ 配制一系列的标准品浓度：（0、20、40、80、160和320ng/L）
质量控制的目的： ⑴保证实验分析误差控制在可接受的范围。 ⑵判断试剂盒质量和方法学的稳定性。
核医学体外分析技术
32
1.实验室内部质量控制：
• 零标准管结合率（ Bo %） • 非特异结合率（NSB%） • 最低和最高浓度管之差 • 标准曲线直线回归参数 • ED25、ED50、ED75 • 质控图
1.反应动力学：非竞争性抗原抗体结合反应。Ag-*Ab 复合物的量与非标记抗原的量呈正相关。
2.灵敏度：灵敏度高出RIA10倍。特别在低剂量区。 3.特异性 4.稳定性 5.标准曲线的工作范围 6.缺点：抗原必须有两个以上的抗原决定簇。
《体外分析技术》课件
行业意义与价值
体外分析技术的发展不仅提 高了医疗诊断和药物研发的 效率，还对人类健康和食品 安全产生了积极的影响。
六、参考文献
• 文献1 • 文献2 • 文献3
《体外分析技术》PPT课 件
欢迎来到《体外分析技术》PPT课件！在本课程中，我们将介绍体外分析技术 的概念、应用和优缺点，以及其在医学、生物学和食品安全监测等领域的重 要性。
一、介绍体外分析技术
什么是体外分析技术
体外分析技术是指在体外环境下进行的生化分析方法和ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验技术。
体外分析技术的主要用途
体外分析技术被广泛应用于医学诊断、药物筛选、生物学研究和食品安全监测等领域。
免疫荧光染色 法 （Immunofluo rescence staining）
利用荧光标记的抗体 在细胞或组织中检测 目标分子的方法。
质谱分析法 （Mass spectrometry）
一种用于分析样品中 化合物结构和组成的 分析技术。
三、体外分析技术的应用
1 医学诊断
体外分析技术在临床医学中被广泛应用于疾 病诊断、治疗监测和病原体检测等方面。
缺点
假阳性率高，可能会导致误诊和误判；限制性较大， 一些分析方法只适用于特定的样品类型；操作技术 要求高，需要专业人员进行分析和解读。
五、结论
体外分析技术的应用前 景
随着科技的进步和人们对健 康的关注，体外分析技术在 医学和生命科学领域的应用 前景非常广阔。
体外分析技术的发展方 向
未来的发展方向包括提高分 析方法的灵敏度和准确性， 开发更多适用于复杂样本的 分析技术。
体外分析技术的发展历程
体外分析技术经历了从传统的化学分析到现代的基于生物分子相互作用的分析方法的发展。
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3. RIA标准曲线制作
γ-计数仪：实际测量的放射性信号 是仪器输出的电脉冲数，单位为： cpm（counts perminute）或者 cps（counts persecond）。
γ-免疫计数仪
标记物与被测物之间的函数关系可以用标准竞争抑 制曲线（标准曲线）来表示。 制作方法：
将药盒中一系列已知浓度（递增）的标准品抗 原（标准品），分别加入相应的试管； 加入固定量的*Ag和Ab； 待竞争结合反应达到平衡后，分离抗原的结合 部分和游离部分； 用放射性测量仪（γ-计数仪）测定*Ag-Ab。 （B）或游离*Ag（F）的放射性，在坐标纸或计 算机拟合曲线。
核医学体外分析是对取自人体的生物样本进行微生物学、免疫、化学、 血液学、生物物理、细胞学、病理学或其他检测，为人类疾病早期诊断、预 防、治疗或健康评价提供信息的学科。体外分析技术分为放射分析和非放射 性分析技术。
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改变标记物
与基础多个学科；
荧光：FIA（RMA）； 化学发光：CLA；
➢ RIA显像； ➢ RIA治疗。
酶：EIA。
放射免疫分析法原理与体外分析技术发展示意图
RIA是所有标记免疫分析的基础，超微量分析的检测源于RIA，RIA及在
此基
础上发展起来的检测方法，是临床医疗不可缺的诊断、治疗疗效评价的
手段
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常用的计算方式有B、B/B0%等。 B或B/B0%作纵坐标来对应标准抗原的浓度作标准曲线，选用的反应变量不同，标准曲线
的形状也不同。但是这些标准曲线都是反映的反应变量对应标准抗原浓度变化而变化的函 数关系。
放射性标记分析技术
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一、放射免疫分析
放射免疫分析（RIA）是指在体外条件下, 利用非标记抗原（含待测抗原 及标准品，简称Ag）及定量的放射性核素标记抗原（*Ag）对限量的特异性 抗体（Ab）的竞争结合反应，通过测定放射性复合物的量来计算出Ag量的 一种超微量分析技术。
Ag =* Ag , AgAb =*AgAb Ag > *Ag , *AgAb (B) *Ag(F) Ag < *Ag , *AgAb (B) *Ag (F)
B%=B/(B+F) F%=F/(B+F) R=B/F
RIA的基本原理示意图，原理是竞争性结合抑制反应
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20世纪50年代，放射免疫分析法的建立与临床应用，开创了微量物质检 测的新纪元。
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1. RIA的基本原理
特异性 抗体Ab
*Ag与Ag 免疫活性相同； 在一定的反应条件下； *Ag、Ab为恒定量； *Ag＋Ag > Ab。
放射性技术 免疫学技术
1977Yalow 获诺贝尔奖
微生物： RMA； 酶： R E A ； 受体：R R A ； 特异结合蛋白：CPBA。
改变结合体对
小分子半抗联接125I； 单克隆技术； 固相技术； 商品化的药盒。
RIA
Ag
+Ab
*Ag *Ag-Ab
Ag-Ab
理论与实践上更丰富 更完善的RIA： ➢ 可测物达300多种； ➢ 涉及生命科学及临床
重点难点
掌握 放射免疫分析与免疫放射分析原理、试剂组成及两者比较
熟悉 非放射性标记免疫分析优点、体外分析实验室质量控制
了解 体外分析实验室管理方法、体外分析项目
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体外分析技术概述
体外分析技术是核医学专业重要的组成部分，是核医学专业发展的基础。 核医学体外分析技术是在放射免疫分析基础上发展起来的集各种体外分析方 法为一体，以标记免疫分析（放射性核素及各类发光物质为标记物）为核心， 其他分析方法为辅助的一类临床实验医学。
纵坐标 横坐标
加入已知定量(ml)抗体 (Ab)
温浴反应达平衡
分离（固相、 液相）B、F
加入已知定量(ml) 125IAg标记抗原（*Ag）
B%=B/(B+F)
F%=F/(B+F)
R=B/F
RIA标准曲线制作
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500
充分混匀，室温（15～28℃）下放置15分钟
离心前任取两管测量，作为总放射性T，3500rpm（离心力1500g）离心20分钟，立即弃去上清
液，测各管1分钟的发射性计数（cpm）。
本文• 档核所医提学供（的第信息9版仅）供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。 3. RIA标准曲线制作
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第一节 放射性标记分析技术 第二节 非放射性标记免疫分析技术 第三节 其他体外分析方法 第四节 体外分析实验室质量控制 第五节 常用体外分析实验室管理方法简介 第六节 体外分析的临床应用
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2. 放射免疫分析加样流程
RIA加样程序（体积：µl）
试剂 标准品
NSB管 100（零标准品）
S0-S5标准管 100
样品管 —
质控管 —
质控血清
—
—
—
50
待测样本
—
—
100
—
125I-Ag
100
100
100
100
蒸馏水
100
—
—
—
抗体
—
100
100
100
混匀，37℃温育1小时
分离试剂
500
500
500